基于吲哚胺2,3-双加氧酶的免疫疗法

基于吲哚胺2,3-双加氧酶的免疫疗法
【专利摘要】本发明涉及癌症的预防和治疗的领域。特别地，提供了能够引起抗癌免疫应答的蛋白质吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)或其肽片段。具体地，本发明涉及IDO或由其衍生的肽或IDO特异性T细胞在治疗癌症中的应用。因此本发明涉及抗癌疫苗，其任选地可以与其他免疫疗法联合使用，并且涉及过继转移的或在体内通过疫苗接种诱导的IDO特异性T细胞作为癌症治疗方法。本发明的一个方面是本文提供的药物可以与癌症化疗联合使用。更多的方面涉及通过如上所述的相同方式对感染的预防和治疗。还提供了IDO和其免疫原性肽片段在癌症和感染治疗、诊断和预后中的应用。
【专利说明】基于吲哚胺2, 3-双加氧酶的免疫疗法
[0001] 本申请是申请日为2009年4月17日、 申请人:为"海莱乌医院"、发明名称为"基于 吲哚胺2,3_双加氧酶的免疫疗法"的中国专利申请200980122844. 0的分案申请。
[0002] 相关申请的交叉引用
[0003] 在此申请或本申请中引用的所有专利和非专利参考文献的全部内容也通过引用 合并于此。

【技术领域】
[0004] 本发明涉及癌症的预防和治疗的领域。特别地，提供了能够引起抗癌免疫应答的 蛋白质--吲哚胺2, 3-双加氧酶（ID0)--或其肽片段。具体地，本发明涉及ID0或由其 衍生的肽或ID0特异性T细胞在治疗癌症中的应用。因此本发明涉及抗癌疫苗，其任选地 可以与其他免疫疗法结合使用，并且涉及过继转移的或在体内通过疫苗接种诱导的ID0特 异性T细胞作为癌症治疗方法。本发明的一个方面是本文提供的药物可以与癌症化疗治疗 联合使用。进一步的方面涉及通过如上所述的相同方式对感染的预防和治疗。
[0005] 还提供了 ID0和其免疫原性肽片段在癌症和感染治疗、诊断和预后中的应用。

【背景技术】
[0006] 免疫系统具有识别和破坏赘生性细胞的能力；然而，尽管致瘤性转化与免疫原性 抗原的表达相关这一事实，但免疫系统经常不能有效地对这些抗原应答。免疫系统显然耐 受这些抗原1。当这种情况发生时，赘生性细胞不受控制地增殖，导致恶性癌症的形成，其中 对于受累的个体其预后很差。对于癌症免疫治疗的成功进行，必须克服获得性的耐受状态。
[0007] 吲哚胺2,3_双加氧酶（ID0)是维持免疫系统的内稳态的主要成分，然而其也促 进肿瘤诱导的耐受性。ID0的表达和激活在肿瘤和肿瘤引流淋巴结（LN)中经由必需氨基酸 色氨酸的降解直接抑制T细胞或经由局部Treg-(激活调节性T细胞）介导的免疫抑制的 增强来建立致耐受性的环境。就前者而言，ID0的一些生物学作用通过色氨酸的局部耗竭 介导，而另一些作用则经免疫调节性色氨酸代谢物来介导 3'4。近年来，已经鉴定了 T细胞中 的ID0-应答信号传导系统，其包括应激激酶GCN2 5。GCN2对不带电荷tRNA的增加发生应 答，如果T细胞耗尽色氨酸这将会发生，并且缺乏GCN2的T细胞耐受ID0介导的抑制和无 反应性诱导 6。
[0008] ID0可以在肿瘤内由肿瘤细胞以及肿瘤基质细胞表达，在此其抑制免疫应答的效 应期。另外，表达ID0的抗原呈递细胞（APC)存在于肿瘤引流淋巴结中，在此认为它们建立 了致耐受性的微环境。实际上，从肿瘤引流淋巴结分离的表达ID0的CD19+浆细胞样树突细 胞（DC)在体内介导复杂的免疫抑制和T细胞无反应性 7'8 ;来自正常淋巴结和脾脏的浆细胞 样DC不表达ID0。在除肠之外的正常淋巴组织中非常少的细胞构成性地表达ID0。此暗示 肿瘤引流淋巴结中的、组成型表达ID0的DC必须接受到了刺激，该刺激与肿瘤的存在有关。 认为此刺激是由从肿瘤迁移至引流淋巴结的激活调节性T细胞（Tregs)传递的。Tregs已 经显示能经由CTLA-4的细胞表面表达来诱导IDO 9。ID0的诱导将肿瘤引流淋巴结从免疫环 境转变成耐受环境。实际上，当IDO+DC注射至体内时，它们在引流注射部位的淋巴结中建 立抗原特异性T细胞的抑制和无反应性1(1。除了其在免疫活性细胞中的表达以外，ID0常常 在肿瘤微环境中表达，或在肿瘤细胞本身中，或在不同的基质细胞中。在此情况下，ID0被 认为抑制免疫应答的效应期 n'12。在临床中，已经反复地观察到，肿瘤细胞中ID0的表达与 不佳的预后有关13' 14。
[0009] 因此，ID0的表达和伴随的ID0诱导的癌症免疫抑制造成了癌症治疗中的问题。


【发明内容】

[0010] 本发明基于发明人的出人意料的发现解决了癌症免疫抑制的问题，该发现是在癌 症患者中针对ID0表达细胞的自发性细胞毒性免疫应答。这些发现开启了新型治疗和诊 断方式之路，其可以广泛地应用于癌症疾病的控制中。
[0011] 本发明通过直接杀死表达ID0的癌细胞和通过杀死表达ID0、诱导无反应性的 APC/DC来靶向癌症疾病。这通过使T细胞能够识别表达ID0的细胞来完成。同样地，当临床 病症是感染时，T细胞能够杀死表达ID0的APC/DC。因此，癌细胞和APC中免疫抑制酶ID0 的表达与本发明的方法的应用结合是有积极意义的，本发明的方法靶向这些表达ID0的细 胞。此方法，尤其是因为其必须杀死APC/DC，与本领域中的普遍观点相反，在本领域的普遍 观点中通常试图下调/抑制ID0以便去除APC/DC周围的耐受环境同时保留这些细胞，这被 认为是必须的以便引起有效的免疫应答。
[0012] 此外，针对表达ID0的细胞的自发性细胞毒性免疫应答的发现是特别出人意料 的，因为表达ID0的细胞拮抗其他免疫治疗方法的所需效应。因此，靶向ID0和靶向肿瘤的 免疫疗法的组合是高度协同的。
[0013] 本发明涉及一种用作药物的疫苗组合物，其包含SEQ ID N0 : (1，13,14,15和/或 16)的吲哚胺2,3-双加氧酶（ID0)或与SEQIDN0:(l，13，14，15和/或16)具有至少70% 同一性的其功能同源物或包含所述ID0或所述其功能同源物的连续序列的免疫原性活性 肽片段或编码所述ID0或所述肽片段的核酸；以及佐剂。
[0014] 本发明的一个方面提供了基于上面公开的疫苗的免疫疗法的组合的协同效应，该 方面涉及包含该疫苗组合物和另外的免疫刺激组合物的多组分试剂盒。
[0015] 本文还提供了将本发明的疫苗与其他的癌症治疗诸如化疗剂结合的方面。
[0016] 本文还提供了将本发明的疫苗与其他的针对感染的治疗诸如免疫疗法和/或抗 生素结合的方面。
