一种复合微生物除臭剂及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种复合微生物除臭剂及其制备方法，每毫升该除臭剂包括光合细菌，活菌数为1.3~7.5×108CFU；芽孢杆菌，活菌数为0.9～7.8×108CFU；酵母菌，活菌数为1.02～1.92×108CFU；硝化细菌，活菌数为1～10×108CFU；硫化细菌，活菌数为1~6×108CFU；黑霉菌，活菌数为4.8~13.5×108CFU；黄霉菌，活菌数为4.8～11.7×108CFU。本发明中的菌群获得基本来源于垃圾，并经垃圾渗透液驯化，能作用于垃圾及垃圾产生的渗透液，从来源切断了垃圾中的臭气。通过有益菌群对垃圾中恶臭污染物的分解及降解，既消除了垃圾恶臭，又产生了很多有益代谢产物及酶类。
【专利说明】一种复合微生物除臭剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于环保【技术领域】，具体涉及一种处理城市生活垃圾臭味的微生物菌群及 其制备工艺。
【背景技术】
[0002] 臭气污染是垃圾及填埋场最直观的污染之一，也是最难处理的污染。目前，大部分 垃圾处理场都是将垃圾处理厂建在远离市区的地方，让臭味自然散发。垃圾中臭气来源主 要有：1、垃圾降解直接产生并散播的恶臭气体；2、垃圾渗滤液散发的恶臭等。而针对垃圾 的臭气污染来源，一般采取的措施有：1)填埋前（转运站或在填埋区）喷洒除臭剂，能减少 臭味，并防止蚊虫孳生，并能改善垃圾降解过程。2)填埋过程中，注意压实并及时用粘土覆 盖（每天），可以防止臭气散发。但无论是哪一种处理处置方法，似乎都无法避免"臭气"扰 民这一难题，从垃圾处理环节方面来看，臭气处理工作必不可少。
[0003] 喷洒除臭剂大多使用的是化学药物，使用化学产品可掩盖臭味，却不能改变臭味 的生成或阻止其散发，同时还造成环境的二次污染。垃圾集中处理场中对垃圾的处理，一般 采用垃圾填埋或者垃圾焚烧处理。垃圾填埋，占用土地资源，同时也影响周边环境和水源； 垃圾焚烧，耗费人力和能源，增加二氧化碳排放，有害微粒尘埃也污染环境。这两种方式都 不是生活垃圾的节能减排的好方式。
[0004] 近年来也出现不少利用微生物除臭剂除臭的方式，由于有益菌的筛选、优化、组 配、共生和发酵、工艺上的不足，在抑制有害微生物和除臭功效上不够显著和快速，并没得 到广泛应用。因此，针对生活垃圾的恶臭，抑制有害腐生菌和有害致病菌，需要筛选出一种 环境友好菌群，能高效降解恶臭气体，并且成本低，效率高，适应性广，同时节能环保。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的就是为了解决上述问题，利用微生物制剂除臭技术，筛选高效降解 臭气的环境友好型菌种，研发高效降解恶臭气体、适于工程化应用的复合菌剂，消除生活垃 圾产生的恶臭，给后续垃圾的综合利用提供有益菌群代谢产物，低成本，高效率，适应性广， 同时节能环保。
[0006] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0007] -种复合微生物除臭剂，每毫升该复合微生物除臭剂包括如下菌种：光合细菌， 活菌数为1. 3?7. 5XIO8CFU;芽孢杆菌，活菌数为0. 9?7. 8XIO8CFU;酵母菌，活菌数 为1. 02?I. 92XIO8CFU;硝化细菌，活菌数为1?IOXIO8CFU;硫化细菌，活菌数为1? 6XIO8CFU;黑霉菌，活菌数为4. 8?13. 5XIO8CFU;黄霉菌，活菌数为4. 8?11. 7XIO8CFUo
