一种仔猪用抗应激剂及其制备方法

一种仔猪用抗应激剂及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种仔猪用抗应激剂及其制备方法，是将丁酸梭状芽孢杆菌菌粉、乳酸菌菌粉、纳豆芽孢杆菌菌粉、维生素C和/或维生素E磷酸酯、有机酸、钾盐混合、搅拌均匀制得。所述各菌粉是在固体培养基中接入各菌种液体种子，经发酵、干燥、粉碎制得。本发明的抗应激剂不仅能帮助猪肠道快速建立微生态平衡，而且能提高断乳仔猪免疫力，预防由于仔猪在断奶、转群、运输等过程中出现的应激综合症，具有抗应激效果好、原料来源广泛、生产工艺简单、成本低廉、无“三废”排放等特点。
【专利说明】一种仔猪用抗应激剂及其制备方法
[0001]

【技术领域】
[0002] 本发明属于动物养殖中的生物【技术领域】，具体涉及一种仔猪用复合微生态抗应激 剂及其制备方法。

【背景技术】
[0003] 猪的应激综合症是指猪体受到各种应激因素的强烈刺激后，处于紧张或戒备状态 时，所产生的一系列神经内分泌的非特异性全身性反应，以及由此而引起的机体各种机能 和代谢功能的变化。例如生长受损，抗病力下降，繁殖障碍，甚至死亡等。近年来，由于我国 养猪业发展迅速，国外瘦肉型猪种引进并普及，以及集约化、规模化养猪业的兴起，长途运 输多，饲养密度大，人为千扰频繁，使生猪应激反应综合症的发生率大幅度上升，给养猪业 造成了巨大的经济损失。应激首先是机体的正常生理活动发生变化，例如配种繁殖，分娩泌 乳，精神紧张等都可作为应激原引起应激反应。断奶、转群、去势、捕捉、驱赶、惊吓、拥挤、打 斗、保定、运输、高温、噪音、空气污染，免疫注射、环境突变等一系列异常刺激，当强度和作 用时间达到一定量时，均可引起应激反应综合症的发生。另外，应激的发生还与遗传因素 (携带氟烷基因)、内分泌失调、硒缺乏、蛋白质缺乏等有一定关系。应激对猪的的健康和生 产力、繁殖力、肉品质等都有不良影响，严重时可导致各种疾病的流行，甚至引起猪的死亡。 特别是断奶仔猪，由于早期断奶导致断乳应激、产房到保育舍环境变化的应激、哺乳管理转 为保育管理的应激等，造成仔猪精神状态不佳，呼吸不畅，腹泻，食欲不旺或拒食，生长发育 不良或停滞(甚至负增长)，出现僵猪，甚至死亡，使得保育仔猪的育成率降低。
[0004] 国内外研究发现，常用的抗应激药物包括糖类（如葡萄糖、活性多糖、几丁聚糖 等）、维生素类、氨基酸类（赖氨酸、蛋氨酸、色氨酸、牛磺酸、谷氨酰氨等）、电解质矿物元 索类（碳酸氢钠、氯化钠、氯化钾、氯化铵、有机镁、砸、锌、铬）、有机酸类（柠檬酸、苹果酸、 腐植酸、甜菜碱等）、抗生素类、化学约物、中草药、微生物等。近些年来，许多国内外研究 工作者研究了抗应激免疫增强剂来提高动物机体的抵抗力，并取得了一定的研究成果，开 发出了一系列新型高效的抗应激免疫增强剂。国内专利 CN1〇2987169A公开了一种断奶 仔猪核苷酸饲料添加剂、制备方法及应用，该发明通过加入核苷酸作为营养剂以缓解仔猪 断奶的应激反应，但是该反应加入的核苷酸只能作为营养补充剂，无法从根本上减少仔猪 应激反应问题的出现；CNl〇 3355545A公开了一种发酵型植物性断奶仔猪饲料添加剂，主要 由中草药、牛至草提取物和芦荟多糖混合配制而成。该发明使用了多种植物混合进行发酵 f后加入到仔猪的饲料中，对于14日龄早期隔离断奶的仔猪而言，过多的混杂添加剂，可 能会使仔猪的消化负担加重；专利201310104364. X公开了了一种仔猪抗应激合生元中药 组合物及其制备方法，主要由中草药及产乳酸枯草芽孢杆菌组成；专利201310031200. 9、 200510〇317〇8· 4公开了由各种维生素、氨基酸、微量元素等组成的仔猪抗应激剂；专利 2〇m〇310298. 7、2〇〇9?〇220085· 3、201310729176· 6分别公开了由中草药或其提取物组成 的断奶仔猪抗应激、抗腹泻、促生长饲料添加剂。尽管这些专利产品在仔猪抗应激方面有 一定的效果，但许多产品仅限于中草药或其提取物、维生素等组合物，存在抗应激作用不稳 定、效果不突出等缺点。


