包含非离子等渗剂的佐剂组合物的制作方法

包含非离子等渗剂的佐剂组合物的制作方法
【专利摘要】提供了包含在脂质体制剂中的TLR-4激动剂和皂苷、以及非离子等渗剂的佐剂和免疫原性组合物，其中氯化钠的浓度或离子强度小于100mM。
【专利说明】包含非离子等渗剂的佐剂组合物

【技术领域】
[0001] 本发明涉及包含非离子等渗剂且具有低浓度的盐，特别是具有以IOOmM或低于 IOOmM的氯化钠浓度的水性佐剂组合物。本发明还涉及包含抗原或抗原性制剂和所述水性 佐剂组合物的免疫原性组合物。

【背景技术】
[0002] 佐剂有时用于改善对于任何给定抗原产生的免疫应答。然而，佐剂包括到疫苗或 免疫原性组合物内增加组分制备的复杂性以及疫苗组合物的分布和配制的复杂性。佐剂组 分和抗原组分各自的制备必须由配制者加以考虑。特别地，应考虑抗原组分与佐剂组分的 相容性。这特别是其中冻干抗原或抗原性制剂预期用佐剂制剂重构的情况。在此类情况下， 重要的是佐剂制剂的缓冲液适合于抗原或抗原性制剂，并且抗原的免疫原性或可溶性不受 佐剂影响。
[0003] 发明概述 本发明人已发现某些抗原对称为"盐析"的现象特别敏感，所述盐析可以定义为通过用 盐例如氯化钠饱和从其溶液中沉淀蛋白质。本发明人已发现在低至150mM的氯化钠浓度 时，敏感抗原可以聚集且沉淀。
[0004] 因此，本发明提供了包含在脂质体制剂中Toll样受体（TLR)4激动剂和皂苷，以及 非离子等渗剂的水性等渗佐剂组合物，其中所述组合物中氯化钠的浓度小于lOOmM。
[0005] 本发明进一步提供了包含在脂质体制剂中的TLR-4激动剂和皂苷，以及非离子等 渗剂的水性等渗佐剂组合物，其中所述组合物中的离子强度小于IOOmM。
[0006] 此外，本发明提供了可以用于更广泛范围的蛋白质抗原的水性等渗佐剂组合物， 所述蛋白质抗原包括对"盐析"敏感的那些以及不敏感的那些。
[0007] 本发明还提供了包含抗原或抗原性制剂和水性佐剂组合物的免疫原性组合物和 用于制备所述免疫原性组合物的方法，所述水性佐剂组合物包含在脂质体制剂中的TLR-4 激动剂和皂苷，以及非离子等渗剂，其中所述佐剂组合物中氯化钠的浓度小于l〇〇mM。
[0008] 附图简述 图I. QS21裂解活性曲线。
[0009] 图2.在不同ASA制剂中每种3D-MPL同源物（congener)的百分率。
[0010] 图3.用于PRAME/CpG冻干的冷冻干燥循环。
[0011] 图4.在ASA (150mM NaCl)和ASA (山梨醇）中重构的PRAME和NYES0-1之间的 图示比较。
[0012] 图5.在实验1中用不同佐剂组合物配制的PRAME/CpG免疫接种的小鼠的体液应 答。
[0013] 图6.在实验1中用不同佐剂组合物配制的PRAME/CpG免疫接种的小鼠中的肿瘤 保护。
[0014] 图L在实验2中用ASA (150mM NaCl)、ASA (山梨醇）或液体制剂ASA (70mM NaCl)配制的PRAME/CpG免疫接种的小鼠的体液应答。
[0015] 图8.在实验2中用ASA (150mM NaCl)、ASA (山梨醇）或液体制剂ASA配制的 PRAME/CpG免疫接种的小鼠的⑶4+应答。
[0016] 图9.在实验2中用ASA (150mM NaCl)、ASA (山梨醇）或液体制剂ASA配制的 PRAME/CpG免疫接种的小鼠中的肿瘤保护。
[0017] 发明详述 本发明描述了用非离子等渗剂的替换或部分替换在水性佐剂组合物中的等渗剂，所述 等渗剂为盐例如氯化钠。
[0018] 众所周知对于肠胃外施用，溶液应是生理学等渗的（即具有药学可接受的摩尔渗 透压浓度）以避免细胞畸变或裂解。"等渗剂"是生理学耐受的且对制剂(例如本发明的免 疫原性组合物）赋予合适张力的化合物，以预防水跨越与制剂接触的细胞膜的净流动。
