植物乳杆菌klds1001及其在抑制口腔变异链球菌中的用途
【专利摘要】植物乳杆菌KLDS1001及其在抑制口腔变异链球菌中的用途，属于微生物【技术领域】。本发明提供的植物乳杆菌KLDS1001，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所，保藏编号为：CGMCC?No.9066，保藏日期为2014年04月16日，分类命名为植物乳杆菌(Lactobacillus?plantarum)，其对口腔变异链球菌具有抑制作用，可以作为口腔保健品，如：口香糖，保健药品的一种添加成分，用于口腔保健；可以作为口腔清洁产品的成分之一，添加到牙膏、漱口水当中，用于口腔清洁和减少口腔中变异链球菌的数量；开发益生菌疗法用于预防和治疗龋齿等口腔疾病。
【专利说明】植物乳杆菌KLDS1001及其在抑制口腔变异链球菌中的用 途
【技术领域】
[0001] 本发明属于微生物【技术领域】，涉及一株具有潜在口腔益生功能的植物乳杆菌 (Lactobacillus plantarum)及其应用。
【背景技术】
[0002] 发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum)Y29对口腔变异链球菌具有一定的抑制 作用；对口腔内溶菌酶和过氧化氢具有一定的耐受性，能够适应口腔环境。但是，没有关于 菌株的产酸能力和致龋能力的相关分析，菌株能够产生胞外多糖，具有一定的齿表面粘附 能力，是潜在的致龋菌。
[0003] 植物乳杆菌H0-69具有较弱的齿表面粘附能力，对口腔粘膜的粘附能力较强，非 酸抑菌物质对变异链球菌具有抑菌作用并具有广谱的抑菌效果。但是，缺少对于菌株应用 安全性的评价，没有对抗药性，引起粘膜感染的特性进行研究。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一株对口腔变异链球菌具有抑制作用的植物乳杆菌 KLDS1001及其应用。
[0005] 本发明提供的植物乳杆菌KLDS1001，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通 微生物中心（CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所，其菌种保 藏编号为：CGMCC No. 9066,保藏日期为2014年04月16日，菌种的分类命名为植物乳杆菌 (Lactobacillus plantarum)。KLDS1001为革兰氏阳性短杆菌，成对或成链状排列。于MRS 平板培养后，菌落呈白色，圆形，枕状光滑，边缘整齐。其菌体和菌落形态特征如图1-3所 /_J、1 〇
[0006] 本发明提供的植物乳杆菌KLDS1001对变异链球菌的抑菌圈直径为 19. 47±0. 50mm，与国内和国际上的研究相比抑菌活性较好。通过测定植物乳杆菌KLDS1001 对变异链球菌在玻璃试管表面形成菌膜的影响，比较直观的发现，菌株可以有效的降低变 异链球菌在菌膜当中的数量。从以上体外实验的结果来看，菌株能够有效的抑制变异链球 菌的生长并减少口腔菌斑中变异链球菌的数量。与传统益生菌株LGG相比，本发明提供的 植物乳杆菌KLDS1001抑菌能力较强，抑制变异链球菌菌膜形成的能力相近。
[0007] 本发明提供的植物乳杆菌KLDS1001能够在pH为3-5的条件下保持良好的生长状 态，在pH为2的条件下培养lh后保持4. 79±0. 491ogcfu的活菌数，说明菌株能够较好的 适应由于进食引起的口腔内pH的变化；菌株在过氧化氢浓度为ImM/L的条件下生长良好， 在5mM/L的条件下培养6h后，存活的菌数为3. 29±0. 071ogcfu对口腔内和口腔清洁用品 中的过氧化氢具有较强的耐受性，能够较好的适应口腔环境。
[0008] 作为新的口腔益生菌，乳酸菌在应用的过程中可能具有以下危害：（1)由于具有 较强的产酸能力而具有一定的致病性；(2)可能携带耐药性基因，存在耐药性基因水平转 移的危害；（3)可能引起口腔粘膜的感染。植物乳杆菌KLDS1001培养72h分解羟磷灰石产 生钙的量为〇. 29±0. 02μ g/mL，仅具有轻微的降解能力，此降解量与传统益生菌LGG相似 (0. 27±0. 01 μ g/mL)，说明菌株分解牙釉质导致龋齿的能力弱。菌株不具有溶血性，不能引 起口腔内粘膜的感染。菌株对万古霉素、克林霉素和链霉素具有耐药性。
[0009] 本发明提供的植物乳杆菌KLDS1001可以作为口腔保健品，如：口香糖，保健药品 的一种添加成分，用于口腔保健；可以作为口腔清洁产品的成分之一，添加到牙膏、漱口水 当中，用于口腔清洁和减少口腔中变异链球菌的数量；开发益生菌疗法用于预防和治疗龋 齿等口腔疾病。
[0010] 保藏信息：
[0011] 保藏单位全称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；
[0012] 保藏单位简称：CGMCC ;
[0013] 保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所；
[0014] 保藏日期：2014年04月16日；
[0015] 保藏编号：CGMCC No. 9066。
【专利附图】
【附图说明】
[0016] 图1为KLDS1001菌落形态；
[0017] 图2为KLDS1001菌落于高倍显微镜下观察形态；
[0018] 图3为KLDS1001革兰氏染色后菌体形态；
[0019] 图4为菌株KLDS1001与LGG对变异链球菌菌膜形成的影响，菌株KLDS1001与LGG 能够有效的抑制变异链球菌菌膜形成，并且筛选菌株和益生菌LGG具有相似的抑菌能力；
[0020] 图5为菌株KLDS1001、LGG和变异链球菌对羟磷灰石的降解能力，菌株KLDS1001 与LGG均具有较弱的羟磷灰石降解能力；
[0021] 图6为不同pH对菌株KLDS1001生长的影响；
[0022] 图7为不同浓度的过氧化氢对菌株KLDS1001生长的影响，菌株KLDS1. 0659在低 pH与过氧化氢存在的条件下培养一段时间，均能保持一定存活菌数，对环境的抵抗能力较 强。
【具体实施方式】
[0023] 下面结合附图对本发明的技术方案作进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本 发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖 在本发明的保护范围中。
[0024] 本发明提供的植物乳杆菌KLDS1001是从新疆酸乳中分离得到的，其分离方法 如下：取一定量新疆自然发酵的酸奶样品，在脱脂乳培养基中进行富集，划线于MRS平板 (pH6. 5)中，37°C培养24h，挑取圆形，白色乳白色的特征菌落进行革兰氏染色，挑取革兰氏 阳性杆菌的菌体进行分纯。纯化后的菌株进行吲哚试验、硝酸盐还原试验、过氧化氢酶试 验、产硫化氢试验，将试验均为阴性反应的菌株初步鉴定为乳杆菌属。然后采用糖发酵实验 和16s rDNA的方法对菌株进行种水平的鉴定。
[0025] 本发明中的植物乳杆菌KLDS1001的生理生化鉴定结果见表1 :
[0026] 表 1
[0027]
【权利要求】
1. 植物乳杆菌KLDS1001，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌 种保藏编号为：CGMCC No. 9066。
2. 如权利要求1所述植物乳杆菌KLDS1001在抑制口腔变异链球菌中的用途。
【文档编号】A61K35/74GK104140937SQ201410225304
【公开日】2014年11月12日 申请日期:2014年5月24日 优先权日:2014年5月24日
【发明者】孟祥晨, 彭悦, 朱文婕, 李艾黎 申请人:东北农业大学