【发明内容】

[0005]本发明的目的是：针对上述现有技术的不足，提供一种断乳仔猪用复合微生态抗 应激剂及其制备方法，该抗应激剂能有效改善仔猪肠道生态环境，促进肠道益害微生物平 衡，提高仔猪的免疫力和抗应激能力，解决目前市场上仔猪抗应激剂存在的抗应激作用不 稳定、效果不突出等问题。
[0006] 为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：本发明的仔猪用抗应激剂， 包括按重量百分比计的下述成分：丁酸梭状芽孢杆菌菌粉30%-35%、乳酸菌菌粉30%-40%、 纳豆芽孢杆菌菌粉14%-20%、维生素 C和/或维生素 E磷酸酯6· 5%-11%、调节肠道pH值的 有机酸4. 5%-10. 5%、和钾盐5%-8%，合计100%。
[0007] 所述有机酸优选为柠檬酸和苹果酸，所述钾盐优选为KC1。
[0008] 本发明的仔猪用抗应激剂优选重量百分比为：丁酸梭状芽孢杆菌菌粉 30%-33· 5%、乳酸菌菌粉31%-32· 5%、纳豆芽孢杆菌菌粉14%-16%、维生素 C 3. 5%-5%、维生素 E 磷酸酯 3%-4%、柠檬酸 2. 5%-3· 5%、苹果酸 3. 5%-5%、和 KC1 5%-7%。
[0009] 所述仔猪为断乳仔猪，所述乳酸菌为乳酸片球菌。
[0010] 该抗应激剂中有效活菌数含量1. 5X 101Q-2· 5X 101° cfu/g。
[0011] 上述仔猪用抗应激剂的制备方法，包括以下步骤： (a) 按20-25%接种重量在固体培养基中接入纳豆芽孢杆菌液体种子，在30-37?的无 菌环境中培养至95%以上的菌体形成芽孢； (b) 按15-20%接种重量在固体培养基中接入乳酸菌液体种子，于35-37?无菌环境中 发酵4_5d ; (c) 按15-20%接种重量在固体培养基中接入丁酸梭状芽孢杆菌液体种子，于35-37°C 的无菌环境中发酵4-5d; (d) 分别在上述培养好的固体发酵培养中加入保护剂，干燥、粉碎得到纳豆芽孢杆菌菌 粉、乳酸菌菌粉和丁酸梭状芽孢杆菌菌粉； (e) 将所得各菌粉与维生素 C和/或维生素 E磷酸酯、有机酸、钾盐按所述配比混合均 匀，制得抗应激剂。
[0012] 所述步骤（a)_ (c)所述的固体培养基由下述方法得到：按重量百分比取麦 麸 30%-40%、玉米粉 15%-25%、大米粉 15%_2〇%、沸石粉 2〇%-3〇%、葡萄糖 1%_2%、（NH4)2S04 1. 5%-2%、ΚΗ2Ρ04 0. 1-0 . 3%、MgS04 · 7H20 0. 05-0. 15%,合计 100%,混合均匀，调节含水重量为 50%-55%,灭菌。
[0013] 所述纳豆芽孢杆菌液体种子是将纳豆芽孢杆菌1株接种一环斜面菌种细胞于液 体肉汤营养培养基中，在35Γ -37°C，160r/min-180r/min条件下，摇床振荡培养20-24h，使 该种子培养液中菌体浓度达到4. 5_6. 7X 108_109cfu/mL ;所述乳酸菌液体种子是将乳酸片 球菌1株接种一环斜面菌种细胞于液体MRS培养基中，在37-40°C条件下静置培养 24-48h， 使该种子培养液中菌体浓度达到3· 1-4·2X i〇7_ 1〇8cfu/mL ;所述丁酸梭状芽孢杆菌液体 种子是将丁酸梭状芽孢杆菌1株接种一环斜面菌种细胞于丁酸梭状芽孢杆菌液体种子培 养基中，3〇-35°C条件下于厌氧培养箱中培养96-l2〇h，使该种子培养液中菌体浓度达到 2. 5-3. 5X 107-108cfu/mL。
