叶酸靶向水飞蓟素固体脂质纳米粒制备方法
【技术领域】
[0001]本发明是以叶酸为靶头制备叶酸靶向水飞蓟素固体脂质纳米粒。
【背景技术】
[0002]目前，肺癌已成为全世界死亡率最高的癌症，治疗肺癌的药物虽然较多，但都不能靶向给药，现国内无水飞蓟素叶酸靶向制剂，使药物直达病灶，在治疗时毒副作用大，即杀死了癌细胞，也杀死了正常细胞，患者治疗痛苦，体力下降，免疫功能低下，治疗效果差，患者所花医疗费用高，而且癌症不能达到治愈。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于克服上述缺点，提供一种叶酸靶向水飞蓟素固体脂质纳米粒制备方法，它是以叶酸为靶头，将水飞蓟素制成固体脂质纳米粒并连接靶头，采用静脉注射途径给药，使该制剂具有肺肿瘤的靶向性，本发明的目的是这样实现的，
将水飞蓟素制成固体脂质纳米粒并连接靶头叶酸，制成叶酸靶向的水飞蓟宾固体脂质纳米粒，
第一步、FA-PEG3350-DSPE (叶酸-聚乙二醇3350-脑磷脂)的合成合成步骤如下:①分别称取65.8mgFA (叶酸)、350mgH2N-PEG3350_NH2 (二氨基-聚乙二醇3350)、30mgNHS (羟基琥珀酸酰亚胺)、60mgDCC (N，Nr - 二环己基碳二亚胺)溶解于ImLDMSO (二甲基亚砜)中，依次加入，加入100 μ L TEA (三乙胺)，N2 (氮气)保护、避光反应24h后50°C (500r - min1)反应6h，加入45mL冷氯仿混匀，旋转蒸发去除氯仿，残留少许液体，真空干燥得淡黄色固体FA-PEG3350-NH2 (氨基-叶酸-聚乙二醇3350)，②50mgDSPE(脑磷脂)溶于2.5mLCHCl3 (三氯甲烷)，15mgSUC (琥珀酸酐)溶于0.5mlDMS0 (二甲基亚砜)，转入前一体系①中，逐渐加入50 μ L TEA (三乙胺)，500 r.π?η 1室温反应24h，残留少许液体，加入45mL无水冷丙酮沉淀，离心(12000 r *min / 1min),反复清洗沉淀3次，真空干燥得SUC-DSPE (琥珀酸脑磷脂)，③将SUC-DSPE (琥珀酸脑磷脂)溶解在1mLCHCl3 (三氯甲烷)中后转入前一体系②中，加入30mgDCC(N，N' - 二环己基碳二亚胺)室温反应4h活化羧基，称取200mgFA-PEG3350-NH2 (氨基-叶酸-聚乙二醇3350)溶解在1mL的CHCl3 (三氯甲烷)中，加入40 μ L TEA，室温反应24h，冷丙酮沉淀并清洗产物，得产物FA-PEG3350-DSPE(叶酸-聚乙二醇3350-脑磷脂)；
第二步、叶酸修饰的水飞蓟素固体脂质体纳米粒制备
2.0%单硬脂酸甘油酯加入少量无水乙醇助融，1mg水飞蓟宾，水浴加热70°C熔融，作为油相，油相中加入3%膜材(溶于氯仿)，称取2.4%泊洛沙姆188，加入20mL蒸馏水超声溶解，称取0.8%脑磷脂，加入少量无水乙醇超声溶解后加入泊洛沙姆188中，作为水相，将水相加热至同温度后以1ml.min 1的速度滴加至油相中，乳化1min后超声破碎(600w，8min, 3s间隔)，置于4°C水浴中固化，0.22 μ m滤膜过滤即得叶酸修饰水飞蓟宾固体脂质纳米粒(FA-SIL-SLN)。本发明将水飞蓟素制成固体脂质纳米粒并连接革El头叶酸，纳米粒静脉注射后具有靶向肺部的作用，叶酸修饰可使药物靶向肿瘤细胞，因此产生肺部肿瘤靶向作用，提高抗肿瘤药物的生物利用度，减少细胞毒副作用，治疗效果好，使患者能够减少痛苦，早日康复。