从异叶青兰中分离制备乌苏甲酯的方法及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种从异叶青兰中分离制备乌苏甲酯的方法，该方法包括以下步骤：⑴将异叶青兰切段后用乙醇进行回流提取，得到提取液；该提取液经减压浓缩，即得提取物；⑵所述提取物用乙酸乙酯在常温条件下进行萃取，得到萃取液，该萃取液经减压浓缩，得到乌苏甲酯粗提物；⑶将所述乌苏甲酯粗提物溶解于乙酸乙酯中，然后加入硅胶拌样，溶剂乙酸乙酯挥干后，干法上硅胶柱二次，经减压浓缩后，得到较纯乌苏甲酯；⑷所述较纯乌苏甲酯用乙醇溶解后结晶除杂，经过滤即得乌苏甲酯晶体。本发明工艺简单、操作简便且分离效率和分离纯度高。同时，本发明所得的乌苏甲酯晶体可应用在肿瘤和急性肝损伤疾病治疗中。
【专利说明】从异叶青兰中分离制备乌苏甲酯的方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种天然活性成分的制备方法与应用，尤其涉及从异叶青兰中分离制 备乌苏甲酯的方法及其应用。
【背景技术】
[0002] 异叶青兰」是唇形科青兰属草本植物，又 名白花枝子花、白花夏枯草、吉孜青保（藏药名），新疆维语称马尔赞居西、祖帕尔。异叶青 兰地上部分有平肝、清热作用，其气味香甜清润，闻之令人神清气爽，是维族、藏族用于治疗 咳喘病和胃病的传统用药，主要用于治疗黄疽性发烧、肝热、热性病头痛、眼豁、口腔溃疡、 支气管炎、高血压等多种病症。近年来，青兰属植物中的三萜类化合物由于具有抗肿瘤、抗 炎、抗菌、抗病毒、护肝、抗心律失常、免疫调节、调节血糖和降血压等多种药理活性，受到越 来越多研究者的青睐。
[0003] 乌苏甲酯又名熊果酸甲酯，属于五环三萜类化合物，是熊果酸羧基酯化产物。熊果 酸具有镇静、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖等多种生物学效应；熊果酸临床表现 有显著而迅速降低谷丙转氨酶、血清转氨酶、消退黄疽、增进食欲、抗纤维化和恢复肝功能 的作用；近年来发现熊果酸还具有抗致癌、抗促癌、诱导F9畸胎瘤细胞分化和抗血管生成 作用。
[0004] 国内外相关文献显示，至今尚无乌苏甲酯单体制备和活性应用的相关报导。鉴于 异叶青兰中乌苏甲酯含量很高，建立一种从异叶青兰中分离制备乌苏甲酯的方法很有必 要。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是提供一种工艺简单、操作简便且分离效率和分离纯 度高的从异叶青兰中分离制备乌苏甲酯的方法。
[0006] 本发明所要解决的另一个技术问题是提供该乌苏甲酯的应用。
[0007] 为解决上述问题，本发明所述的从异叶青兰中分离制备乌苏甲酯的方法，包括以 下步骤： ⑴将异叶青兰切成长度为广3cm的段，然后按1 kg :9~15 L的料液质量体积比加入质 量浓度为85~95%的乙醇，在温度为65~75°C的条件下进行回流提取，提取次数2~3次，每次 l~3h，合并得到提取液；该提取液经减压浓缩，即得提取物； ⑵所述提取物按1 kg :1~2 L的料液质量体积比用乙酸乙酯在常温条件下进行萃取，萃 取次数为3次，每次2h，合并得到萃取液，该萃取液经减压浓缩，得到乌苏甲酯粗提物； ⑶将所述乌苏甲酯粗提物溶解于乙酸乙酯中，然后加入所述乌苏甲酯粗提物质量1~2 倍的硅胶拌样，溶剂乙酸乙酯挥干后，干法上硅胶柱；其次，用:Γ5倍柱体积的石油醚-乙酸 乙酯混合溶剂洗脱，经薄层层析TCL检测，得到含有乌苏甲酯的洗脱液A，该洗脱液A经减压 浓缩后，得到乌苏甲酯粗品；所述乌苏甲酯粗品再次上硅胶柱，用2~4倍柱体积的所述石油 醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，经薄层层析TCL检测，得到含有乌苏甲酯的洗脱液B，该洗脱液 B经减压浓缩后，得到较纯乌苏甲酯； ⑷在3(T60°C温度下，所述较纯乌苏甲酯按1 g:2(T60 mL的料液质量体积比用体积浓 度为9(Γ100%的乙醇进行溶解，然后在(T25°C的条件下进行1~3次结晶除杂，经过滤即得乌 苏甲酯晶体。