[0014] 作为改进，步骤（b)和（c)中是将菌种液体种子装入用95%乙醇灭菌的内衬塑料编 织袋中并压实，扎紧袋口后发酵。
[0015] 作为改进，步骤（d)所述保护剂为海藻糖、甘油和轻质碳酸钙中的两种或三种混合 物，以固体培养基干重计加入15%-18%的保护剂；所述干燥为40-45°C干燥6-8h。
[0016] 本发明的"接种重量"指菌种液体种子体积（L)与固体培养基质量（kg)的比值，例 如"20%的接种重量"指20L/100kg。
[0017] 本发明同时应用三种不同类型的菌种(好氧菌、严格厌氧菌和兼性厌氧菌)，能及 时消耗肠道中的氧气，保持肠道内优势种群的稳定性和整个肠道微生态环境的相对稳定。 其中采用的丁酸梭状芽孢杆菌，可抑制肠道有害菌，促进有益菌生长；减少肠内氨、胺含量 (这两种物质会损害肝功能）；产生多种维生素，如维生素 K等；产生多种酶类，提高饲料利 用率，促进动物生长。此外，本发明同时结合能提高动物肌体免疫力和促生长作用等的维生 素，补充肌体因应激造成的体液酸碱不平衡的有机酸，从而提高断奶仔猪机体对外来刺激 的代偿能力。
[0018] 因此，与现有技术相比，本发明的复合微生态抗应激剂不仅能快速、有效地建立和 修复断奶仔猪的微生态平衡，清除机体内自由基，而且能提高断乳仔猪免疫力，预防由于仔 猪在断奶、转群、去势、捕捉、驱赶、运输等过程中出现的应激综合症，降低应激反应强度，具 有抗应激效果好。同时，本发明方法具有原料来源广泛、生产工艺简单、易于规模化生产、成 本低廉、生产能耗低、无"三废"排放等特点。

【具体实施方式】
[0019] 本发明中用到的菌种均为现有技术，可购自各保藏机构，例如保藏号分别为：丁酸 梭状芽孢杆菌（Clostridium butyricum):JSMCB 或 ATCC 25755 ;乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici) :CGMCC1. 2696、CICC10146 或 CICC10346 ;纳豆芽孢杆菌（Bacillus natto): CCTCC M207147、CGMCC 0724 或ATCC 6051。
[0020] 本发明所用菌种的液体种子培养基均为现有技术，例如可以按下述方法制备： 液体肉汤营养培养基可以按1000mL水加10-20g葡萄糖、5_10g蛋白胨、3_ 5g牛肉 膏、及3-5g氯化钠的比例，于水中加入葡萄糖、蛋白胨、牛肉膏、及氯化钠，搅匀，在O.IMPa 压力下灭菌25min，冷却至30°C而成。
[0021] 液体MRS培养基可以按下述方法制成：将蛋白胨10. 0g、牛肉膏10. 0g、酵母膏 5. 0g、葡萄糖20. 0g、乙酸钠5. 0g、柠檬酸二胺2. 0g、吐温-80 1· 0g、磷酸氢二钾0· 4g、硫 酸镁〇· 58g、硫酸锰〇. 29g、碳酸钙20. 0g、琼脂15. 0g依次加入蒸馏水并将蒸馏水补充到 1000mL，pH 调至 6. 3,在 12Γ(：、0· IMpa 下灭菌 30min。
[0022] 丁酸梭状芽孢杆菌液体培养基可以按1000mL水加入2〇-40g葡萄糖、l 5_2〇g胰 蛋白胨、1.0-1. 5g硫酸铵、2.0-2. 5g氯化钠、1.0-1. 5g碳酸氢钠、3.0-4· 0g磷酸氢二钾、 0· 5-0. 8g七水硫酸镁、1. 0-2. 〇g碳酸钙的比例，于水中加入葡萄糖、胰蛋白胨、硫酸铵、氯 化钠、碳酸氢钠、磷酸氢二钾、七水硫酸镁、碳酸钙，搅勻，在〇· IMPa压力下灭菌25min,冷 却至30°C而成。
[0023] 本发明中用到的维生素 C、维生素 E磷酸酯、柠檬酸、苹果酸、钾盐等均为现有产 品，市场有售。下面以具体实施例对本发明进行详细的说明。
