一种治疗骨关节病的药物组合物的制备方法
【专利摘要】本发明属于中药制剂领域，具体涉及一种用于治疗骨关节病的药物组合物的制备方法。本发明所述制备方法：以狗脊、淫羊藿、独活、骨碎补、续断、桑寄生、鸡血藤、熟地黄、木香、以及乳香挥发油、没药挥发油和补骨脂炮制品入药进行制备。所述方法制备得到的药物组合物不仅有效治疗肝肾不足、气滞血瘀、脉络痹阻所致的骨性关节炎和腰肌劳损，并且有效减少了原产品的肝毒性副作用，具有更好的临床治疗效果。
【专利说明】一种治疗骨关节病的药物组合物的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药制剂领域，具体涉及一种用于治疗骨关节病的药物组合物的制备 方法。
【背景技术】
[0002] 骨性关节炎（osteoarthritis, 0A)是一种常见的慢性关节疾病，其主要病变是关 节软骨的退行性变和继发性骨质增生。退行性骨关节病是指人体出现的一系列退行性病 变，如关节疼痛、僵硬及活动受限等，是一种综合性疾病。其在50岁以上的人群中，发病率 仅次于心脏病，在65岁以上人群中的发病率高达60-90%，特别是给中老年人的生活带来 了极大的痛苦及不便。
[0003] 腰肌劳损也是腰疼病中最常见的一种疼痛，常被用作没有器质性改变的慢性腰背 疼痛的总称。腰肌劳损是由很多原因引起的，其疼痛长期反复发作，腰部酸痛或胀痛。临床 表现为，活动过度、弯腰过久则疼痛加重，直腰困难，阴冷、潮湿的天气会加重病症。
[0004] 对于上述骨性关节炎及腰肌劳损症状，中国专利CN1931277A公开了一种治疗骨 关节病的药物组合物。所述药物组合物由狗脊、淫羊藿、独活、骨碎补、续断、补骨脂、桑寄 生、鸡血藤、熟地黄、木香、乳香、没药十二味中药组成，具有补益肝肾，养血活血，舒筋活络， 理气止痛等功能，主要用于肝肾不足，血瘀气滞，经络痹阻所致的骨性关节炎、腰肌劳损等 症。且动物及临床试验显示，该药物对骨性关节炎、腰肌劳损具有确切的疗效，并获得广大 患者的青睐。
[0005] 然而，上述药物在临床使用过程中发现存在一定的肝损伤，为此，在保证药效的前 提下，通过工艺改进对其进行降低肝损伤研究是迫切需要解决的问题。
【发明内容】
[0006] 为此，本发明所要解决的技术问题在于现有技术中治疗骨关节病的药物存在一定 的肝损伤不良反应的问题，进而开发一种肝毒性损伤较低的、可有效治疗骨关节病的药物 组合物的制备方法。
[0007] 为解决上述技术问题，本发明所述的治疗骨关节病的药物组合物的制备方法，包 括如下步骤：
[0008] (1)取乳香154-520重量份、没药154-520重量份混合，加水进行水蒸气蒸馏提取， 收集挥发油，加入常规辅料制成挥发油包合物，备用；
[0009] (2)取补骨脂154-520重量份，加水提取，弃去水提液后收集药渣，得到补骨脂炮 制品，备用；
[0010] (3)取狗脊290-864重量份、淫羊藿154-520重量份、独活154-520重量份、骨碎补 224-692重量份、续断290-864重量份、桑寄生290-864重量份、鸡血藤154-520重量份、熟 地黄692-2076重量份、木香154-520重量份，与所述备用的补骨脂炮制品混合、粉碎，添加 所述备用的挥发油包合物和常规辅料，按照常规工艺制成临床可接受的口服制剂。
[0011] 进一步的,所述的药物组合物的制备方法,包括如下步骤：
[0012] (1)取乳香346. 1重量份、没药346. 1重量份混合，加水进行水蒸气蒸馏提取，收集 挥发油，加入常规辅料制成挥发油包合物，备用；
[0013] (2)取补骨脂346. 1重量份，加水提取，弃去水提液后收集药渣，得到补骨脂炮制 品》备用；
[0014] (3)取狗脊576. 8重量份、淫羊藿346. 1重量份、独活346. 1重量份、骨碎补462. 0 重量份、续断576. 8重量份、桑寄生576. 8重量份、鸡血藤346. 1重量份、熟地黄1384. 2重 量份、木香346. 1重量份，与所述备用的补骨脂炮制品混合、粉碎，添加所述备用的挥发油 包合物和常规辅料，按照常规工艺制成临床可接受的口服制剂。
[0015] 优选的，所述的药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
[0016] (1)按照选定的重量份取所述乳香和没药混合，加8-12倍量水进行水蒸气蒸馏提 取8-15小时，收集挥发油，加入常规辅料制成挥发油包合物，备用；
