一种小分子多肽的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种小分子多肽，所述小分子多肽包含：(a)小分子多肽氨基酸序列：SEQ ID No.1所示的氨基酸序列；(b)在(a)限定的小分子多肽中经过缺失、插入或置换一个或几个氨基酸且与(a)所述多肽具有相同生物学功能的由(a)衍生的多肽；所述小分子多肽分子量为2461g/mol，等电点为12.3；其可应用于制备抗菌和促进成骨细胞生长的材料中。本发明在于提供一种具有抗菌和促进成骨细胞生长的小分子多肽，同时在于提供该小分子多肽在制备抗菌和促进成骨细胞生长的材料中的应用。
【专利说明】一种小分子多肽
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物医药领域，特别涉及一种小分子多肽。
【背景技术】
[0002] 种植牙手术是一个牙槽外科手术，选用的是与人体相容性极好的生物材料，要求 种植牙对人体不产生任何不良副作用，种植牙的材料分为牙根材料和牙冠材料两部分，牙 冠材料可以根据患者意愿灵活处理，而牙根材料则是有严格的规定。随着口腔种植治疗的 广泛开展，种植体周围感染的病例也在逐渐增多，寻找一种和人体能极好的相容，又能提高 种植体性能的材料具有重要的意义。
【发明内容】
[0003] 本发明目的之一在于提供一种具有抗菌和促进成骨细胞生长的小分子多肽；本发 明目的之二在于提供该小分子多肽在制备抗菌和促进成骨细胞生长的材料中的应用。
[0004] 本发明提供的技术方案为：
[0005] -种小分子多肽，所述小分子多肽包含：
[0006] (a)小分子多肽氨基酸序列：SEQ ID No. 1所示的氨基酸序列；
[0007] (b)在（a)限定的小分子多肽中经过缺失、插入或置换一个或几个氨基酸且与（a) 所述多肽具有相同生物学功能的由（a)衍生的多肽。
[0008] 优选的是，所述小分子多肽分子量为2461g/mol。
[0009] 优选的是，所述小分子多肽等电点为12. 3。
[0010] 优选的是，其在制备抗菌和促进成骨细胞生长的材料中的应用。种植体的钛表面 可用连接子预处理，并且可将含有-SH基团的氨基酸，例如半胱氨酸引入本发明小分子多 肽的N末端或C末端中，以结合所述连接子的官能团。也可用连接子对钛表面预处理后连 接多肽中的-NH 2基团，将多肽连接在钛表面。例如，结合连接子，本发明小分子多肽在N 末端含有半胱氨酸以便借助于连接子与半胱氨酸之间的相互作用容易地被引入种植体中； 另外，为了将本发明小分子多肽稳定地引入种植体的钛（Ti)表面中，优选利用硅烷-连接 子-肽的连接关系将这些小分子多肽引入种植体表面中，这样处理得到的钛金属可作为牙 种植体和骨种植体使用，由于其优异的抗菌性能和促进成骨细胞生长功能，对于避免种植 体细菌感染和挽救病人生命有重大意义。
[0011] 此外，本发明的小分子多肽也可简单应用于其他日常使用的材料表面，如塑料、玻 璃和其他金属表面，可有效预防日常接触引起的细菌感染。
[0012] 本发明的有益效果是本发明提供的一种小分子多肽，具有良好的抗菌能力，对于 多种菌种均能有效杀菌，并且杀菌效果能达到99 %，其中对于大肠埃希氏菌杀菌率可达到 99.98% ;本发明的小分子多肽能有效的提高骨细胞活性，促进成骨细胞分化能力，通过小 分子多肽对初始细胞分化能力与普通培养基对初始细胞分化能力的比较可知碱性磷酸酶 (ALP)活性提高了 93% ;通过细胞毒性分析，可知利用本发明制作的材料无毒，作用于人体 不会造成健康危害；本发明提供的小分子多肽，稳定性强，结构易于调控，易于与其它化合 物结合，可以简单应用于各种形式的材料，易于大规模生产。
[0013] 本发明所涉及到的术语定义
[0014] 除非另外定义，否则本文所用的所有技术及科学术语都具有与本发明所属领域的 普通技术人员通常所了解相同的含义。虽然在本发明的实践或测试中可使用与本文所述者 类似或等效的任何方法、装置和材料，但现在描述优选方法、装置和材料。
[0015] 术语"氨基酸"意指构成蛋白质的基本单位，赋予蛋白质特定的分子结构形态，使 它的分子具有生化活性。蛋白质是生物体内重要的活性分子，包括催化新陈代谢的酶，两个 或两个以上的氨基酸化学聚合成肽，一个蛋白质的原始片段，是蛋白质生成的前体，氨基酸 广义上是指既含有一个碱性氨基又含有一个酸性羧基的有机化合物，正如它的名字所说的 那样。但一般的氨基酸，则是指构成蛋白质的结构单位。在生物界中，构成天然蛋白质的氨 基酸具有其特定的结构特点，即其氨基直接连接在a-碳原子上，这种氨基酸被称为a-氨 基酸。在自然界中共有300多种氨基酸，其中a-氨基酸21种。a-氨基酸是肽和蛋白质 的构件分子，也是构成生命大厦的基本砖石之一。