[0017] 本发明的另一方面涉及一种用于离体或原位诊断癌症患者中在PBL或在肿瘤组 织中与ID0有反应性的T细胞的存在的组合物，所述组合物包含SEQ ID N0 : (1，13,14,15 和/或16)的吲哚胺2,3-双加氧酶（ID0)或与SEQIDN0:(l，13，14，15和/或16)具有 至少70%同一性的其功能同源物或包含所述IDO或所述其功能同源物的连续序列的免疫 原性活性肽片段。
[0018] 另外的一个方面涉及一种用于离体或原位诊断癌症患者中在PBL或在肿瘤组织 中与ID0有反应性的T细胞的存在的诊断试剂盒，所述试剂盒包含SEQ ID N0: (1，13,14,15 和/或16)的吲哚胺2,3-双加氧酶（ID0)或与SEQIDN0:(l，13，14，15和/或16)具有 至少70%同一性的其功能同源物或包含所述ID0或所述其功能同源物的连续序列的免疫 原性活性肽片段。
[0019] 本文还提供了一种包含所述ID0或所述其功能同源物的连续序列的肽片段和I类 HLA或II类HLA分子或此类分子的片段的复合物。
[0020] 本发明的另一个方面是一种检测癌症患者中ID0反应性T细胞的存在的方法，所 述方法包括将肿瘤组织或血样与包含所述ID0或所述其功能同源物的连续序列的肽片段 和I类HLA或II类HLA分子或此类分子的片段的复合物接触，并且检测所述复合物与所述 组织或所述血细胞的结合。
[0021] 本发明还有一个方面涉及一种能够与包含所述ID0或所述其功能同源物的连续 序列的肽片段特异性结合的分子。
[0022] 由此可见，通过上述的任一种方式治疗临床病症诸如癌症或感染的方法包括在本 发明的范围内；所述方式包括向患有临床病症的个体施用有效量的如上所述的疫苗组合 物；能够与包含所述ID0或所述其功能同源物的连续序列的肽片段特异性结合的分子，或 包含上述的疫苗或分子以及其他的免疫刺激组合物和/或化疗剂的多组分试剂盒。
[0023] 因此包含所述ID0或所述其功能同源物的连续序列的免疫原性活性肽片段或上 述疫苗组合物在制造用于治疗或预防癌症疾病的药物中的应用也是本发明的目的。
[0024] 本发明的另一个目的是一种监测免疫接种作用的方法，所述方法包括以下步骤： 提供来自个体的血样 ；提供SEQIDN0:(1，13，14，15和/或16)的ID0或与SEQIDN0:(1， 13,14,15和/或16)具有至少70%同一性的其功能同源物或包含所述ID0或所述其功能同 源物的连续序列的免疫原性活性肽片段或编码所述ID0或所述肽片段的核酸；确定所述血 样是否包含与所述蛋白质或肽特异性结合的抗体或含有与所述蛋白质或肽特异性结合的T 细胞受体的T细胞；以及从而确定在所述个体中是否已经产生了针对所述蛋白质或肽的免 疫应答。

【专利附图】

【附图说明】
[0025] 图1针对ID0的HLA-A2-限制性T细胞应答；
[0026] 图2a HLA-A2-限制性阳性对照肽的结合；
[0027] 图2b来自肾细胞癌患者的PBL中的ID05-特异性⑶8T细胞；
[0028] 图2c_f ID05-特异性T细胞的四聚体分析；
[0029] 图3ID05-特异性T细胞克隆的特异性和功能性能力；
[0030] 图4直方图显示细胞内ID0染色；
[0031] 图5ID05-特异性T细胞克隆（RBS35)杀死IFN- γ处理的乳腺癌细胞系的功能性 能力；
[0032] 图6ID05-特异性T细胞克隆（RBS35)杀死DC的功能性能力；
[0033] 图7通过51Cr_释放测定法测定ID05-特异性T细胞的特异性和功能性能力；
[0034] 图8ID0序列IDO、IDOA、ID0B和ID0C的多序列比对；
[0035] 图9ID0和ID0LIKE的配对比对。

【具体实施方式】
[0036] 本发明的主要目的是提供一种用作预防癌症、减少形成癌症的风险或治疗癌症的 药物的疫苗组合物，其包含吲哚胺2, 3-双加氧酶（IDO)或其免疫活性多肽片段。
[0037] 定义
[0038] 佐剂：与施用的免疫原决定簇/抗原/核酸构建体的混合增加或以其他的方式改 变对所述决定簇的免疫应答的任何物质。
[0039] 氨基酸：任何合成或天然存在的氨基羧酸，包括存在于肽和多肽中的任何氨基酸， 所述肽和多肽包括体内合成的蛋白质和酶，因此包括氨基酸的修饰。本文中使用的术语氨 基酸与术语"氨基酸残基"同义，氨基酸残基的含义包含如所述的已经与至少一种其他物 类，诸如2种，例如3种，诸如超过3种的其他物类反应的氨基酸。上位术语氨基酸包括天 然的和非天然的氨基酸两者，它们的任一种可以处于"D"或"L"异构形式。
[0040] 抗体：免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的活性部分。抗体例如是完整的免疫球 蛋白分子或其保留免疫学活性的片段。
[0041] 抗原：可以与克隆性分布的免疫受体（T细胞或B细胞受体）结合的任何物质。通 常，为肽、多肽或多聚多肽。抗原优选地能够引起免疫应答。
[0042] APC :抗原呈递细胞。APC是在其表面上展示与MHC复合的外来抗原的细胞。T细 胞可以使用其T细胞受体（TCR)识别此复合物。APC分为两类：专职性，（其有三种类型： 树突细胞、巨噬细胞和B细胞）或非专职性（不组成型表达与幼稚T细胞相互作用所需的 主要组织相容性复合物蛋白质；这些仅在通过某些细胞因子诸如IFN-γ刺激非专职性APC 时表达）。
[0043] 加强：通过加强接种或剂量进行加强是给予额外剂量的免疫试剂，诸如疫苗，该免 疫试剂在初始剂量后的一定时间给予从而保持由先前剂量的相同试剂所引起的免疫应答。
[0044] 癌症：本文中任何肿瘤前或肿瘤性疾病，良性的或恶性的，其中"肿瘤性"是指细胞 的异常增殖。
[0045] 载体：与抗原结合以辅助诱导免疫应答的实体或化合物。
[0046] 嵌合蛋白：一种遗传改造的蛋白质，其由通过将两种或多种完全的或部分的基因 或一系列（非）随机核酸拼接在一起制备的核苷酸序列编码。
[0047] 临床病症：需要医学救护的病症，本文中尤其是与ID0的表达有关的病症。所述病 症的实例包括：癌症和感染。
[0048] 补体：一系列复杂的血液蛋白，其作用"补充"抗体的作用。补体破坏细菌，产生炎 症,并且调节免疫反应。
[0049] CTL :细胞毒性T淋巴细胞。一种表达⑶8以及T细胞受体并且因此能够对由I类 分子呈递的抗原应答的T细胞亚群。
[0050] 细胞因子：生长或分化调节剂，其在本文中非限定性地使用，并且应该不限制对本 发明和权利要求的解释。除了细胞因子以外，粘附分子或辅助分子，或其任何组合，可以单 独采用或与细胞因子联合使用。
[0051] 递送载体：一种实体，凭借该实体，核苷酸序列或多肽或两者可以从至少一种介质 转运至另一种介质。
