一种金介导的近红外光热效应与自噬抑制剂联合杀伤肿瘤细胞的方法
【专利摘要】本发明提供一种金介导的近红外光热效应与自噬抑制剂联合杀伤肿瘤细胞的方法，与现有技术相比，本发明中自噬抑制剂的引入，可以降低金纳米颗粒的用量，使用较低剂量的激光即可获得良好的肿瘤细胞杀伤效果，从而降低激光和金纳米颗粒对正常细胞组织造成危害的风险。
【专利说明】一种金介导的近红外光热效应与自嗤抑制剂联合杀伤肿瘤 细胞的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及金介导的近红外光热效应与自噬抑制剂的联合，用于杀伤肿瘤。
【背景技术】
[0002] 癌症是由于控制细胞周期的相关基因发生突变，并且遗传不稳定性累积形成的发 生在各种人群，年龄阶段和不同人体器官上的一种难以治愈的顽疾，严重威胁人类的健康 及生命。目前还没有较为行之有效的诊疗手段，能够彻底治愈癌症。
[0003] 目前治疗癌症的手段主要是：外科手术直接切除病灶处肿瘤，放疗，化疗或者以上 几种治疗手段的组合治疗。然而，采用手术治疗，很难将所有的肿瘤组织切除，对于难以行 使肿瘤切除的部位，或者非实体瘤，手术治疗将变得束手无措。放化疗受限于无法区分肿瘤 细胞及正常细胞，会对正常细胞产生较大的毒副作用，最终有可能引起癌症病人较大的毒 副反应。
[0004] 纳米技术在癌症的诊疗上具有独特的优势。诊疗用纳米材料具有与核酸、多肽以 及蛋白质等生物大分子类似的尺度，使得纳米材料极易穿过组织间隙进入组织及细胞内 部，通过毛细血管、甚至穿透血脑屏障，躲避机体的生物防御系统，便于生物降解或吸收；纳 米颗粒的较大的比表面积，提供了功能基团或活性分子锚定修饰的位点，可以被加工修饰 成多功能性的纳米颗粒；纳米结构特性（如多孔、中空、多层等），使得纳米颗粒具有较高的 药物载负能力，便于药物的输送及药物缓释控制；纳米颗粒表面可以修饰PEG等分子，可以 通过"渗透-滞留增强效应"选择性的在肿瘤部位选择性的聚集及滞留，增强肿瘤的诊疗效 果。
[0005] 纳米材料介导的肿瘤光热治疗，是通过选择性进入肿瘤细胞内部的纳米颗粒将光 的能量转换为局部热量杀伤癌细胞的一种方法。此种肿瘤治疗手段，可以借助于高效低毒 纳米颗粒在肿瘤部位的选择性聚集，在活体外通过非介入式激光直接照射肿瘤灶，实现肿 瘤的光热杀伤。具有毒副作用小，靶向治疗效果好等特点，其相关的临床前及临床研究试验 方兴未艾。
[0006] 近红外激光具有较强的深层组织穿透能力，加之，金纳米颗粒在近红外区的光吸 收特性以及其自身的低毒性，使金介导的光热治疗方案成为肿瘤光热治疗的理想平台之一
[0007] 自噬是细胞的一种细胞自我降解机制，包括自噬泡的起始，包裹待降解物质，最后 形成的自噬泡与溶酶体融合，降解内含物的完整过程。自噬与人体的重要生理与病理过程 相关
[0008] 调控自噬，可以抑制肿瘤的生长，增强化疗药物、纳米抗癌试剂对癌细胞的杀伤效 果。自噬相关基因 Beeline 1在细胞的正常表达，可以导致肿瘤的发生。在癌症发生的早 期，细胞自噬水平的降低，可以导致癌细胞的持续增殖，这说明自噬是抑制癌症的。诸如银 纳米颗粒，本身可以作为抗癌试剂，抑制银纳米颗粒引起的自噬效应，可以增强其对肿瘤的 杀伤效果，降低纳米制剂的剂量，减少毒副作用。C60，Mn0等纳米颗粒也可以通过调节细胞 自噬效应，增强化疗药物对癌细胞的杀伤，降低化疗药物的使用剂量。
【发明内容】
[0009] 本发明的目的在于通过联合金介导的光热效应及自噬抑制剂，提高金介导的光热 效应对癌细胞的杀伤效果，降低金纳米颗粒及激光的使用剂量。
[0010] 本发明的第一个方面提供一种纳米颗粒和自噬抑制剂用于制备基于光热效应杀 伤肿瘤的药物或试剂盒的用途。
[0011] 在一个优选的实施方案中，所述纳米颗粒选自金纳米颗粒，聚多巴胺纳米颗粒，单 壁碳纳米管，石墨烯或其组合，优选金纳米颗粒，所述金纳米颗粒包括笼形金纳米颗粒，球 形金纳米颗粒，棒状金纳米颗粒，星状金纳米颗粒。