[0008] 所述步骤⑴中的减压浓缩条件是指温度为6(T70°C，真空度为0. 6~0. 8MPa。
[0009] 所述步骤⑵和所述步骤⑶中的减压浓缩条件是指温度为4(T50°C，真空度为 0. 6^0. 8MPa〇
[0010] 所述步骤⑶中石油醚-乙酸乙酯混合溶剂是指将石油醚与乙酸乙酯按:T5mL :1 mL的比例混合而成的溶液。
[0011] 如上所述的从异叶青兰中分离制备乌苏甲酯的方法所得的乌苏甲酯晶体在肿瘤 和急性肝损伤疾病治疗中的应用，其特征在于：该乌苏甲酯晶体作为有效成分按常规方法 与药学上可接受的任何载体制成各类药用制剂。
[0012] 本发明与现有技术相比具有以下优点： 1、由于本发明仅涉及乌苏甲酯的提取浓缩、萃取、硅胶柱层析和结晶四个步骤，纯化过 程简单，因此，工艺简单、易于操作。
[0013] 2、本发明采用二次硅胶柱分离与重结晶结合的方法，将乌苏甲酯粗提物进行快速 分离纯化。因此，分离效率和分离纯度高。采用本发明方法，lkg异叶青兰能得到约3. 8g乌 苏甲酯，纯度兰97.0%。
[0014] 3、本发明方法所制得的乌苏甲酯晶体为熊果酸衍生物，其结构式如下：
【权利要求】
1. 从异叶青兰中分离制备乌苏甲酯的方法，包括以下步骤： ⑴将异叶青兰切成长度为广3cm的段，然后按1 kg :9~15 L的料液质量体积比加入质 量浓度为85~95%的乙醇，在温度为65~75°C的条件下进行回流提取，提取次数2~3次，每次 l~3h，合并得到提取液；该提取液经减压浓缩，即得提取物； ⑵所述提取物按1 kg :1~2 L的料液质量体积比用乙酸乙酯在常温条件下进行萃取，萃 取次数为3次，每次2h，合并得到萃取液，该萃取液经减压浓缩，得到乌苏甲酯粗提物； ⑶将所述乌苏甲酯粗提物溶解于乙酸乙酯中，然后加入所述乌苏甲酯粗提物质量1~2 倍的硅胶拌样，溶剂乙酸乙酯挥干后，干法上硅胶柱；其次，用:Γ5倍柱体积的石油醚-乙酸 乙酯混合溶剂洗脱，经薄层层析TCL检测，得到含有乌苏甲酯的洗脱液A，该洗脱液A经减压 浓缩后，得到乌苏甲酯粗品；所述乌苏甲酯粗品再次上硅胶柱，用2~4倍柱体积的所述石油 醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，经薄层层析TCL检测，得到含有乌苏甲酯的洗脱液B，该洗脱液 B经减压浓缩后，得到较纯乌苏甲酯； ⑷在3(T60°C温度下，所述较纯乌苏甲酯按1 g:2(T60 mL的料液质量体积比用体积浓 度为9(Γ100%的乙醇进行溶解，然后在(T25°C的条件下进行1~3次结晶除杂，经过滤即得乌 苏甲酯晶体。
2. 如权利要求1所述的从异叶青兰中分离制备乌苏甲酯的方法，其特征在于：所述步 骤⑴中的减压浓缩条件是指温度为6(T70°C，真空度为0. 6~0. 8MPa。
3. 如权利要求1所述的从异叶青兰中分离制备乌苏甲酯的方法，其特征在于：所述步 骤⑵和所述步骤⑶中的减压浓缩条件是指温度为4(T50°C，真空度为0. 6?0. 8MPa。
4. 如权利要求1所述的从异叶青兰中分离制备乌苏甲酯的方法，其特征在于：所述步 骤⑶中石油醚-乙酸乙酯混合溶剂是指将石油醚与乙酸乙酯按:Γ5 mL:l mL的比例混合而 成的溶液。
5. 如权利要求1所述的从异叶青兰中分离制备乌苏甲酯的方法所得的乌苏甲酯晶体 在肿瘤和急性肝损伤疾病治疗中的应用，其特征在于：该乌苏甲酯晶体作为有效成分按常 规方法与药学上可接受的任何载体制成各类药用制剂。
【文档编号】A61P1/16GK104151390SQ201410383292
【公开日】2014年11月19日 申请日期:2014年8月6日 优先权日:2014年8月6日
【发明者】岳会兰, 赵晓辉, 邵赟, 梅丽娟, 王启兰, 陶燕铎 申请人:中国科学院西北高原生物研究所