一种狂犬疫苗稳定剂及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种狂犬疫苗稳定剂，由以下组分组成：牛血清白蛋白1～1.2％(W/V)；氨基酸类组合物2.1～2.7％(W/V)；山梨糖醇或甘露醇0.2～0.8％(W/V)；缓冲液20-50mmol/L，pH7.0-7.2；原人参三醇1.2～1.5％(W/V)水；该稳定剂的应用方法为：(1)BSR细胞传代、培养和扩大；(2)病毒接种、培养和收获；(3)病毒灭活；(4)配苗：病毒灭活检验合格后，加入狂犬疫苗稳定剂。该稳定剂不含有动物血清，不会对免疫的动物机体产生不良影响，且能够保证狂犬疫苗在低温、常温、高温下的稳定性。
【专利说明】一种狂犬疫苗稳定剂及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物制药领域，特别是一种狂犬疫苗稳定剂及其应用。
【背景技术】
[0002] 由于狂犬病是致命性疾病，发病后的死亡率几乎100%，至目前为止，世界上仍未 有一种有效的治疗方法。所以，凡被狂犬或不清楚是否带毒的动物咬伤后，都应立即注射 狂犬疫苗。孕妇被咬伤，也应及时全程注射狂犬疫苗。我国现在制造的狂犬疫苗系用狂犬 病毒固定毒接种于原代地鼠肾细胞，培养后，收获毒液，经浓缩、纯化、精制并加氢氧化铝佐 齐IJ，经全面检定合格后即为预防狂犬病的疫苗。目前狂犬病灭活疫苗生产中，通常需加入一 定比例的动物血清以延长疫苗的保存期，动物血清因成分复杂，注射动物后经常会出现过 敏反应或其他应激反应，甚至发生动物死亡的情况，而且现有的各种稳定剂最多只能保证 狂犬疫苗在低温下的稳定性，而在常温、高温环境下无法起到稳定效果，不利于狂犬疫苗在 一些低温贮存条件及设备不完善的经济落后国家和地区推广应用。
【发明内容】
[0003] 针对上述现有技术中存在的不足，本发明提供了一种狂犬疫苗稳定剂，该稳定剂 不含有动物血清，不会对免疫的动物机体产生不良影响，且能够保证狂犬疫苗在低温、常 温、高温下的稳定性。
[0004] 本发明提供的一种狂犬疫苗稳定剂，由以下组分组成：
[0005] 牛血清白蛋白1?1. 2% (W/V);
[0006] 氨基酸类组合物2. 1?2. 7 % (W/V);
[0007] 山梨糖醇或甘露醇0? 2?0? 8% (W/V);
[0008] 缓冲液 20-50mmol/L，pH7. 0-7. 2 ;
[0009] 原人参三醇1. 2?1. 5 % (W/V)
[0010] 余量用水补齐；
[0011] 优选地，由以下组分组成：
[0012] 牛血清白蛋白1% (W/V);
[0013] 氨基酸类组合物2. 4% (W/V);
[0014] 山梨糖醇或甘露醇0.6% (W/V);
[0015] 缓冲液 30mmol/L，pH7. 0 ；
[0016] 原人参三醇1. 4% (W/V)
[0017] 余量用水补齐；
[0018] 优选地，所述氨基酸类组合物由以下组分组成：L-赖氨酸，4-羟基异亮氨酸，L-脯 氨酸叔丁酯盐酸盐，三者的重量比为：L-赖氨酸：4_羟基异亮氨酸：L-脯氨酸叔丁酯盐酸 盐=(1 ?1. 5) : (0? 8 ?1. 2) : (0? 3 ?0? 6)。
[0019] 更优选地，所述L-赖氨酸，4-羟基异亮氨酸，L-脯氨酸叔丁酯盐酸盐三者的重量 比为：L-赖氨酸：4_羟基异亮氨酸：L-脯氨酸叔丁酯盐酸盐=1. 2 :0. 9 :0. 5。
[0020] 优选地，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液。
[0021] 优选地，所述水为注射用水。
[0022] 上述狂犬疫苗稳定剂的应用，包括如下步骤：
[0023] (l)BSR细胞传代、培养和扩大：将BSR细胞复苏后，按常规生产工艺传代和放大培 养，以达到生产规模后用于接种狂犬病毒；
[0024] (2)病毒接种、培养和收获：将狂犬病毒按适当的比例接种到BSR细胞上复制增 殖，待病毒滴度达到最佳水平时收获病毒细胞培养液；
[0025] (3)病毒灭活：收获的狂犬病毒经毒价检测合格后，用适当的灭活剂进行灭活；