[0008] 优选的，一种复合微生物除臭剂，每毫升该复合微生物除臭剂包括如下菌种： 光合细菌，活菌数为I. 3XIO8CFU;芽孢杆菌，活菌数为I. 17XIO8CFU;酵母菌，活菌数为 1. 73XIO8CFU;硝化细菌，活菌数为I. 6XIO8CFU;硫化细菌，活菌数为I. 7XIO8CFU;黑霉 菌，活菌数为6. 3XIO8CFU;黄霉菌，活菌数为6. 24X108CFU。
[0009] 该复合微生物除臭剂，是由经从污水，垃圾等中筛选出的多种微生物，再经过垃圾 渗出液驯化、培养后复配而成的。作为多种微生物共存的一种生物体复合制剂，因已通过垃 圾浸出液的驯化，所以能在垃圾上迅速生长繁殖，快速分解臭源有机物，同时依靠相互间共 生增殖及协同作用，代谢出抗氧化物质，形成稳定而复杂的生态系统，抑制有害微生物的生 长繁殖，抑制含硫、氮等恶臭物质产生的臭味，从而达到净化环境、除臭的目的。
[0010] 该复合微生物除臭剂从废水或垃圾中选取，并且经过垃圾浸出液的驯化，在处理 垃圾上有一定的针对性，该混合菌液为自然混合状态，深棕色液体。所述复合微生物除臭剂 的密度为lg/cm3。 toon] 所述复合微生物除臭剂的制备方法，其特征是，包括如下步骤：
[0012] (1)菌种的富集、分离：从污水中富集分离出光合细菌、硝化细菌和硫化细菌，从 垃圾中富集分离出黑霉菌和黄霉菌，从土壤中富集分离出芽孢杆菌；
[0013] (2)菌株的扩大培养：将以上获得的菌株和酵母菌分别进行垃圾渗出液驯化、培 养后，获得种子菌液，其中光合细菌菌液活菌数为IX109CFU/mL，芽孢杆菌菌液活菌数为 9X108CFU/mL，酵母菌菌液活菌数为2X109CFU/mL，硝化细菌菌液活菌数为4X108CFU/mL， 硫化细菌菌液活菌数为5X108CFU/mL，黑霉菌菌液活菌数为9X109CFU/mL，黄霉菌菌液活 菌数为 9XIO9CFUAiL;
[0014] (3)将获得的种子菌液按按体积分数比光合细菌13?15份；芽孢杆菌9?13份； 酵母菌17?24份；硝化细菌10?25份；硫化细菌10?15份；黑霉菌8?15份；黄霉菌 8?13份混合即可得到复合微生物除臭剂。
[0015] 所述光合细菌富集、分离方法的步骤是：从污水中采集泥土于含有光合细菌富集 培养基的无菌三角瓶中，置于光照培养箱中30°c培养，随时观察。当培养液变为红色时，取 红色液体于平板培养基上划线培养，反复挑选出单菌落即为获得的光合细菌菌株。
[0016] 将挑选的光合细菌菌株接种到液体培养基上，该液体培养基按照下述重量百分比 配制：碳酸钠0. 2 %，乙酸钠0. 3 %，酵母膏0. 2 %，磷酸二氢钾0. 05 %，氯化铵0. 1 %，食盐 0. 1 %，六水氯化镁0. 02%，垃圾渗透液10 %，余量为蒸馏水，pH为6?8 ;接种后于28? 35°C、光照条件下培养箱中扩大培养48?72h。该配方生产的活菌数可达IX109CFU/mL。
[0017] 所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌，富集、分离方法为从土壤表层5-l〇Cm下称取肥土 5g放入含有45ml水的三角瓶中，混匀，然后将此瓶用小火加热至悬浊液沸腾，维持15min。 室温后吸取上层液0.Iml加入到含有4. 5ml无菌水的试管中，制成1:100浓度的悬液，然后 吸取悬液滴加到牛肉汤蛋白胨培养基平板上，用涂布棒均匀涂布，并将培养基倒置于37°C 恒温培养1-2天。从分离的平板上挑取单菌落中部分菌体，在牛肉膏蛋白胨培养基上划线 纯化，反复挑选出单菌落即为获得的芽孢杆菌菌株。