[0052] DC:树突细胞。（DC)是免疫细胞并且形成哺乳动物免疫系统的一部分。它们的主 要功能是加工抗原物质和将其呈递在免疫系统的其他细胞的表面上，因此作为抗原呈递细 胞（APC)起作用。
[0053] 片段：用来表示核酸或多肽的非全长部分。因此，片段本身也分别是核酸或多肽。 [0054] 功能同源物：功能同源物可以是与给定基因/基因产物/蛋白质/多肽的野生型 形式/序列显示至少一些序列同一性并且保留初始序列功能性的至少一个方面的任何核 酸/蛋白质/多肽。本文中ID0的功能同源物具有诱导对表达ID0的细胞的免疫应答的能 力。
[0055] ID0:n引哚胺2,3-双加氧酶。在SEQIDN0s:(l，13，14，15，和16)中被标识。
[0056] 个体：通常为鸟、哺乳动物、鱼、两栖动物、或爬行动物的任何种或亚种，优选哺乳 动物，最优选人类。
[0057] 感染：本文术语"感染"涉及产生免疫应答的任何类型的临床病症，并且因此包括 感染、慢性感染、自身免疫性疾病和变态反应性炎症。
[0058] 分离的：与本文公开的核酸、多肽和抗体结合使用的"分离的"是指这些核酸、多肽 和抗体已经被鉴定和从其天然环境（通常为细胞环境）的组分中分离和/或回收。本发明 的核酸、多肽和抗体优选是分离的，并且本发明的疫苗和其他组合物优选包含分离的核酸、 多肽或分离的抗体。
[0059] MHC :主要组织相容性复合物，存在两种主要亚类的MHC，I类和II类。
[0060] 核酸：传递遗传信息的核苷酸的链或序列。就本发明而言，核酸是脱氧核糖核酸 (DNA)。
[0061] 核酸构建体：遗传改造的核酸。典型地包含几种元件诸如基因或其片段、启动子、 增强子、终止子、polyA尾、接头、多接头、操作接头、多克隆位点（MCS)、标志物、STOP密码 子、其他调控元件、内部核糖体进入位点（IRES)等等。
[0062] 操作接头：以确保核酸或多肽的生物学加工的方式将两部分核酸构建体或（嵌 合）多肽结合在一起的核苷酸或氨基酸残基的序列。
[0063] 病原体：疾病的特异性致病因子，尤其是生物剂诸如病毒、细菌、朊病毒或寄生虫， 它们可以使其宿主导致疾病，也称为传染剂（infectious agent)。
[0064] PBL :外周血细胞是血液的细胞组分，其由红细胞、白细胞和血小板组成，其在血液 的循环池中发现并且在淋巴系统、脾脏、肝脏或骨髓内不被隔离。
[0065] PBMC :外周血单核细胞（PBMC)是具有圆形细胞核的血细胞，诸如淋巴细胞或单核 细胞。这些血细胞是免疫系统对抗感染并适应入侵者的关键组分。淋巴细胞群由T细胞 (⑶4和⑶8阳性?75% )、B细胞和NK细胞（合在一起?25% )组成。
[0066] 肽：形成序列并由酰胺键连接的多个共价连接的氨基酸残基。该术语与寡肽和多 肽类似地使用。天然和/或非天然氨基酸可以通过肽键或通过非肽键连接。术语肽也包括 通过化学或酶催化的反应引入的翻译后修饰，如本领域中所公知的。该术语可以指多肽的 变体或片段。
[0067] 药用载体：也称为赋形剂或稳定剂，在采用的剂量和浓度下其对接触其的细胞或 个体是无毒性的。通常，生理学可接受的载体是pH缓冲水溶液。生理学可接受的载体的 实例包括缓冲液诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子 量（小于约10个残基）多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物 诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二 糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂诸如EDTA ;糖醇诸如甘露醇或山 梨醇；形成盐的抗衡离子诸如钠；和/或非离子型表面活性剂诸如TWEEN. TM.、聚乙二醇 (PEG)和 PLURONICS. TM。
[0068] 多个（种）：至少两个（种）。
[0069] 启动子：DNA链中的结合位点，RNA聚合酶结合在该位点以启动一个或多个相邻的 结构基因对信使RNA的转录。
[0070] 信号肽：氨基酸的短序列，其确定蛋白质在细胞中的最终位置，也称为分选肽 (sorting peptide)〇
[0071] 表面活性剂：能够减少溶解其的液体的表面张力的表面活性试剂。表面活性剂是 含有亲水的极性基团和疏水的且经常由脂肪链组成的非极性基团的化合物。
[0072] Treg:调节性T细胞/T淋巴细胞。
[0073] 疫苗：一种能够在动物中诱导免疫应答的物质或组合物。在本文中也称为免疫原 性组合物。免疫应答是在生物体中诱发记忆的免疫应答（体液/抗体和/或细胞免疫），导 致传染剂被继发应答而非初次应答对抗，由此减少其对宿主生物体的影响。本发明的疫苗 可以作为预防性和/或治疗性药物给予。该组合物可以包含下列的一种或多种：一种或多 种抗原，包含与Π 可操作地连接的一种或多种抗原的核酸构建体，载体，佐剂和药用载体。
[0074] 变体：指定的参照核酸或多肽的"变体"是指显示与所述参照核酸或多肽的一定 程度的序列同源性/同一性但不同于所述参照核酸或多肽的核酸或多肽。
[0075] 吲哚胺2, 3-双加氧酶
[0076] 吲哚胺2, 3-双加氧酶（ID0)是催化L-色氨酸转变为N-甲酰犬尿氨酸的酶，并 且因此是通过犬尿氨酸途径的色氨酸分解代谢的第一个酶和限速酶。色氨酸的分解代 谢导致色氨酸的消耗，其消耗抑制T细胞应答并且促进哺乳动物妊娠、肿瘤抵抗（tumor resistance)、慢性感染、自身免疫性和变态反应性炎症中的免疫耐受性。因此，不仅癌症， 而且通常感染，且尤其是慢性感染的感染，自身免疫性和特别地变态反应性炎症所有均是 与本发明相关的临床病症。
[0077] ID0在人中以5种形式存在：ID0, IDOA，IDOB，ID0C和ID0LIKE (在文献中也称为 ID02)。ID0是如SEQ ID N0 :1中所公开的403个氨基酸残基长的多肽，并且与SEQ ID N0 : 16的ID0LIKE -起是本文中优选的IDO。其他的IDO也与本发明相关，尽管关于它们知之 甚少；它们在本文中被标识为 ID0A :SEQ ID N0 :13, ID0B :SEQ ID N0 :14 和 ID0C :SEQ ID N015。ID0LIKE不如IDO那样广泛地表达，但如其亲缘体一样，也在抗原呈递树突细胞中表 达，在所述树突细胞中色氨酸分解代谢驱动免疫耐受。如ID0 -样，ID0LIKE使色氨酸分解 代谢，触发翻译起始因子eIF2 α的磷酸化，并且动员LIP的翻译，所述LIP是免疫调节转录 因子NF-IL6的一种抑制性亚型（Popov & Schultze，2008)。本文中术语ID0通常指所有上 述ID0和它们相应的序列。
