一种瑞香狼毒提取物贴剂的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种瑞香狼毒提取物贴剂，所述提取物用以下方法制备：将瑞香狼毒丙酮乙醇混合溶液提取，提取物过大孔树脂后用制备色谱进行梯度洗脱,流动相A为水，流动相B为乙腈，在时间段10-15分钟收集洗脱液,浓缩干燥得到提取物。
【专利说明】一种瑞香狼毒提取物贴剂
【技术领域】:
[0001]本发明涉及一种抗肿瘤中药提取物，特别涉及从中药瑞香狼毒中提取的抗肿瘤提取物及其提取方法与用途。
【背景技术】:
[0002]中药材瑞香狼毒，英文名:RADIX STELLERAE CHAMAEJASMES，为瑞香科植物瑞香狼毒的干燥根。秋季采挖，除去杂质、晒干，药材呈纺锤形、圆锥形或长圆柱形，稍弯曲，单一或有分枝，长短不等，根头部有地上茎残迹，表面棕色至棕褐色，有扭曲的纵沟及横生隆起的皮孔和侧根痕，栓皮剥落处露出白色柔软纤维。体轻，质韧，不易折断，断面呈纤维状。皮部类白色，木部淡黄色。气微，味微辛，毒性比狼毒略低。其性味:辛，温；有毒，功能主治有:清热解毒，消肿，泻炎症，止溃疡，祛腐生肌。对瑞香狼毒化学成分分析表明，瑞香狼毒的根含甾醇、酚性成分、氨基酸、三萜类、蒽甙、狼毒甙及有毒高分子有机酸。含香豆素类虎耳草素(pimpinelline)、异虎耳草素(isopimpinelline)，异佛手柑丙酯(isobergapten)，牛防风素(sphondin),伞形花内酯(7-羟基香豆素，umbelliferone)，daphnoritin。还分得多种双氢!双黄丽类狼毒素(chamae jasmine), 7_甲基狼毒素(7_methoxy chamae jasmin),狼毒素甲基衍生物(chamaejasmenin A、B、C),新狼毒素 A、B (neochamaejasmin A and B),狼毒色原丽(chamaechromone),异狼毒素(isochame jasmin)。
[0003]瑞香狼毒具有以下药物作用:
[0004]抗肿瘤作用:动物实验表明瑞香狼毒对小鼠移植性肿瘤确有一定的抑制作用，如腹腔注射其醇提液或水提液对小鼠Lewis肺癌抑瘤率分别为70.2%及59.9% ;水提物对小鼠肝癌抑瘤率为36.8%，对小鼠宫颈癌14(U14)的抑癌率为48.5% ;挥发物对肝癌抑瘤率为42.5%，对U14的抑瘤率为50.5%，其抑瘤效果与农吉利(40.2%)，去甲基斑蝥素(38.2%)，氟脲嘧啶(39.0%)，长春新碱(43.8%)等相当或略高，因而认为该药具有显著的抗癌作用。
[0005]抗菌作用:瑞香狼毒的有效成分狼毒素为一抗菌性物质，能抑制真菌、金黄色葡萄球菌与链球菌的生长。狼毒在试管内对大肠杆菌、宋内氏痢疾杆菌、变形杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、绿脓杆菌及霍乱弧菌等7种革兰氏阳性肠内致病菌有抑制作用。狼毒的水浸剂(I: 3)在试管内对黄色毛癣菌、同心性毛癣菌、铁锈色小芽孢癣菌、许兰氏黄癣菌、奥杜盎氏小芽孢菌、羊毛状小芽孢癣菌、腹股沟表皮癣菌、星形奴卡氏菌等皮肤真菌均有不同程度的抑制作用。
[0006]抗惊厥、抗癫痫作用:瑞香狼毒发现具有抗癫痫活性，其六种粗提物对多种动物惊厥模型均有不同程度的抗惊厥作用，其中丙酮提取物抗癫痫作用更强，毒副作用更小。实验结果表明瑞香狼毒能有效对抗最大电休克惊厥发作，延长戊四唑诱发的惊厥发作潜伏期，提高惊厥阈值，同时能延长惊厥小鼠的存活时间，降低死亡率；对声源性惊厥发作也有较好的对抗作用；亦能明显提高刺激大鼠皮层运动区诱发惊厥阈值，进一步肯定该药具有抗惊厥作用。其抗惊厥作用机制与动物脑内氨基酸神经递质比例失衡有关，也可能与细胞凋亡等有关。[0007]对免疫系统的作用:狼毒对Raji细胞内EB病毒有非常明显的诱导作用，药物浓度为I~100 μ g，EB病毒EA细胞阳性率为31.8%~52.0% ;并能显著地促进EB病毒对淋巴细胞的转化作用。还报道对EB病毒有激活作用的瑞香狼毒与促癌物TPA —样，能促进腺病毒5型转化鼠胚细胞。从而证明狼毒不仅对EB病毒有激活作用，而且对腺病毒转化细胞也有促进作用。
[0008]临床研究
