红花酢浆草黄酮类化合物的提取方法
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及一种红花酢浆草黄酮类化合物的提取方法。
【背景技术】
[0002] 酢浆草有红花酢浆草、紫叶酢浆草等多个变种，多为酢浆草科多年生宿根草本植 物。酢浆草广布于世界各地，在中国，主要分布于华北、华中、华南、江西、四川和云南等地， 是一种极好的地被和盆栽植物。酢浆草全草均可入药，其性寒、味酸，归肝、小肠经，具有清 热解毒、消炎止痛、利湿消肿、凉血散瘀之功效。临床上主要用于治疗肺炎、扁桃体炎、急性 肝炎和腮腺炎等多种疾病。鄂西土家常用于内服治疗跌打青肿、咽喉肿痛、祛痰平喘、痢疾、 黄疸、尿路感染、结石、小儿肝热和惊风等;外用治跌打损伤、毒蛇咬伤、脚癣和湿疹等症。
[0003] 黄酮类化合物是一类在植物中分布很广而且重要的多酚类天然产物，因黄酮类化 合物的结构与来源不同，溶解特性差异也很大。对于黄酮苷类以及极性稍大的苷元(如羟基 黄酮、双黄酮等），一般可用水、甲醇、乙醇等进行提取。研究表明，天然植物中提取出来的黄 酮类化合物能有效清除多种自由基，具有抗氧化、抗肿瘤、消炎及免疫调节、抗病毒等生物 活性，在当今科学界抗疲劳、抗衰老研究领域具有十分重要的应用价值和研究意义，但是关 于红花酢浆草黄酮类物质的提取条件研究却少有报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种红花酢浆草黄酮类化合物的提取方法。
[0005] 本发明采用单因素实验法，研究不同的提取剂种类及浓度、料液比、提取温度、提 取时间对黄酮类化合物提取的影响，先确定各个显著影响因素的范围，然后通过4因素3水 平正交实验分析法，确定红花酢浆草黄酮类化合物提取的最佳条件。
[0006] 为达到上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种红花酢浆草黄酮类化合物的提取方法，其特征在于该方法的具体步骤为： a. 将红花酢浆草干燥后研磨成粉； b. 将步骤a所得红花酢浆草粉浸没在乙醇溶液中，浸提后得到提取液； c. 将步骤b所得提取液离心分离除去沉淀，得到上清液； d. 将步骤c所得上清液浓缩，脱除溶剂，再冷冻至干，得红花酢浆草黄酮类化合物。
[0007] 上述步骤b的具体步骤为:将红花酢浆草粉浸没在体积百分比浓度为60~80 %乙 醇溶液中，其中红花酢浆草粉质量与乙醇溶液的体积的比值范围为1: (40~60)g/mL，浸提 1.0~2.0小时后得到提取液，浸提温度为60~80°C。
[0008] 上述的步骤c的具体步骤为:将提取液采用高速离心机离心除去沉淀;离心机转速 为4000-10000 r/min，离心时间为10-15 min;取出上清液，残渣再重复提取2次，将3次得到 的上清液合并。
[0009] 上述的步骤d的具体步骤为:将上清液在旋转蒸发仪上进行浓缩，脱除溶剂，其中 旋转蒸发仪真空度为〇 .09 MPa，水浴温度控制在50~55°C之间，当脱溶瓶中剩余料液能倾 倒出来时，停止脱溶，将脱除溶剂后的料液倒入表面皿中，置于真空冷冻干燥机中冷冻至 干，得红花酢浆草黄酮类化合物。
[0010] 本发明新颖之处和优点在于:本发明首次对红花酢浆草黄酮类化合物提取方法和 工艺进行研究，通过粉碎、乙醇提取、高速离心去沉淀、浓缩、脱溶、干燥等工艺制备黄酮类 化合物，有效提高了产品的得率和品质，从而使红花酢浆草不仅可以观赏，也可以作为黄酮 类化合物提取的原料，为红花酢浆草的药物及抗氧化作用研究提供参考，加大了红花酢浆 草的利用范围。
【附图说明】
[0011] 图1为芦丁标准曲线图。
[0012] 图2为提取剂种类对黄酮类化合物提取的影响。
[0013]图3为乙醇浓度对黄酮类化合物提取的影响。
[0014] 图4为提取温度对黄酮类化合物提取的影响。
[0015] 图5为料液比对黄酮类化合物提取的影响。
[0016] 图6为提取时间对黄酮类化合物提取的影响。
【具体实施方式】
[0017] 实施例一:黄酮类化合物含量测定方法 首先制定芦丁标准曲线:取芦丁标准品0.02 g，置于100 mL容量瓶内，用70% (v/v) 乙醇溶解并定容至刻度。分别精确吸取〇 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.8 mL、1.2 mL、1.6 mL、2.0 mL芦丁标准液于10 mL的刻度具塞试管中，各管补纯水至2.0 mL，加入5%(w/v)亚硝酸钠 0.3 mL，摇勾后放置6 min，加入10% (w/v)三氯化错0.3 mL，摇勾再放置6 min，加入4% (w/v)氢氧化钠4 mL，最后用纯水定容，静止10 min，510 nm处测其吸光度，建立回归方程： A(吸光度)=KC(芦丁浓度)+b。根据此方法制得芦丁标准曲线。