[0016] 术语"多肽"意指a -氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物，它也是蛋白质水 解的中间产物。由两个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫做二肽，同理类推还有三肽、四 肽、五肽等，通常由10?100氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫多肽，它们的分子量低于 10000道尔顿，能透过半透膜，不被三氯乙酸及硫酸铵所沉淀，也有文献把由2?10个氨基 酸组成的肽称为寡肽（小分子肽）；10?50个氨基酸组成的肽称为多肽；由50个以上的氨 基酸组成的肽就称为蛋白质。
[0017] 术语"缺失"意指一个正常染色体断裂后丢失了一个片段，这片段上的基因也随之 失去，在本发明中意指小分子多肽除了为SEQ ID No. 1所示的氨基酸序列之外，还包括小分 子多肽氨基酸序列中丢失一个或几个氨基酸的不影响其功能的新的氨基酸序列的小分子 多肽。
[0018] 术语"插入"意指利用基因操作技术把一段DNA接入另一段DNA中或克隆载体中 去，在本发明中意指小分子多肽除了为SEQ ID No. 1所示的氨基酸序列之外，还包括小分子 多肽氨基酸序列中插入一个或几个氨基酸的不影响其功能的新的氨基酸序列的小分子多 肽。
[0019] 术语"置换"意指一种基因重组载体，一般利用同源重组将基因组中的某段基因替 换，而达到基因敲除的目的，在本发明中意指小分子多肽除了为SEQ ID No. 1所示的氨基酸 序列之外，还包括小分子多肽氨基酸序列中一个或几个氨基酸被其他种类的氨基酸置换后 的不影响其功能的新的氨基酸序列的小分子多肽。
[0020] 术语"等电点"意指在某一 pH的溶液中，氨基酸或蛋白质解离成阳离子和阴离子 的趋势或程度相等，成为兼性离子，呈电中性，此时溶液的pH成为该氨基酸或蛋白质的等 电点，生物两性分子如蛋白质即含有酸性的，也含有碱性的官能团。组成蛋白质的氨基酸可 能是带正电荷的、带负电荷的、中性的或者本生是两性的，它们的电荷加在一起是蛋白质的 电荷，PH值小于等电点时蛋白质的总电荷是正的，大于等电点时是负的。
【专利附图】
【附图说明】
[0021] 图1为本发明所述小分子多肽对成骨细胞增殖活性的影响与普通培养基对成骨 细胞增殖活性影响的比较结果对照图；
[0022] 图2为本发明所述小分子多肽对初始细胞分化能力与普通培养基对初始细胞分 化能力的比较结果对照图。
【具体实施方式】
[0023] 下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文 字能够据以实施。
[0024] 实施例1 :
[0025] -种小分子多肽，氨基酸序列如SEQ ID No. 1所示；
[0026] SEQ ID No. I ：GSKKPVPIIY CNRRTGKRTR M〇
[0027] 实施例2 :
[0028] 小分子多肽的制备：
[0029] 选用氨基酸-王树脂作为载体（树脂），用二氯甲烷将树脂充分溶胀，用二甲基甲 酰胺清洗几遍，用适当浓度的DBLK，将Fmoc-保护基团脱出，之后用二甲基甲酰胺清洗数 遍，洗去DBLK，称取适合的缩合剂苯并三氮唑-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸盐和活 化剂甲基吗啉以及C端第二个Fmoc-保护氨基酸（Fmoc-Pro-OH)进行偶联，通过茚三酮检 测法进行检测确保连接比较完全，用二甲基甲酰胺清洗几遍，洗去残留的各种残基，活化剂 和缩合剂，依氨基酸序列进行偶联，将所有的氨基酸连接结束后，脱去最后的Fmoc-保护基 团，用切割液裂解，去除树脂和氨基酸保护基团，得到小分子多肽的粗品，送质谱确认产品 分子量2461 g/mol符合理论值。
[0030] 实施例3 :
[0031] 抗菌能力实验：
[0032] 一、实验方法
[0033] 在灭菌试管中加入ImL浓度为I X IO6个/mL的菌液，加入Img本发明所提供的小 分子多肽，37°C培养24小时后，培养基收集起来用倍比稀释，稀释倍数为10倍和涂布培养 法检测活菌数。
[0034] 二、实验结果：
[0035] 表1本发明所述小分子多肽的杀菌率（％ )
[0036]
【权利要求】
1. 一种小分子多肽，其特征在于，所述小分子多肽包含： (a) 小分子多肽氨基酸序列：SEQ ID No. 1所示的氨基酸序列； (b) 在（a)限定的小分子多肽中经过缺失、插入或置换一个或几个氨基酸且与（a)所述 多肽具有相同生物学功能的由（a)衍生的多肽。
2. 根据权利要求1所述的小分子多肽，其特征在于，所述小分子多肽分子量为2461g/ mol 〇
3. 根据权利要求1所述的小分子多肽，其特征在于，所述小分子多肽等电点为12. 3。
4. 权利要求1所述的小分子多肽，其特征在于，其在制备抗菌和促进成骨细胞生长的 材料中的应用。
【文档编号】A61L27/54GK104292309SQ201410512774
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2014年9月29日 优先权日:2014年9月29日
【发明者】李培源, 苏炜, 霍丽妮, 陈睿 申请人:广西中医药大学