[0078] ID0已经被鉴定为一种主要的免疫调节分子，其是几个负反馈机制的一部分，通过 这些机制免疫应答处于控制之下。以此方式，ID0也在癌症中发挥关键性的免疫抑制功能。 在本发明所基于的研究中，检验了是否ID0本身可以充当免疫应答的靶标，其可开发用于 免疫治疗，特别是对于癌症的治疗。通过采取"反向免疫"方式，鉴定了 ID0蛋白内的HLA-A2 肽，在患有不相关的肿瘤类型，即，黑色素瘤、肾细胞癌和乳腺癌的患者中对其检测到自发 性T细胞反应性。这些天然存在的T细胞应答容易地使用HLA/肽四聚体在体外刺激后通 过流式细胞术而可见，而且也容易地在直接离体测定中可见。此外，明确地证实IDO反应性 T细胞实际上是肽特异性的细胞毒性效应细胞。换句话说：ID0特异性T细胞有效地溶解不 同来源（诸如黑色素瘤、结肠癌、乳腺癌以及直接离体富集的AML母细胞）的ID0+癌细胞 系。在来自患有不相关癌症类型的患者的PBL中针对ID0来源的肽表位的自发性CTL应答 的存在以及ID0特异性T细胞杀死不同来源的癌细胞说明了 ID0的免疫治疗潜力。更为独 特的是下面的发现，即，ID0特异性CTL识别并杀死ID0+成熟DC ;因此，ID0特异性T细胞 能够杀死免疫活性DC。近年来的报道已经证明ID0在人DC中在成熟后被上调23' 24。而且， 在拟用于在癌症患者中疫苗接种的DC中也观察到ID0表达并且此表达在s. c.(皮下）注 射后保持在原位25。在基于DC的治疗疫苗中ID0的表达经由吸引或诱导F〇xP3(+)Treg来 保持其关键性的临床相关性。
[0079] ID0的双重作用（抑制免疫应答的初发期和效应期两者）不是相互排斥的；实际 上，有可能两者在特定的肿瘤中均起作用。ID0发挥的另一作用可能与癌症免疫治疗的结 果高度相关：作为炎症诱导的抗调节机制。抗调节应答在免疫系统中是重要的，因为它们有 助于限制免疫应答的强度和程度，否则免疫应答可能导致对宿主的危险的损害。然而，就抗 癌免疫治疗而言，抗调节应答拮抗针对肿瘤建立强免疫应答的能力。就抗调节是仅响应于 免疫激活而引发的继发事件而言，抗调节不同于耐受。ID0已知由I型和II型干扰素两种 类型诱导，这些干扰素有可能在免疫激活和炎症部位被发现 26'27。值得注意的是，在此证明 了通过与IFN-γ的预温育增加了肿瘤细胞对ID0反应性T细胞导致的杀死的易感性。同 样地，已报道共刺激分子4-1BB (⑶137)的系统性连接诱导ID028。当然大多数抗癌免疫治 疗策略不管其分子靶标为何，均针对诱导免疫激活和炎症（例如，在疫苗的部位处或肿瘤 内）。事实上，在可接受的毒性范围内，达到尽可能多的免疫激活是目标；因此，抗调节不合 乎需要。就此而言，在用CTLA-4阻断（S卩，抗CTLA-4抗体）治疗的黑色素瘤和肾细胞癌患 者两者中，已经报道了小肠结肠炎和肿瘤消退之间的关联性 29。因此，自身免疫反应明确地 与临床功效相关3°'31。CTLA-4阻断被认为通过抑制Treg的功能来减少对自身抗原的外周 耐受性和增加 T细胞激活来介导其抗肿瘤和IRAE-诱导效应。
[0080] 由于表达ID0的细胞拮抗其他免疫治疗方法的所需效应，例如通过疫苗接种靶向 表达ID0的细胞，过继T细胞转移或免疫刺激剂（所有这些均是本发明的方面），因此与其 他抗癌免疫治疗在作用上是高度协同的。在本公开中，证明了 CTL限定的ID0表位可广泛 地应用于治疗性疫苗接种中，并且因此具有重要的免疫治疗价值。
[0081] 因此本发明的一个方面是提供一种用作用于治疗临床病症的药物的疫苗组合物， 其包含吲哚胺2,3_双加氧酶（ID0)或其免疫活性多肽片段。所述临床病症可以是癌症，并 且本发明的另一方面是预防癌症、减少形成癌症的风险或治疗癌症。另一方面涉及本发明 的疫苗组合物与其他药物诸如免疫治疗药物和/或化疗剂的联合应用。还有一个方面涉及 如本文所公开的疫苗组合物在病毒和/或微生物来源的疾病的治疗中的应用，并还涉及所 述疫苗与其他药物诸如免疫治疗药物和/或抗生素和/或抗病毒剂的联合应用。
[0082] 功能同源物
[0083] 序型
[0084] 野生型人ID0,即，该蛋白质的天然存在的未突变形式，在SEQ ID N0 :1中鉴定。本 发明涵盖包含下列的疫苗组合物：ID0 ;ID0的免疫活性肽片段；ID0的肽片段的组合物，其 中至多两个氨基酸已经被置换；和/或IDO的功能同源物，其与SEQ ID NO :1具有至少70% 的序列同一性。术语多肽片段在本文中用来定义氨基酸残基的任何非全长（如与SEQ ID NO :1相比）链，其直接来源于如SEQ ID NO :1中所鉴定的ID0,或合成以与其相同，或合成 以与其具有至少70%的序列同一性。
[0085] 功能同源物可以被定义为在序列上与野生型ID0(诸如野生型人ID0)不同但仍然 能够诱导针对表达ID0的细胞（诸如癌细胞和DC)的免疫应答的ID0的全长或片段。在这 些细胞中表达的ID0可以是野生型或内源性突变的（诸如在细胞分裂期间诱导的先天性突 变体或突变等等）。功能同源物可以是野生型ID0的突变形式或选择性剪接形式。在另一 个方面，ID0的功能同源物如本文下面所述进行定义。功能同源物可以是，但不限于，具有 离体引入的一个或多个突变和/或一个或多个序列缺失和/或添加的全长或片段化ID0的 重组形式。
[0086] ID0的功能同源物可以是与SEQ ID N0 :1显示至少一些序列同一性并且具有诱导 对表达ID0的细胞的免疫应答的能力的任何蛋白质/多肽。
[0087] 因此，在具体实施方案中，本发明的免疫原性活性肽片段由如SEQ ID N0 :1中所鉴 定的ID0或其功能同源物的50个氨基酸残基，例如至多45个氨基酸残基，诸如至多40个 氨基酸残基，例如至多35个氨基酸残基，诸如至多30个氨基酸残基，例如至多25个氨基酸 残基，诸如18-25个连续氨基酸组成；所述功能同源物为其中至多三个氨基酸，诸如两个氨 基酸，诸如一个氨基酸已经被置换的功能同源物。
