一种中药灌注液及其制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种中药灌注液，包含有按重量份计的以下组分：淫羊藿80份，阳起石60份，丹参60份、红花60份，益母草60份，当归60份，黄芪60份，菟丝子60份，桃仁60份；并提供了其制备方法和应用。本发明的有益效果为：（1）根据养牛业实际生产需要，组成新的配方，有效解决了养牛业实际生产中关键环节：适繁母牛卵巢疾病性不孕症问题，提高适繁母牛情期受胎率，受胎率高达82.04%；（2）根据中兽医穴位理论，通过不同给药方式：子宫灌注或穴位注射，使药物发挥最大药效；（3）利用现代制药工艺，通过水提醇沉法，精制成既可子宫灌注，也可穴位注射的新型制剂，提高现有生产工艺，能够达到质量可控制的目的。
【专利说明】一种中药灌注液及其制备方法和应用
[0001]
【技术领域】
[0002]本发明涉及畜用制剂，具体涉及一种中药灌注液及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0003]随着我国人民生活水平的提高，畜牧养殖业已经成为我国农业领域增长最快的产业之一，而牛养殖业又是畜牧业中增长最快的产业之一，在国民经济中扮演着越来越重要角色。尤其是肉牛和奶牛的养殖规模越来越大，养殖水平逐步提高。据中国行业研究网行业研究资讯，截止2010年，我国肉牛存栏量就超过了 12353.2万头，牛肉总产量位居世界第四位；2008年，全国奶牛存栏达到1233.5万头，奶产量达到3870万吨，奶类产量位居世界第三位，成为奶类生产大国。在牛养殖业中，增加牛只数量就显得尤为重要，使得繁育母牛按时发情怀孕成为牛养殖业中重要环节。[0004]卵巢疾病性不孕症是造成繁育母牛发情周期异常，繁殖性能低下，引起母牛不孕的主要原因之一。其中主要包括母牛卵巢静止、持久黄体、卵巢囊肿、卵泡交替发育、排卵延迟等多种疾病。由于此类疾病发病率高，影响养牛业比较严重，所以国内外一直都很关注。N.Hollis对3172头奶牛发病情况定期统计，发现在产后150天内仅卵巢囊肿牛就有210头，发病率为6.26% ；Ahmadljaz等报道，奶牛卵巢囊肿发生率约为6_19%。东北农业大学对6158头奶牛调查，患卵巢疾病牛325头，发病率为5.29%，其中卵巢机能不全124头，占卵巢疾病的38.15%，持久黄体45头，占13.85%，卵巢囊肿123头，占37.85%，卵泡交替发育25头，占7.69%，排卵延迟8头，占2.46%。中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所对黑龙江、天津、江苏、湖南、甘肃、四川、陕西、河北等省、市的83个奶牛场的21596头成年母牛进行了调查，因卵巢疾病引起的不孕牛1830头，占8.45%，其中持久黄体555头，占卵巢病的30.32%，卵巢静止443头，占24.20%,卵巢囊肿379头，占21.69%，卵巢萎缩184头，占10.05%,排卵延迟64头，占3.50%,卵巢、输卵管炎70头，占3.82%，卵巢及输卵管其它疾病(卵巢肿瘤、输卵管硬结、粘连等)135头，占7.38%。由此可见，卵巢疾病性不孕症是牛常见病和多发病，按目前文献记载，我国每年因本病造成的经济损失多达数亿元。
[0005]以下列举出于本发明相关的现有技术，并进行评析:
1、与本发明相关的现有技术一:
现有技术一的技术方案:
目前临床上治疗牛卵巢性不孕证的主要是应用激素疗法。如前列腺素F2a(PGF2a)及其类似物被公认为是治疗持久黄体的首选药物，具有良好的溶黄体作用。用20-30mg PGF2a或0.5-1.0mg氯前列烯醇肌注，绝大多数母牛于注射后3-5天内黄体退化。促性腺激素释放激素(GnRH)及其类似物是治疗卵巢囊肿和卵巢静止，暗发情较为理想的药物。无论那类囊肿，都可单独应用GnRH或与其他激素配合应用。
[0006]促黄体素(LH)和人绒毛膜促性腺激素(hCG)是治疗卵巢囊肿较为理想的药物。促卵泡激素(FSH)和孕马血清促性腺激素(PMSG)可以治疗卵巢静止。还有雌激素，肌注20-30mg己烯雌酚或5-10mg雌二醇对暗发情(再牛接近排卵时注射)一般有效。此外，还有催产素、孕酮(P4)、甲状腺素、皮质醇等。
[0007]现有技术一的缺点:
目前临床上应用激素类药物治疗卵巢疾病性不孕症存在以下副作用:
(I)临床上多数根据直肠检查来判断母牛卵巢活动情况，由于技术操作者的临床经验不同，易引起主观误判，选择治疗药物激素不当。这样极易引起机体生殖激素调节紊乱，使母牛不易受孕。
[0008](2)养牛场和养殖个体户为了提高经济效益，大量、多次应用激素治疗，极易对母牛机体造成伤害。
[0009](3)大量、多次应用激素治疗，易造成肉、牛奶中激素残留，威胁人类健康。
[0010]2、与本发明相关的现有技术二: 现有技术二的技术方案:
目前临床上除多数应用激素疗法外，部分应用中药制剂进行治疗。
[0011]I)催情散、促孕灌注液:
催情散和促孕灌注液为《中国兽药典》(2000年版)二部收载的品种。催情散为古籍之经典中药复方，组方为淫羊藿6g、阳起石(酒淬)6g、当归4g、香附5g、益母草6g、菟丝子5g共6味药。粉碎，过筛，混匀，即得。疗效确切。促孕灌注液组方为淫羊藿400g、益母草400g、红花200g共3味药。水提醇沉，加注射用葡萄糖粉50g，精滤，灌封，灭菌，即得。从20世纪90年代初，宋大鲁等对促孕灌注液的作用机理进行了一系列的研究，并对质量控制进行了研究。张宝康等用聚酰胺薄膜层析法鉴别了制剂中的淫羊藿和红花，用薄层层析法鉴别了制剂中的黄柏与益母草，用分光光度法测定了药剂中总生物碱和总黄酮的含量。平星等对促孕灌注液中淫羊藿苷含量进行分析，建立了该制剂中淫羊藿苷的含量测定方法。
[0012]2)新型促孕灌注液:
孔祥峰等研究表明，新型促孕灌注液可增加子宫收缩波幅和频率。周淑贞等通过测定淫羊藿苷、小檗碱、总生物碱和干浸膏的含量，比较了用水提法、半仿生法、水提醇沉和半仿生醇沉法对新型促孕灌注液提取效果的影响，结果半仿生提取法效果最好。
[0013]3)催情助孕液:
是由淫羊藿、红花等中药组成的一种中药复方制剂，王东才应用该制剂治疗奶牛持久黄体18例、卵巢囊肿12例和卵巢静止4例，总有效率达100%，治愈率达94%。关玉强等对该制剂的质量控制进行研究，建立了制剂中淫羊藿苷的含量测定方法高效液相色谱法。李世宏等用其治疗奶牛持久黄体、卵巢静止和卵巢囊肿等卵巢性不孕症61例，平均发情率为99.4%，受孕率为81.5%，其中治疗持久黄体36例，平均发情率为98.2%，受孕率为79.8% ；治疗卵巢静止12例，平均发情率为100%，受孕率为85.4% ;卵巢囊肿13例，平均发情率为100%,受孕率为79.2%。
[0014]现有技术二的缺点:
(O目前治疗牛卵巢疾病性不孕症有效中药成方单一。《中国兽药典》(2000年版)二部收载的品种仅有2个，为催情散和促孕灌注液，是古籍之经典中药复方。目前有学者进行了药理学研究。虽然疗效确切，但生产工艺比较粗放，质量标准需要继续提高，以便进行规模化生产。
[0015](2)其它有关文献资料中的新型促孕灌注液、催情助孕液有报道，目前有部分药理学研究，治疗效果尚可，但治疗例数较少，疗效需要进一步验证，生产工艺及质量标准需要标准化，距离达到《中国兽药典》收录标准还很远。