[0012] 在一个优选的实施方案中，所述肿瘤为宫颈癌，乳腺癌或胶质瘤。
[0013] 在一个优选的实施方案中，所述自噬抑制剂选自3-MA, Wortmannin(渥曼青霉 素），自噬相关基因的siRNA、shRNA或其组合。
[0014] 在一个优选的实施方案中，所述自噬相关基因包括Atg5[NCBI Reference S equence:NM_058484. 5], Becline-I[mRNA NCBI Reference Sequence :NM_003766. 3 ； mRNA NCBI Reference Sequence :NM_019584.3],Atg7[mRNA NCBI Reference Sequence:NM_001253717. I ；mRNA NCBI Reference Sequence:NM_001136031. 2]〇
[0015] 本发明的第二个方面提供自噬抑制剂用于制备增强纳米颗粒介导的光热杀伤肿 瘤的药物或试剂盒的用途。
[0016] 在一个优选的实施方案中，所述纳米颗粒选自金纳米颗粒，聚多巴胺纳米颗粒，单 壁碳纳米管，石墨烯或其组合，优选金纳米颗粒，所述金纳米颗粒包括笼形金纳米颗粒，球 形金纳米颗粒，棒状金纳米颗粒，星状金纳米颗粒。
[0017] 在一个优选的实施方案中，所述肿瘤为宫颈癌，乳腺癌或胶质瘤。
[0018] 在一个优选的实施方案中，所述自噬抑制剂选自3-MA，Wortmannin，自噬相关基因 的siRNA、shRNA或其组合。
[0019] 在一个优选的实施方案中，所述自噬相关基因包括Atg5，BeCline-l，Atg7。
[0020] 本发明与现有技术相比具有以下优点：
[0021] 1、自噬抑制剂的引入，可以降低金纳米颗粒的用量
[0022] 2、使用较低剂量的激光即可获得良好的肿瘤细胞杀伤效果，从而降低激光对正常 细胞组织的造成危害的风险。
【专利附图】
【附图说明】
[0023] 图1合成的金纳米颗粒的透射电镜（TEM)结果；
[0024] 图2合成的金纳米笼子的光热转换曲线，Au :金纳米颗粒；PVP:聚乙烯基吡咯烷 酮；
[0025] 图3笼形金纳米颗粒对细胞活力的影响，Con :空白对照，Au :金纳米颗粒；PVP:聚 乙稀基批略烧丽；
[0026] 图4显示金介导的光热效应随金纳米颗粒用量的增加，增强对癌细胞的杀伤效 果，Au :金纳米颗粒；NIR:近红外激光；
[0027] 图5显示增加激光的照射时间可以增加金纳米颗粒杀伤肿瘤细胞的效果Con :空 白对照Au :金纳米颗粒；NIR:近红外激光；
[0028] 图6金纳米颗粒，单独近红外激光，以及近红外激光联合金纳米颗粒处理 GFP-LC3/HeLa细胞对自噬相关蛋白LC3的影响，其中A为荧光显微照片，B为蛋白质印记结 果及相应Image J软件分析结果，Con :空白对照Au :金纳米颗粒；NIR:近红外激光；Wort : 渥曼青霉素；3-MA:3-甲基腺嘌呤；图7在HeLa细胞中，自噬抑制剂Wortmannin可以显著 抑制金吸收近红外激光引起细胞LC3-II过度积累；
[0029] 图8自噬抑制剂3-MA，Wortmannin增强金介导的光热杀伤人宫颈癌细胞HeLa及 小鼠乳腺癌细胞4T1的效果，Con :空白对照Au :金纳米颗粒；NIR:近红外激光，Wort :渥曼 青霉素，3-MA:3-甲基腺嘌呤；
[0030] 图9Atg 5siRNA沉默ATG5的表达后，可以显著增强金介导的光热杀伤人宫颈癌细 胞HeLa的效果。NIR:近红外激光
【具体实施方式】
