T细胞表位肽p29及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种结核分枝杆菌特异性CD8+T细胞表位肽及其应用。所述表位肽的氨基酸序列为ATFAEIGHK，该表位肽与HLA-A*1101分子亲和力高，能活化CD8+T细胞、诱导其增殖和分泌IFN-γ。本发明表位肽的确定，为结核病疫苗、诊断试剂和治疗药物的研发提供了理论基础和新的解决方案，对结核病的防治具有重大意义。
【专利说明】结核分枝杆菌特异性CD8+T细胞表位肽P29及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于免疫学【技术领域】，特别涉及结核分枝杆菌特异性CD8+T细胞表位肽及 其应用。
【背景技术】
[0002] 结核病是由结核分枝杆菌感染后诱发、全球感染率最高的传染病，病死率仅次于 艾滋病。仅2012年，全球新发结核病患者达860万，死亡130万。结核病疫情的新特点在 于：耐药结核病例出现并呈蔓延之势；结核与艾滋病共感染情况愈演愈烈。针对这两类患 者，目前并无有效的防治措施。中国是世界上结核病负担最重的国家之一，研发适合中国人 群的结核病疫苗和治疗药物已时不我待。
[0003] 结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis,MTB)是胞内寄生菌，对其有效控 制主要依赖于细胞免疫，尤其是T细胞免疫。人体内T细胞主要分为CD4+T(Th)细胞和 CD8+T(CTL)细胞两大亚群，大量研究已经证明，这两种T细胞亚群对于控制结核菌感染都具 有重要作用，其中⑶8+CTL更是清除结核菌的主力军。
[0004]T细胞无法识别完整的结核菌和蛋白抗原，而是识别经过抗原递呈细胞摄取和加 工后释放出的结核表位肽。表位肽是抗原中引起免疫应答的核心部份，也称为抗原决定簇， 它与抗原递呈细胞表面的HLA分子结合形成肽-HLA复合物并被递送和表达在抗原递呈细 胞表面，进而活化T细胞，诱发T细胞免疫反应。CD4+T细胞识别HLAII类分子递呈的表位 肽，而CD8+T细胞识别HLAI类分子递呈的表位肽。T细胞对表位肽的识别及其活化要求表 位肽与抗原递呈细胞表面HLA分子稳定结合，而肽与HLA分子的亲和力是形成肽-HLA复合 物的关键，因此制备诱发T细胞免疫的治疗药物和疫苗，首要步骤是筛选出高亲和力的肽， 进而鉴定出具有免疫活性的表位肽。
[0005] 表位肽可以完全通过人工合成获得，研发周期短；由于剔除了表位肽以外病原体 其他有害成分，安全性良好；还可以将多个表位肽串联使用，加强免疫效果和减少免疫逃 逸。目前已知的结核菌CTL表位肽主要是在欧美人群中鉴定，多为HLA-A*0201限制性， 而对于结核病流行最严重的非洲和东南亚人群，并没有合适的表位肽可使用。在中国， HLA-A*1101是人群中基因频率最高的HLA分子，鉴定HLA-A*1101限制性CTL表位对于研发 适合中国人群的表位肽疫苗具有非常重要的意义。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供结核分枝杆菌特异性CD8+T细胞表位肽。
[0007] 本发明的另一目的在于提供该结核分枝杆菌特异性CD8+T细胞表位肽在制备结核 病疫苗、诊断试剂和治疗药物中的应用。
[0008] 本发明所采取的技术方案是：
[0009] 本发明提供了与HLA-A*1101分子亲和力高，能活化⑶8+T细胞、诱导其增殖和 分泌IFN-y的结核分枝杆菌特异性CD8+T细胞表位肽，所述表位肽的氨基酸序列为： ATFAEIGHK(SEQIDN0.29)WP:Ala-Thr-Phe-Ala-Glu-Ile-Gly-His-Lys)。
[0010] 本发明结合生物信息学预测方法和紫外诱导肽置换实验，利用结核分枝杆菌自 身的抗原筛选出具有抗结核活性的表位肽，高效准确地检测出表位肽ATFAEIGHK(SEQID NO. 29)与HLA-A*1101分子之间的亲和力。这是新的、未被报道过的HLA-A*1101限制性结 核分枝杆菌表位肽，被结核病人CD8+T细胞广泛识别。由于HLA-A*1101基因型是中国人中 最广泛携带的基因型，目前并未发现结核分枝杆菌特异的HLA-A*1101限制性CTL表位肽， 本发明表位肽的确定，为结核病疫苗、诊断试剂和治疗药物的研发提供了理论基础和新的 解决方案，对结核病的防治具有重大意义。
【专利附图】
【附图说明】
[0011] 图1为候选表位肽与HLA-A*1101分子亲和力示意图。
[0012] 图2为22条高亲和力的表位肽诱导结核患者T细胞活化并分泌IFN-Y的示意图。
[0013] 图3为ELISP0T检测P29诱导结核患者T细胞分泌IFN-Y的示意图。
[0014] 图4为P29的质谱分析图。
[0015] 图5为CFSE标记的淋巴细胞增殖实验检测P29诱导结核患者⑶8+T细胞增殖的 结果示意图。
【具体实施方式】
[0016] 本发明根据抗原的一级结构，采用免疫信息学手段，运用CBS数据库中的 NetMHCcons表位预测软件对结核分枝杆菌抗原蛋白的HLA-A*1101限制性CTL表位肽进行 了预测分析，然后采用紫外诱导肽置换实验检验候选肽与HLA-A*1101分子结合的亲和力 和稳定性，筛选获得表位肽，通过体外实验鉴定，CTL表位肽P29可诱导⑶8+T细胞产生强烈 的细胞免疫应答，分泌高水平IFN-Y，并诱导⑶8+T细胞发生显著增殖。
[0017] 下面结合具体实施例进一步阐述本
【发明内容】
。
[0018] 应用生物信息学方法，预测HLA-A*1101限制性表位肽：
[0019] 根据文献报道，选取94个有较强免疫原性的结核分枝杆菌抗原蛋白（如表1所 示），从GeneBank获得各个抗原蛋白的氨基酸序列。
[0020] 表1候选结核分枝杆菌抗原蛋白
[0021]
【权利要求】
1. 结核分枝杆菌特异性CD8+T细胞表位肽，所述表位肽的氨基酸序列为：ATFAEIGHK (SEQ ID NO. 29)。
2. 权利要求1所述的结核分枝杆菌特异性CD8+T细胞表位肽P29在制备结核病诊断试 剂及治疗结核病药物中的应用。
3. 权利要求1所述的结核分枝杆菌特异性CD8+T细胞表位肽P29在制备结核病预防性 疫苗中的应用。
【文档编号】A61K39/04GK104387449SQ201410596674
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年10月29日 优先权日:2014年10月29日
【发明者】马骊, 刘苏东, 罗微 申请人:南方医科大学