[0017] (2)按照选定的重量份取所述补骨脂，加6-10倍量水提取1-3次，每次0. 5-2小 时，弃去水提液后收集药渣，干燥即得补骨脂炮制品，备用；
[0018] (3)按照选定的重量份取狗脊、淫羊藿、独活、骨碎补、续断、桑寄生、鸡血藤、熟地 黄、木香，与所述备用的补骨脂炮制品混合、粉碎，添加所述备用的挥发油包合物和常规辅 料，按照常规工艺制成临床可接受的口服制剂。
[0019] 更优的，所述的药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
[0020] (1)按照选定的重量份取所述乳香和没药混合，加10倍量水进行水蒸气蒸馏提取 12小时，收集挥发油，加入常规辅料制成挥发油包合物，备用；
[0021] (2)按照选定的重量份取所述补骨脂，加8倍量水提取2次，每次1小时，弃去水提 液后收集药渣，干燥即得补骨脂炮制品，备用；
[0022] (3)按照选定的重量份取狗脊、淫羊藿、独活、骨碎补、续断、桑寄生、鸡血藤、熟地 黄、木香，与所述备用的补骨脂炮制品混合、粉碎，添加所述备用的挥发油包合物和常规辅 料，按照常规工艺制成临床可接受的口服制剂。
[0023] 所述步骤（1)中，制备所述挥发油包合物的常规辅料包括环糊精、水和乙醇。
[0024] 所述步骤⑴中，所述挥发油、β_环糊精、水和乙醇的质量比为I :8-12 :16-24 : 1-2。
[0025] 所述挥发油、环糊精、水和乙醇的质量比为1 :10 :20 :1。
[0026] 所述乳香和/或没药为醋炙。
[0027] 本发明还公开了由所述制备方法制备得到的药物组合物，以及由上述药物组合物 添加常规辅料，按照常规工艺制成的临床可接受的口服制剂。
[0028] 本发明所述制备方法在现有产品的基础上进行改进，所述治疗骨关节病的药物组 合物由补骨脂、骨碎补、续断、淫羊藿、独活、木香、鸡血藤和狗脊等药材组成，主要用于肝肾 不足、气滞血瘀、脉络痹阻所致的骨性关节炎和腰肌劳损等症。本发明所述制备药物组合物 的方法以乳香和没药的挥发油、以及补骨脂炮制品入药，在保持原有产品药效的基础上，进 一步大大降低了原产品的肝毒性副作用，使得产品具有更好的药用价值及市场前景。
[0029] 实验例
[0030] 实验例1药效学实验
[0031] 1 材料
[0032] I. 1 动物
[0033] Hartley豚鼠，普通级，SD大鼠、KM小鼠，SPF级，购自北京华阜康生物科技股份有 限公司，合格证号：SCXK(京）2009-0004 ;饲养于天津中医药大学实验动物中心，保持动物 房安静，通风，干燥，室温18?25°C，湿度40%?70%，自由摄食、饮水。
[0034] 1. 2受试药
[0035] 实施例1所制备新工艺丸剂；
[0036] 壮骨关节丸，华润三九医药股份有限公司。
[0037] 实验给药剂量参考壮骨关节丸的临床人用剂量：12g/d，实验中的各给药剂量都按 照不同种属动物折合成相应的给药剂量。
[0038] 1. 3 试剂
[0039] 盐酸氨基葡萄糖胶囊（浙江诚意药业有限公司）；
[0040] 木瓜蛋白酶，泊洛沙姆P407 (Sigma公司）；
[0041] 0.5%伊红染色液，苏木素染色液（武藤化学株式会社）；
[0042] 基质金属蛋白酶-I(MMP-I)、基质金属蛋白酶-1抑制剂（HMP-I)Elisa试剂盒 (Cusabio) ;--ΜΡ-1 和 MMP-3ELISA 试剂盒（武汉优尔生公司）；UNIQ-10column Trizol 总 RNA提取试剂盒（上海生工生物工程股份有限公司）；mProm II Reverse Transcription System 逆转录试剂盒（Promega) ;FastStart Universal CYBR Green 试剂盒（Roche) ;BCA 蛋白检测试剂盒（Beyotime);
[0043] 碱性磷酸酶（AKP)，南京建成生物工程研究所；
[0044] 苯扎溴铵溶液，江西京东药业有限公司；
[0045] 注射用青霉素钠，中诺药业（石家庄）有限公司；
[0046] 冰醋酸，天津市化学试剂一厂；
[0047] 甲醛，天津市风船化学试剂科技有限公司；
[0048] 二甲苯，天津市津被精细化工有限公司。
[0049] 1. 4 仪器
[0050] JJ3000电子天平、JJ2000精密电子天平（常熟双杰测试仪器厂）；