[0019] 包含100 mM氯化钠或更多的水性佐剂组合物是已知的，例如在WO 2005/112991 和TO2008/142133中的佐剂系统A (ASA)或在W02007/068907中公开的脂质体佐剂。如 W02008/142133中所示，此类佐剂组合物可以用作稀释剂，以在疫苗接种前重构包含抗原或 抗原性制剂的冻干组合物。重要的是此类重构的组合物是等渗的，即含有与机体和血液的 细胞中发现的基本上相同的盐浓度，从而使得在注射时不引起细胞皱缩或扩张。一般地，氯 化钠用作等渗剂。本发明人已发现某些抗原对"盐析"特别敏感，即当在溶液中含有高浓度 的盐时，在溶液中的蛋白质聚集或凝固（coagulate)的过程。
[0020] 蛋白质抗原聚集时的盐浓度在蛋白质之间不同。本发明人已鉴定了在相对低的盐 浓度时，例如在约IOOmM或更少的氯化钠时，将聚集的一组抗原。这意味着某些已知佐剂组 合物不适合于重构包含这些抗原的组合物或与包含这些抗原的组合物一起使用，因为聚集 发生。
[0021] 本发明提供了可以与此类抗原一起使用的水性佐剂组合物，所述抗原即在低于 IOOmM氯化钠的盐浓度时聚集的那些抗原。本发明的水性佐剂组合物包含在脂质体制剂 中的TLR-4激动剂和皂苷，以及非离子等渗剂，其中佐剂组合物中氯化钠的浓度低于约 IOOmM,例如低于 90禮、8〇1111、7〇1111、6〇1111、5〇1111、4〇1111、3〇1111、2〇1111或15 1111。在一个具体实施 方案中，佐剂组合物中氯化钠的浓度低于IOmM或在或低于5mM。在一个进一步具体实施方 案中，佐剂组合物基本上不含氯化钠。基本上不含意指氯化钠的浓度在或非常接近于0 mM (即 或 3mM)。
[0022] 使用已知技术和试剂盒，技术人员可以容易地测试钠（Na+)和氯（CO离子 的浓度。例如，钠可以使用试剂盒例如来自Biosupply的钠酶促测定试剂盒（目录号： BQ011EAEL)进行测定。氯化物可以使用试剂盒例如来自Biosupply的氯化物酶促测定试剂 盒（目录号：BQ006EAEL)进行测定。
[0023] 本发明进一步提供了包含在脂质体制剂中的TLR-4激动剂和皂苷，以及非离子等 渗剂的水性等渗佐剂组合物，其中离子强度小于IOOmM,例如低于90mM、80mM、70mM、60mM、 50mM、40mM、30mM、20 mM或15 mM。在一个具体实施方案中，佐剂组合物中的离子强度低于 IOmM或在或低于5mM。在一个进一步具体实施方案中，佐剂组合物具有在或非常接近于0 mM的离子强度。
[0024] 本发明的佐剂或免疫原性组合物的离子强度可以使用技术人员已知的技术例如 使用电导仪进行测量。
[0025] 用于在与抗原组合物组合的本发明的水性佐剂组合物中使用的合适的非离子等 渗剂将需要适合于在人中使用，以及与抗原组合物内的抗原相容且与佐剂组合物的其他组 分进一步相容。
[0026] 特别地，水性佐剂组合物必须是这样的，使得当与佐剂组合物组合时，抗原组合物 内的抗原能够保留在溶液中且保留其免疫原性。
[0027] 在本发明的一个实施方案中，合适的非离子等渗剂是多元醇、糖(特别是蔗糖、果 糖、右旋糖或葡萄糖)或氨基酸例如甘氨酸。在一个实施方案中，多元醇是糖醇特别是C3-6 糖醇。示例性糖醇包括甘油、赤藓醇、苏糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、核糖醇、山梨醇、甘露醇、 卫矛醇和艾杜糖醇。在这个实施方案的具体例子中，合适的非离子等渗剂是山梨醇。在本 发明的一个具体实施方案中，本发明的组合物中的非离子等渗剂是蔗糖和/或山梨醇。
[0028] 在一个实施方案中，在水性佐剂组合物内多元醇的合适浓度是约3 -约15% (w/ v)，特别是约3 -约10% (w/v)，例如约3 -约7 % (w/v)，例如约4 -约6% (w/v)。在 这个实施方案的具体例子中，多元醇是山梨醇。
[0029] 水性佐剂组合物包含在脂质体制剂中的Toll样受体激动剂（TLR) 4激动剂和皂 苷。这意味着皂苷和TLR-4激动剂用脂质体进行配制。