[0031] 制备金纳米笼子，聚多巴胺纳米颗粒所用的化学试剂均购自于sigma ;基化单 壁碳纳米管Short-SWCNT (-C00H，l-2nm，>90 % )及石墨烯购自于南京先丰纳米；微管 相关轻链 3(LC3)质粒获赠于 N.Mizushima(东京，日本）[Man，N. ;Chen，Y. ;Zheng，F.; Zhou,ff. ；ffen,L. P. , Induction of genuine autophagy by cationic lipids in mammalian cells. Autophagy 2010,6(4)，449-54. ] ;3_methyladenine(3-MA,08592)，海 藻糖（Tre，T9531), Hoechst 33342 (B2261),碘化丙啶（PI, P4864)和氯喹（Chloroquine， CQ，C6628)从sigma公司购买；噻唑蓝（MTT，TB0799)从上海生工生物购买；渥曼青 霉素（Wortmmanin，Wo;rt，sl952)购自于碧云天生物科技；细胞培养相关试剂购自于 Invitrogen ;LC3 抗体（NB100-2220)购自于 Novus (Littleton, CO)，绿色突光蛋白抗体 GFP(sc_101536)购自于 Santa Cruz Biotechnology;憐酸甘油醒脱氢酶（GAPDH)抗体 (MAB374)购自于Millipore ;带有HRP抗鼠的二抗（W4021)及抗兔的二抗（W4011)购自于 Promega (Wisconsin, USA);增强化学发光试剂盒购自于 Biological Industries (Kibbutz Beit Haemek, Israel) ;Geneticin/G418(Gibco, 11811-031)溶解在灭菌的去离子水中，制 备成lOOmg/mL的储液，低温冷冻保存。
[0032] 实施例1 :金纳米笼子的制备及表征
[0033] 银纳米立方体的合成制备：
[0034] IOOmL乙二醇加入到250mL的圆底烧瓶中，随后放入150°C的油浴中预热1小时， 并磁力搅拌。L 2mL，3mM的硫氢化钠（NaHS)乙二醇溶液加入到反应溶液中；2分钟后，10mL， 3mM盐酸（HCl)乙二醇溶液加入到反应溶液中；随后加入25mL，20mg/mL的聚乙烯吡咯烷酮 (PVP，分子量?55000) ;2分钟后，8mL，282mM的三氟醋酸银（CF3C00Ag)。反应进行20分钟 左右，通过紫外可见吸收光谱仪确定反应溶液吸收光谱在440nm左右（对应40nm左右的银 纳米立方体），将反应烧瓶迅速置入冰水浴中终止反应。所得银纳米立方体用丙酮洗一次， 随后用去离子水离心洗涤2次，随后悬浮于15mL的水溶液中待用。
[0035] 金纳米立方笼的制备：
[0036] 将20mL去离子水加入到IOOmL反应烧瓶中，随后加入ImL银纳米立方体悬浮液， 然后将ImM的氯金酸溶液以lmL/min的速率滴加到反应溶液中，待到吸收光谱红移到800nm 时,停止滴加氯金酸。将反应溶液中加入过量氯化钠溶液并过夜，以溶解反应生成的氯化 银，随后离心洗涤3次。
[0037] 如图 1 所不，透射电镜（transmition electron microscopy，TEM)的结果显不合 成的金纳米颗粒为笼形,立方体结构,大小为40-60nm。
[0038] 实施例2 :金纳米笼子的光热转换曲线
[0039] 将 400μ L 的 DMEM，PBS，含有 100μ g/mL 聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinyl Pyrrolidone，PVP)的 400μ L PBS 以及分别含有 0· 5, 1，2,2· 5, 3, 4, 5μ g/mL 的金纳米笼子 的400yL体系的PBS，置于透明圆底玻璃管内，使用MDL-III-808nm-2.5W的激光器（长春 新产业光电技术有限公司）照射管底部，输出功率为Iw,此时激光器未连接稱合光纤。并使 用热电偶实时测定管内液体的温度。如图2所示，结果表明，金纳米颗粒具有较为优越的光 热转换能力。
[0040] 实施例3 :细胞培养及细胞活力实验