[0016](3)现有治疗牛卵巢疾病性不孕症中药整体治疗效果不佳，换句话说，就是牛卵巢疾病性不孕症治愈率低，受胎率低。
【发明内容】
[0017]本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，根据中兽医学理论和辨证论治的原则，提供了一种能够有效提高适繁母牛情期受胎率的中药灌注液，是一种针对牛(肉牛、奶牛)卵巢疾病性不孕症研制的纯中药制剂。
[0018]为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为:一种中药灌注液，所述中药灌注液包含有按重量份计的以下组分:淫羊藿80份，阳起石60份，丹参60份、红花60份，益母草60份，当归60份，黄芪60份，菟丝子60份，桃仁60份。[0019]组方原则:根据临床辨证分型，卵巢疾病性不孕症大多属于肾阳虚和冲任不调之气血瘀滞证。因此选择了具有壮阳补肾，兴奋性机能的阳起石、淫羊藿、菟丝子，补血调经、活血祛瘀的当归、益母草、桃仁、丹参、红花；还选用了补气、扶阳的黄芪以扶正固本，从而达到阴平阳秘，使患牛恢复正常的生殖功能。
[0020]本发明的第二个目的是提供了上述的中药灌注液的制备方法，是将各组分中药采用水提醇沉法制备中药灌注液，水提2次，醇沉3次，制成每毫升含生药I克的澄明灌注液。
[0021]进一步的，上述的中药灌注液的制备方法，包括以下步骤:
O按照上述配比取各中药组分，清洗后，加水淹过药材后，浸溃12小时；
2)将步骤I)得到的浸溃后药材进行煎熬，煎熬过程为武火烧开后以文火煎熬，每次I小时，煎煮2次，第1次煎煮加水量为药材质量的7倍，第2次加水量为药材质量的5倍，合并煎液，并浓缩得到水提药液，浓缩比例为:中药组分总重量为560g时浓缩得水提药液560ml ；
3)将步骤2)得到的水提药液，候温后加3倍体积的95%酒精，搅匀后进行沉淀，沉淀时间为24小时，取上清液蒸馏后弃去沉渣，回收酒精并反复沉淀3次，得到醇沉药液；
4)将步骤3)得到的醇沉药液中加入蒸馏水使其每1ml含生药lg，分装并高压灭菌得到澄明中药灌注液。
[0022]本发明的第三个目的是提供了上述中药灌注液在治疗牛卵巢疾病性不孕症中的应用。
[0023]进一步的，上述的应用，将上述的中药灌注液进行子宫灌注，具体方法为:将器械和患牛外阴部常规消毒，以直肠把握法将输精器送入子宫，每次注入中药灌注液100ml，隔日I次，3次为I疗程。
[0024]进一步的，上述的应用，将上述的中药灌注液以穴位注射的方式进行给药。
[0025]主要用于繁育母牛卵巢静止、持久黄体、卵巢囊肿、卵泡交替发育、排卵延迟等卵巢疾病性不孕症。
[0026]为验证本发明提供的中药灌注液的效果，分组选方，共治疗卵巢机能障碍病例514例，其中本发明中药灌注液组子宫灌注治疗323例，发情294例，受胎265例，受胎率为82.04%。基本接近健康对照牛。
[0027]本发明的有益效果为:本发明提供了一种中药灌注液，并提供了其制备方法和应用，具有以下优点:
(1)根据养牛业实际生产需要，组成新的配方，有效解决了养牛业实际生产中关键环节:适繁母牛卵巢疾病性不孕症问题，提高适繁母牛情期受胎率，受胎率高达82.04% ；
(2)根据中兽医穴位理论，通过不同给药方式:子宫灌注或穴位注射，使药物发挥最大药效；
(3)利用现代制药工艺，通过水提醇沉法，精制成既可子宫灌注，也可穴位注射的新型制剂，提高现有生产工艺，能够达到质量可控制的目的。
