一种可注射填充植入剂及其制备方法
【专利摘要】本发明提供一种可注射填充植入剂，所述可注射填充植入剂的有效成分为生物细胞外基质材料，所述生物细胞外基质材料的交联度为50％-70％。本发明还涉及所述可注射填充植入剂的制备方法。本发明提供的制备方法，可以获得优于现有技术的可注射填充植入剂。本发明所提供的可注射填空植入剂，交联程度高，粒径范围合适，体内降解时间长，生物相容性好。
【专利说明】-种可注射填充植入剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本申请涉及一种可注射填充植入剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002] -个世纪以来，软组织充填剂被广泛应用于美容外科手术以改善面部轮廓、修正 皱纹、填平凹陷瘢痕和填充体积（如唇部）等，现今对于软组织填充剂的需求越来越大。 [0003]理想的软组织填充剂，应该具有便宜易得、良好的生物惰性、生物相容性和稳定 性、无毒性、无致癌性、无感染性、无急性或慢性炎症反应、易于注射和取出、能够维持长期 甚至永久的外观修复效果且恢复时间短。但至今为止，仍没有如此理想的注射式填充剂问 世。
[0004] 现有的美容植入产品均存在一定缺陷，且目前国家对于美容植入剂类产品要求非 常严格，如：要明确控制交联程度、粒径分布范围、分子量大小、降解周期等，需满足的技术 条件很闻。
[0005] 中国专利CN200510044005. 5公开了一种可注射软组织生物填充材料的制备方 法，其采用新宰杀小猪皮为原料，经过去皮下组织、脱脂、碱处理、剖层、酶处理、戊二醛交 联、漂白处理以及微粒化加工，最后经包装及钴60灭菌而成。该专利制备微粒的方法只是 将皮片通过物理方法切制为边长为300?500 μ m的微粒，但微粒直径过大，无法采用直径 较小的针头注射；且最终只是将微粒进行简单包装，无法直接注射使用。
[0006] 中国专利CN95106720. 6公开了 一种采用人胎盘为原料制备颗粒性胶原的方法， 其是先对胎盘进行辐照灭活病毒，清洗、粉碎后采用有机试剂提取胎盘中的胶原，最后经浓 缩透析并加入利多卡因而得到的可注射胶原溶液。该专利使用原料与本专利相近，但工艺 中使用大量有机试剂提取胶原，易存在有机试剂残留。
[0007] 中国专利CN201010117490. 5公开了一种制备注射用的透明质酸凝胶微粒的方 法。该专利所用原料为透明质酸干粉，将其用碱性溶液溶解后加入交联剂交联，制备得到透 明质酸凝胶后再采用透析方法去除交联剂。该方法可能无法彻底去除凝胶中的交联剂等试 剂残留，另外清洗效率较低，需要透析4?5天。
[0008] 中国专利CN200810007484. 7公开了一种采用人发角蛋白制备软组织填充材料的 方法，该专利利用人发中段作为原料，经过清洗、漂白、研磨加工、冻千、包装、钴60辐照处 理，将人发制备成粉体匀浆及液体人发角蛋白颗粒。该专利仅采用物理碾磨方法制备粒径 60?80 μ m的人发角蛋白颗粒匀浆，根据发明人实验经验，将不溶于水的不同固体物质进 行物理碾磨而没有筛分、均质化等后续步骤，得到的粒径分布范围通常在100?1000 μ m， 很难得到较小粒径范围。
[0009] 中国专利CN02156797. 2公开了一种注射性胶原蛋白的制备方法及其产品和应 用，该专利通过提取动物组织中的胶原蛋白纤维来制备注射性胶原蛋白，在制备过程中会 完全破坏动物组织原有结构及其他成分，损失了天然组织中具有生物活性或生物功能的天 然成分，只能起到单纯的胶原蛋白填充作用。
[0010]由上可见，目前已上市的各种美容植入产品及国内同类专利公开的美容植入剂制 备方法均存在一定缺点，尤其是同类胶原植入剂产品除了包含胶原基质外，并未包含生物 活性因子，因此其作用仅仅是填充，当这些填充材料被机体分解吸收后，美容修复效果会减 弱或消失，因而该类植入剂产品的美容效果是暂时性的。