[0088] 因此在另一个具体实施方案中，本发明的免疫原性活性肽片段由来自SEQ ID N0 : 1的ID0或其功能同源物的至多25个氨基酸残基，诸如至多24个氨基酸残基，诸如至多23 个氨基酸残基，诸如至多22个氨基酸残基，诸如至多21个氨基酸残基，诸如至多20个氨基 酸残基，例如至多19个氨基酸残基，诸如至多18个氨基酸残基，例如至多17个氨基酸残 基，诸如至多16个氨基酸残基，例如至多15个氨基酸残基，诸如至多14个氨基酸残基，例 如至多13个氨基酸残基，诸如至多12个氨基酸残基，例如至多11个氨基酸残基，诸如8-10 个连续氨基酸残基组成；所述功能同源物为其中至多三个氨基酸，诸如两个氨基酸，诸如一 个氨基酸已经被置换的功能同源物。优选地，所述肽包含来自如SEQ ID N0 :1中所鉴定的 ID0或其功能同源物的至多10个连续氨基酸残基，诸如至多9个连续氨基酸残基，诸如8个 连续氨基酸残基，诸如来自ID0的7个连续氨基酸残基；所述功能同源物为其中至多三个氨 基酸，诸如两个氨基酸，诸如一个氨基酸已经被置换的功能同源物。
[0089] 因此在一些实施方案中，本发明的肽为九肽（包含9个氨基酸残基的肽），和一些 十肽（包含10个残基），并且这些可以选自下列的非限制性群组（首先为肽名称，然后是序 列、ID0 序列中的位置和 SEQ ID NO.) :ID01 :QLRERVEKL (54-62) (SEQ ID NO :2); ID02 :FLVSLLVE 1(164-172)(SEQ ID NO :3) ;ID03 :TLLKALLE 1 (195-203) (SEQ ID NO ：4) ；ID04 ：F I A K H L P D L(41-49) (SEQ ID NO ：5) ；ID05 ：A L L E I A S C L(199-207)(SEQ ID NO ：6) ；ID06 ：VLSKGDAG L(32〇-328)(SEQ ID NO ：7) ；ID07 ： DLMNFLKT V(383-391)(SEQ ID NO ：8) ；ID08 ：V L L G I Q Q T A(275-283)(SEQ ID NO ：9) ；ID09 ：K V L P R N I A V(101-109) (SEQ ID NO ：10) ；ID010 ：KLNMLSIDH L(61-70) (SEQ ID NO :11) ;ID011 :SLRSYHLQI V(341-350) (SEQ ID NO :12)。优选 地，本发明的肽为 ID05 :A L L E I A S C L(199-207) (SEQ ID NO :6) ;ID02 :F L V S L L V E 1(164-172) (SEQ ID NO :3);和 / 或 ID06 :VLSKGDAGL (320-328) (SEQ ID NO : 7)。最优选地，本发明的疫苗组合物包含具有ID05 :A L L E I A S C L(199-207) (SEQ ID NO :6)的至少一种肽。
[0090] 本发明的其他肽包含（或更优选地由其组成）SEQ ID NO :1的IDO或与SEQ ID NO :1具有至少70%同一性的其功能同源物的4-120,优选8-100,更优选10-75,还更优选 12-60,甚至更优选15-40,诸如18-25个连续氨基酸，在所述功能同源物中，SEQ ID N0 :1的 ID0的至多三个氨基酸已经被置换、删除或添加，诸如两个氨基酸已经被置换、删除或添加， 或一个氨基酸已经被置换、删除或添加。
[0091] 在本发明的一个实施方案中，ID0肽包含变体肽。如本文所使用，表述"变体"是指 与基础蛋白（适当地为人ID0)同源但与得到它们的基础序列不同的肽，不同之处在于该序 列内的一个或多个氨基酸被置换为其他氨基酸。适当的变体将具有至多6个氨基酸置换， 例如至多5个氨基酸置换，诸如至多4个氨基酸置换，例如至多3个氨基酸置换，诸如至多 2个氨基酸置换，例如至多1个氨基酸置换。
[0092] 适当的变体将与SEQ ID N0 :1的ID0共享至少70%的序列同一性，并且因此，变体 优选与人ID0的序列具有至少75%序列同一性、例如至少80%序列同一性、诸如至少85% 序列同一性、例如至少90%序列同一性、诸如至少91%序列同一性、例如至少91%序列同 一性、诸如至少92%序列同一性、例如至少93%序列同一性、诸如至少94%序列同一性、例 如至少95%序列同一性、诸如至少96%序列同一性、例如至少97%序列同一性、诸如至少 98 %序列同一性、例如99 %序列同一性。
[0093] 序列同一性可以使用许多熟知的算法并应用许多不同的空位罚分来计算。序列同 一性相对于全长SEQ ID N0 :1来计算。任意的序列比对工具，诸如但不限于FASTA、BLAST 或LALIGN，可以用于搜索同源物和计算序列同一性。此外，当适当时，任何公知的置换矩阵， 诸如但不限于PAM、BL0SSUM或PSSM矩阵，可以使用搜索算法来应用。例如，PSSM(位置特 异性记分矩阵（position specific scoring matrix))可以经PSI-BLAST程序来应用。此 夕卜，序列比对可以使用一定范围的用于空位开放和延伸的罚分来进行。例如，BLAST算法可 以使用5-12的范围内的空位开放罚分，和1-2的范围内的空位延伸罚分。
[0094] 功能等同物可以进一步包含化学修饰诸如泛素化、标记（例如，使用放射性核 素、各种酶等）、聚乙二醇化（用聚乙二醇衍生）、或通过插入（或通过化学合成置换）氨基 酸（多个氨基酸）诸如鸟氨酸（正常情况下其不存在于人蛋白中），然而，优选功能等同物 不包含化学修饰。
[0095] 与SEQ ID N0 :1的ID0相比对氨基酸残基的序列作出的任何改变优选地是保守置 换。本领域技术人员将知晓如何作出和评估"保守"氨基酸置换，通过该保守置换，一个氨 基酸置换成另一个具有一种或多种共同的化学和/或物理特性的氨基酸。保守氨基酸置换 较不可能影响蛋白质的功能性。氨基酸可以根据共同的特性进行分组。保守氨基酸置换是 预定组的氨基酸内的一个氨基酸替换成相同组内的另一个氨基酸，其中预定组内的氨基酸 显示相似的或基本上相似的特性。
[0096] 因此，在本发明的一个实施方案中，疫苗组合物包含由SEQ ID N0 :1的ID0的8-50 个氨基酸的范围内、优选8-10或20-25个氨基酸的范围内的连续序列组成的多肽，其中至 多三个氨基酸已经被置换，并且优选所述置换是保守的。
[0097] MHC
[0098] 存在两种类型的MHC分子；MHC I类分子和MHC II类分子。MHC I类分子被CD8 T细胞识别，该细胞是适应性免疫应答的主要效应细胞。MHC II类分子主要在抗原呈递细 胞（APC)的表面上表达，其中最重要的似乎是树突细胞。APC刺激幼稚T细胞，以及免疫系 统中的其他细胞。它们刺激⑶8 T细胞和⑶4 T细胞两者。