[0051] YLS-Q4耳肿打孔器（济南益延科技发展有限公司）；
[0052] HSS-I (B)恒温浴槽（成都仪器厂）；
[0053] MEK-6318K型血细胞分析仪（日本光电工业株式会社）；
[0054] 核酸蛋白分析仪-DU800，Allegra 64R High-Speed Centrifuge (Beckman Coulter) ;Real_time RT-PCR System, Prism7500(Applied Biosystem) ;PCR_C1000 型 PCR 仪，ClOOOTouch Thermal Cycler(Bio-Rad) ;FlexStation3 多功能酶标仪（Molecular Devices) ;M0DEL 1012型杂交箱（SHEL LAB) ;ASP300S全自动封闭脱水机，RM2135切片机 (Leica) 生物组织包埋机（天津航空机电公司）；照相显微镜（OLYMPUS);超声破碎 仪（UIBRA) ;MEK-7222K全自动血细胞分析仪（日本光电工业株式公社）；
[0055] IKA/T18匀浆机（IKA) ;KJ-201A型振荡器（江苏康健医疗用品有限公司）；
[0056] QL-901型涡旋混合器（海门市其林贝尔仪器制造有限公司）；
[0057] MilliQ 纯水系统（Millipore 公司）。
[0058] 2 方法
[0059] 2· 1骨关节炎治疗作用研究
[0060] 2. I. 1对hareley豚鼠自发性骨关节炎的治疗作用
[0061] 取hartley豚鼠，雌性，随机分为模型组（对照组），壮骨关节丸组（0. 96g/kg)及 本发明组合物高剂量（I. 92g/kg)、中剂量（0. 96g/kg)、低剂量（0. 48g/kg) 5个剂量组，每组 10只。待5月龄豚鼠自发骨性关节炎模型形成后，开始给药，模型组给予相应体积蒸馏水， 连续给药4周。每天观察动物一般状态，每周一称动物体重及食量，末次给药后腹主动脉取 血，检测血清中MMP-I、--ΜΡ-1的含量。动物处死后切取胫骨到股骨之间的关节软骨进行组 织病理学检查。
[0062] 2. 1. 2对木瓜蛋白酶诱导的大鼠骨关节炎慢性期的治疗
[0063] 选健康雄性SD大鼠，按0. 3g/kg体重腹腔注射10 %的水合氯醛麻醉，以35 %泊洛 沙姆载药体加载4%木瓜蛋白酶制成温敏型原位凝胶控释剂（?册.7)，按照0.051^(1.6扔/ 关节剂量，双侧膝关节注射，将造模动物膝关节及以下肢体置于特制的保温箱中，50°C环境 下保温作用2小时，即可造成软骨的损伤。随机抽取3/10只大鼠进行病理组织学检查，复 核模型的可靠性及成功率。
[0064] 选择造模成功的骨关节炎模型大鼠40只，随机分为模型组、壮骨关节丸组、本发 明组合物2. 20g/kg、I. 10g/kg和0. 55g/kg剂量组，每组8只。另选健康雄性SD大鼠8只， 作为对照组。壮骨关节丸和本发明组合物按照设定剂量灌胃给药，连续治疗4周，对照组和 模型组灌胃等体积蒸馏水。
[0065] 治疗结束后，按0. 3mL/100g体重腹腔注射10%的水合氯醛进行麻醉，腹主动脉取 血。打开左膝关节腔，用ImL生理盐水反复冲洗3次，收集关节液，3000r/min离心10分钟， 取上清液，_20°C保存备用。用小刀刮取大鼠股骨关节面和胫骨关节面的表面软骨，称重， 放入400 μ I Trizol中，-80°C存放备用，采用实时定量RT-PCR法测定大鼠关节软骨iNOS、 Aggrecan和Collegan IImRNA表达。取完整右膝关节10%福尔马林固定。用ELISA法测 定关节液MMP-3和TIMP-I的含量，引物设计见表1。
[0066] 常规Trizol法提取总RNA，根据0D260/0D280的值估计核酸的纯度。采用 Real-time RT-PCR 法测定大鼠关节软骨 Aggrecan 和Collegan- II mRNA 表达。取 2_AACT 值进行数据统计。
[0067] 表 I Real-time RT-PCR 引物序列
[0068]
【权利要求】