[0011 ]羊膜，从细胞滋养层衍化而来，是胚胎双层膜的内层，由上皮细胞层，基底膜和无 血管基质组成。羊膜中包含了多种胶原蛋白成分及活性因子，包括胶原、层粘连蛋白（LN)、 表皮生长因子（EGF)、角质细胞生长因子（KGF)、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)、肝细胞 生长因子（HGF)、金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP)、其它蛋白酶抑制因子等。
[0012] 正是羊膜中含有以上较多的能够抑制血管生成、抗炎症的活性因子，能够起到促 进眼表上皮化、减轻炎性反应、抑制纤维组织增生和新生血管形成的作用，从而在临床上广 泛应用于眼表各类疾病修复、皮肤烧创伤修复等方面。目前尚无采用羊膜为原料制备可注 射充填材料的产品，亦无专利及文献报道。
【发明内容】
[0013] 为了解决现有注射填充剂存在的问题，本发明提供一种可注射填充植入剂及其制 备方法。
[0014] 作为本发明的一个方面，涉及一种可注射填充植入剂，所述可注射填充植入剂的 有效成分为生物细胞外基质材料，所述生物细胞外基质材料的交联度为50% -70%，优选 为60% -70%，最优选为70%。作为优化，所述可注射填充植入剂还可含有95% -97%、 ρΗ7· 5的磷酸盐缓冲液。作为优选，所述生物细胞基质材料为羊膜基质。
[0015] 作为本发明的另一方面，还涉及一种可注射填充植入剂制备方法，包括如下步 骤：
[0016] 将消毒处理后的生物细胞材料用胰蛋白酶消化；
[0017] 胰蛋白酶消化的生物细胞材料在交联体系中交联，所述交联体系为含有终浓度 0. 1 ?0· 2mol/L 的 EDC、0_ 01 ?〇· 〇5mol/L 的 NHS 和 0· 01 ?0. 2mol/L 的 MES 的水溶液。 [0018] 所述将消毒处理后的生物细胞材料用胰蛋白酶消化是指，将消毒处理后的生物细 胞材料先用纯化水清洗，再用ρΗ7· 5的PBS清洗后，用0· 1?0. 5%的胰蛋白酶消化后，再采 用纯化水和ρΗ7· 5的PBS清洗。
[0019] 所述胰蛋白酶消化的生物细胞材料在交联体系中交联是指，在所述交联体系中重 复交联两次。
[0020] 所述交联体系为含有终浓度0· 2mol/L的EDC、0. 05mol/L的NHS和〇. 2m〇l/L的 MES的水溶液。
[0021] 作为优先，所述生物细胞材料是指羊膜。
[0022] 具体地，所述可注射填充植入剂制备方法，步骤如下：
[0023] 将冻存羊膜取出，经PBS清洗和清水冲洗后，60?90%酒精浸泡1?2h ;
[0024] 将消毒处理后的羊膜先用纯化水清洗，再用pH7. 5的PBS清洗，加入〇. 1 ^ 〇. 5% 的胰蛋白酶，匀速震荡，室温0· 5?4h或4°C过夜后，纯化水和pH7. 5的PBS清洗；
[0025] 将胰蛋白酶消化后的羊膜在交联体系中变性交联两次，用交联体系为含有终浓度 0· 2molEDC、0. 05molNHS 和 0. 2molMES 的水溶液；
[0026]改性交联的羊膜超高速低温粉碎，筛分选取粒径50?400 μ ra范围的羊膜微粒。 [0027] 本发明至少实现了如下有益效果：
[0028]本发明提供的制备方法，可以获得优于现有技术的可注射填充植入剂。
[0029]本发明所提供的可注射填空植入剂，交联程度高，粒径范围合适，体内降解时间 长，生物相容性好，并可有效保留羊膜本身抑制炎症、抑制瘢痕生成的活性特点。
[0030] 说明书附图
[0031] 图1为本发明所提供的清洗装置。
[0032] 1为旋转轴，2为固定板。
【具体实施方式】
[0033] 本发明所涉及的实验材料均可以通过商业途径或通过 申请人:获取。
[0034] 本发明中所用PBS，在未经特别说明的情况，均为pH7. 5。
[0035] 本发明的清洗过程，可以在本发明所提供的清洗装置中进行。本发明所提供的清 洗装置为，一个盒体内横贯一个旋转轴1，在该旋转轴1上设置若干固定板2,所述固定板2 随着旋转轴1的旋转而旋转。所述固定板上还可以设置若干贯穿孔。可以将材料固定到各 固定板上，在旋转轴的作用下，在清洗液中运动，以实现清洗目的。当然，本发明的清洗过程 也可以不使用本发明所提供清洗装置进行，只要达到清洗的目的即可。