[0018] 将挑选的芽孢杆菌菌种接种到液体培养基上，该液体培养基按照下述重量百分比 配制：葡萄糖1 %，蛋白胨1 %，酵母膏0. 5%，食盐0. 5%，垃圾渗透液10%，余量为蒸馏水， pH为6?8 ;接种后于37°C，160r/min的震荡培养箱中扩大培养36?72h。该配方生产的 活菌数可达9X108CFU/mL。
[0019] 直接将市售的酵母菌菌种接种到马铃薯蔗糖培养基上，马铃薯蔗糖培养基用以下 配方配制：200g马铃薯的浸出液，IOg鹿糖，垃圾渗透液IOOmL,蒸馈水900mL，pH自然；接种 后于30?37°C，120r/min的震荡培养箱中扩大培养24?72h。该配方生产的活菌数可达 2X109CFU/mL。
[0020] 所述硝化细菌为亚硝酸细菌，富集、分离方法为，从污水处理厂的活性污泥中采 样，于含有亚硝化细菌富集培养基的无菌三角瓶中，混匀，28°C培养，3-7天后传代培养，经 6次富集培养后，每隔3-5天持续供给6%的硫酸铵溶液2ml。用涂布方法吸取亚硝化细菌 富集营养液于分离培养基上，于28-30°C培养15-20天，反复挑选出单菌落即为获得的亚硝 化细菌。
[0021] 将挑选的硝化细菌菌种接种到培养基上，培养基按照下述重量百分比配制：葡萄 糖 0.5%，（NH4)2SO4 0.2%，NaCl0.2%，FeSO4 0.04%，K2HPO4 0.1%，MgSO4 0.05%，垃圾 渗透液10%，余量为蒸馏水，pH值7. 1?7. 4 ;接种后于25?35°C，150r/min的震荡培养 箱中扩大培养36?96h。该配方生产的活菌数可达4X108CFU/mL。
[0022] 所述硫化细菌富集、分离方法为，污水中活性污泥IOml接种于装有IOOml灭菌后 的自养脱硫细菌培养基中，30°C，150rpm的条件下培养，每三天进行传代，每隔1天向培养 基中补加Na2S，以淘汰不能利用S2^的微生物。15-30天的富集后，将发酵液经梯度稀释后 分别涂布培养基平板上，30°C倒置培养，等平板长出单菌落后，挑取典型单菌落进行重复平 板划线，直至得到单一菌株。
[0023] 将挑选的硫化细菌菌种接种到马铃薯蔗糖培养基上，培养基用Na2HPO4 3. 0g， KH2P042.0g，（NH4)2SO4 2. 0g，Na2CO3I. 0g，MgCl2O.lg，FeCl3 0.03g，CaCl2 0.03g，MnCl2 0. 03g，Na2S2O3 15. 0g，垃圾渗透液IOOmL,蒸馈水900mL配制。其中配制成溶液后Na2S2O3最 后加入，pH自然；接种后于30?37°C，140r/min的震荡培养箱中扩大培养24?72h。该配 方生产的活菌数可达5XIO8CFUAiL。
[0024] 所述黑霉菌富集、分离方法为，将垃圾场中的垃圾于室温放置2-3天，长出霉菌后 用划线法挑选绿色菌株接种到含有马铃薯葡萄糖培养基的平板上，培养3-7天后，挑选出 黑色的菌落重新接种到含有马铃薯葡萄糖培养基的平板上，于28-30°C培养5-7天，重复平 板划线直到挑选出单菌落即为获得的黑霉菌。
[0025] 将挑选的黑霉菌菌种接种到马铃薯葡萄糖培养基上，培养基用200g马铃薯提取 浸出液，IOg葡萄糖，垃圾渗透液IOOmL,蒸馏水900mL配制，pH自然；接种后于30?37°C， 120r/min的震荡培养箱中扩大培养24?72h。该配方生产的活菌数可达9X109CFU/mL。
