缀合试剂的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种通式化合物，其中每个X独立地代表聚合物链；p代表1-6的整数；Y代表酰胺基；且Z代表-CH.(CH2L)2或-C(CH2L)(＝CH2)，其中每个L独立地代表离去基团。所述化合物是可用于将聚合物缀合至蛋白质上的试剂，所得缀合物是新的并且也构成本发明的一部分。
【专利说明】缀合试剂
[0001] 本发明涉及用于将聚合物缀合到蛋白质和肽的新型缀合试剂，还涉及生产新型缀 合物的新方法。
[0002] 许多治疗活性分子，例如蛋白质，不具有在临床医学用途中达到效果所需要的性 质。例如，许多天然蛋白质不能作为良好的药物，因为在将其给予患者时有几个固有缺点， 包括：（1)蛋白质被多种存在于血液或组织中的肽链内切酶和肽链端解酶消化；（2)在一定 程度上，几乎所有的蛋白质都是免疫原性的；和（3)蛋白质能被肾脏超滤作用和细胞内吞 作用快速地排泄。一些被发现可在医学上作为活性治疗剂的分子具有全身毒性或缺乏最佳 生物利用度和药物动力学。如果蛋白质很快地从血液循环清除，则它们通常不得不被频繁 地给予患者。频繁的给药进一步提高毒性风险，尤其是免疫学衍生的毒性。通常很难达到 治疗有效剂量，因此效力受损。因此，快速清除既是效力问题也是安全性问题。
[0003] 水溶性合成聚合物，特别是聚亚烷基二醇，被广泛用于缀合治疗活性分子如蛋白 质。通过延长循环时间和降低清除率，这些治疗缀合物已显示可有利地改变药物动力学，降 低全身毒性，并且在一些情况下，显示出提高的临床效力。将聚乙二醇PEG共价缀合到蛋白 质的方法通常称为"PEG化"。
[0004] 对于使效力最优化和确保剂量之间的一致性非常重要的是，对于每个分子，缀合 到每个蛋白质的缀合聚合物分子的数量是相同的，并且各聚合物分子特异性地共价缀合到 每个蛋白质分子的相同的氨基酸残基上。在沿着蛋白质分子的位点上非特异性缀合会导致 缀合产物分布，且通常未缀合的蛋白质形成难以纯化且纯化成本高的复杂混合物。
[0005] WO 2005/007197公开了一系列新型缀合试剂，所述缀合试剂可用于与蛋白质的亲 核基团反应从而产生蛋白质-聚合物缀合物。这些试剂发现特别有用，因为其能够与来自 蛋白质中的二硫键的两个硫原子缀合从而形成硫醚缀合物，并且也能用于缀合其它亲核试 齐[J，例如与两个组氨酸残基，例如在与蛋白质连接的聚组氨酸标签中的两个组氨酸残基缀 合，如WO 2009/047500中记载的。
[0006] 对于一些用途，需要将两个聚合物链缀合到蛋白质上，因为含有给定分子量的单 链的缀合物的空间性质可明显不同于含例如各具有一半分子量的两条链的缀合物的性质。 可用于这种缀合作用的试剂是已知的。因此，例如，US 5, 932, 462 (Harris)公开了能将两条 PEG链缀合到蛋白质的试剂。Cong et al，Bioconjugate Chemistry 23(2012)，ρρ· 248-263 也公开了能将两条PEG链缀合到蛋白质的试剂，具体地，如第249页图1的试剂3所示的 PEG-双砜试剂。在Cong的试剂中，两个PEG链连接到作为苯基基团上的不同位置，所述苯 基基团为该试剂与蛋白质反应官能团之间的连接基团。Cong的试剂能够将两个PEG链缀合 至IJ，例如，来自蛋白质中的二硫键的两个硫原子，或者缀合到与蛋白质连接的聚组氨酸标签 中存在的两个组氨酸残基，其与Harris的试剂相比提供了改良的缀合作用。
[0007] 现已发现能够将两条聚合物链缀合到蛋白质的新试剂，其显示超越Cong已知试 剂的改良性质。
[0008] 因此，本发明提供通式化合物：
[0009]
【权利要求】
1. 以下通式的化合物
其中每个X独立地代表聚合物链；P代表1-6的整数；Y代表酰胺基；Z代表-CH. (CH2L)2或-C (CH2L) ( = CH2)，其中每个L独立地代表离去基团。
2. 权利要求1的化合物，其中每个X独立地代表聚（亚烷基二醇）、聚乙烯吡咯烷酮、 聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚噁唑啉、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、HPM共 聚物、聚酯、聚缩醛、聚（原酸酯）、聚碳酸酯、聚（亚氨基碳酸酯）、聚酰胺、或多糖。
3. 权利要求1的化合物，其中每个X代表聚（乙二醇）。
4. 前述权利要求任一项的化合物，其中Y代表-NH-CO-。
5. 前述权利要求任一项的化合物，其中p是3。
6. 前述权利要求任一项的化合物，其中每个L独立地代表-SR、-S02R、-0S02R、-N +R3、-N+HR2、-N+H2R、卤素、或-〇0,其中R代表氢原子或烷基、芳基或烷芳基，且0代表含有至少一 个吸电子取代基的取代芳基。
7. 权利要求6的化合物，其中每个L独立地代表苯磺酰基或甲苯磺酰基。
8. 权利要求1的化合物，其具有式：
9. 权利要求8的化合物，其中每个X独立地代表式CH3O-(CH2CH2O) m-的聚乙二醇，其中 m是X中环氧乙烧单元的数量。
10. 以下通式的化合物
其中X、p和Y具有上述权利要求任一项中给定的含义，A代表基团CO、CHOH、CH. NH2、 CH. NHR、CH. NR2、CH. OR CH. 0? C (O) R、CH. NHC (O) R 或 CH. N(C (O) R) 2，其中每个 R 代表氢原子 或烷基、芳基或烷芳基，且每个Pr1和pr2代表独立的蛋白质或肽分子或Pr1和pr 2二者一起 代表在两个独立的点处结合的单个蛋白质或肽。
11. 权利要求10的化合物，其具有通式：
其中X、p、Y和A具有权利要求10中给定的含义，且Pr代表在两个不同点上结合的单 个蛋白质或肽。
12. 权利要求11的化合物，其中Pr代表单个蛋白质或肽，其结合至来自所述蛋白质或 肽中的二硫键的两个硫原子、或结合至与所述蛋白质或肽连接的聚组氨酸标签中存在的两 个组氨酸残基。
13. 权利要求11或12的化合物，其中Pr代表IgG Fab片段、INF-a、IFN-P或复合 IFN。
14. 制备权利要求10-13任一项的化合物的方法，其包括将权利要求1-9任一项的化合 物与蛋白质或肽反应；以及任选地将所得缀合物中的酮基还原。
15. 药物组合物，其包括权利要求1-9任一项的化合物与可药用载体，并任选地还包括 其他活性成分。
16. 权利要求1-9任一项的化合物或权利要求15的组合物，用于治疗用途。
17. 治疗患者的方法，其包括向所述患者给予药物有效量的权利要求1-9和16任一项 的化合物或权利要求15的药物组合物。
【文档编号】A61K47/48GK104363926SQ201380031844
【公开日】2015年2月18日 申请日期:2013年6月17日 优先权日:2012年6月18日
【发明者】A·戈德温 申请人:宝力泰锐克斯有限公司