[0030] 术语"脂质体"一般指封装水性内部的单或多层(取决于形成的脂质膜数目，特别 是2、3、4、5、6、7、8、9或10层)脂质结构。脂质体和脂质体制剂是本领域众所周知的。能够 形成脂质体的脂质包括具有脂肪或脂肪样性质的所有物质。可以构成脂质体中的脂质的脂 质可以选自甘油酯、甘油磷脂、甘油膦酰脂（glycerophosphinolipids)、甘油磷酸酯、硫脂、 鞘脂、磷脂、异戊二烯、类固醇、硬脂、留醇、archeolipids、合成阳离子脂质和含碳水化合物 的脂质。
[0031] 在一个实施方案中，脂质体包含磷脂。合适的磷脂包括(但不限于):其为磷脂酰胆 碱合成中的中间产物的磷酸胆碱（PC);天然磷脂衍生物：蛋磷酸胆碱、蛋磷酸胆碱、大豆磷 酸胆碱、氢化大豆磷酸胆碱、作为天然磷脂的鞘磷脂；和合成磷脂衍生物：磷酸胆碱(二癸 酰-L- α-磷脂酰胆碱[DDPC]、二月桂酰磷脂酰胆碱[DLPC]、二肉豆蘧磷脂酰胆碱[DMPC]、 二棕榈酰磷脂酰胆碱[DPPC]、二硬脂酰磷脂酰胆碱[DSPC]、二油酰磷脂酰胆碱[D0PC]、 1-棕榈酰，2-油酰磷脂酰胆碱[P0PC]、二反油酰磷脂酰胆碱[DEPC])、磷酸甘油（1，2_二 肉豆蘧酰-sn-甘油-3-磷酸甘油[DMPG]、1，2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸甘油[DPPG]、 1，2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸甘油[DSPG]、1-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸甘油 [P0PG])、磷脂酸（1，2-二肉豆蘧酰-sn-甘油-3-磷脂酸[DMPA]、二棕榈酰磷脂酸[DPPA]、 二硬脂酰-磷脂酸[DSPA])、磷酸乙醇胺（1，2-二肉豆蘧酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺 [DMPE]、1，2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺[DPPE]、1，2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸 乙醇胺DSPE、1，2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺[DOPE])、磷酸丝氨酸、聚乙二醇[PEG] 磷脂(mPEG-磷脂、聚甘油-磷脂、官能化的磷脂、末端激活的磷脂)。在一个实施方案中，月旨 质体包含1-棕榈酰-2-油酰-甘油-3-磷酸乙醇胺。在一个实施方案中，使用高度纯化的 磷脂酰胆碱，并且可以选自磷脂酰胆碱(蛋)、氢化磷脂酰胆碱(蛋)、磷脂酰胆碱(大豆)、氢化 磷脂酰胆碱(大豆)。在一个进一步的实施方案中，脂质体包含磷脂酰乙醇胺[POPE]或其衍 生物。
[0032] 取决于磷脂组成和用于其制备的方法，脂质体大小可以从30 nm到数Mm。在本发 明的特定实施方案中，脂质体大小将在50 nm - 500 nm的范围中，并且在进一步实施方案 中，50 nm - 200 nm。动态激光散射是本领域技术人员众所周知的用于测量脂质体的大小 的方法。
[0033] 脂质体适当地含有中性脂质，例如磷脂酰胆碱，这在室温适当地是非结晶的，例如 蛋黄磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱（DOPC)或二月桂酰磷脂酰胆碱。在一个特定实施方案 中，本发明的脂质体含有D0PC。脂质体还可以包含荷电脂质，这增加关于由饱和脂质组成的 脂质体的脂质体-皂苷结构的稳定性。在这些情况下，荷电脂质的量适当地是I - 20%w/ w，优选5 - 10%。固醇或磷脂的比值是1 - 50% (摩尔/摩尔)，适当地20 - 25%。