[0026] 黄霉菌的富集、分离方法为，将垃圾场中的垃圾于室温放置2-3天，长出霉菌后用 划线法挑选黄色菌株接种到含有马铃薯葡萄糖培养基的平板上，培养3-7天后，挑选出黄 色的菌落重新接种到含有马铃薯葡萄糖培养基的平板上，于28-30°C培养5-7天，重复平板 划线直到挑选出单菌落即为获得的黄霉菌。
[0027] 将挑选的黄霉菌菌种接种到马铃薯蔗糖培养基上，培养基用200g马铃薯提取浸 出液，IOg葡萄糖，垃圾渗透液IOOmL,蒸馏水900mL配制，pH自然；接种后于30?37°C， 120r/min的震荡培养箱中扩大培养24?72h。该配方生产的活菌数可达9X109CFU/mL。
[0028] 将上述获得扩大培养后的的种子菌株按体积配比混合即得用于垃圾除臭的复合 微生物除臭剂，所述体积配比为：光合细菌13?15份；芽孢杆菌9?13份；酵母菌17? 24份；硝化细菌10?25份；硫化细菌10?15份；黑霉菌8?15份；黄霉菌8?13份。
[0029] 使用方法：将所述用于垃圾除臭的复合微生物除臭剂混合到生活垃圾中，复合微 生物除臭剂与垃圾的质量比例为〇. 1:1〇〇?50:100。
[0030] 本发明的有益效果是：光合细菌的菌体能以垃圾中的有机酸、氨基酸、氨和糖类等 有机物和硫化氢作为供氧体，通过光合磷酸化获得能量，在光照条件下可直接利用降解有 机质和硫化氢并使自身得以增殖，同时净化了垃圾渗透液。枯草芽孢杆菌可以产生各种有 益的酶类，这些酶对生活垃圾中的有机物有一定分解作用，并能对垃圾渗透液也有一定的 净化。本发明中的酵母菌能分解利用环境中的糖类、硫化氢、氨气等，代谢过程中产生的酸 性物质，可有效抑制有害微生物、致病菌生长并具有抑制有机物急剧腐败分解，并且酵母菌 体可作为其他配合菌的营养物质，有利于复合菌群的快速增殖。硝化细菌为自养需氧型细 菌，以二氧化碳为碳源，通过代谢将氨或铵盐氧化成硝酸盐。而垃圾中臭气成分之一就有 氨。垃圾中的臭气成分还有硫化氢，而硫化细菌就是可以脱硫的菌群。本发明中的黑霉菌 在自然界分布很广，用途广泛，其淀粉酶活性很强，具有极强的脂肪分解功能。黄霉菌能分 泌淀粉酶及氧化酶等，可使淀粉转化为糖而作菌群培养的基质，促使多酚类化合物发生氧 化作用。
[0031] 本发明中的菌群获得基本来源于垃圾，并经垃圾渗透液驯化，能作用于垃圾及垃 圾产生的渗透液，从来源切断了垃圾中的臭气。本菌群来源广泛，获得成本低，但作用巨大。 通过有益菌群对垃圾中恶臭污染物的分解及降解，既消除了垃圾恶臭，又产生了很多有益 代谢产物及酶类，对后续垃圾的处理有一定优势。
【具体实施方式】
[0032] 实施例1
[0033] -种复合微生物除臭剂，每毫升该复合微生物除臭剂包括如下菌种：光合细菌，活 菌数为1.3XIO8CFU;芽孢杆菌，活菌数为1. 17XIO8CFU;酵母菌，活菌数为1.73XIO8CFU; 硝化细菌，活菌数为I. 6XIO8CFU;硫化细菌，活菌数为I. 7XIO8CFU;黑霉菌，活菌数为 6. 3XIO8CFU;黄霉菌，活菌数为6. 24X108CFU。所述复合微生物除臭剂为深棕色液体。 [0034] 上述复合微生物除臭剂的制备方法，其特征是，包括如下步骤：
[0035] 1.菌种的富集、分离
[0036] 光合细菌的富集分离方法：从沟渠的污水处采集5g泥土放入含有45ml水的三角 瓶中，混匀。静止一段时间吸取上清〇.Iml于含有光合细菌富集培养基的无菌三角瓶中，置 于光照培养箱中30°C培养，随时观察。当培养液变为红色时，用接种环取红色液体于平板培 养基上划线培养，反复挑选出单菌落即为获得的光合细菌菌株。