[0041] 人宫颈癌细胞系HeLa细胞和小鼠乳腺癌细胞4T1由ATCC购买获得。微管相关 轻链3(1X3)质粒获赠于N. Mizushima(东京，日本）。基于此GFP-LC3质粒构建稳定转 J. ；Li, Y. ；ffen, L. P. , Autophagy-mediated chemosensitization in cancer cells by fullerene C60nanocrystal. Autophagy 2009,5(8),1107-1117.】人宫颈癌细胞系 HeLa 细 胞，小鼠乳腺癌细胞4T1及稳定表达GFP-LC3的HeLa细胞（GFP-LC3/HeLa)培养在温度为 37°〇、0) 2浓度为5%的培养箱中，01^1培养基（含10%的胎牛血清）中含有100皿^8/1^ 的青霉素/链霉素和2. 5 μ g/mL的两性霉素 B。GFP-LC3/HeLa细胞，在使用之前使用G418 进行维持生长一段时间。遵循无菌操作原则，在超净工作台中完成细胞培养，传代，处理等 操作。无菌实验操作过程中所用到的枪头、EP管、玻璃瓶等实验耗材均于121°C，60分钟高 温高压灭菌。
[0042] 细胞培养所用磷酸盐缓冲液（PBS)的配制：准确称取氯化钠（NaCl)8g、磷酸二 氢钾（KH 2PO4)O. 27g、磷酸氢二钠（Na2HPO 4)1. 42g、氯化钾（KCl)O. 2g 加入约 900mL 的 Millipore超纯水搅拌至溶解，浓盐酸将pH调至7. 4,最后定容总体积1L，121°C高压灭菌后 于室温妥善保存。
[0043] HeLa细胞分至96孔中，细胞种植密度为10,000细胞/孔，每孔100 μ L的培养基 体系。待细胞贴壁20-24小时后，使用3. 12, 6. 25, 12. 5, 25, 50, 100, 200 μ g/mL的金纳米颗 粒分别处理细胞24小时。每孔加入10 μ L的MTT溶液（5mg/mL，用pH = 7. 4的PBS配制）， 继续孵育4小时。小心吸去孔内的培养基上清液，每孔加入150 μ L的DMSO溶液，待甲噴结 晶充分溶解后，选择570nm波长，在酶标仪上测定各个培养孔的光吸收值，记录结果并除去 背景吸光度后，绘制细胞的生长曲线，计算细胞活力。
[0044] 如图3所示，笼形金纳米颗粒具有较小的细胞毒性，在100 μ g/mL及以下浓度，对 细胞的活力没有显著影响（细胞活力大于80% )。
[0045] 实施例4 :金纳米颗粒对肿瘤细胞的光热杀伤
[0046] HeLa经胰酶消化，DMEM培养基重悬，种植到24孔细胞培养板内，待细胞贴壁率达 到90 %左右，进彳了后续的实验。
[0047] 近红外激光的剂量及照射时间保持不变，加入不同浓度（0, 25, 50, 75,100 μ g/mL) 的金纳米颗粒，与细胞共孵育6h后，胰酶消化细胞，lOOOrpm，5min离心收集细胞，并将细胞 重悬于500 μ L的DMEM培养基内，转移至48孔板内，进行激光照射处理5min。而后，将细胞 进行适当稀释，分别种植到96孔细胞培养板。16小时后，使用MTT法检测细胞活力的变化
[0048] 图4显示金介导的光热效应能够随着金纳米颗粒的用量的增加，增强对癌细胞的 杀伤效果。细胞活力实验结果显示，当金纳米颗粒的浓度为50 μ g/mL时，能够杀伤约30% 左右的细胞。
[0049] 保持金纳米颗粒的剂量不变，增加激光的照射时间。使用50 μ g/mL金纳米颗粒预 处理细胞6小时后，对细胞分别照射5min，7. 5min，lOmin，检测对癌细胞的杀伤效果。图5 显示，增加激光的照射时间可以增加金纳米颗粒杀伤肿瘤细胞的效果。
[0050] 实施例5 :金纳米颗粒，单独近红外激光，以及近红外激光联合金纳米颗粒在HeLa 及GFP-LC3/HeLa细胞中诱导细胞自噬的发生
[0051] HeLa经胰酶消化，DMEM培养基重悬，种植到24孔细胞培养板内，待细胞贴壁率达 到90%左右，加入不同浓度50 μ g/mL的金纳米颗粒，与细胞共孵育6h后，胰酶消化细胞， lOOOrpm，5min离心收集细胞，并将细胞重悬于500 μ L的DMEM培养基内，转移至48孔板内， 进行激光照射处理5min。而后，将细胞进行适当稀释，种植到24孔细胞培养板内，每孔10 万细胞，继续培养16小时。胰酶消化，收集细胞，进行蛋白质印记实验，检测自噬的发生。
