去甲蟛蜞菊内酯-7-硫酸酯在制备抗肺纤维化药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种去甲蟛蜞菊内酯-7-硫酸酯作为治疗肺纤维化的药物用途。化合物去甲蟛蜞菊内酯-7-硫酸酯从中药材墨旱莲首次中获得并通过NMR等波谱数据确定结构，体内、外药理实验结果证明去甲蟛蜞菊内酯-7-硫酸酯可显著抑制TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞的增殖及其HYP含量，在口服灌胃5-30mg/kg剂量范围内可改善博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化模型中肺组织的炎症及纤维化程度，影响肺组织中反映肺损伤程度的MDA含量，减少反映肺组织胶原沉积的HYP含量，降低可致肺纤维化的细胞因子TGF-β1含量等从而发挥改善肺纤维化程度的药理作用。去甲蟛蜞菊内酯-7-硫酸酯具有作为治疗或改善肺纤维化疾病的药物新用途。
【专利说明】去甲蟛蜞菊内酯-7-硫酸酯在制备抗肺纤维化药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及化合物去甲蟛蜞菊内酯-7-硫酸酯作为治疗肺纤维化的药物新用途。【背景技术】
[0002]肺纤维化是一种以纤维化及肺实质重塑为特征的渐进性疾病，肺成纤维细胞过度增殖、转分化为肌成纤维母细胞，分泌大量胶原和基质沉积是其重要特征，目前尚无有效的治疗方法。博来霉素诱导肺纤维化动物模型最为常用。气管给药博来霉素在很短时间内引起组织炎症及纤维化，博来霉素引起促炎症细胞因子如IL-1，TNF-α上调，之后又增加促纤维化标记物如TGF-β 1、纤连粘蛋白、a -SMA的表达，14天达最高值。博来霉素动物模型在造模后9天开始出现纤维化症状，21天出现典型的纤维化症状[1]。
[0003]去甲蟛蜞菊内酯-7-硫酸酯为香豆草醚类物质，本发明人于2010年首次从墨旱莲Eclipta prostrata L.中获得。目前，未见任何关于此类物质治疗肺纤维化疾病的研究报道，及在制备肺纤维疾病治疗药物中的应用[3]。有关去甲蟛蜞菊内酯的的活性主要涉及治疗关节炎(专利号:200310124512.0)、治疗和预防支气管哮喘、慢性支气管炎及肺气肿(专利号:200510023677.8)。然而，肺纤维化和肺气肿不是一个病，肺纤维化是一种以肺实质重塑，肺成纤维细胞过度增殖、转分化，分泌大量胶原和基质沉积是其重要特征的慢性渐进性疾病[3]。支气管哮喘(简称哮喘)、慢性支气管炎是多种炎性细胞及细胞组分参与的气道慢性炎性疾病；肺气肿的发病机制尚未完全清楚，一般认为与支气管阻塞以及蛋白酶-抗蛋白酶失衡有关。吸烟、感染和大气污染等引起细支气管炎症，管腔狭窄或阻塞，吸气时细支气管管腔扩张，空 气进入肺泡；呼气时管腔缩小，空气滞留，肺泡内压不断增高，导致肺泡过度膨胀甚至破裂。支气管哮喘、慢性支气管炎及肺气肿的治疗常选用舒张支气管药物如氨茶碱、β 2受体兴奋剂，如有过敏或感染因素，可选用皮质激素以及抗生素如青霉素、头孢菌素等；目前临床上推荐使用吸入型糖皮质激素与β 2肾上腺素受体激动剂的复合制剂如舒利迭。一般治疗支气管炎、哮喘、肺气肿的药物，对治疗肺纤维化无效或效果差，原因在于舒张支气管的类药物并不能最终减缓或终止肺组织中的胶原过多沉积，而胶原沉积是肺纤维化的主要特征和病因。
[0004]目前，尚未有文献报道去甲蟛蜞菊内酯等类似物具有治疗肺纤维化疾病的药理功效及其在治疗肺纤维疾病药物中的应用。
[0005]【参考文献】
[0006]1.Moeller A, Ask K, Warburton D, Gauldie J, Kolb M.The bleomyc inanimalmodel:a useful tool to investigate treatment options for idiopathiepulmonary fibrosis.1nt J.Biochem Cell Biol.，2008，40(3):362-82.[0007]2Zhang C F，Sun ZH, Zhang D，Zhang M.Sulphur compounds from the aerialparts of Eclipta prostrata, Biochemical Systematics and Ecology.2010,38:1253-1256[0008]3施维，张劲农Th I /Th2炎症极化与肺气肿和肺纤维化国际呼吸杂志.2007，27(7):551-553.[0009]本项发明预解决的问题
[0010]本项发明的目的在于发现去甲蟛蜞菊内酯-7-硫酸酯可用于治疗肺纤维化疾病的医药新用途。
【发明内容】