[0037] 枯草芽孢杆菌的富集分离方法：从土壤表层8cm下称取肥土 5g放入含有45ml水 的三角瓶中，混匀，然后将此瓶用小火加热至悬浊液沸腾，维持15min。室温后吸取上层液 0.Iml加入到含有4. 5ml无菌水的试管中，制成1:100浓度的悬液，然后吸取悬液滴加到牛 肉汤蛋白胨培养基平板上，用涂布棒均匀涂布，并将培养基倒置于37°C恒温培养2天。从分 离的平板上挑取单菌落中部分菌体，在牛肉膏蛋白胨培养基上划线纯化，反复挑选出单菌 落即为获得的芽孢杆菌菌株。
[0038] 亚硝酸细菌，其富集分离方法：从污水处理厂的活性污泥中采样，于含有亚硝化细 菌富集培养基的无菌三角瓶中，混匀，28°C培养，5天后传代培养，经6次富集培养后，每隔3 天持续供给6 %的硫酸铵溶液2ml。用涂布方法吸取亚硝化细菌富集营养液于分离培养基 上，于28°C培养15天，反复挑选出单菌落即为获得的亚硝化细菌。
[0039] 硫化细菌富集分离方法为，活性污泥IOml接种于装有IOOml灭菌后的自养脱硫细 菌培养基中，30°C，150rpm的条件下培养，每三天进行传代，每隔1天向培养基中补加Na2S, 以淘汰不能利用S2^的微生物。30天的富集后，将发酵液经梯度稀释后分别涂布培养基平 板上，30°C倒置培养，等平板长出单菌落后，挑取典型单菌落进行重复平板划线，直至得到 单一菌株。
[0040] 黑霉菌富集分离方法为，将垃圾场中的垃圾于室温放置3天，长出霉菌后用划线 法挑选绿色菌株接种到含有马铃薯葡萄糖培养基的平板上，培养7天后，挑选出黑色的菌 落重新接种到含有马铃薯葡萄糖培养基的平板上，于28°C培养7天，重复平板划线直到挑 选出单菌落即为获得的黑霉菌。
[0041] 黄霉菌富集分离方法为，将垃圾场中的垃圾于室温放置2-3天，长出霉菌后用划 线法挑选黄色菌株接种到含有马铃薯葡萄糖培养基的平板上，培养7天后，挑选出黄色的 菌落重新接种到含有马铃薯葡萄糖培养基的平板上，于28-30°C培养7天，重复平板划线直 到挑选出单菌落即为获得的黄霉菌。
[0042] 2.菌株的扩大培养
[0043] 将以上获得的菌株和酵母菌分别单独扩大高密度培养，获得大量的种子菌株。
[0044] 将挑选的光合细菌菌种接种到液体培养基上，培养基用碳酸钠2. 0g，乙酸钠 3. 〇g，酵母膏2. 0g，磷酸二氢钾0. 5g，氯化铵I. 0g，食盐I. 0g，六水氯化镁0. 2g，垃圾渗透 液lOOmL，蒸馏水900mL配制，pH为7 ;接种后于30°C，光照条件下培养箱中扩大培养48? 72h。得到的光合细菌菌液活菌数为lX109CFU/mL。
[0045] 将挑选的芽孢杆菌菌种接种到液体培养基上，培养基用葡糖糖1%，蛋白胨1%， 酵母膏0. 5%，食盐0. 5%，垃圾渗透液10%，剩余用蒸馏水，pH为7 ;接种后于37°C，160r/ min的震荡培养箱中扩大培养36?72h。得到的芽孢杆菌菌液活菌数为9X108CFU/mL。
[0046] 将市售的酵母菌菌种接种到马铃薯蔗糖培养基上，培养基用200g马铃薯的浸出 液，IOg鹿糖，垃圾渗透液IOOmL,蒸馈水900mL配制，pH自然；接种后于37°C，120r/min的 震荡培养箱中扩大培养24?72h。得到的酵母菌菌液活菌数为2X109CFU/mL。
[0047] 将挑选的硝化细菌菌种接种到培养基上，培养基为葡萄糖5.0g，（NH4)2SO4 2.0g， NaC12. 0g，FeSO4 0· 4g，K2HPO4I. 0g，MgSO4 0· 5g，垃圾渗透液lOOmL，蒸馏水 900mL配制，pH 值7.I;接种后于35°C，150r/min的震荡培养箱中扩大培养36?96h。得到的硝化细菌菌 液活菌数为4X108CFU/mL。