[0028]根据对514例不孕牛的临床实验观察和药效试验，初步认为，该制剂具有生产工艺简单，疗效好，见效快，使用方便，无副作用等优点。用本发明提供的中药灌注液进行子宫灌注治疗的323例，发情294例(91.02%)，受胎265例(82.04%)。此种疗法与当前主要疗法相比，其受胎率均高于其他疗法。可在全国范围内大面积推广应用。[0029]该制剂推广使用可使适繁母牛提早怀孕，减少母牛空怀时间，因而可以节约饲草、饲料，提高料肉比；节约人工成本，多产牛犊，奶牛多产牛奶。
[0030]每I头奶牛减少I个情期，一般为21天，节约饲草、料为21天X 30元/天=630元；节约人工最少估计100元(每个饲养员饲喂20头奶牛计)；多产牛奶为21天X20kg/天X4元/kg牛奶=1680元；多产犊牛每头按1000元计。
[0031]若按2008年全国奶牛1233.5万头计算，假设适繁母牛为1/2，即616.75万头，卵巢疾病性不孕症发病率为5% (低于我们调查发病率)，那么，就有30.8375万头为卵巢疾病性不孕症。则计算如下:
节约饲草饲料约为=30.8375万头X 630元=19427.625万元；
节约人工=30.8375万头X 100元=3083.75万元；
多产牛犊=3.08375万头X 1000元=30837.5万元；
奶牛合计=19427.625万元+ 3083.75万元+ 30837.5万元 =53348.875 万元。
[0032]仅养殖奶牛一项，每年可产生经济效益5亿多元，若再加上肉牛养殖每年存栏I亿头以上，经济效益更加可观。
[0033]此外，肉、牛乳中药物无残留，为绿色食品，对提高人民生活质量，对养牛业的发展，具有重要意义，可产生明显的社会效益。
【具体实施方式】
[0034]实施例1:
1、试验动物:
从兰州城关奶牛场、临泽奶牛场、七里河奶牛场、兰州铁路奶牛场、兰炼奶牛场、兰州民族奶牛场、西宁市奶牛场、天津市等奶牛场，选择产后2月以上不发情的奶牛514例作为治疗对象，经直肠检查所确定的不孕类型为:持久黄体242例，卵巢静止180例，卵巢囊肿74例，卵巢萎缩18例，分组用不同方法进行治疗。[0035]2、临床检查:
在治疗前直肠检查子宫角的行状、大小、质地、位置及收缩反应，卵巢的形状、大小、质地和黄体等。
[0036]3、实验室检查:
患牛血浆孕酮水平的测定；血液流变学的检测；血中微量元素含量的测定；中药对雌性小白鼠性器官发育的影响实验；药液安全性实验。
[0037]4、治疗药物及制法:
方I (对照方):淫羊藿100g、阳起石100g、丹参100g、红花100g、益母草100g。
[0038]方2 (本发明):淫羊藿80g、阳起石60g、丹参60g、红花60g、益母草60g、当归60g、黄苗60g、英丝子60g、桃仁60g。
[0039]将方I或方2分别放入不锈钢桶内，用水冲洗药材中的尘土，加水淹过药面，加水量为药材质量的7倍，浸溃12小时，武火(大火)烧开，文火(小火)煎熬，每次I小时,煎煮2次，第2次煎煮前加水量为药材质量的5倍，合并煎液，浓缩至500ml (方l)/560ml (方2)，候温加3倍体积的95%酒精，搅匀、沉淀24小时，取上清液蒸馏回收酒精，反复沉淀3次，将所得药液加入蒸馏水使其每1ml含生药lg。分装、高压灭菌。[0040]5、治疗方法:
方1、方2分别穴位注射或子宫灌注。
[0041]①穴位注射:取雁翅(仿马雁翅)、后海穴。
[0042]雁翅穴:位于髋结节到背中线所作垂线的中、外1/3交界处，刺入臀中肌约6cm左右，每4次为I疗程。
[0043]后海穴:位于肛门与尾根之间的凹陷中。向前上方刺入6cm左右，注入方I或方2药液20ml，隔日I次，4次为I疗程。
