葶苈子脂肪油在制备治疗止咳祛痰平喘药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了葶苈子脂肪油在制备治止疗咳祛痰平喘药物中的应用，所述葶苈子脂肪油用于制备治疗止咳祛痰平喘药物。与现有技术相比，本发明的有益效果为：①通过实验表明：葶苈子脂肪油组分能够明显延长咳嗽潜伏期、减少咳嗽次数，提示其具有止咳作用；葶苈子脂肪油组分能显著增加小鼠气管酚红排泌量，提示其具有祛痰作用；此外，葶苈子脂肪油组分能明显延长豚鼠哮喘反应潜伏期，提示葶苈子脂肪油组分具有平喘作用，从而开辟了葶苈子脂肪油药用新用途；②传统中药一般采用水煎煮方法，不仅耗时、费力，而且人们服用、携带都不太方便；而用葶苈子脂肪油不仅用量少、服用方便，而且有效解决呼吸道相关疾病的用药问题，临床意义巨大。
【专利说明】葶苈子脂肪油在制备治疗止咳祛痰平喘药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于天然植物的应用，具体涉及葶苈子脂肪油在制备治疗止咳祛痰平喘药 物中的应用。
【背景技术】
[0002] 葶苈子为十字花科植物独行菜或播娘蒿 (L.)WebbexPrantl的干燥成熟的种子，前者称为北葶苈子；后者称为 南葶苈子。始载于《神农本草经》，味辛苦，性大寒，归肺、膀胱经。为传统常用中药，具有泻 肺平喘、利水消肿、强心之功效。常用于治疗痰涎壅盛，喘息不得平卧、水肿、悬饮，胸腹积 水，小便不利等。现代药理研究表明，葶苈子水提液能明显改善心衰大鼠的钠水潴留，且具 有显著的利尿作用。其中，以葶苈子为主药的复方葶苈子胶囊具有一定的祛痰作用，并且对 氨雾刺激引起的小鼠咳嗽反应也具有明显的止咳作用，其作用随剂量的增大而增强。此外， 有文献报道葶苈子具有一定抗氧化活性、调节血脂等作用。但至今尚未有关于葶苈子脂肪 油活性方面的研究报道。
[0003] 葶苈子在我国大部分省区均有栽培，资源非常丰富，其种子产量较大，在我国一直 被作为传统中药，临床上常用于治疗多种疾病，其治病的物质基础是含有独特活性成分决 定的。葶苈子所含有的化学成分种类较多，现已从独行菜和播娘蒿中分离得到强心苷类、异 硫氰酸和硫苷类、脂肪油类、生物碱类、黄酮类、酚酸类、香豆素类等化学成分，现代药理研 究表明葶苈子、利尿，调血脂等作用，但至今尚未有关于葶苈子发挥止咳祛痰平喘作用的有 效部位及有效成分的研究报道，没有报道明确葶苈子化学成分中哪种或哪类具有止咳祛痰 平喘的作用，因而，目前葶苈子在止咳祛痰平喘用药时一般采用水煎煮方法，不仅耗时、费 力，而且服用、携带都不太方便，给患者用药带来了诸多不便。
【发明内容】
[0004] 针对现有技术中存在的因没有明确葶苈子中哪种或哪类化学成分具有止咳、祛 痰，平喘的作用给患者用药带来的诸多不便的问题，本发明提供葶苈子脂肪油在制备治疗 止咳祛痰平喘药物中的应用，明确表明：葶苈子化学成分中脂肪油组分具有较好的止咳祛 痰平喘的作用，方便葶苈子在临床治疗疾病中的应用。
[0005] 为实现上述目的，本发明采用以下技术方案： 葶苈子脂肪油在制备止咳祛痰平喘药物中的应用，所述葶苈子脂肪油用于制备治疗止 咳祛痰平喘药物。
[0006] 所述葶苈子脂肪油是将称量后的葶苈子经粉碎机粉碎至50-70目，粉碎后的葶苈 子置于容器中，然后向容器中加入葶苈子重量8-12倍的石油醚，在温度为60-90°C下回流 提取两次，每次回流提取〇. 4-0. 6小时，提取结束后，提取液用慢速滤纸抽滤，将滤液用旋 转蒸发器减压回收溶剂，将油样旋蒸至恒重，即得到葶苈子脂肪油；所述葶苈子脂肪油用于 制备治疗止咳祛痰平喘药物。
[0007] 本发明采用水煎煮提取法结合萃取、醇沉、大孔吸附树脂（DiaionHP-20大孔吸附 树脂）等技术，将葶苈子水煎液拆分为成分之间互不交叉的6个部位：挥发油组分、石油醚 萃取组分(脂肪油组分)、醇沉组分（多糖组分)、20%乙醇洗脱组分、80%乙醇洗脱组分、水洗 脱组分，对各部位进行止咳祛痰平喘活性的筛选，发现脂肪油组分具有较好的止咳祛痰平 喘作用，因此，对其止咳祛痰平喘作用进行进一步的探讨。