[0052] 图6中GFP_LC3/HeLa是稳定转染并持续表达GFP标签的LC3蛋白的HeLa细胞 系。当自噬发生时，GFP-LC3-I就会被加工成GFP-LC3-II，聚集在自噬泡上，在荧光显微镜 下，我们很容易观测到带有绿色荧光的膜泡样结构（膜泡直径约为300-900nm)。经50yg/ mL的金纳米颗粒，单独近红外激光，以及近红外激光联合金纳米颗粒处理GFP-LC3/HeLa细 胞，荧光显微镜（Olympus 1X71)观察细胞内部GFP点状聚集的变化，如图6A的实验结果显 示，金纳米颗粒与近红外激光共处理可以显著增强细胞内部点状聚集的产生。
[0053] 自噬相关蛋白LC3是自噬的标志物蛋白，当细胞自噬水平较低时，LC3蛋白弥散 的分布在胞质溶胶中。此时的LC3蛋白为LC3蛋白I型。但自噬被诱导时，分布于胞质溶 胶中的LC3蛋白就会被剪切加工成膜结合的LC3-II，分布在自噬泡的膜上。通过western blotting技术分析LC3蛋白I型到II型的转换，我们可以在一定程度上断定自噬的发生。 如图6B的蛋白质印记的结果及Image J软件分析的结果显示，金纳米颗粒与近红外激光共 处理可以显著促进自噬相关蛋白LC3从I型到II型的转换。
[0054] 实施例6 :金介导的光热杀伤肿瘤细胞与自噬抑制剂联合使用
[0055] HeLa经胰酶消化，DMEM培养基重悬，种植到24孔细胞培养板内，待细胞贴壁 率达到85 %左右时，加入或不加自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA)或者渥曼青霉素 (Wortmannin)，预处理Ih后，加入50 μ g/mL金纳米颗粒，继续处理细胞6小时。胰酶消化细 胞，lOOOrpm，5min离心收集细胞，并将细胞重悬于有或无自噬抑制剂的500 μ L DMEM培养 基内，转移至48孔板内，进行激光照射处理5min。而后，使用有或无自噬抑制的DMEM培养 基将细胞进行适当稀释，分别种植到96孔细胞培养板或者24孔细胞培养板内，继续培养16 小时。Hochest3342/PI双染，统计细胞死亡的比例。其中，使用Hochest3342/PI双染检测 光热治疗后的细胞死亡情况的步骤如下：移出细胞培养基，使用10 μ g/mL的h〇cheSt3342 着色细胞核；死亡的细胞，细胞膜通透性改变，可以被10 μ g/mL的碘化丙啶（PI)着色，使用 荧光显微镜（Olympus 1X71)进行拍照，统计视野中，PI阳性细胞及h〇echst33342着色的 细胞，前者与后者的比值乘以100%，即为死亡率。胰酶消化，收集细胞，进行蛋白质印迹实 验，检测3-MA及wortmannin对自噬的抑制作用。
[0056] 如图7所示，在HeLa细胞中，自噬抑制剂Wortmannin可以显著抑制金吸收近红 外激光引起细胞LC3-II过度积累。在GFP-LC3HeLa细胞中，自噬抑制剂3-MA可以抑制 GFP-LC3II的积累，抑制细胞内部游离GFP的释放，抑制细胞自噬的水平。
[0057] 如图8所示，自噬抑制剂3-MA，Wortmannin本身对细胞没有毒性，并且能够通过抑 制细胞自噬，增强金介导的光热杀伤人宫颈癌细胞HeLa及小鼠乳腺癌细胞4T1的效果。
[0058] 实施例7 :金介导的光热杀伤肿瘤细胞与自噬相关基因（Atg5) SiRNA的联合使用
[0059] Atg5 siRNAs
