一种用于预防治疗番鸭细小病毒病的卵黄抗体的制作方法
【专利摘要】发明的目的是提供一种用于预防治疗番鸭细小病毒病的卵黄抗体，是用保藏编号为CGMCC?No.8504的番鸭细小病毒作为抗原制备的。本发明用番鸭细小病毒YBMDP株接种番鸭胚，分别收获死亡胚胚体和胚液，经研磨、冻融后收取病毒液，经超滤浓缩、甲醛溶液灭活后，加油佐剂混合乳化制成疫苗。用此疫苗接种产蛋鸡，收获鸡蛋，分离蛋黄，灭活、萃提精制得到抗体。制备的抗体能预防番鸭细小病毒引起的雏鸭细小病毒感染，此卵黄抗体具有高效、安全性好、保护率高等优点。
【专利说明】一种用于预防治疗番鸭细小病毒病的卵黄抗体
【技术领域】
[0001]本发明属于兽用生物制品领域，具体涉及一种用于预防治疗番鸭细小病毒病的卵黄抗体。
【背景技术】
[0002]番鸭细小病毒病是侵害雏番鸭的一种急性或亚急性传染病，它具有高度传染性，发病率和死亡率都很高，常造成严重的经济损失，主要发生于I~3周龄的雏番鸭，尤其是10日龄左右的雏番鸭，3周龄以上基本不发病。雏番鸭以喘气、腹泻及胰脏坏死和出血为主要特征的传染病。本病最早于20世纪80年代中后期出现于中国福建和法国西部Brittany地区，20世纪90年代初才认识到它是不同于小鹅瘟的独立疾病，死亡率高达80%。对死亡的番鸭如果处理不当，往往造成病毒的蔓延，产生更大的危害，目前市场上有预防该病的活疫苗，但而尚无快速有效的药物或方法来防治番鸭细小病毒病。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是提供一种用于预防治疗番鸭细小病毒病的卵黄抗体，提供的卵黄抗体具有效价高、保护率高、安全性好等优点。
[0004]本发明所提供的用于预防治疗番鸭细小病毒病的卵黄抗体，是用保藏编号为CGMCC N0.8504的番鸭细小病毒作为抗原制备的。
[0005]该保藏编号为CGMCC N0.8504的番鸭细小病毒，为YBMDV株，已于2013年11月08日保藏于北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
[0006]本发明的卵黄抗体，其制备包括如下的步骤
[0007]I)用番鸭细小病毒作为抗原，制成灭活疫苗；
[0008]2)将制备的灭活疫苗注射免疫产蛋鸡，来获得用番鸭细小病毒免疫后的鸡蛋；
[0009]3)将免疫后的鸡蛋收集卵黄用酸化水-辛酸的方法萃提、灭活制成卵黄抗体。
[0010]本发明用番鸭细小病毒YBMDP株接种番鸭胚，分别收获死亡胚胚体和胚液，经研磨、冻融后收取病毒液，经超滤浓缩、甲醛溶液灭活后，加油佐剂混合乳化制成疫苗。用此疫苗接种产蛋鸡，收获鸡蛋，分离蛋黄，灭活、萃提精制得到抗体。制备的抗体能预防番鸭细小病毒引起的雏鸭细小病毒感染，此卵黄抗体具有高效、安全性好、保护率高等优点。
【具体实施方式】
[0011]本发明使用的抗原为番鸭细小病毒YBMDP株，其信息如下:
[0012]一、YBMDV 株的筛选
[0013]2011年从浙江省某鸭场爆发了急性的番鸭细小病毒病，取病死鸭的胰脏及肠道，将胰脏及肠道组织用无生理盐水匀浆制成20%悬液，3000r/min离心15min，取上清除菌后经尿囊腔分别接种13日龄番鸭胚，孵化120小时，收集尿囊液及胚体组织，经匀浆后，反复冻融3次，取上清液冻存。收获的病毒液经纯化后进行了病毒含量、免疫原性、特异性及纯净性等方面的病毒特性的分析检测，结果表明该毒株病毒含量为105_7ELD5(i/0.2ml,最小免疫剂量为102_°ELD5(i/0.2ml，该病毒仅与番鸭细小病毒发生特异性反应，无细菌、支原体及外源病毒污染，适合作为制苗用毒株。将筛选的病毒株于2013年11月08日保藏于北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC N0.8504。
[0014]对于本发明筛选的毒株的性状进行检测，结果表明，该株病毒属细小病毒，圆形无囊膜，直径在20μ m左右、对乙醚、胰蛋白酶、酸不敏感，对红细胞无凝集现象。该病毒可引起雏番鸭发生以出血性肠炎为特征的急性败血性传染病。该毒株制备的疫苗免疫成年番鸭后，能保护免疫4个月内种番鸭所产子代免受流行毒株的攻击。该毒株作100倍稀释后，与等量雏番鸭细小病毒病抗血清中和，接种13日龄番鸭胚，结果表明，中和组番鸭胚全部健活，而病毒对照组番鸭胚全部死亡。
[0015]对筛选的YBMDV株的结构基因VP进行测序，结果VP全长为2199bp，编码732个氨基酸；NCBI的blast序列分析表明，YBMDV株的结构基因VP与已公开的番鸭细小病毒的VP存在差异位点，同源性为97.7%~98.3% (即存在着9_16个氨基酸的差异)。
[0016]实施例1
[0017]1.制苗用病毒液的制备将生产用毒种YBMDV株，尿囊腔接种12~14日龄易感番鸭胚，每胚0.2ml，36~37°C孵育,每日2次照胚检查。选择接种后48~120小时内死亡，且胚体有广泛出血，毛囊出血，肝脏变性和坏死，绒毛尿膜有轻度水肿的鹅胚，取其尿囊液及鹅胚体放入组织捣碎机中粉碎，取粉碎后的组织按1:2加入生理盐水混合；置2~8°C 4~12小时，收取尿囊液、羊水及胚体(去掉头和四肢)。用胚液匀浆、冻融3次，4000r/min离心30min，取上清混合于无菌容器中，置2~8°C保存。(参见表1)。
[0018]表1:病毒液的制备
[0019]
【权利要求】
1.一种卵黄抗体，其特征在于，所述的卵黄抗体是用番鸭细小病毒YBMDV株作为抗原制备的。
2.如权利要求1所述的卵黄抗体，其特征在于，所述的番鸭细小病毒YBMDV株的番鸭细小病毒YBMDV株已于2013年11月08日保藏于北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCN0.8504。
3.权利要求1所述的卵黄抗体，其制备包括如下的步骤 1)用番鸭细小病毒作为抗原，制成灭活疫苗； 2)将步骤I)制备的灭活疫苗注射免疫产蛋鸡，来获得用番鸭细小病毒免疫后的鸡蛋； 3)将免疫后的鸡蛋收集卵黄用酸化水-辛酸的方法萃提、灭活后制成卵黄抗体。
4.权利要求1所述的卵黄抗体用于预防治疗番鸭细小病毒病。
【文档编号】A61P31/20GK103833848SQ201410083016
【公开日】2014年6月4日 申请日期:2014年3月7日 优先权日:2014年3月7日
【发明者】宫晓, 徐保娟, 宋新宇, 李陆梅, 胡潇, 张维, 王龙 申请人:青岛易邦生物工程有限公司