[0099] 在一个实施方案中，提供了新的MHC I类-限制性肽片段，该肽片段由来自SEQ ID N01的IDO或其功能同源物的8-10个氨基酸组成，其中SEQ ID N01的至多两个氨基酸已 经被置换，其特征为具有几个特征中的至少一个，其中之一是以一定的亲和力结合对其是 限制性的I类HLA分子的能力，所述亲和力如通过能够达到I类HLA分子的半数最大回收 值（C 5(l值）（其至多50 μ M)的肽的量来测量，如通过本文所述的装配结合测定法（assembly binding assay)来测定。此装配测定法基于在将肽负载至肽转运蛋白缺陷细胞系T2后HLA 分子的稳定。随后，正确折叠的稳定HLA重链使用构象依赖性抗体免疫沉淀，并且对肽结合 进行定量。此实施方案的肽包含（或更优选由其组成）SEQ ID N01的ID0或其中SEQ ID N01的至多两个氨基酸已经被置换的其功能同源物的至多200个，优选至多100个，更优选 至多50个，还更优选至多25个，甚至更优选至多20个，还甚至更优选至多15个，诸如至多 10个，例如8-10个范围内的连续氨基酸。
[0100] 此测定提供了筛选候选肽以上述亲和力结合特定HLA等位基因分子的能力的简 单方式。在优选的实施方案中，本发明的肽片段是具有至多30 μ Μ的C5(l值，诸如至多20 μ Μ 的c5(l值，包括至多10 μ Μ、至多5 μ Μ和至多2 μ Μ的C5(l值的肽片段。
[0101] 在另一个优选的实施方案中，提供了 SEQ ID N01的IDO或其功能同源物的新的 MHC II类-限制性肽片段，在所述功能同源物中，SEQ ID N01的至多两个氨基酸已经被置 换，（本文中也称为"肽"），其特征为具有本文下面所述的几个特征中的至少一个。此实施 方案的肽包含（或更优选由其组成）SEQ ID N01的ID0或其中SEQ ID N01的至多两个氨基 酸已经被置换的其功能同源物的4-120个，优选8-100个，更优选10-75个，还更优选12-60 个，甚至更优选15-40个，诸如18-25个连续氨基酸，。
[0102] 因此，提供了 SEQ ID N01的ID0或其功能同源物的新的具有8-10个氨基酸的MHC I类-限制性肽片段和新的具有18-25个氨基酸的MHC II类-限制性肽片段，在所述功能 同源物中，SEQ ID N01的至多两个氨基酸已经被置换，其特征为具有本文下面所述的几个 特征中的至少一个，其中之一是结合对其是限制性的I类或II类HLA分子的能力。
[0103] 在具体实施方案中，提供了肽片段，其是具有下列特征的至少一个的MHCI类限制 性肽或MHC II类限制性肽：
[0104] (i)能够以如通过ELISP0T测定法测定的至少1个/104个PBL的频率在癌症患者 的PBL群中诱发INF- γ产生细胞，和/或
[0105] (ii)能够在肿瘤组织中原位检测与所述表位肽反应的CTL，
[0106] (iii)能够在体外诱导ID0特异性T细胞的生长。
[0107] 根据本发明更优选的肽是能够引起如通过ELISP0T测定法（例如，本文下面实施 例1中所述的ELISP0T测定法）测定的特异性T细胞应答的肽。一些肽尽管不以高亲和力 结合I类或II类MHC，但可以仍然产生如通过ELISP0T测定的T细胞应答。能够以高亲和 力结合MHC I类或II类的其他肽也产生如通过ELISP0T测定的T细胞应答。两种类型的 肽是根据本发明优选的肽。
[0108] 因此，根据本发明优选的肽是能够产生如通过ELISP0T测定法测定的特异性T细 胞应答的肽，其中每1〇 8个细胞、更优选每1〇7个细胞、甚至更优选每1〇6个细胞、还更优选 每1〇 5个细胞、诸如每1〇4个细胞测量50个特异性斑点。
[0109] 根据本发明最优选的肽是能够在患有以表达ID0为特征的临床病症的个体中引 起细胞免疫应答的肽，所述临床病症优选为癌症或感染，且最优选是癌症。
[0110] 如上所述，HLA系统代表人主要组织相容性（MHC)系统。一般而言，MHC系统控制 一系列特性：移植抗原，胸腺依赖性免疫应答，某些补体因子和某些疾病的诱因。更具体地， MHC编码三种不同类型的分子，S卩，I类、II类和III类分子，其决定MHC的更普遍的特性。 在这些分子中，I类分子是所谓的HLA-A、HLA-B和HLA-C分子，它们存在于大多数有核细胞 和凝血细胞的表面上。
[0111] 本发明的肽的特征为它们结合（受限于）特定的MHC I类HLA分子的能力。因 此，在一个实施方案中，肽是由MHC I类HLA-A分子限制的肽，所述I类HLA-A分子包括 HLA-A1、HLA-A2、HLA-A3、HLA-A9、HLA-A10、HLA-A11、HLA-Awl9、HLA-A23 (9)、HLA-A24 (9)、 HLA-A25 (10)、HLA-A26 (10)、HLA-A28、HLA-A29 (wl9)、HLA-A30 (wl9)、HLA-A31 (wl9)、 HLA-A32 (wl9)、HLA-Aw33 (wl9)、HLA-Aw34 (10)、HLA-Aw36、HLA-Aw43、HLA-Aw66 (10)、 HLA-Aw68 (28)、HLA-A69 (28)。在文献中也使用更简单的命名，其中仅使用主要数字命名，例 如，HLA-A19或HLA-A24分别代替HLA-Awl9和HLA-A24 (49)。在具体的实施方案中，本发明 的肽受限于选自由HLA-A1、HLA-A2、HLA-A3、HLA-A11和HLA-A24组成的组的MHC I类HLA 物种。在具体的实施方案中，本发明的肽受限于MHC I类HLA物种HLA-A2或HLA-A3。
[0112] 在更多的有用的实施方案中，本发明的肽是由MHC I类HLA-B分子限制的肽， 所述 I 类 HLA-B 分子包括下列的任一种：HLA-B5、HLA-B7、HLA-B8、HLA-B12、HLA-B13、 HLA-B14、HLA-B15、HLA-B16、HLA-B17、HLA-B18、HLA-B21、HLA-Bw22、HLA-B27、HLA-B35、 HLA-B37、HLA-B38、HLA-B39、HLA-B40、HLA-Bw41、HLA-Bw42、HLA-B44、HLA-B45、HLA-Bw46 和 HLA-Bw47。在本发明的具体实施方案中，能够结合本发明的肽的MHC I类HLA-B物种选自 HLA-B7、HLA-B35、HLA-B44、HLA-B8、HLA-B15、HLA-B27 和 HLA-B51。
[0113] 在更多的有用的实施方案中，本发明的肽是由MHC I类HLA-C分子限制的肽，所 述I类HLA-C分子包括但不限于下列的任一种：HLA-Cwl、HLA-Cw2、HLA-Cw3、HLA-Cw4、 HLA-Cw5、HLA-Cw6、HLA-Cw7 和 HLA-Cwl。
