一种丹参提取物及其制备方法
【专利摘要】本发明提供了丹参的提取方法，它包括如下操作步骤：取丹参饮片，加水，减压条件下，70℃沸腾提取，合并提取液，即可。本发明还提供了丹参提取物及其制备方法。本发明还提供了丹参提取物的检测方法。本发明的丹参提取方法，所得提取物中丹酚酸B含量远高于高温回流提取物，其他成分和杂质含量较高温回流提取低，低温沸腾动态法制得的丹参提取物丹酚酸B纯度大于高温回流提取物。本发明检测方法，能够有效将丹参提取物中的多个成分有效分离，峰形良好，基线平稳，为丹参提取物的质量控制提供了可靠的基础。
【专利说明】一种丹参提取物及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种丹参提取物及其制备方法。本发明还涉及丹参提取物的检测方法。
【背景技术】
[0002]丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根莖，始载于《神农本草经》，列为上品，为临床常用中药材。具有活血祛瘀，痛经止痛，清心除烦，凉血消痈等功效，临床广泛用于胸痹心痛、脘腹胁痛、癥瘕积聚、热痹疼痛、心烦不眠、月经不调等证。
[0003]丹参含有脂溶性的二萜醌类化合物和水溶性的酚酸类化合物。水溶性酚酸是丹参主要的活性成分，包括丹参素、丹酚酸B、丹酚酸C及原儿茶醛等成分，以丹酚酸B含量最高。丹酚酸B对心血管系统、大脑、肝脏、肾脏等都具有保护作用，是丹参的有效水溶性成分。
[0004]丹参提取多采用回流提取，提取温度为溶剂在大气压下的沸点，温度较高，丹酚酸B对热不稳定，长时间加热，丹酚酸B易被分解破坏，使其含量降低。因此，亟待一种可有效提取丹酚酸B，且对杂质提取较少的丹参提取方法。
【发明内容】
[0005]本发明的技术方案是提供了一种丹酚酸B含量较高的丹参提取物，本发明的另一技术方案是提供了丹参提取物的制备方法。
[0006]本发明提供了丹参的提取方法，它包括如下操作步骤:取丹参饮片，加水，减压条件下，70 ± 5 °C沸腾提取，合并提取液，即可。
[0007]上述提取温度，优选使用70 0C。
[0008]本发明中所述的沸腾提取，即在减压条件下，使得水在相应的提取温度下达到沸腾状态，在此温度和压力条件下进行提取，其中，真空压力以满足在某一温度条件下保证水沸腾为基准。
[0009]其中，加水量为丹参干重的5~15倍，优选为12倍。
[0010]其中，提取I~3次，每次0.5~3h ;优选提取3次，每次此。
[0011]本发明还提供了一种丹参提取物的制备方法，它包括如下操作步骤:
[0012](I)按上述方法提取；
[0013](2)取步骤(1)的提取液，减压回收溶剂、冷冻干燥后，即得丹参提取物。
[0014]其中，所述减压回收溶剂的条件为:-0.05~-0.095MPa、40~90°C;优选70±5°C。
[0015]本发明还提供了一种丹参提取物，所述丹参提取物含有5~15%的丹酚酸B。
[0016]进一步地，所述丹参提取物的制备方法如上所述。
[0017]本发明还提供了丹参提取物的检测方法，它是以高效液相色谱法进行测定的，具体操作步骤如下:
[0018](I)取待测丹参提取物，以甲醇为溶剂或稀释剂，制备供试品溶液；
[0019](2)将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，检测即得，其色谱条件如下:[0020]色谱柱:十八烷基键合硅胶为固定相；
[0021]流动相:甲醇A-1.0%冰醋酸水溶液B，梯度洗脱，洗脱程序A:0min7%, 10min7%,12min9%,31min33%,47min39%,60min58%,70min62% ；
[0022]检测波长:286±5nm。
[0023]进一步地，所述高效液相色谱法中，以丹酚酸B、原儿茶醛或丹参素钠中的一种或两种以上为对照品，制备对照品溶液。
[0024]进一步地,检测柱温为30±5°C。
[0025]利用本发明提取方 法，制得的丹参提取物中丹酚酸B含量远高于高温回流提取物，其他成分和杂质含量较高温回流提取低，低温沸腾动态法制得的丹参提取物丹酚酸B纯度大于高温回流提取物。