[0026] (4)配苗：病毒灭活检验合格后，加入狂犬疫苗稳定剂和氢氧化铝佐剂，氢氧化铝 佐剂终浓度400- 700ug/ml。
[0027] 上述（1)?（3)步骤可采用本领域中的常规技术手段，本领域技术人员有能力根 据生产规模、所需产品质量选择合适的工艺参数和相关制剂，故本发明中不再赘述。
[0028] 步骤⑷中，按照每100ml狂犬疫苗稳定剂中含有250?50〇n效价狂犬疫苗的 配比培苗。
[0029] 本发明提供的一种狂犬疫苗稳定剂，不含有动物血清，不会对免疫的动物机体产 生不良影响，配伍和配比科学合理，相互协同地保证狂犬疫苗在低温、常温、高温下的稳定 性。
【具体实施方式】
[0030] 为了使本【技术领域】的人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合【具体实施方式】 对本发明作进一步的详细说明。
[0031] 实施例1
[0032] 按以下组分和配比配置狂犬疫苗稳定剂：
[0033] 牛血清白蛋白1. 1% (W/V);
[0034] 氨基酸类组合物2. 1 % (W/V);
[0035] 甘露醇 0.8% (W/V);
[0036] 磷酸盐缓冲液 20mmol/L，pH7. 2 ;
[0037] 原人参三醇1. 5% (W/V)
[0038] 其中氨基酸类组合物按如下重量比的组分配置：L-赖氨酸：4_羟基异亮氨酸： L-脯氨酸叔丁酯盐酸盐=1 :1. 2 :0. 6。
[0039] 按溶液总体积100ml计算并准确称量上述各组分保持常温混合均匀，用注射用水 补足至100ml定容，置于灭菌容器中。
[0040] 实施例2
[0041] 按以下组分和配比配置狂犬疫苗稳定剂：
[0042] 牛血清白蛋白1. 2% (W/V);
[0043] 氨基酸类组合物2.7% (W/V);
[0044] 山梨糖醇 0? 2% (W/V);
[0045] 磷酸盐缓冲液 50mmol/L，pH7. 2 ;
[0046] 原人参三醇1. 2% (W/V)
[0047] 其中氨基酸类组合物按如下重量比的组分配置：L-赖氨酸：4_羟基异亮氨酸： L-脯氨酸叔丁酯盐酸盐=1. 5 :0. 8 :0. 3。
[0048] 按溶液总体积100ml计算并准确称量上述各组分保持常温混合均匀，用注射用水 补足至100ml定容，置于灭菌容器中。
[0049] 实施例3
[0050] 按以下组分和配比配置狂犬疫苗稳定剂：
[0051] 牛血清白蛋白1.0% (W/V);
[0052] 氨基酸类组合物2. 5% (W/V);
[0053]山梨糖醇 0.6% (W/V);
[0054]磷酸盐缓冲液 30mmol/L，pH7. 0;
[0055] 原人参三醇1. 4% (W/V)
[0056] 其中氨基酸类组合物按如下重量比的组分配置：L-赖氨酸：4_羟基异亮氨酸： L-脯氨酸叔丁酯盐酸盐=1. 2 :0. 9 :0. 5。
[0057] 按溶液总体积100ml计算并准确称量上述各组分保持常温混合均匀，用注射用水 补足至100ml定容，置于灭菌容器中。
[0058] 实施例4
[0059] 按以下组分和配比配置狂犬疫苗稳定剂：
[0060] 牛血清白蛋白1. 0% (W/V);
[0061] 氨基酸类组合物2. 4% (W/V);
[0062]甘露醇 0.4% (W/V);
[0063] 磷酸盐缓冲液 40mmol/L，pH7. 2 ;
[0064] 原人参三醇1. 3% (W/V)
[0065] 其中氨基酸类组合物按如下重量比的组分配置：L-赖氨酸：4_羟基异亮氨酸：L-脯氨酸叔丁酯盐酸盐=1. 3 :1. 0 :0. 4。
[0066] 按溶液总体积100ml计算并准确称量上述各组分保持常温混合均匀，用注射用水 补足至100ml定容，置于灭菌容器中。
[0067] 实施例5
[0068] 按如下步骤制备狂犬疫苗：
[0069] (l)BSR细胞传代、培养和扩大：将BSR细胞复苏后，按常规生产工艺传代和放大培 养，以达到生产规模后用于接种狂犬病毒；
[0070] (2)病毒接种、培养和收获：将狂犬病毒按适当的比例接种到BSR细胞上复制增 殖，待病毒滴度达到最佳水平时收获病毒细胞培养液；