1. 一种治疗骨关节病的药物组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： (1) 取乳香154-520重量份、没药154-520重量份混合，加水进行水蒸气蒸馏提取，收集 挥发油，加入常规辅料制成挥发油包合物，备用； (2) 取补骨脂154-520重量份，加水提取，弃去水提液后收集药渣，得到补骨脂炮制品， 备用； (3) 取狗脊290-864重量份、淫羊藿154-520重量份、独活154-520重量份、骨碎补 224-692重量份、续断290-864重量份、桑寄生290-864重量份、鸡血藤154-520重量份、熟 地黄692-2076重量份、木香154-520重量份，与所述备用的补骨脂炮制品混合、粉碎，添加 所述备用的挥发油包合物和常规辅料，按照常规工艺制成临床可接受的口服制剂。
2. 根据权利要求1所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： (1) 取乳香346. 1重量份、没药346. 1重量份混合，加水进行水蒸气蒸馏提取，收集挥发 油，加入常规辅料制成挥发油包合物，备用； (2) 取补骨脂346. 1重量份，加水提取，弃去水提液后收集药渣，得到补骨脂炮制品，备 用； (3) 取狗脊576. 8重量份、淫羊藿346. 1重量份、独活346. 1重量份、骨碎补462. 0重量 份、续断576. 8重量份、桑寄生576. 8重量份、鸡血藤346. 1重量份、熟地黄1384. 2重量份、 木香346. 1重量份，与所述备用的补骨脂炮制品混合、粉碎，添加所述备用的挥发油包合物 和常规辅料，按照常规工艺制成临床可接受的口服制剂。
3. 根据权利要求1或2所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： (1) 按照选定的重量份取所述乳香和没药混合，加8-12倍量水进行水蒸气蒸馏提取 8-15小时，收集挥发油，加入常规辅料制成挥发油包合物，备用； (2) 按照选定的重量份取所述补骨脂，加6-10倍量水提取1-3次，每次0. 5-2小时，弃 去水提液后收集药渣，干燥即得补骨脂炮制品，备用； (3) 按照选定的重量份取狗脊、淫羊藿、独活、骨碎补、续断、桑寄生、鸡血藤、熟地黄、木 香，与所述备用的补骨脂炮制品混合、粉碎，添加所述备用的挥发油包合物和常规辅料，按 照常规工艺制成临床可接受的口服制剂。
4. 根据权利要求3所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： (1) 按照选定的重量份取所述乳香和没药混合，加10倍量水进行水蒸气蒸馏提取12小 时，收集挥发油，加入常规辅料制成挥发油包合物，备用； (2) 按照选定的重量份取所述补骨脂，加8倍量水提取2次，每次1小时，弃去水提液后 收集药渣，干燥即得补骨脂炮制品，备用； (3) 按照选定的重量份取狗脊、淫羊藿、独活、骨碎补、续断、桑寄生、鸡血藤、熟地黄、木 香，与所述备用的补骨脂炮制品混合、粉碎，添加所述备用的挥发油包合物和常规辅料，按 照常规工艺制成临床可接受的口服制剂。
5. 根据权利要求1-4任一所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤（1) 中，制备所述挥发油包合物的常规辅料包括3 -环糊精、水和乙醇。
6. 根据权利要求5所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤（1)中，所述 挥发油、P _环糊精、水和乙醇的质量比为1 :8-12 :16_24 :1_2。
7. 根据权利要求5或6所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤（1)中， 所述挥发油、￠-环糊精、水和乙醇的质量比为1 :10 :20 :1。
8. 根据权利要求1-7任一所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，所述乳香和/或 没药为醋炙。
9. 由权利要求1-8任一所述制备方法制备得到的药物组合物。
10. 由权利要求9所述药物组合物添加常规辅料，按照常规工艺制成的临床可接受的 口服制剂。
【文档编号】A61P19/02GK104352633SQ201410649898
【公开日】2015年2月18日 申请日期:2014年11月14日 优先权日:2014年11月14日
【发明者】马鹏岗, 代志, 刘志刚, 徐冰, 王勇, 王跃飞, 李琼娅, 赵枫林, 王静, 周昆, 李霞 申请人:华润三九医药股份有限公司