[0048] 将挑选的硫化细菌菌种接种到马铃薯蔗糖培养基上，培养基用Na2HPO4 3. 0g， KH2P042.0g，（NH4)2SO4 2. 0g，Na2CO3I. 0g，MgCl2O.lg，FeCl3 0.03g，CaCl2 0.03g，MnCl2 0. 03g，Na2S2O3 15. 0g，垃圾渗透液IOOmL,蒸馈水900mL配制。其中配制成溶液后Na2S2O3最 后加入，pH自然；接种后于37°C，140r/min的震荡培养箱中扩大培养24?72h。得到的硫 化细菌菌液活菌数为5X108CFU/mL。
[0049] 将挑选的黑霉菌菌种接种到马铃薯葡萄糖培养基上，培养基用20%的马铃薯浸出 液，IOg葡萄糖，垃圾渗透液IOOmL,蒸馈水900mL配制，pH自然；接种后于30°C，120r/min 的震荡培养箱中扩大培养24?72h。得到的黑霉菌菌液活菌数为9X109CFU/mL。
[0050] 将挑选的黄霉菌菌种接种到马铃薯蔗糖培养基上，培养基用200的马铃薯浸出 液，IOg葡萄糖，垃圾渗透液IOOmL,蒸馈水900mL配制，pH自然；接种后于30°C，120r/min 的震荡培养箱中扩大培养24?72h。得到的黄霉菌菌液活菌数为9X 109CFU/mL。
[0051] 3.菌种的混合配比
[0052] 将获得的种子菌株按光合细菌13份，芽孢杆菌13份，酵母菌17份，硝化细菌16 份，硫化细菌15份，黑霉菌13份，黄霉菌13份的体积配比进行混合，按复合微生物与垃圾 的质量比例为1:10投放到生活垃圾中，可迅速降解垃圾中的有机物，特别是能从根本上减 少垃圾中的臭味来源。
[0053] 实施例2
[0054] 由经从污水、垃圾中筛选出的多种微生物制成的复合微生物除臭剂，经过垃圾渗 出液驯化、培养后复配而成的。用于处理城市生活垃圾的臭气，有抑制有害微生物生长繁 殖，抑制含硫、氮等恶臭物质产生的臭味，从而达到净化环境、除臭的目的。复合微生物除臭 剂采用实施例1中方案配比而成，取500mL混合喷洒到IOkg垃圾上，并分别检测投加相同 量的水及投加复合微生物除臭剂，同期对照检测投加等量市售除臭剂20h后的垃圾上的氨 气指标、硫化氢指标；重复试验3次，观察结果稳定性。
[0055] 表1氨气、硫化氢指标
[0056]
【权利要求】
1. 一种复合微生物除臭剂，其特征是，每毫升该复合微生物除臭剂包括如下菌种：光 合细菌，活菌数为1. 3~7. 5X 108CFU ;芽孢杆菌，活菌数为0. 9?7. 8X 108CFU ;酵母菌，活 菌数为1. 02?1. 92X 108CFU ;硝化细菌，活菌数为1?10X 108CFU ;硫化细菌，活菌数为 1?6 X 108CFU ;黑霉菌，活菌数为4. 8?13. 5 X 108CFU ;黄霉菌，活菌数为4. 8?11. 7 X 108CFU。
2. 根据权利要求1所述的复合微生物除臭剂，其特征是：每毫升该复合微生物除臭 剂包括如下菌种：光合细菌，活菌数为1. 3X 108CFU ;芽孢杆菌，活菌数为1. 17X 108CFU ; 酵母菌，活菌数为1. 73X 108CFU ;硝化细菌，活菌数为1. 6X 108CFU ;硫化细菌，活菌数为 1. 7X108CFU ;黑霉菌，活菌数为6. 3X108CFU ;黄霉菌，活菌数为6. 24X 108CFU。