[0011]本发明是关于作为医药品使用的去甲蟛蜞菊内酯7-硫酸酯改善肺纤维化的新医药用途。详细地说，就是本发明专利是指去甲蟛蜞菊内酯7-硫酸酯具有改善肺纤维化进程的功效，体内药理实验结果证明去甲蟛蜞菊内酯7-硫酸酯可降低肺纤维化模型的肺组织中MDA、HYP、TGF- β I含量，在1_50 μ M范围内抑制TGF- β I诱导的人胚肺成纤维细胞的增殖及其HYP的含量，呈现剂量依赖性，具有治疗肺纤维化疾病的新医药用途。
[0012]有益效果[0013]1、尚未见研究报道去甲蟛蜞菊内酯-7-硫酸酯可用于肺纤维化的治疗。发明人通过体内、外实验证明去甲蟛蜞菊内酯-7-硫酸酯对于博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化治疗有很好干预作用，可用于制备治疗肺纤维疾病的药物。
[0014]具体来说:本项发明是经过体内、外药理实验结果证明去甲蟛蜞菊内酯-7-硫酸酯可改善博莱霉素诱导小鼠炎症及肺纤维化程度，通过HE、Masson染色观察肺组织病理切片、测定肺脏指数和肺组织中代表胶原含量的ΗΥΡ，代表过氧化水平的MDA，致纤维因子TGF-β I等各种指标的变化情况，体外细胞实验考察去甲蟛蜞菊内酯-7-硫酸酯对抑制TGF- β I诱导的人胚肺成纤维细胞的增殖及其HYP含量，综合评价去甲蟛蜞菊内酯7-硫酸酯改善模型小鼠肺纤维的药理作用机制。2、本发明涉及实验材料来自多种原植物，成本低；也可采用有机合成方法获得，本物质药理活性明确，具有广泛的实用价值。
【专利附图】
【附图说明】
[0015]图1药物对博莱霉素诱导小鼠肺纤维化模型中各组肺组织炎症的影响(HE染色X 200)。B:对照组；Μ:模型组；Ρ:阳性药；SH:高剂量；SM:中剂量；SL:低剂量
[0016]图2药物对博莱霉素诱导小鼠肺纤维化模型中各组肺组织纤维化程度的影响(Masson染色X200)。B:对照组；M:模型组；P:阳性药；SH:高剂量；SM:中剂量；SL:低剂
量
【具体实施方式】
[0017]一、去甲蟛蜞菊内酯7-硫酸酯的制备和结构确证
[0018]墨旱莲(Herba Ecliptae)为菊科植物鳢肠Eclipta prostrate L.的干燥地上部分，购于安徽亳州。乙醇、石油醚等试剂均为分析纯。墨旱莲干燥地上部分，以10倍于生药体积的80%乙醇回流提取3次，每次2h，过滤，合并提取液，减压去除乙醇，得总浸膏903g，依次石油醚、乙酸乙酯、正丁醇等量萃取，正丁醇萃取物减压浓缩后采用硅胶(150~200目)柱色谱，以氯仿-甲醇-水(5: 3: 0.1)洗脱，Sephadex LH-20色谱柱纯化，经氯仿-甲醇(1:1)洗脱得化合物去甲膨蜞菊内酯-7-硫酸酯(Demethylwedelolctone-7-硫酸酯)。
[0019]波谱数据及其结构如下:棕色粉末(甲醇)；365nm下观察显示蓝色荧光，碘显红色，喷雾1 % AlCl3乙醇液，紫外365nm下显蓝色荧光。ES1-MS m/z:379[Μ-Η]-，299[μ-η-80]-。1Hnmr(Dmso-C^soomHz):?ο.9i(ih,s,5-oh),6.89(ih,d, j = 2.2Hz，h-6)，
6.73 (IH, d, J = 2.2Hz, H_8)，7.24 (IH, s’ H-10)，9.36 (IH, s’ 11-OH)，9.34 (IH, s’ 12-OH)，
7.16(1H, s, H-13)和 13C 匪 R (DMS0_d6，125MHz): 158.6 (C_l)，102.2 (C_2)，154.1 (C_3)，97.9 (C-4)，154.1 (C_5)，102.7 (C_6)，156.5 (C_7)，98.8 (C_8)，157.7 (C_9)，104.5 (C-1l)，145.5 (C-l I)，144.3 (C-12)，98.8 (C-13), 113.7 (C-13)，148.9 (C-14)。
[0020]
【权利要求】
1.去甲蟛蜞菊内酯7-硫酸酯在制备抗肺纤维化药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的去甲蟛蜞菊内酯-7-硫酸酯在治疗肺纤维化疾病药物中的应用，其特征在于去甲蟛蜞菊内酯-7-硫酸酯由如下方法获得:墨旱莲药材干燥粉碎后、用80%乙醇回流提取得总提取物，减压浓缩依次石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，正丁醇萃取物减压浓缩干燥，通过硅胶柱色谱以氯仿-甲醇-水(5: 3: 0.1)洗脱，S^hadex LH-20色谱柱(氯仿-甲醇(1: 1))洗脱制备去甲蟛蜞菊内酯-7-硫酸酯。
【文档编号】A61P11/00GK103919769SQ201410165166
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2014年4月24日 优先权日:2014年1月28日
【发明者】张朝凤, 许翔鸿, 张勉 申请人:中国药科大学