[0034] 用于在本发明中使用的特别合适的皂苷是Quil A及其衍生物。Quil A是从南 美树阜树（必中分离的阜苷制剂，并且首先由Dalsgaard等人 在 1974 年（"Saponin adjuvants，'，Archiv. fiir die gesamte Virusforschung,第 44 卷， Springer Verlag，Berlin,第243-254页)描述为具有佐剂活性。已通过HPLC分离Quil A 的纯化片段，这保留佐剂活性而无与Quil A相关的毒性（EP 0 362 278)，例如QS7和QS21 (也称为QA7和QA21)。QS-21是衍生自皂树树皮的天然皂苷，这诱导⑶8+细胞毒性T细胞 (CTLs)、Thl细胞和占优势的IgG2a抗体应答。QS21是在本发明的背景中的优选皂苷。
[0035] 在本发明的合适形式中，在免疫原性组合物内的阜苷佐剂是 quil A的衍生物，优选Quil A的免疫原性活性部分，例如QS-17或QS-21，适当地QS-21。
[0036] 在一个具体实施方案中，QS21以其更少反应原性（reactogenic)组合物提供，在 其中它用外源固醇例如胆固醇猝灭。存在几个具体形式的更少反应原性的组合物，在其中 QS21由外源胆固醇猝灭。皂苷/固醇在脂质体制剂结构中（W0 96/33739,实施例1)。 [0037] 合适的固醇包括谷留醇、豆留醇、麦角固醇、麦角钙化醇和胆固醇。在一个具 体实施方案中，佐剂组合物包含胆固醇作为固醇。这些固醇是本领域众所周知的，例如胆固 醇作为在动物脂肪中发现的天然存在的固醇公开于Merck Index，第11版，第341页中。
[0038] 当活性皂苷部分是QS21时，QS21 :固醇的比值一般是1:100 - l:l(w/w)数量级， 适当地1:10 - 1:1 (w/w)，且优选1:5 - 1:1 (w/w)。存在适当过量的固醇，QS21:固醇的 比值是至少1:2 (w/w)。在一个实施方案中，QS21:固醇的比值是1:5 (w/w)。固醇适当地 是胆固醇。
[0039] 水性佐剂组合物包含Toll样受体（TLR) 4激动剂。"TLR激动剂"意指作为直接 配体或通过内源或外源配体的生成间接地，能够引起通过TLR信号途径的信号应答的组分 (Sabroe等人，JI 2003 pl630-5)。TLR4激动剂能够引起通过TLR-4信号途径的信号应答。 TLR-4激动剂的合适例子是脂多糖，适当地脂质A的无毒衍生物，特别是单磷酰脂质A或更 具体而目3_脱醜单憐醜脂质A (3D - MPL)。
[0040] 3D-MPL 在名称 MPL 下由 GlaxoSmithKline Biologicals N.A.销售，并且文件自 始至终称为MPL或3D-MPL。参见例如，美国专利号4, 436, 727 ;4, 877, 611 ;4, 866, 034和 4,912,094。3D-MPL主要促进具有IFN-g (Thl)表型的CD4+ T细胞应答。3D-MPL可以根 据GB 2 220 211 A中公开的方法产生。在化学上，它是具有4、5或6条酰化链的3-脱酰 单磷酰脂质A的混合物。在本发明的组合物中，小颗粒3D-MPL可以用于制备水性佐剂组合 物。小颗粒3D-MPL具有这样的粒子大小，从而使得它可以通过0.22 μ m滤器无菌过滤。此 类制剂在WO 94/21292中描述。优选地，粉末状3D-MPL用于制备本发明的水性佐剂组合物。
[0041] 可以使用的其他11^-4激动剂是烷基氨基葡糖苷磷酸盐（46?8)，例如冊98/50399 或美国专利号6, 303, 347中公开的那些(还公开了用于制备AGPs的方法)，适当地如美国专 利号中公开的RC527或RC529或AGPs的药学可接受的盐。
[0042] 其他合适的TLR-4激动剂如W02003/011223和WO 2003/099195中描述的，例如在 W02003/011223的第4-5页上或在W02003/099195的第3 - 4页上的化合物I、化合物II和 化合物 III，且特别是在 W02003/011223 中作为 ER803022、ER803058、ER803732、ER804053、 ER804057m ER804058、ER804059、ER804442、ER804680 和 ER804764 公开的那些化合物。例 如，一种合适的TLR-4激动剂是ER804057。