[0008] 本发明采用氨水诱咳法、小鼠酚红排泌法，豚鼠喷雾致喘法，观察葶苈子脂肪油的 止咳、祛痰、平喘作用；实验结果表明：葶苈子脂肪油能够明显延长小鼠咳嗽潜伏期、减少 咳嗽次数，提示其具有止咳作用；葶苈子脂肪油组分能显著增加小鼠气管酚红排泌量，提示 其具有祛痰作用；葶苈子脂肪油组分能明显延长豚鼠哮喘反应潜伏期，提示葶苈子脂肪油 组分具有平喘作用；从而明确了葶苈子脂肪油组分具有止咳祛痰平喘的作用。
[0009] 与现有技术相比，本发明的有益效果为：①本发明葶苈子脂肪油制备方法简单、方 便、成本低，稳定可靠，并经多次以上试验，均取得了相同或相近似的结果；②通过实验表 明：葶苈子脂肪油组分能够明显延长咳嗽潜伏期、减少咳嗽次数，表明其具有止咳作用；葶 苈子脂肪油组分能显著增加小鼠气管酚红排泌量，表明其具有祛痰作用；此外，葶苈子脂肪 油组分能明显延长豚鼠哮喘反应潜伏期，表明葶苈子脂肪油组分具有平喘作用，从而开辟 了葶苈子脂肪油药用新用途；③传统中药一般采用水煎煮方法，不仅耗时、费力，而且人们 服用、携带都不太方便；而用葶苈子脂肪油不仅用量少、服用方便，而且有效解决呼吸道相 关疾病的用药问题，临床意义巨大，具有较好的开发前景。
【专利附图】
【附图说明】
[0010] 图1为实施例1中葶苈子各组分拆分的工艺流程图。
[0011] 图2为实施例1中水洗脱组分、20%、80%乙醇洗脱组分样本聚类分析图。
[0012] 图3为实施例1中水洗脱组分、20%、80%乙醇洗脱组分样本主成分分析图。
[0013] 图4为实施例1中水洗脱组分、20%、80%乙醇洗脱组分样本正交偏最小二乘法分析 图。
[0014] 图5为实施例1中脂肪油成分的总离子流图。
【具体实施方式】
[0015] 实施例1 本实施例所用的材料与仪器： 1.实验材料 I. 1动物 昆明种小鼠，雌雄各半，体重18_22g ;豚鼠，雌雄各半，体重180-220g ;许可证号：scxk 鲁20130001 (由山东鲁抗医药股份公司质检中心提供）。饲养于18~22°C清洁级动物实验 内，自由饮食、饮水。
[0016] 1.2药物与试剂 南葶苈子(购于郑州市中药材市场，经鉴定为十字花科植物播娘蒿 Descurainiasophia(L) Webb, ex Prantl.的干燥种子）由河南中医学院董诚明教授鉴 定；磷酸组胺，生产批号A0165,上海楷洋生物技术有限公司提供；氯化乙酰胆碱，生产批号 G8320,北京索莱宝科技有限公司提供；氨水，分析纯，批号：20111013,烟台市双双化工有 限公司提供。
[0017] 1.3主要仪器 AgiIent7890/7000B三重串联四级杆气质联用仪(美国安捷伦公司）、AB204-N型万 分之一电子天平(河南爱博特科技发展有限公司）、Q-250A3粉碎机(瑞达国际)、SB-1000 型旋转蒸发器(上海爱朗仪器有限公司）、Bio Mate 3S紫外分光光度计（Thermo Fisher Scientific)、YLS-8A多功能诱咳引喘仪（济南益延科技发展有限公司）、SK6200H型超声 波清洗器(上海科导超声仪器有限公司）、DFZ-3型真空干燥箱（上海医用恒温设备有限公 司）、DRT-ZN型电热套(郑州长城科工贸有限公司）、冷凝装置（四川省隆昌玻璃仪器厂)、 ChemPattern软件（科迈恩北京科技有限公司）。
[0018] 本实施例采用水煎煮提取法结合萃取、醇沉、大孔吸附树脂（DiaionHP-20大孔吸 附树脂）等技术，将葶苈子水煎液拆分为成分之间互不交叉的6个部位：挥发油组分、石油 醚萃取组分(脂肪油组分)、醇沉组分（多糖组分)、20%乙醇洗脱组分、80%乙醇洗脱组分、水 洗脱组分，工艺流程如图1所示。
[0019] 本实施例对葶苈子各组分所含成分互不交叉研究：因脂肪油组分、挥发油组分、多 糖组分与水溶性组分之间成分不可能交叉，有可能交叉的是水洗脱组分、20%、80%乙醇洗脱 组分，因此，将组分的HPLC-DAD数据导入ChemPattern软件，对有可能交叉的组分进行了互 补交叉研究。