[0044]②子宫灌注:用0.1%新洁尔灭消毒输精管及乳胶管(直径约0.5cm的乳胶管0.5m接于输精管末端)，外阴部洗净消毒，术者一手以直肠把握法握住子宫颈，另一手持输精管送入子宫内，助手用100mL注射器吸取方I或方2药液100mL注入子宫内，隔日I次，3次为I疗程。
[0045]6、疗效判定标准:
①治愈:治疗期间或治疗后，持久黄体、卵巢囊肿消失，卵巢机能恢复正常，并发情输精，在3个情期内受:孕者。
[0046]②好转:在治疗后，持久黄体、卵巢囊肿消失，卵巢机能基本恢复正常，虽发情输精，但未受孕者。
[0047]③无效:在治疗后，持久黄体、卵巢囊肿如故，卵巢机能未恢复正常，且未发情者。
[0048]7、临床试验结果:
筛选出的治疗牛卵巢疾病新制剂，经安全性试验，均为发现不良反应。分组选方治疗卵巢机能障碍病例514例，方I穴位注射40例，发情32例，受胎13例，受胎率为32.50% ;方2穴位注射108例，发情74例，受胎55例，受胎率50.92% ;方I子宫灌注43例，发情35例，受胎22例，受胎率为51.16% ;方2子宫灌注323例，发情294例，发情率为91.02%,受胎265例，受胎率为82.04。试验结果表明，方2子宫灌注的发情率、受胎率与其他三组相比，差异显著(P < 0.05)与健康对照组比较，发情率与受胎率基本接近。催情助孕灌注剂治疗结果如表1所示。
[0049]表1
【权利要求】
1.一种中药灌注液，其特征在于，所述中药灌注液包含有按重量份计的以下组分:淫羊藿80份，阳起石60份，丹参60份、红花60份，益母草60份，当归60份，黄芪60份，菟丝子60份，桃仁60份。
2.一种如权利要求1所述的中药灌注液的制备方法，其特征在于，是将各组分中药采用水提醇沉法制备中药灌注液，水提2次，醇沉3次，制成每毫升含生药I克的澄明灌注液。
3.根据权利要求2所述的中药灌注液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: O按照权利要求1所述配比取各中药组分，清洗后，加水淹过药材后，浸溃12小时； 2)将步骤I)得到的浸溃后药材进行煎熬，煎熬过程为武火烧开后以文火煎熬，每次I小时，煎煮2次，第1次煎煮加水量为药材质量的7倍，第2次加水量为药材质量的5倍，合并煎液，并浓缩得到水提药液，浓缩比例为:中药组分总重量为560g时浓缩得水提药液560ml ； 3)将步骤2)得到的水提药液，候温后加3倍体积的95%酒精，搅匀后进行沉淀，沉淀时间为24小时，取上清液蒸馏后弃去沉渣，回收酒精并反复沉淀3次，得到醇沉药液； 4)将步骤3)得到的醇沉药液中加入蒸馏水使其每1ml含生药lg，分装并高压灭菌得到澄明中药灌注液。
4.一种如权利要求1所述的中药灌注液在治疗牛卵巢疾病性不孕症中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，将如权利要求1所述的中药灌注液进行子宫灌注，具体方法为:将器械和患牛外阴部常规消毒，以直肠把握法将输精器送入子宫，每次注入中药灌注液100ml，隔日I次，3次为I疗程。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，将如权利要求1所述的中药灌注液以穴位注射的方式进行给药。
【文档编号】A61K9/08GK103908507SQ201410149820
【公开日】2014年7月9日 申请日期:2014年4月15日 优先权日:2014年4月15日
【发明者】牛建荣, 张继瑜, 周绪正, 李冰, 魏小娟, 程富胜 申请人:中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所