[0043] 本发明的水性佐剂组合物包含皂苷和TLR-4激动剂。在一个具体实施方案中，水 性佐剂组合物包含QS21和3D-MPL。
[0044] TLR-4激动剂例如脂多糖例如3D-MPL可以以1 - 100 μ g /佐剂组合物的人剂量 的量使用。3D-MPL可以以约50yg的水平使用，例如40 - 60 yg，适当地45 - 55 yg或 49 - 51 μ g或50 μ g。在一个进一步的实施方案中，佐剂组合物的人剂量包含以约25 μ g 的水平使用的3D-MPL，例如21 - 29 μ g或22 - 28 μ g或28 - 27 μ g或24 - 26 μ g、或 25 μ g〇
[0045] 皂苷例如QS21可以以I - IOOyg /佐剂组合物的人剂量的量使用。QS21可以 以约50yg的水平使用，例如40 - 60 yg，适当地45 - 55 yg或49 - 51 yg或50yg。 在一个进一步的实施方案中，佐剂组合物的人剂量包含以约25 μ g的水平使用的QS21，例 如 21 - 29yg 或 22 - 28yg 或 28 - 27yg 或 24 - 26yg、或 25yg。
[0046] TLR-4激动剂和皂苷都存在于水性佐剂组合物中-TLR-4激动剂与皂苷的重量比 值适当地是1:5 - 5:1，适当地1:1。例如，当3D-MPL以50yg或25yg的量存在时，那么 适当地QS21也可以分别以50 μ g或25 μ g /水性佐剂组合物的人剂量的量存在。
[0047] 当佐剂待与液体形式的抗原组合物组合时，佐剂组合物将在人剂量适当体积中， 这是人剂量的预期最终体积的约一半。例如，500 μ?体积的佐剂用于I ml的预期最终人剂 量，或250 μ?体积用于0.5 ml的预期最终人剂量。当与抗原组合物组合时，佐剂组合物是 稀释的，以提供疫苗的最终人剂量。此类剂量的最终体积当然将取决于佐剂组合物的起始 体积和加入佐剂组合物中的抗原组合物的体积而改变。在一个可替代实施方案中，水性佐 剂用于重构冻干的抗原组合物。在这个实施方案中，佐剂组合物的人剂量适当体积大约等 于人剂量的最终体积。液体佐剂组合物加入含有冻干抗原组合物的小瓶中，并且用于重构 冻干的抗原组合物。
[0048] 本发明因此提供了用于制备免疫原性组合物的方法，其包括用如本文定义的水性 佐剂组合物重构包含如本文描述的至少一种抗原或抗原性制剂的冻干组合物的步骤。
[0049] 在本发明的一个进一步实施方案中，提供了包含（i)包含抗原或抗原性制剂的冻 干组合物和（ii)如本文描述的水性佐剂组合物的试剂盒。
[0050] 在本发明的一个特定实施方案中，提供了包含（i)如本文描述的包含抗原或抗原 性制剂的冻干组合物和（ii)如本文描述的水性佐剂组合物的试剂盒。
[0051] 在一个实施方案中，冻干组合物进一步包含例如如WO 2008/142133中所示的 TLR-9激动剂。
[0052] 在一个可替代实施方案中，提供了其中CpG不与抗原一起共冻干的试剂盒。CpG 可以与水性佐剂组合物混合，或以水性或冻干形式在分开小瓶中。相应地，在一个可替代实 施方案中，提供了包含（i)如本文描述的包含抗原的冻干组合物；（ii)水性佐剂组合物；和 (iii) TLR9激动剂(例如免疫刺激性CpG寡核苷酸）的试剂盒。
[0053] 用于在本发明的试剂盒中使用的TLR-9激动剂是免疫刺激性寡核苷酸，特别 是含有未甲基化的CpG基序的寡核苷酸。此类寡核苷酸是众所周知的，并且例如在TO 96/02555、W0 99/33488和US 5,865,462中描述。用于在本文描述的免疫原性组合物中使 用的合适TLR9激动剂是含有CpG的寡核苷酸，任选含有由至少3个、适当地至少6个或更 多个核苷酸分开的2个或更多个二核苷酸CpG基序。CpG基序是胞嘧啶核苷酸随后为鸟嘌 呤核苷酸。
[0054] 在一个实施方案中，寡核苷酸中的核苷酸间键合是二硫代硫酸酯，或可能地是硫 代硫酸酯键合，尽管还可以使用磷酸二酯和其他核苷酸间键合，包括具有混合的核苷酸间 键的寡核苷酸。用于产生硫代磷酸酯寡核苷酸或二硫代硫酸酯的方法在US5, 666, 153、 US5, 278, 302和W095/26204中描述。考虑了包含不同核苷酸间键的寡核苷酸，例如混合的 硫代硫酸酯磷酸二酯。可以使用稳定寡核苷酸的其他核苷酸间键合。