3. 根据权利要求1所述的复合微生物除臭剂的制备方法，其特征是，包括如下步骤： (1) 菌种的富集、分离：从污水中富集分离出光合细菌、硝化细菌和硫化细菌，从垃圾中 富集分离出黑霉菌和黄霉菌，从土壤中富集分离出芽孢杆菌； (2) 菌株的扩大培养：将以上获得的菌株和酵母菌分别进行垃圾渗出液驯化、培养 后，获得种子菌液，其中光合细菌菌液活菌数为IX 109CFU /mL，芽孢杆菌菌液活菌数为9 X108CFU /mL，酵母菌菌液活菌数为1 X108CFU /mL，硝化细菌菌液活菌数为4 X108CFU / mL，硫化细菌菌液活菌数为5X108CFU /mL，黑霉菌菌液活菌数为1X109CFU /mL，黄霉菌菌 液活菌数为1 X 109CFU /mL ; (3) 将获得的种子菌液按按体积分数比光合细菌13?15份；芽孢杆菌9?13份； 酵母菌17?24份；硝化细菌10?25份；硫化细菌10?15份；黑霉菌8?15份； 黄霉菌8?13份混合即可得到复合微生物除臭剂。
4. 根据权利要求3所述的复合微生物除臭剂的制备方法，其特征是，所述光合细菌富 集、分离方法的步骤是：从污水处采集泥土于含有光合细菌富集培养基的无菌三角瓶中，置 于光照培养箱中30°C培养，随时观察；当培养液变为红色时，取红色液体于平板培养基上 划线培养，反复挑选出单菌落即为获得的光合细菌菌株； 所述光合细菌扩大培养的步骤是：将挑选的光合细菌菌株接种到液体培养基上，该液 体培养基按照下述重量百分比配制：碳酸钠0. 2%，乙酸钠0. 3%，酵母膏0. 2%，磷酸二氢钾 0. 05%，氯化铵0. 1%，食盐0. 1%，六水氯化镁0. 02%，垃圾渗透液10%，余量为蒸馏水，pH为 6?8 ;，接种后于28?35°C，光照条件下培养箱中扩大培养48?72h，该配方生产的活菌 数可达 1X109CFU /mL。
5. 根据权利要求3所述的复合微生物除臭剂的制备方法，其特征是，所述芽孢杆菌为 枯草芽孢杆菌，富集、分离方法为从土壤表层5-10cm下称取肥土 5g放入含有45ml水的三 角瓶中，混匀，然后将此瓶用小火加热至悬浊液沸腾，维持15min ;室温后吸取上层液0. lml 加入到含有4. 5ml无菌水的试管中，制成1:100浓度的悬液，然后吸取悬液滴加到牛肉汤蛋 白胨培养基平板上，用涂布棒均匀涂布，并将培养基倒置于37°C恒温培养1-2天；从分离的 平板上挑取单菌落中部分菌体，在牛肉膏蛋白胨培养基上划线纯化，反复挑选出单菌落即 为获得的芽孢杆菌菌株； 所述芽孢杆菌扩大培养的步骤是：将挑选的芽孢杆菌菌种接种到液体培养基上，该液 体培养基按照下述重量百分比配制：葡萄糖1%，蛋白胨1%，酵母膏0. 5%，食盐0. 5%，垃圾渗 透液10%，余量为蒸馏水，pH为6?8 ;，接种后于37°C，160r/min的震荡培养箱中扩大培 养36?72h，该配方生产的活菌数可达9 X 108CFU /mL。
6. 根据权利要求3所述的复合微生物除臭剂的制备方法，其特征是，直接将市售的酵 母菌菌种接种到马铃薯蔗糖培养基上，马铃薯蔗糖培养基用以下配方配制：200g马铃薯的 浸出液，l〇g蔗糖，垃圾渗透液l〇〇mL，蒸馏水900mL ;接种后于30?37°C，120r/min的震荡 培养箱中扩大培养24?72h，该配方生产的活菌数可达1 X 108CFU /mL。
7. 根据权利要求3所述的复合微生物除臭剂的制备方法，其特征是，所述硝化细菌 为亚硝酸细菌，富集、分离方法为，从污水中的活性污泥中采样，于含有亚硝化细菌富集培 养基的无菌三角瓶中，混匀，28°C培养，3-7天后传代培养，经6次富集培养后，每隔3-5天 持续供给6%的硫酸铵溶液2ml，用涂布方法吸取亚硝化细菌富集营养液于分离培养基上， 28-30°C培养15-20天，反复挑选出单菌落即为获得的亚硝化细菌； 所述硝化细菌扩大培养的步骤是：将挑选的硝化细菌菌种接种到培养基上，培养基按 照下述重量百分比配制：葡萄糖 〇? 5%，（NH4)2S04 0? 2%，NaCl 0? 2%，FeS04 0? 04%，K2HP04 0. l%，MgS040 . 05%，垃圾渗透液10%，余量为蒸馏水，pH值7. 1?7. 4 ;接种后于25?35°C， 150r/min的震荡培养箱中扩大培养36?96h，该配方生产的活菌数可达4 X 108CFU /mL。