[0071] (3)病毒灭活：收获的狂犬病毒经毒价检测合格后，用适当的灭活剂进行灭活；
[0072] (4)配苗：病毒灭活检验合格后，加入实施例1的狂犬疫苗稳定剂和氢氧化铝佐 齐IJ，氢氧化铝佐剂终浓度400- 700ug/ml。狂犬疫苗稳定剂的加入量按照：每100ml狂犬疫 苗稳定剂中含有25〇n狂犬疫苗的配比培苗，分装制成2. 5n/ml规格的狂犬疫苗成品。
[0073] 实施例6
[0074] 本实施例与实施例5的区别仅在于，步骤（4)中，加入实施例2的狂犬疫苗稳定 剂。
[0075] 实施例7
[0076] 本实施例与实施例5的区别仅在于，步骤（4)中，加入实施例3的狂犬疫苗稳定 齐U。狂犬疫苗稳定剂的加入量按照：每l〇〇ml狂犬疫苗稳定剂中含有50〇n狂犬疫苗的配 比培苗，分装制成5. 〇n/ml的狂犬疫苗成品。
[0077] 实施例8
[0078] 本实施例与实施例7的区别仅在于，步骤（4)中，加入实施例4的狂犬疫苗稳定 剂。
[0079] 对比例1
[0080] 本对比例与实施例5的区别仅在于，步骤（4)中，将狂犬疫苗稳定剂换为等量的动 物血清。
[0081] 对比例2
[0082] 本对比例与实施例7的区别仅在于，步骤（4)中，将狂犬疫苗稳定剂换为等量的动 物血清。
[0083] 试验例1
[0084] 将实施例5?8、对比例1?2中的产品分别放置2?8°C环境下24个月、25°C环 境下12个月、37°C环境下14天，检测产品效价（UI/ml)前后变化。结果如下：
【权利要求】
1. 一种狂犬疫苗稳定剂，其特征在于，由以下组分组成： 牛血清白蛋白1?1.2% (W/V); 氨基酸类组合物2. 1?2. 7 % (W/V); 山梨糖醇或甘露醇〇. 2?0. 8 % (W/V); 缓冲液 20-50mmol/L，pH7. 0-7. 2 ; 原人参三醇1. 2?1. 5% (W/V); 水。
2. 根据权利要求1所述的狂犬疫苗稳定剂，其特征在于，由以下组分组成： 牛血清白蛋白1% (W/V); 氨基酸类组合物2.4% (W/V); 山梨糖醇或甘露醇0.6% (W/V); 缓冲液 30mmol/L，pH7. 0 ; 原人参三醇1. 4% (W/V); 水。
3. 根据权利要求1或2所述的狂犬疫苗稳定剂，其特征在于，所述氨基酸类组合物由以 下组分组成：L-赖氨酸，4-羟基异亮氨酸，L-脯氨酸叔丁酯盐酸盐，三者的重量比为：L-赖 氨酸：4_羟基异亮氨酸：L-脯氨酸叔丁酯盐酸盐=(1?1. 5) : (0. 8?1. 2) : (0. 3?0. 6)。
4. 根据权利要求3所述的狂犬疫苗稳定剂，其特征在于，所述L-赖氨酸，4-羟基异亮 氨酸，L-脯氨酸叔丁酯盐酸盐三者的重量比为：L-赖氨酸：4_羟基异亮氨酸：L-脯氨酸叔 丁酯盐酸盐=L2 :0.9 :0.5。
5. 根据权利要求1或2所述的狂犬疫苗稳定剂，其特征在于，所述缓冲液为磷酸盐缓冲 液。
6. 根据权利要求1或2所述的狂犬疫苗稳定剂，其特征在于，所述水为注射用水。
7. 权利要求1所述狂犬疫苗稳定剂的应用，其特征在于，包括如下步骤： (1) BSR细胞传代、培养和扩大：将BSR细胞复苏后，按常规生产工艺传代和放大培养， 以达到生产规模后用于接种狂犬病毒； (2) 病毒接种、培养和收获：将狂犬病毒按适当的比例接种到BSR细胞上复制增殖，待 病毒滴度达到最佳水平时收获病毒细胞培养液； (3) 病毒灭活：收获的狂犬病毒经毒价检测合格后，用适当的灭活剂进行灭活； (4) 配苗：病毒灭活检验合格后，加入狂犬疫苗稳定剂。
8. 根据权利要求7所述的狂犬疫苗稳定剂的应用，其特征在于，步骤（4)中，按照每 100ml狂犬疫苗稳定剂中含有250?50〇n效价狂犬疫苗的配比培苗。
【文档编号】A61P31/14GK104383550SQ201410677477
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年11月21日 优先权日:2014年11月21日
【发明者】张传明, 冷雪梅, 虞华芳 申请人:常州同泰生物药业科技有限公司