[0055] 适合于包括在本文描述的免疫原性组合物中的CpG寡核苷酸的例子具有下述序 列。在一个实施方案中，这些序列含有硫代硫酸酯修饰的核苷酸间键。

【权利要求】
1. 一种水性佐剂组合物，其包含：（a)在脂质体制剂中的TLR-4激动剂和皂苷；和（b) 非离子等渗剂，其中所述佐剂组合物中氯化钠的浓度或离子强度小于l〇〇mM。
2. 如权利要求1中要求的水性佐剂组合物，其中所述氯化钠的浓度或离子强度小于 80mM。
3. 如权利要求2中要求的水性佐剂组合物，其中所述氯化钠的浓度或离子强度小于 30mM〇
4. 如权利要求3中要求的水性佐剂组合物，其中所述氯化钠的浓度或离子强度小于 10mM〇
5. 如权利要求4中要求的水性佐剂组合物，其中所述氯化钠的浓度或离子强度小于 5mM〇
6. 如权利要求5中要求的水性佐剂组合物，其基本上不含氯化钠。
7. 根据任一前述权利要求的水性佐剂组合物，其中所述非离子等渗剂是多元醇。
8. 根据权利要求7的水性佐剂组合物，其中所述多元醇是山梨醇。
9. 权利要求8的水性佐剂组合物，其中所述山梨醇的浓度是约3% -约15% (w/v)。
10. 权利要求9的水性佐剂组合物，其中所述山梨醇的浓度是约4% -约10% (w/v)。
11. 任一前述权利要求的水性佐剂组合物，其中所述TLR-4激动剂是3D-MPL。
12. 根据任一前述权利要求的水性佐剂组合物，其中所述皂苷是QuilA或其衍生物。
13. 根据权利要求12的水性佐剂组合物，其中所述QuilA的衍生物是QS21。
14. 根据任一前述权利要求的水性佐剂组合物，其包含约5mM氯化钠和5%- 6% w/v 山梨醇。
15. -种免疫原性组合物，其包含抗原或抗原性制剂和权利要求1 - 14中任一项的 水性佐剂组合物。
16. 根据权利要求15的免疫原性组合物，其中所述抗原或抗原性制剂在其中所述离子 强度高于51111、1〇1111、2〇111111、3〇1111、4〇1111、5〇1111、6〇1111、7〇1111、8〇1111、9〇1111或10〇1111的盐浓度或溶 液中是不可溶的。
17. 权利要求15或16的免疫原性组合物，其中所述抗原或抗原性制剂衍生自HIV、脑 膜炎奈瑟球菌或是肿瘤相关抗原。
18. 根据权利要求17的免疫原性组合物，其中所述抗原选自PRAME或NY-ES0-1或其片 段或衍生物。
19. 根据权利要求15 - 18中任一项的免疫原性组合物，其进一步包含CpG寡核苷酸。
20. -种用于制备权利要求15 - 19中任一项的免疫原性组合物的方法，其包括用如 权利要求1 _ 14中任一项定义的水性佐剂组合物重构包含至少一种抗原或抗原性制剂的 冻干组合物的步骤。
21. -种试剂盒，其包含（i )包含抗原或抗原性制剂的冻干组合物，和（ii )权利要求1 -14中任一项的水性佐剂组合物。
22. 权利要求18的方法或权利要求19的试剂盒，其中所述冻干组合物进一步包含 TLR9激动剂。
23. 权利要求22的方法或试剂盒，其中所述TLR9激动剂是CpG免疫刺激性寡核苷酸。
24. 权利要求20 - 23的方法或试剂盒，其中所述抗原或抗原性制剂在其中所述离子 强度高于 1〇遍、2〇111111、3〇1111、4〇1111、5〇1111、6〇1111、7〇1111、8〇1111、9〇1111或10〇1111的盐浓度或溶液中 是不可溶的。
【文档编号】A61P37/04GK104367997SQ201410497386
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2010年6月8日 优先权日:2009年6月10日
【发明者】V.亨德里克斯, D.I.勒穆瓦纳 申请人:葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司