8. 根据权利要求3所述的复合微生物除臭剂的制备方法，其特征是，所述硫化细菌富 集、分离方法为，污水处理厂活性污泥l〇ml接种于装有100ml灭菌后的自养脱硫细菌培 养基中，30°C，150rpm的条件下培养，每三天进行传代，每隔1天向培养基中补加Na2S，以 淘汰不能利用S2_的微生物，15-30天的富集后，将发酵液经梯度稀释后分别涂布培养基平 板上，30°C倒置培养，等平板长出单菌落后，挑取典型单菌落进行重复平板划线，直至得到 单一菌株； 所述硫化细菌扩大培养的步骤是：将挑选的硫化细菌菌种接种到马铃薯蔗糖培养基 上，培养基用 Na2HP04 3. 0 g，KH2P04 2. 0g，（NH4) 2S04 2. 0g，Na2C03 1. 0g，MgCl2 0? lg，FeCl3 0. 03g，CaCl2 0. 03g，MnCl2 0. 03g，Na2S203 15. 0g，垃圾渗透液 100mL，蒸馏水 900mL 配制；其 中配制成溶液后Na2S203最后加入；接种后于30?37 C，140r/min的震汤培养箱中扩大培 养24?72h，该配方生产的活菌数可达5X108CFU /mL。
9. 根据权利要求3所述的复合微生物除臭剂的制备方法，其特征是，所述黑霉菌富集、 分离方法为，将垃圾场中的垃圾于室温放置2-3天，长出霉菌后用划线法挑选绿色菌株接 种到含有马铃薯葡萄糖培养基的平板上，培养3-7天后，挑选出黑色的菌落重新接种到含 有马铃薯葡萄糖培养基的平板上，于28-30°C培养5-7天，重复平板划线直到挑选出单菌落 即为获得的黑霉菌； 所述黑霉菌扩大培养的步骤是：将挑选的黑霉菌菌种接种到马铃薯葡萄糖培养基上， 培养基用200g的马铃薯提取其浸出液，10g葡萄糖，垃圾渗透液100mL，蒸馏水900mL配制； 接种量为5%?10%，接种后于30?37°C，120r/min的震荡培养箱中扩大培养24?72h，该 配方生产的活菌数可达1 X109CFU/mL。
10. 根据权利要求3所述的复合微生物除臭剂的制备方法，其特征是，所述黄霉菌的 富集、分离方法为，将垃圾场中的垃圾于室温放置2-3天，长出霉菌后用划线法挑选黄色菌 株接种到含有马铃薯葡萄糖培养基的平板上，培养3-7天后，挑选出黄色的菌落重新接种 到含有马铃薯葡萄糖培养基的平板上，于28-30°C培养5-7天，重复平板划线直到挑选出单 菌落即为获得的黄霉菌； 所述黄霉菌扩大培养的步骤是：将挑选的黄霉菌菌种接种到马铃薯蔗糖培养基上，培 养基用200g的马铃薯提取其浸出液，lOg葡萄糖，垃圾渗透液lOOmL，蒸馏水900mL配制；接 种量为5%?10%，接种后于30?37°C，120r/min的震荡培养箱中扩大培养24?72h，该配 方生产的活菌数可达1 X109CFU/mL。
【文档编号】A61L101/52GK104399098SQ201410623509
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年11月6日 优先权日:2014年11月6日
【发明者】安良梅 申请人:临沂清宇环境资源工程设备有限公司