[0024] 实施例1 : 本实施例所用的菌种为丁酸梭状芽孢杆菌、乳酸片球菌、纳豆芽孢杆菌。其步骤为： (1)制备液体菌种：将纳豆芽孢杆菌1株接种一环斜面菌种细胞于液体扩大肉汤营养 培养基中，在36°C, 160r/min条件下，摇床振荡培养22h，使该种子培养液中菌体浓度达到 5. 8 X 108cfu/mL ； 将乳酸片球菌1株接种一环斜面菌种细胞于液体MRS培养基中，在37°C条件下静置培 养36h,使该种子培养液中菌体浓度达到3. 7X 108cfu/mL ; 将丁酸梭状芽孢杆菌1株接种一环斜面菌种细胞于丁酸梭状芽孢杆菌液体种子培养 基中，35?条件下于厌氧培养箱中培养％h，使该种子培养液中菌体浓度达到2. 6X107cfu/ mL〇
[0025] (2)制备固体培养基：按重量百分比取麦麸35%、玉米粉21. 2%、大米粉15%、沸石粉 25. 5%、葡萄糖 1. 5%、（NH4) 2S04 1. 5%、KH2P04 0. 15%、MgS04 · 7H20 0. 15%，混合均匀，调节含水 重量为52%,于121°C条件下灭菌60min,冷却至室温后，得到固体培养基。
[0026] (3)制备菌粉：于上述固体培养基中按20%接种重量接入纳豆芽孢杆菌液体种子， 充分混合，置于发酵浅盘中，于35°C无菌发酵室中培养至 95%以上的菌体形成芽孢； 分别按18%接种重量接入乳酸片球菌和丁酸梭状芽孢杆菌液体种子，装入用95%乙醇 灭菌的内衬塑料编织袋中并压实，扎紧袋口后于37°C发酵4d ; 以固体培养基干重加入8%海藻糖、8%甘油作为保护剂，充分拌匀； 将上述培养好的固体发酵培养基于42°C干燥6. 5h，粉碎得各菌粉。
[0027] (4)取丁酸梭状芽孢杆菌菌粉30%、乳酸片球菌菌粉32%、纳豆芽孢杆菌菌粉16%、 维生素 C 5%、维生素 E磷酸酯4%、柠檬酸2. 5%、苹果酸4. 5%、KC1 6%，充分混合均匀，过6〇 目筛，包装后即得成品。
[0028] 实施例2 : 本实施例所用的菌种为丁酸梭状芽孢杆菌、乳酸片球菌、纳豆芽孢杆菌。其步骤为： (1)将纳豆芽孢杆菌1株接种一环斜面菌种细胞于液体扩大肉汤营养培养基中，在 37?，170r/min条件下，摇床振荡培养20h，使该种子培养液中菌体浓度达到6. 5X 108cfu/ mL ;将乳酸片球菌1株接种一环斜面菌种细胞于液体MRS培养基中，在40°C条件下静置培 养48h，使该种子培养液中菌体浓度达到4· 05X 108cfu/mL ;将丁酸梭状芽孢杆菌1株接种 一环斜面菌种细胞于丁酸梭状芽孢杆菌液体种子培养基中，32°C条件下于厌氧培养箱中培 养104h，使该种子培养液中菌体浓度达到2· 2X 108cfu/mL。
[0029] (2)按重量百分比取麦麸31. 5%、玉米粉24%、大米粉I8· 2%、沸石粉23%、葡萄糖1%、 (NH4) 2S04 2%、KH2P04 0. 25%、MgS04 ·7Η20 0. 05%,混合均匀，调节含水重量为 55%,于 121°C条 件下灭菌60min，冷却至室温后，得到固体培养基。
[0030] (3)于上述固体培养基中按25%接种重量接入纳豆芽孢杆菌液体种子，充分混合， 置于发酵浅盘中，于32°C无菌发酵室中培养至95%以上的菌体形成芽孢；分别按15%接种 重量接入乳酸片球菌和丁酸梭状芽孢杆菌液体种子，装入用95%乙醇灭菌的内衬塑料编织 袋中并压实，扎紧袋口后于35?C发酵5d ; 以固体培养基干重加入6%海藻糖、4%甘油和8%轻质碳酸钙作为保护剂，充分拌匀；将 上述培养好的固体发酵培养基于4(TC千燥7h，粉碎得各菌粉。
[0031] (4)取丁酸梭状芽孢杆菌菌粉32%、乳酸片球菌菌粉31%、纳豆芽孢杆菌菌粉 15. 5%、维生素 C 4. 5%、维生素 E磷酸酯3. 5%、柠檬酸3%、苹果酸3. 5%、KC1 7%，充分混合均 匀，过60目筛，包装后即得成品。