[0020] HPLC-DAD数据聚类分析：将制备好的8批次供试品按葶苈子水煎液HPLC-DAD液 相条件进样分析，聚类分析结果分为3大类，样本1?8号为一类、9?17号为一类、18? 24号为一类。验证了水洗脱组分、20%、80%乙醇洗脱组分各聚一类，互不交叉，分析结果如 图2所示。
[0021] HPLC-DAD数据主成分分析：将制备好的8批次供试品按葶苈子水煎液按HPLC-DAD液相条件进样分析，记录IOOmin色谱图，经ChemPattern软件处理分析，结果如图3所 /Jn〇
[0022] HPLC-DAD数据正交偏最小二乘法：在前期分析的基础上，又进行了正交偏最小二 乘法的分析，得到结果，见图4,从LV1-LV2-LV3散点图发现，样本可明显分为3区域，样本 1?8号构成区域I、9?17号构成区域II、18?24号构成区域III。验证了水洗脱组分、 20%、80%乙醇洗脱组分互不交叉，结果如图4所示。
[0023] 对各部位进行止咳祛痰平喘作用的筛选，发现脂肪油组分具有较好的止咳祛痰平 喘作用，因此，对葶苈子脂肪油的止咳祛痰平喘作用进行进一步的探讨。
[0024] 本实施例葶苈子脂肪油是通过称量500g葶苈子，经粉碎机将称量后的葶苈子粉 碎至60目，粉碎后的葶苈子置于容器中，然后向容器中加入葶苈子重量10倍的石油醚，在 温度为90°C下回流提取两次，每次回流提取0. 5小时，提取结束后，提取液用慢速滤纸抽 滤，将滤液用旋转蒸发器减压回收溶剂，将油样旋蒸至恒重，即得到葶苈子脂肪油；将所制 得的葶苈子脂肪油用于制备治疗止咳祛痰平喘药物。
[0025] 本实施例氨水刺激引咳实验： 昆明种小鼠，雌雄各半，体重18_22g;许可证号：scxk鲁20130001 (由山东鲁抗医药股 份公司质检中心提供）；饲养于18~22°C清洁级动物实验内，自由饮食、饮水。
[0026] 取小鼠逐个放于玻璃罩内，以25%氨水喷雾引咳15s，观察小鼠从喷雾开始到出现 腹肌收缩张嘴的时间，I. 5min内不出现咳嗽者弃去。挑选敏感昆明种小鼠20只，雌雄各半， 按体重和性别随机分为2组，每组10只，分别为空白对照组、葶苈子脂肪油组。空白对照组 给予同体积蒸馏水，葶苈子脂肪油组给药剂量按人和小鼠20倍等效剂量折算，给药体积为 1.0ml/100g。每日给药1次，连续7天。给药期间自由进食、饮水。于末次给药后30min将 小鼠放入玻璃罩内，以25%氨气喷雾引咳15s，以小鼠腹肌收或缩胸，同时张大嘴为咳嗽指 标，观察各组小鼠自喷雾开始至出现咳嗽的潜伏期及2min内的咳嗽次数。
[0027] 本实施例葶苈子脂肪油对小鼠氨水引咳实验的影响： 与空白对照组比较，葶苈子脂肪油组能够明显延长咳嗽潜伏期、减少咳嗽次数，均有显 著性差异（P〈〇. 01，P〈〇. 05)，表明葶苈子脂肪油具有止咳作用。结果见表1。
[0028] 表1葶苈子脂肪油组对小鼠氨水引咳实验的影响（^±s，n=10)
【权利要求】
1. 葶苈子脂肪油在制备治疗止咳祛痰平喘药物中的应用，其特征在于：所述葶苈子脂 肪油用于制备治疗止咳祛痰平喘药物。
2. 根据权利要求1所述的葶苈子脂肪油在制备治疗止咳祛痰平喘药物中的应用，其特 征在于：所述葶苈子脂肪油是将称量后的葶苈子经粉碎机粉碎至50-70目，粉碎后的葶苈 子置于容器中，然后向容器中加入葶苈子重量8-12倍的石油醚，在温度为60-90°C下回流 提取两次，每次回流提取〇. 4-0. 6小时，提取结束后，提取液用滤纸抽滤，将滤液用旋转蒸 发器减压回收溶剂，将油样旋蒸至恒重，即得到葶苈子脂肪油；所述葶苈子脂肪油用于制备 治疗止咳祛痰平喘药物。
【文档编号】A61P11/10GK104306424SQ201410349621
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2014年7月22日 优先权日:2014年7月22日
【发明者】郑晓珂, 赫金丽, 弓建红, 张明辉, 张国顺, 张娜, 袁培培, 李玲玲, 孙亚萍, 王小兰, 冯卫生, 匡海学 申请人:河南中医学院, 黑龙江中医药大学