[0114] 在更多的有用的实施方案中，本发明的肽是由MHC II类HLA分子限制的肽，所述 II 类 HLA 分子包括但不限于下列的任一种：HLA-DPA-1、HLA-DPB-1、HLA-DQA1、HLA-DQB1、 HLA-DRA、HLA-DRB和这些组中的所有等位基因以及HLA-DM、HLA-D0。
[0115] 可以通过比对结合给定的特定HLA分子的已知序列从而揭示在肽中特定位点处 的少数相关氨基酸的超优势度来选择潜在地具有结合特定HLA分子的能力的肽。这些占优 势的氨基酸残基在本文中也称为"锚定残基"或"锚定残基基序"。基于在可进入的数据库 中可以发现的已知序列数据，通过按照这样的相对简单的步骤，可以从ID0得到可能与具 体HLA分子结合的肽。对于一定范围的HLA分子这些分析的代表性实例在下表中给出：
[0116] 表 2
[0117]

【权利要求】
1. 一种疫苗组合物，其包含： a) 由SEQ ID NO :1的吲哚胺2, 3-双加氧酶的18-30个氨基酸范围的连续序列组成的 免疫原性活性肽片段；和 b) 佐剂， 其用作药物。
2. 根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中所述疫苗组合物当施用于患有以吲哚胺2， 3_双加氧酶的表达为特征的临床病症的个体时能够引起针对表达SEQ ID N0:(l、13、14、15 和/或16)的吲哚胺2, 3-双加氧酶或其功能同源物的癌症和/或抗原呈递细胞的免疫应 答。
3. 根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其中所述疫苗组合物能够在所述个 体中引起细胞免疫应答。
4. 根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其中所述临床病症是癌症。
5. 根据权利要求1-3中任一项所述的疫苗组合物，其中所述临床病症是感染。
6. 根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其包含具有下列特征的至少一种的 MHC I类-限制性肽： a) 能够以通过ELISP0T测定法测定的至少1个/104个PBL的频率在患有临床病症的 个体的PBL群中诱发INF-γ产生细胞，和/或 b) 能够在肿瘤组织中原位检测与所述表位肽具有反应性的CTL， c) 能够在体外诱导吲哚胺2, 3-双加氧酶特异性T细胞的生长。
7. 根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其包含免疫原性活性肽片段，所述 免疫原性活性肽片段受MHC I类分子限制。
8. 根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其包含免疫原性活性肽片段，所述 免疫原性活性肽片段受MHC I类HLA-A2分子限制。
9. 根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其包含免疫原性活性肽片段，所述 免疫原性活性肽片段受MHC II类分子限制。
10. 根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其包含免疫原性活性肽片段，所述 免疫原性活性肽片段受MHC II类HLA-DRB分子限制。
11. 根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其中所述免疫原性活性肽片段由 SEQ ID NO :1的吲哚胺2, 3-双加氧酶的18-25个连续氨基酸组成。
12. 根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其中所述免疫原性活性肽片段由 SEQ ID NO :1的吲哚胺2, 3-双加氧酶的至多21个连续氨基酸残基组成。
13. 根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其包含免疫原性活性肽片段，所述 免疫原性活性肽片段能够以至少10个/1〇4个PBL的频率在患有临床病症的个体的PBL群 中诱发INF-γ产生细胞。
14. 根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其包含免疫原性活性肽片段，所述 免疫原性活性肽片段能够在患有临床病症的个体的PBL群中诱发INF- γ产生细胞，其中 SEQIDN01的吲哚胺2,3-双加氧酶或与SEQID1具有至少70%同一性的其功能同源物被 表达。
15. 根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其中所述癌症疾病是形成肿瘤的 癌症疾病。
16. 根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其中所述免疫原性活性肽片段由 20-25个氨基酸残基组成。
17. 根据权利要求1-16中任一项所限定的肽，其中所述免疫原性活性肽片段包含SEQ ID NO :3 (吲哚胺2, 3-双加氧酶5)。
18. 根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其中所述疫苗在接种的个体中诱 发产生对表达吲哚胺2, 3-双加氧酶的癌细胞和/或表达吲哚胺2, 3-双加氧酶的抗原呈递 细胞具有细胞毒性作用的调节性T细胞。
19. 根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其中所述疫苗组合物能够诱导抗 原特异性T细胞在受试者的肿瘤基质中浸润。
20. 根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其中所述疫苗组合物能够在受试 者中引起临床反应，其中所述临床反应的特征为疾病稳定、部分反应或完全缓解。
21. 根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其还包含选自不是吲哚胺2, 3-双 加氧酶的蛋白质或肽片段的免疫原性蛋白质或肽片段。
22. 根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其中所述佐剂选自由基于细菌 DNA的佐剂、基于油/表面活性剂的佐剂、基于病毒dsRNA的佐剂和咪唑并喹啉组成的组。