[0032] 实施例3 : 本实施例所用的菌种为丁酸梭状芽孢杆菌、乳酸片球菌、纳豆芽孢杆菌。其步骤为： (1)将纳豆芽孢杆菌1株接种一环斜面菌种细胞于液体扩大肉汤营养培养基中，在 35°C，l8〇r/min条件下，摇床振荡培养24h，使该种子培养液中菌体浓度达到4. 2X 109cfu/ mL ;将乳酸片球菌1株接种一环斜面菌种细胞于液体MRS培养基中，在38°C条件下静置培 养40h，使该种子培养液中菌体浓度达到3. 93X 107cfu/mL ;将丁酸梭状芽孢杆菌1株接种 一环斜面菌种细胞于丁酸梭状芽孢杆菌液体种子培养基中，30°C条件下于厌氧培养箱中培 养l 2〇h，使该种子培养液中菌体浓度达到3. 12X107cfu/mL。
[0033] (2)按重量百分比取麦麸38. 5%、玉米粉20. 5%、大米粉16. 7%、沸石粉20. 6%、葡萄 糖 1. 87%、（NH4) 2S〇4 1. 7%、KH2P04 0. l%、MgS04 ·7Η20 0· 13%,混合均勻，调节含水重量为 50%, 于121°C条件下灭菌60min,冷却至室温后，得到固体培养基。
[0034] (3)于上述固体培养基中按18%接种重量接入纳豆芽孢杆菌液体种子，充分混合， 置于发酵浅盘中，于37°C无菌发酵室中培养至95%以上的菌体形成芽孢；分别按20%接种 重量接入乳酸片球菌和丁酸梭状芽孢杆菌液体种子，装入用95%乙醇灭菌的内衬塑料编织 袋中并压实,扎紧袋口后于36?发酵4. 5d ; 以固体培养基干重加入11%甘油和7%轻质碳酸钙作为保护剂，充分拌匀；将上述培养 好的固体发酵培养基于45°C干燥6h，粉碎得各菌粉。
[0035] (4)取丁酸梭状芽孢杆菌菌粉33. 5%、乳酸片球菌菌粉32. 5%、纳豆芽孢杆菌菌粉 14%、维生素 C 3. 5%、维生素 E磷酸酯3%、柠檬酸3. 5%、苹果酸5%、KC1 5%，充分混合均匀，过 60目筛，包装后即得成品。
[0036] 本发明的抗应激剂在湖南桃江、安化等地的许多大中小养猪场进行了大量的应用 试验，证明具有促生长、抗应激、提高免疫力和预防疾病等作用。应用效果举例如下： (1)仔猪的选择和分组 选择同批次体重相近的长白二元杂交断乳仔猪45头，按性别、窝别和体重随机分成 I、II、111 3组，每组IS头，公母各半，初始重组内和组间差异均不显著（p >〇· 〇5)，基础日 粮为大北农公司生产的仔猪料。其中I组为对照组，Π、ΙΠ 两组为试验组，II组在基础日粮 中添加1. 5%的实施例1产品，ΙΠ 组在基础日粮中添加2. 〇%的实施例1产品，对照组不添加 任何其它物质。
[0037] (2)试验时间 试验时间自2013年9月5日开始至2013年11月5日结束。
[0038] (3)饲养管理 各今分栏饲喂，栏舍为水泥地板，其它环境条件一致。试验前进行防疫、去势和驱虫。采 用自由采食和自由饮水，饲料为粉料，以吃饱不剩料为准。
[0039] (4)测定项目 每天记录每栏饲料的消耗量和猪只的健康状况、用药量、次数及价格。试验结束时空腹 I6小时称猪只终重，计算平均日增重、料重比、腹泻率等，并用EXCELL软件进行分析比较。
[0040] (5)试验结果 各组试验结果见表1。
[0041] 表1试验组与对照组断乳仔猪饲喂效果统计表

【权利要求】
1. 一种仔猪用抗应激剂，其特征在于包括按重量百分比计的下述成分：丁酸梭状芽孢 杆菌菌粉 3〇%-35%、乳酸菌菌粉30%-40%、纳豆芽孢杆菌菌粉14%-20%、维生素 C和/或维生 素 Ε磷酸酯6. 5%-11%、调节肠道pH值的有机酸4. 5%-10· 5%、和钾盐5%-8%，合计100%。