[0026]较高温回流提取而言，适宜低温提取既保证了酚酸类成分的最大溶出，还防止其在高温下被分解破坏，最大限度的提取出了丹参中的酚酸类成分；同时，由于低温，杂质及其他成分溶出量减少，使酚酸类成分被高效地从丹参中被分离出来的同时，提取液中杂质和其他成分的含量也降低，有利于后续的分离纯化工艺，提高了产品品质和附加值。
[0027]本发明检测方法，能够有效将丹参提取物中的多个成分有效分离，峰形良好，基线平稳，为丹参提取物的质量控制提供了可靠的基础。
【专利附图】
【附图说明】
[0028]图1:不同提取温度丹酚酸B含量图
[0029]图2:丹参提取液表面张力
[0030]图3:丹参提取液Zeta电位
[0031]图4:丹参提取液粒径分布
[0032]图5:丹参提取液指纹图谱色谱图
[0033]图6:10批丹参提取液指纹图谱叠加图
[0034]图7:丹参提取物粒径分布图
[0035]图8:丹参提取物吸湿百分率曲线
[0036]图9:10批丹参提取物指纹图谱叠加图
【具体实施方式】
[0037]实施例1丹参提取方法
[0038]取丹参饮片，加丹参干重的12倍量水，减压条件下，70°C沸腾提取3次，每次2h，合并提取液，即可。
[0039]实施例2丹参提取方法的研究
[0040]I仪器与试药
[0041 ] 岛津LC-10A高效液相色谱仪，SCL-6A系统控制器，N2000色谱数据工作站，TC-100恒温箱(日本岛津公司)；Agilentl200高效液相色谱仪系列(美国Agilent公司)；MettlerAE240十万分之一电子天平(德国Mettler公司);FA1104万分之一电子天平(上海天平仪器厂)；KQ3200型超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；SHZ-D (III)循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)；恒温水浴锅(北京中兴伟业仪器有限公司)；RE-2000型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)，ALPHA1-4LSC冷冻干燥器(CHRIST公司)，PHS-3E型PH计(上海精密科学仪器有限公司);0CAT21表面/界面张力仪(德国Dataphysics公司)；电导率仪(雷磁DDS - 307A,上海精科)Malvern纳米粒度仪(型号Nano-ZS)。
[0042]丹参药材(四川科伦天然药业有限公司)；丹酚酸B对照品(批号:MUST-12020104，成都曼斯特生物科技有限公司)，丹参素钠对照品(批号:MUST-12020803，成都曼斯特生物科技有限公司)，原儿茶醛对照品(批号:110810-200205，中国药品生物制品检定所)，甲醇为色谱纯，水为重蒸水(自制)，其他试剂均为分析纯。
[0043]2丹酚酸B含量测定方法学的建立
[0044]色谱条件色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶柱；Agilent TC-C18 (250mmX4.6mm)色谱柱，5 μ m ;乙腈-0.5%磷酸水(28:72)为流动相，检测波长286nm,流速1.0mL/min ;柱温:30。。。
[0045]对照品溶液的制备对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对照品14.0Smg于IOmL量瓶中，75%甲醇溶液定容，摇匀，作为贮备液；精密量取ImL于IOmL量瓶中，75%甲醇溶液定容，摇匀，即得0.1408mg/mL丹酚酸B对照品溶液。
[0046]供试品溶液的制备精密吸取提取液适量于25mL量瓶中，75%甲醇溶液定容，摇匀，
0.45 μ m微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
[0047]线性范围试验取对照品溶液，分别精密进样2、4、8、16、20yL，照上述色谱条件测定峰面积积分值，以峰面积对进样量进行回归，得回归方程:Y=131290X+46157，R=0.9991。结果表明，在丹酚酸B含量为0.2816mg~2.8160mg范围内，线性关系良好。