23. 根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其中所述佐剂为Montanide ISA 佐剂。
24. 根据权利要求23所述的疫苗组合物，其中所述佐剂为Montanide ISA51或 Montanide ISA720。
25. 根据权利要求24所述的疫苗组合物，其中所述佐剂为Montanide ISA51。
26. 根据权利要求1-22中任一项所述的疫苗组合物，其中所述佐剂为GM-CSF。
27. 根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其中所述疫苗组合物包含抗原呈 递细胞，所述抗原呈递细胞包含所述免疫原性活性肽片段或编码所述免疫原性活性肽片段 的核酸。
28. 根据权利要求27所述的疫苗组合物，其中所述抗原呈递细胞是树突细胞。
29. -种多组分试剂盒，其包含根据权利要求1-28中任一项所述的疫苗组合物和第二 活性成分。
30. 根据权利要求29所述的包含疫苗组合物的多组分试剂盒，其中所述第二活性成分 是免疫刺激组合物。
31. 根据权利要求29或30中任一项所述的多组分试剂盒，其中该另外的免疫刺激组合 物包含一种或多种白介素。
32. 根据权利要求29-31中任一项所述的多组分试剂盒，其中所述白介素选自IL-2和 / 或 IL-21。
33. 根据权利要求29所述的多组分试剂盒，其中所述第二活性成分为抗癌剂。
34. 根据权利要求33所述的多组分试剂盒，其中所述抗癌剂为化疗剂。
35. 根据权利要求33或34中任一项所述的多组分试剂盒，其中所述化疗剂选自：辅酶 B12、阿扎胞苷、硫唑嘌呤、博来霉素、卡钼、卡培他滨、顺钼、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、阿糖胞 苷、柔红霉素、多西紫杉醇、去氧氟尿苷、阿霉素、表阿霉素、依托泊苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、 吉西他滨、羟基脲、伊达比星、伊立替康、来那度胺、甲酰四氢叶酸、氮芥、马法兰、巯嘌呤、甲 氨蝶呤、米托蒽醌、奥沙利钼、紫杉醇、培美曲塞、来那度胺、替莫唑胺、替尼泊苷、硫鸟嘌呤、 戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春地辛和长春瑞滨。
36. 根据权利要求29所述的多组分试剂盒，其中所述第二活性成分是抗生素。
37. 根据权利要求36所述的多组分试剂盒，其中所述抗生素选自：阿莫西林、青霉素、 阿昔洛韦和/或阿糖腺苷。
38. 根据权利要求29-37中任一项所述的多组分试剂盒，其中该提供的组合物同时或 相继施用。
39. -种用于离体或原位诊断在患有临床病症的个体中在PBL或在肿瘤组织中与吲哚 胺2, 3-双加氧酶有反应性的T细胞的存在的组合物，所述组合物包含根据权利要求1-20 中任一项所述的免疫原性活性肽片段。
40. -种用于离体或原位诊断在患有临床病症的个体中在PBL或在肿瘤组织中与吲哚 胺2, 3-双加氧酶有反应性的T细胞的存在的诊断试剂盒，所述试剂盒包含根据权利要求 1-20中任一项所述的免疫原性活性肽片段。
41. 根据权利要求1-20中任一项所限定的免疫原性活性肽片段与I类HLA或II类HLA 分子或所述分子的片段的复合物。
42. 权利要求41所述的复合物，所述复合物是单体。
43. 权利要求41所述的复合物，所述复合物是多聚体。
44. 权利要求41的复合物在制备用于检测患有临床病症的个体中吲哚胺2, 3-双加氧 酶反应性T细胞的存在的药物中的用途，其中所述复合物被配制用于接触肿瘤组织或血样 并且检测所述复合物与所述组织或血细胞的结合。
45. 根据权利要求1-28中任一项所述的疫苗组合物或根据权利要求29-38中任一项所 述的多组分试剂盒在制造用于治疗或预防以表达吲哚胺2,3_双加氧酶为特征的临床病症 的药物中的用途。
46. 权利要求45所述的用途，其中待治疗的疾病是其中表达吲哚胺2,3_双加氧酶的癌 症疾病。
47. 根据权利要求45或46中任一项所述的用途，所述药物被制备来与另外的癌症治疗 联合。
48. 权利要求47所述的用途，其中另外的治疗选自由化学疗法、放射疗法、使用免疫刺 激物质的治疗、基因疗法、使用抗体的治疗和使用树突细胞的治疗组成的组。
49. 权利要求46所述的用途，其中待治疗的临床病症是导致吲哚胺2, 3-双加氧酶在 APC中表达的感染。
50. 权利要求49所述的用途，所述药物被制备来与另外的针对所述感染的治疗联合。
51. 权利要求50所述的用途，其中所述另外的治疗选自由化学疗法、使用免疫刺激物 质的治疗、基因疗法、使用抗体的治疗和使用树突细胞的治疗组成的组。
52. 根据权利要求1-28任一项所述的疫苗组合物在制造用于治疗或预防临床病症的 药物中的用途，其中所述临床病症是癌症或感染。
53. 根据权利要求52所述的用途，其中待治疗的疾病是其中表达吲哚胺2, 3-双加氧酶 的癌症疾病。
54. 根据权利要求52或53所述的用途，其中所述药物被制备来与另外的癌症治疗联 合。
55. 根据权利要求54所述的用途，其中另外的治疗选自由化学疗法、放射疗法、使用免 疫刺激物质的治疗、基因疗法、使用抗体的治疗和使用树突细胞的治疗组成的组。
56. 根据权利要求52所述的用途，其中待治疗的临床病症是导致吲哚胺2, 3-双加氧酶 在APC中表达的感染。
57. 根据权利要求56所述的用途，其中所述药物被制备来与针对所述感染的另外的治 疗联合。
58. 根据权利要求56所述的用途，其中所述另外的治疗选自由化学疗法、使用免疫刺 激物质的治疗、基因疗法、使用抗体的治疗和使用树突细胞的治疗组成的组。
59. 根据权利要求1-20任一项中所限定的吲哚胺2, 3-双加氧酶的免疫原性活性肽片 段在制备用于在个体中监测免疫接种作用的药物中的用途。
60. 根据权利要求1-20任一项中所限定的免疫原性活性肽片段，其用于治疗或预防与 吲哚胺2, 3-双加氧酶的表达相关的临床病症。
61. 根据权利要求60所述的免疫原性活性肽片段，其中所述与喷哚胺2,3_双加氧酶的 表达相关的临床病症是癌症和/或感染。
62. 根据权利要求1-28中任一项所述的疫苗组合物，其用于治疗或预防癌症。
【文档编号】A61P31/00GK104056261SQ201410247727
【公开日】2014年9月24日 申请日期:2009年4月17日 优先权日:2008年4月17日
【发明者】梅斯·哈尔德·安德森, 珀·托尔·斯特拉藤 申请人:海莱乌医院