2. 根据权利要求1所述的仔猪用抗应激剂，其特征在于所述有机酸为柠檬酸和苹果 酸，所述钾盐为KC1。
3. 根据权利要求2所述的仔猪用抗应激剂，其特征在于重量百分比为：丁酸梭状芽 孢杆菌菌粉30%-33. 5%、乳酸菌菌粉31%-32. 5%、纳豆芽孢杆菌菌粉14%_16%、维生素 C 3. 5%_5%、维生素 E 磷酸酯 3%-4%、柠檬酸 2. 5%-3. 5%、苹果酸 3. 5%-5%、和 KC1 5%-7%。
4. 根据权利要求1-3之一所述的仔猪用抗应激剂，其特征在于所述仔猪为断乳仔猪， 所述乳酸菌为乳酸片球菌。
5. 根据权利要求4所述的仔猪用抗应激剂，其特征在于该抗应激剂中有效活菌数含量 1. 5Χ1010-2· 5X1010 cfu/g。
6. -种权利要求1-5之一所述仔猪用抗应激剂的制备方法，包括以下步骤： (a) 按20-25%接种重量在固体培养基中接入纳豆芽孢杆菌液体种子，在30-37°C的无 菌环境中培养至95%以上的菌体形成芽孢； (b) 按15_2〇%接种重量在固体培养基中接入乳酸菌液体种子，于35_37°C无菌环境中 发酵4-5d ; (c) 按15-20%接种重量在固体培养基中接入丁酸梭状芽孢杆菌液体种子，于35-37°C 的无菌环境中发酵4-5d; (d) 分别在上述培养好的固体发酵培养中加入保护剂，干燥、粉碎得到纳豆芽孢杆菌菌 粉、乳酸菌菌粉和丁酸梭状芽孢杆菌菌粉； (e) 将所得各菌粉与维生素 C和/或维生素 E磷酸酯、有机酸、钾盐按所述配比混合均 匀，制得抗应激剂。
7. 根据权利要求6所述的仔猪用抗应激剂的制备方法，其特征在于所述步骤（a)- (c) 所述的固体培养基由下述方法得到：按重量百分比取麦麸30%-40%、玉米粉15%-25%、大米 粉 15%-20%、沸石粉20%-30%、葡萄糖 1%-2%、（NH4)2S04 1. 5%-2%、KH2P04 0. 1-0 . 3%、MgS04 ·7Η20 0· 05-0· 15%，合计100%,混合均匀，调节含水重量为50%-55%，灭菌。
8·根据权利要求6或7所述的仔猪用抗应激剂的制备方法，其特征在于所述纳豆芽孢 杆菌液体种子是将纳豆芽孢杆菌1株接种一环斜面菌种细胞于液体肉汤营养培养基中，在 35°C -37°C，160r/min-180r/min条件下，摇床振荡培养2〇-24h，使该种子培养液中菌体浓 度达到4. 5-6. 7X 108-109cfu/mL ;所述乳酸菌液体种子是将乳酸片球菌1株接种一环斜面 菌种细胞于液体MRS培养基中，在37_40°C条件下静置培养 24-48h,使该种子培养液中菌体 浓度达到3. 1-4. 2 X 107- 108cfu/mL ;所述丁酸梭状芽孢杆菌液体种子是将丁酸梭状芽孢 杆菌1株接种一环斜面菌种细胞于丁酸梭状芽孢杆菌液体种子培养基中，30-35?条件下 于厌氧培养箱中培养 96_120h，使该种子培养液中菌体浓度达到2. 5-3. 5X 107-108cfu/mL。
9·根据权利要求6或7所述的仔猪用抗应激剂的制备方法，其特征在于（b)和（c)中 是将菌种液体种子装入用95%乙醇灭菌的内衬塑料编织袋中并压实，扎紧袋口后发酵。
10.根据权利要求6或7所述的仔猪用抗应激剂的制备方法，其特征在于步骤（(1)所 述保护剂为海藻糖、甘油和轻质碳酸钙中的两种或三种混合物，以固体培养基干重计加入 15%-18%的保护剂；所述干燥为40-45°C干燥6-8h。
【文档编号】A61P39/00GK104186971SQ201410373093
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年8月1日 优先权日:2014年8月1日
【发明者】曾梦良, 兰时乐 申请人:湖南丹维生物科技有限公司