[0060] (四种Atg5siRNA的等质量混合物，其序列分别为：Sense 5'-GGA AUA UCC UGC AGA AGA ATT-3' （SEQ ID No :1)，Anti-sense 5'-UUC UUC UGC AGG AUA UUC CTT-3' （SEQ ID No :2) ;Sense 5'-CAU CUG AGC UAC CCG GAU ATT-3'（SEQ ID No :3)，Anti-sense 5'-UAU CCG GGU AGC UCA GAU GTT-3' (SEQ ID No ：4) ；Sense 5'-GAC AAG AAG ACA UUA GUG ATT-3' （SEQ ID No :5),Anti-sense 5'-UCA CUA AUG UCU UCU UGU CTT-3' （SEQ ID No : 6) ;Sense 5,-CAA UUG GUU UGC UAU UUG ATT-3,（SEQ ID No :7) ,Anti-sense 5,-UCA AAU AGC AAA CCA AUU GTT-3'（SEQ ID No :8))，阴性对照 siRNA 序列为 Sense 5'-UUC UCC GAA CGU GUC ACG UTT-3' （SEQ ID No :9),Antisense 5'-ACG UGA CAC GUU CGG AGA ATT-3' （SEQ ID No:10))由上海吉玛生物合成。将细胞分到24孔板内，使用lipo2000(Invitrogen， 11668-027)转染阴性对照siRNA及Atg5siRNA St)36小时后，加入或者不加入50μ g/mL金纳 米颗粒，继续处理细胞6小时。胰酶消化细胞，lOOOrpm，5min离心收集细胞，并将细胞重悬 于500 μ L DMEM培养基内，转移至48孔板内，进行激光照射处理5min，或者常温放置5min。
[0061] 而后，使用DMEM培养基将细胞进行适当稀释，分别种植到96孔细胞培养板或者24 孔细胞培养板内，继续培养16小时。使用实施例6的细胞死亡检测方法检测处理前后细胞 死亡的情况。实验结果见附图9。金纳米颗粒与近红外激光对细胞并没有细胞毒性，但当两 者联合在一起可以杀伤肿瘤细胞，Atg5siRNAs沉默掉ATG5表达之后，可进一步增强金介导 的光热杀伤人宫颈癌细胞HeLa的效果。
[0062] 本发明所涉及的激光器型号为MDL-III-808-2. 5(长春新产业光电技术有限公 司），耦合芯径400 μ m，长1米，SMA905接口的光纤，对细胞进行激光照射处理时，激光器输 出功率为2. 5W，光纤输出端距离细胞培养板底部5厘米。
【权利要求】
1. 纳米颗粒和自噬抑制剂用于制备基于光热效应杀伤肿瘤的药物或试剂盒的用途。
2. 根据权利要求1所述的用途，所述纳米颗粒选自金纳米颗粒，聚多巴胺纳米颗粒，单 壁碳纳米管，石墨烯或其组合，优选金纳米颗粒，所述金纳米颗粒包括笼形金纳米颗粒，球 形金纳米颗粒，棒状金纳米颗粒，星状金纳米颗粒。
3. 根据权利要求1所述的用途，所述肿瘤为宫颈癌，乳腺癌或胶质瘤。
4. 根据权利要求1所述的用途，所述自噬抑制剂选自3-MA，Wortmannin，自噬相关基因 的siRNA、shRNA或其组合。
5. 根据权利要求4所述的用途，所述自噬相关基因包括Atg5, Becline-1，Atg7。
6. 自噬抑制剂用于制备增强纳米颗粒介导的光热杀伤肿瘤的药物或试剂盒的用途。
7. 根据权利要求6所述的用途，所述纳米颗粒选自金纳米颗粒，聚多巴胺纳米颗粒，单 壁碳纳米管，石墨烯或其组合，优选金纳米颗粒，所述金纳米颗粒包括笼形金纳米颗粒，球 形金纳米颗粒，棒状金纳米颗粒，星状金纳米颗粒。
8. 根据权利要求6所述的用途，所述肿瘤为宫颈癌，乳腺癌或胶质瘤。
9. 根据权利要求6所述的用途，所述自噬抑制剂选自3-MA，Wortmannin，自噬相关基因 的siRNA、shRNA或其组合。
10. 根据权利要求9所述的用途，所述自噬相关基因包括Atg5, Becline-1，Atg7。
【文档编号】A61K47/34GK104353074SQ201410545330
【公开日】2015年2月18日 申请日期:2014年10月15日 优先权日:2014年10月15日
【发明者】温龙平, 魏鹏飞, 张强, 周伟, 张云娇, 梁朝朝, 张力, 石闪闪 申请人:中国科学技术大学