固体脂质纳米粒，是一种以室温下为固态的天然或合成的脂质或类脂为基质，将药物包裹于类脂核中制成粒径约为50-1000nm的固体脂质粒子给药体系，是一种很有发展前景的新型载药系统。随着对肿瘤分子水平研究的不断深入，在肿瘤细胞表面发现了一系列受体，它们与肿瘤生长增殖密切相关并在肿瘤组织过度表达，它们与特异性抗体或配体结合可诱导细胞内化，这种肿瘤特异性的受体为肿瘤治疗提供了靶点，使传统的化疗药物和新发现的肿瘤特异性的配体或抗体结合，增强了药物的肿瘤选择性并减少药物的毒副作用，叶酸受体(folate receptor, FR)是一种可以介导细胞内化，将叶酸摄取入真核细胞胞浆的一种高亲和力受体，在正常组织中极少表达，而在上皮组织来源的恶性肿瘤如肺癌、卵巢癌、宫颈癌、乳腺癌、结肠癌等组织中高度表达。本发明是以叶酸为靶头，将水飞蓟素制成固体脂质纳米粒并连接靶头，采用静脉注射途径给药，使该制剂具有肺肿瘤的靶向性，对水飞蓟素治疗药物研究与开发具有积极的意义，本发明制备方法简便，对环境无污染，成本低，有利于推广应用。
[0004]下面是本发明的具体实施例:
将水飞蓟素制成固体脂质纳米粒并连接靶头叶酸，制成叶酸靶向的水飞蓟宾固体脂质纳米粒，
第一步、FA-PEG3350-DSPE (叶酸-聚乙二醇3350-脑磷脂)的合成
合成步骤如下:①分别称取65.8mgFA(叶酸)、350mgH2N-PEG3350-NH2(二氨基-聚乙二醇3350)、3011^順3(羟基琥珀酸酰亚胺)、6011^0(1:(1& - 二环己基碳二亚胺)溶解于ImLDMSO(二甲基亚砜)中，依次加入，加入10yL TEA(三乙胺)，N2(氮气)保护、避光反应24h后50°C(500r *min 3反应6h，加入45mL冷氯仿混勾，旋转蒸发去除氯仿，残留少许液体，真空干燥得淡黄色固体FA-PEG3350-NH2 (氨基-叶酸-聚乙二醇3350)，②50mgDSPE (脑磷脂)溶于
2.5mLCHCl3 (三氯甲烷)，15mgSUC (琥珀酸酐)溶于0.5mlDMS0 (二甲基亚砜)，转入前一体系①中，逐渐加入50yL TEA (三乙胺)，500 r.min 1室温反应24h，残留少许液体，加入45mL无水冷丙酮沉淀，离心(12000 r.min / 1min),反复清洗沉淀3次，真空干燥得SUC-DSPE(琥珀酸脑磷脂)，③将SUC-DSPE (琥珀酸脑磷脂)溶解在1mLCHCl3 (三氯甲烷)中，加入30mgDCC (N, Nr - 二环己基碳二亚胺)室温反应4h活化羧基，称取200mgFA-PEG3350_NH2(氨基-叶酸-聚乙二醇3350)溶解在1mL的CHCl3 (三氯甲烷)中后转入前一体系②中，加Λ 40 μ L TEA，室温反应24h，冷丙酮沉淀并清洗产物，得产物FA-PEG3350-DSPE (叶酸-聚乙二醇3350-脑磷脂)；
第二步、叶酸修饰的水飞蓟素固体脂质体纳米粒制备
2.0%单硬脂酸甘油酯加入少量无水乙醇助融，1mg水飞蓟宾，水浴加热70°C熔融，作为油相，油相中加入3%膜材(溶于氯仿)，称取2.4%泊洛沙姆188，加入20mL蒸馏水超声溶解，称取0.8%脑磷脂，加入少量无水乙醇超声溶解后加入泊洛沙姆188中，作为水相，将水相加热至同温度后以1ml.min 1的速度滴加至油相中，乳化1min后超声破碎(600w，8min, 3s间隔)，置于4°C水浴中固化，0.22 μ m滤膜过滤即得叶酸修饰水飞蓟宾固体脂质纳米粒(FA-SIL-SLN)。