[0009]治疗肿瘤:用瑞香狼毒挥发液、醇提物、水提物治疗恶性肿瘤54例，其中肝癌43例(I1、ΠΙ期占94%)，肺癌6例，宫颈癌I例，宫体癌I例，卵巢癌I例，胰腺癌I例，脑胶质癌I例。结果完全缓解3例，部分缓解9例，有效8例，改善14例，其客观有效率为63%。治疗结核病:用狼毒枣、狼毒膏治疗结核效果良好，除对肺结核未大力试用外，其他腺、骨、皮肤、副睾等结核患者，如无严重并发症及体力尚未过衰时，能坚持长期治疗，都能得到满意的痊愈或减轻的效果，对皮肤结核用狼毒膏疗法，更能加速收效。[0010]治疗坐骨神经痛:狼毒药酒内服治疗坐骨神经痛50例，大部分患者用药2d后疼痛减轻，有效率90%。
[0011]现有的瑞香狼毒提取物，提取方法有多种，主要包括，水提，醇提，乙酸乙酯提，丙酮提，石油醚提，甲醇提等，还包括提取后用各种方法进一步的分离提取物如:用不同的色谱柱分离不同的活性物质。
[0012]现有瑞香狼毒制剂包括狼毒注射液，狼毒溶液(外用)，狼毒软膏等，主要活性成分是乙醇提取物或水提取物，由于提取工艺简单，其中含有大量混合成分，造成制剂副作用大，制剂稳定性差，疗效不佳。
[0013]采用纯度高的提取物，有些难以制成合适的制剂，有些稳定性差，有些难溶于水，生物利用度不闻等。
[0014]本发明对瑞香狼毒提取物进行了研究，找到一种合适的提取物，并意外的发现其兼具抗肿瘤作用和抗炎作用，具有治疗风湿性或类风湿性关节炎的前景，为此，本发明将该提取物制备成药物制剂，同时将其和其他抗肿瘤药物以及抗炎药物联合使用，具有显著增加现有药物疗效的作用，起到协同增效作用。本发明还对本发明的提取物进行了制剂方面的研究，找到了多种可以使用的制剂形式包括适合局部服用，胃肠道服用，非胃肠道服用的剂型，为中药的现代化提供了一种前景良好的产品。
【发明内容】
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[0015]本发明提供一种瑞香狼毒提取物，所述提取物由以下方法制备得到:
[0016]步骤1、将瑞香狼毒用丙酮和乙醇的混合溶液提取，得提取液；
[0017]步骤2、回收溶剂，浓缩干燥得到干浸膏，取大孔树脂与干浸膏混匀拌样；先用乙醇和乙酸乙酯的混合溶液作为流动相洗脱，然后改换乙醇作为流动相，洗脱得洗脱液，将该洗脱液回收乙醇后，浓缩干燥；
[0018]步骤3、将样品用制备液相色谱进一步进行梯度洗脱分离，收集不同时间流出的洗脱液，得到提取物。
[0019]优选的，本发明的提取物，其制备方法如下，
[0020]步骤1、将Ikg瑞香狼毒药材粉碎后加入IOL丙酮:乙醇=2:1 (ν:ν)的混合溶液，加热回流1小时，滤出提取液，再次加入1OL丙酮:乙醇=2:1 (v:v)的混合溶液，加热回流1小时，滤出提取液，合并滤液得提取液；
[0021]步骤2、将合并后的提取液减压回收溶剂，浓缩干燥得到干浸膏85g，取HPD100型大孔树脂2kg，与干浸膏混匀拌样；首先，采用乙醇:乙酸乙酯=1:1 (v:v)5L作为流动相洗脱，然后改换95%乙醇5L作为流动相，洗脱得洗脱液，将该洗脱液回收乙醇后，浓缩干燥得到15g样品；
[0022]步骤3、将步骤2得到的样品用制备液相色谱进一步进行梯度洗脱分离，收集不同时间流出的洗脱液，得到提取物；其中，梯度洗脱的色谱洗脱条件为:色谱柱为制备柱YMC-Pack Pro C18; 30mmX 250mm,流动相A为水,流动相B为乙腈,梯度洗脱程序如下:
[0023]
【权利要求】
1.一种瑞香狼毒提取物贴剂，其特征在于，由瑞香狼毒提取物和药物载体制备而成，所述瑞香狼毒提取物，是由以下方法制备得到: 步骤1、将Ikg瑞香狼毒药材粉碎后加入IOL丙酮:乙醇=2:1的混合溶液，加热回流I小时，滤出提取液，再次加入IOL丙酮:乙醇=2:1的混合溶液，加热回流I小时，滤出提取液，合并滤液得提取液； 步骤2、将合并后的提取液减压回收溶剂，浓缩干燥得到干浸膏85g，取HPD100型大孔树脂2kg，与干浸膏混匀拌样；首先，采用乙醇:乙酸乙酯=1:15L作为流动相洗脱，然后改换95%乙醇5L作为流动相，洗脱得洗脱液，将该洗脱液回收乙醇后，浓缩干燥得到15g样品；步骤3、将步骤2得到的样品用制备液相色谱进一步进行梯度洗脱分离，收集不同时间流出的洗脱液，得到提取物；其中，梯度洗脱的色谱洗脱条件为:色谱柱为制备柱YMC-PackPro C18; 30mmX 250mm，流动相A为水，流动相B为乙腈，梯度洗脱程序如下:
【文档编号】A61K125/00GK103893409SQ201410127842
【公开日】2014年7月2日 申请日期:2014年3月31日 优先权日:2014年3月31日
【发明者】陆建军, 钱国栋 申请人:南通市康桥油脂有限公司