[0036] 本发明的技术路线概述如下（以羊膜为例）：
[0037] 步骤一、前处理：将冻存羊膜取出，分别PBS清洗，清水冲洗，之后60?90%酒精 浸泡1?2h进行病毒灭活。
[0038]本步骤通过对羊膜进行消毒处理，可降低羊膜的微生物负载，同时灭活多种可能 存在的病毒，保证羊膜在后续处理时的安全性，避免羊膜上携带的微生物污染。
[0039] 步骤二、脱细胞处理：将步骤一消毒处理后的羊膜先用纯化水清洗次，再用PH7. 5 的PBS清洗，用0· 1?〇· 5 %的胰蛋白酶消化处理，可以在加入胰蛋白酶后匀速震荡，室温 0· 5?4h或4°C过夜，最后再采用纯化水和PBS清洗。
[0040] 本步骤通过温和的化学及物理方法去除羊膜中的细胞成分，可降低羊膜的免疫原 性，并同时最大程度保留了羊膜的胶原及活性因子（含有I型胶原300u g/mg以上，III型胶 原38〇ug/mg以上；成纤维细胞生长因子20ug/mg以上，表皮生长因子9ug/mg以上，肝细胞 生长因子ll〇ug/mg以上，角质细胞生长因子40ug/mg以上。），为制备保留羊膜生物活性的 植入剂提供原料。
[0041] 步骤三、改性处理：为获得一种在体内保留时间较长，又保留较髙生物特性的胶原 基质结构，故将步骤二得到的羊膜用温和的化学方法进行改性处理，改性所用交联体系含 有终浓度0. 1?0. 2molEDC、0. 01?0. 05molNHS、0. 01?0. 2molMES的水溶液；交联条件为 室温下2?20h，重复交联两次。这种温和的交联方法既可以保证低交联剂残留，又有效保 证了交联强度。
[0042] 对比结果如下表所示：
[0043]
【权利要求】
1· 一种可注射填充植入剂，其特征在于，所述可注射填充植入剂的有效成分为生物细 胞外基质材料，所述生物细胞外基质材料的交联度为50% -70%。
2·权利要求1所述可注射填充植入剂，其特征在于，所述生物细胞外基质材料的交联 度为 60% -70%。
3.权利要求2所述可注射填充植入剂，其特征在于，所述可注射填充植入剂含有 95% _97%、ρΗ7· 5的磷酸盐缓冲液。
4·权利要求3所述可注射填充植入剂，其特征在于，所述生物细胞外基质材料的交联 度为70%。
5·权利要求1-4任一项所述可注射填充植入剂，其特征在于，所述生物细胞外基质材 料为羊膜基质。
6. -种可注射填充植入剂制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 将消毒处理后的生物细胞材料用胰蛋白酶消化； 胰蛋白酶消化的生物细胞材料在交联体系中交联，所述交联体系为含有终浓度〇. 1? 〇· 2mol/L 的 EDC、0_ 01 ?〇· 05mol/L 的 NHS 和 0· 01 ?0· 2mol/L 的 MES 的水溶液。
7. 权利要求6所述可注射填充植入剂制备方法，其特征在于，所述将消毒处理后的 生物细胞材料用胰蛋白酶消化是指，将消毒处理后的生物细胞材料先用纯化水清洗，再用 ?取_5的？33清洗后，用〇_1?〇.5%的胰蛋白酶消化后，再采用纯化水和1^7.5的？83清 洗。
8·权利要求7所述可注射填充植入剂制备方法，其特征在于，所述胰蛋白酶消化的生 物细胞材料在交联体系中交联是指，在所述交联体系中重复交联两次。 9_权利要求8所述可注射填充植入剂制备方法，其特征在于，所述交联体系为含有终 浓度 0. 2mol/L 的 EDC、0. 05mol/L 的 NHS 和 〇· 2mol/L 的 MES 的水溶液。
10.权利要求6_9任意一项所述可注射填充植入剂制备方法，其特征在于，所述生物细 胞材料是指羊膜。 <
【文档编号】A61L27/54GK104189956SQ201410427779
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年8月27日 优先权日:2014年8月27日
【发明者】何越 申请人:陕西瑞盛生物科技有限公司