[0005]本药所含成分分析及配伍禁忌: 本制剂以水飞蓟素为指标成分，采用HPLC方法检测。水飞蓟素为中药水飞蓟种子提取的黄酮类物质，无配伍禁忌。
【主权项】
1.一种叶酸靶向水飞蓟素固体脂质纳米粒制备方法，其特征在于:将水飞蓟素制成固体脂质纳米粒并连接革G头叶酸，制成叶酸革El向的水飞蓟宾固体脂质纳米粒， 第一步、FA-PEG3350-DSPE (叶酸-聚乙二醇3350-脑磷脂)的合成合成步骤如下:①分别称取65.8mgFA(叶酸)、350mgH2N-PEG3350-NH2(二氨基-聚乙二醇.3350)、3011^順3(羟基琥珀酸酰亚胺)、6011^0(1:(1& - 二环己基碳二亚胺)溶解于ImLDMSO(二甲基亚砜)中，依次加入，加入10yL TEA(三乙胺)，N2(氮气)保护、避光反应24h后50°C(500r *min 3反应6h，加入45mL冷氯仿混勾，旋转蒸发去除氯仿，残留少许液体，真空干燥得淡黄色固体FA-PEG3350-NH2 (氨基-叶酸-聚乙二醇3350)，②50mgDSPE (脑磷脂)溶于.2.5mLCHCl3 (三氯甲烷)，15mgSUC (琥珀酸酐)溶于0.5mlDMS0 (二甲基亚砜)，转入前一体系①中，逐渐加入50yL TEA (三乙胺)，500 r.min 1室温反应24h，残留少许液体，加入45mL无水冷丙酮沉淀，离心(12000 r.min / 1min),反复清洗沉淀3次，真空干燥得SUC-DSPE(琥珀酸脑磷脂)，③将SUC-DSPE (琥珀酸脑磷脂)溶解在1mLCHCl3 (三氯甲烷)中，加入.30mgDCC (N, Nr - 二环己基碳二亚胺)室温反应4h活化羧基，称取200mgFA-PEG3350_NH2(氨基-叶酸-聚乙二醇3350)溶解在1mL的CHCl3 (三氯甲烷)中后转入前一体系②中，加Λ 40 μ L TEA，室温反应24h，冷丙酮沉淀并清洗产物，得产物FA-PEG3350-DSPE (叶酸-聚乙二醇3350-脑磷脂)； 第二步、叶酸修饰的水飞蓟素固体脂质体纳米粒制备 . 2.0%单硬脂酸甘油酯加入少量无水乙醇助融，1mg水飞蓟宾，水浴加热70°C熔融，作为油相，油相中加入3%膜材(溶于氯仿)，称取2.4%泊洛沙姆188，加入20mL蒸馏水超声溶解，称取0.8%脑磷脂，加入少量无水乙醇超声溶解后加入泊洛沙姆188中，作为水相，将水相加热至同温度后以1ml.min 1的速度滴加至油相中，乳化1min后超声破碎(600w，.8min, 3s间隔)，置于4°C水浴中固化，0.22 μ m滤膜过滤即得叶酸修饰水飞蓟宾固体脂质纳米粒(FA-SIL-SLN)。
【专利摘要】本发明涉及一种叶酸靶向水飞蓟素固体脂质纳米粒制备方法，它是首先将叶酸-聚乙二醇3350-脑磷脂进行合成，再将叶酸修饰的水飞蓟素固体脂质体纳米粒进行制备。该发明将水飞蓟素制成固体脂质纳米粒并连接靶头叶酸，纳米粒静脉注射后具有靶向肺部的作用，叶酸修饰可使药物靶向肿瘤细胞，因此产生肺部肿瘤靶向作用，提高抗肿瘤药物的生物利用度，减少细胞毒副作用，治疗效果好，使患者能够减少痛苦，早日康复，本发明制备方法简便，对环境无污染，成本低，有利于推广应用。
【IPC分类】A61K47/34, A61K9/14, A61P35/00, A61K31/357
【公开号】CN105708803
【申请号】CN201410725936
【发明人】于莲, 田丽华, 赵岩, 杨春荣, 苏瑾, 孙维彤, 杜研, 周彤
【申请人】佳木斯大学