[0048]精密度试验精密吸取对照品溶液IOuL注入液相色谱仪，连续进样6次，记录峰面积，计算RSD为1.16%，表明仪器精密度良好。
[0049]稳定性试验精密吸取供试品溶液，分别于0h、2h、4h、6h、8h进样5uL，记录峰面积，RSD为1.08%，表明样品在8h内稳定性良好。
[0050]重复性试验按“供试品溶液的制备”制备6份供试品溶液，分别精密吸取5uL注入液相色谱仪，记录峰面积，RSD为2.14%，表明该法重复性良好
[0051]回收率试验精密称取已知含量的丹参粉末0.1g,精密加入丹酚酸B对照品
3.8016mg, 75%甲醇定容至50mL，称定重量，超声lh，取出，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，进样5μ L测定含量，计算回收率，平均回收率为101.77%, RSD 为 2.89%(η=6)。
[0052]丹参药材中丹酚酸B含量测定取丹参粉末(过三号筛)约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75 %甲醇50mL，称定重量，超声lh，取出，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，进样5 μ L测定含量，测得丹参药材中丹酚酸B含量为3.81%。
[0053]3正交试验设计
[0054]称取丹参饮片30g，以水为溶剂，于抽真空70°C下沸腾提取温度下对提取次数、溶剂用量、提取时间三个因素进行L9(34)正交实验，制备样品溶液，测定丹酚酸B含量，结果如下:
[0055] 表1正交试验设计及结果
【权利要求】
1.丹参的提取方法，其特征在于:它包括如下操作步骤:取丹参饮片，加水，减压条件下，70 ± 5 °C沸腾提取，合并提取液，即可。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于:加水量为丹参干重的5~15倍，优选为12倍。
3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于:提取I~3次，每次0.5~3h ;优选提取3次,每次2h。
4.一种丹参提取物的制备方法，其特征在于:它包括如下操作步骤: (I)按权利要求1-3任意一项所述方法提取； (2 )取步骤(1)的提取液，减压回收溶剂、冷冻干燥后，即得丹参提取物。
5.根据权利要求4所述丹参提取物的制备方法，其特征在于:所述减压回收溶剂的条件为:-0.05 ~-0.095MPa、40 ~90°C ;优选 70±5°C。
6.权利要求4或5所述方法制备的丹参提取物，其特征在于:所述丹参提取物含有5~15%的丹酚酸B。
7.丹参提取物的检测方法，其特征在于:它是以高效液相色谱法进行测定的，具体操作步骤如下: (1)取待测丹参提取物，制备供试品溶液； (2)将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，检测即得，其色谱条件如下: 色谱柱:十八烷基键合硅胶为固定相； 流动相:甲醇A-1.0%冰醋酸水溶液B，梯度洗脱，洗脱程序A:0min7%, 10min7%,12min9%,31min33%,47min39%,60min58%,70min62% ； 检测波长:286±5nm。
8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于:步骤(1)中，以甲醇为溶剂或稀释剂，制备供试品溶液。
9.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于:所述高效液相色谱法中，以丹酚酸B、原儿茶醛或丹参素钠中的一种或两种以上为对照品，制备对照品溶液。
10.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于:检测柱温为30±5°C。
【文档编号】A61K36/537GK104013673SQ201410069832
【公开日】2014年9月3日 申请日期:2014年2月28日 优先权日:2013年2月28日
【发明者】韩丽, 杨明, 黄娟, 张定堃, 杨秀梅, 陈晓东 申请人:成都中医药大学