[0018] 样品黄酮类化合物的测定方法：取0.1 mL样品提取液中于10 mL试管中，补纯水 至2.0 mL，加入5%亚硝酸钠0.3 mL，摇匀后放置6 min，加入10%三氯化铝0.3 mL，摇 勾再放置6 min，加入4%氢氧化钠4 mL，最后用纯水定容，静置10 min，510 nm处测其吸光 度。平行测定3组。
[0019] 实施例二:提取剂种类对黄酮类化合物提取的影响 考察在提取温度为60°C，提取时间为2.0 h，料液比为1:50，研究甲醇、乙醇、水、正丁醇 和乙酸乙酯作为提取剂对黄酮类化合物提取的影响。结果表明不同提取溶剂对红花酢浆草 黄酮类化合物的提取有着较大的影响。乙酸乙酯作为提取剂提取黄酮效果较差，显著低于 其他溶剂提取效果，甲醇提取效果最好，但甲醇有毒性且成本较高，而乙醇的提取效果较好 而且无毒、安全环保。因此从提取效果和安全角度来说，乙醇都是红花酢浆草黄酮类化合物 提取的最佳试剂。（见图2) 实施例三:乙醇浓度对黄酮类化合物提取的影响 在筛选到最佳提取溶剂的基础上，研究该试剂不同浓度下（40%、50%、60%、70%、80%)对 黄酮类化合物含量的影响，选取适合的浓度。结果表明，随着乙醇浓度增高，黄酮类化合物 的提取含量增加，在乙醇浓度为70%时达到最大值，但乙醇浓度超过70%时，提取的黄酮类 化合物有所下降，表明红花酢浆草黄酮类化合物提取以70%乙醇为佳。（见图3) 实施例四：提取温度对黄酮类化合物提取的影响 以70%乙醇作为提取剂，1:50作为料液比，提取时间为2.0 h，研究提取温度40、50、60、 70、80°C对黄酮类化合物含量的影响，找出最佳的提取温度。结果表明，随着提取温度的增 加，黄酮类化合物的含量不断增加，当提取温度高于70°C，提取效果变化不大。因此，黄酮提 取温度最佳为70°C。（见图4) 实施例五:料液比对黄酮类化合物提取的影响 以70%乙醇作为提取剂，提取温度为70°C，提取时间为2.0 h，考察料液比（红花酢浆草 粉的质量：乙醇的体积，g/mL) 1:30、1:40、1:50、1:60、1:70对黄酮类化合物含量的影响。可 见随着乙醇体积的增加，红花酢浆草中黄酮类化合物的含量不断增加，但当料液比达到1: 50时，黄酮类化合物的含量变化不大。所以红花酢浆草提取黄酮类化合物时料液比可选取 1:50。（见图 5) 实施例六:提取时间对黄酮类化合物提取的影响 以70%乙醇作为提取剂，1:50作为料液比，提取温度为70°C，研究提取时间0.5 h、l .0 h、1.5 h、2.0 h、2.5 h对黄酮类化合物含量的影响，找出最佳的提取时间。结果表明：提取 时间在0.5 h-2.0 h期间，随着时间的增加，黄酮类化合物提取含量不断增加，因此提取时 间以2.0 h为最佳。（见图6) 实施例七:正交实验确定提取条件最优组合 为了确定红花酢浆草中黄酮类化合物的最佳提取工艺，在单因素试验的基础上，从提 取时间、料液比、乙醇浓度和提取温度这四个因素中挑选出单因素试验结果中提取效果比 较好的3个水平进行试验，按正交试验设计筛选最佳提取条件，黄酮类化合物提取条件的正 交试验因素和水平如表1所示。
[0020] 从表2的结果可以看出，提取时间、料液比、乙醇浓度和提取温度这4个因素对红花 酢浆草中黄酮类化合物提取效果影响的大小次序依次为：乙醇浓度〉料液比〉提取温度〉提 取时间。黄酮类化合物提取的最优组合为A 2B2C2D2，即乙醇浓度70%，料液比1: 50，提取时间 1.5 h，提取温度70°C。在此优化条件下进行提取，黄酮类化合物的含量为45.60 mg/g。
【主权项】
1. 一种红花酢浆草黄酮类化合物的提取方法，其特征在于该方法的具体步骤为： a. 将红花酢浆草干燥后研磨成粉； b. 将步骤a所得红花酢浆草粉浸没在提取剂中，浸提后得到提取液； c. 将步骤b所得提取液离心分离除去沉淀，得到上清液； d. 将步骤c所得上清液浓缩，脱除提取剂，再冷冻至干，得红花酢浆草黄酮类化合物。2. 根据权利要求1所述的红花酢浆草黄酮类化合物的提取方法，其特征在于所述步骤b 的具体步骤为:将红花酢浆草粉浸没提取剂中在其中红花酢浆草粉质量与提取剂的体积的 比值范围为1:(40~60)g/mL，浸提1.0~2.0小时后得到提取液，浸提温度为60~80°C。3. 根据权利要求2所述的红花酢浆草黄酮类化合物的提取方法，其特征在于所述提取 剂为：甲醇、乙醇、水、正丁醇或乙酸乙酯。4. 根据权利要求3所述的红花酢浆草黄酮类化合物的提取方法，其特征在于所述提取 剂为体积百分比浓度为60~80 %的乙醇水溶液。5. 权利要求1所述的红花酢浆草黄酮类化合物的提取方法，其特征在于所述的步骤c的 具体步骤为:将提取液采用高速离心机离心除去沉淀;离心机转速为4000-10000 r/min，离 心时间为10-15 min;取出上清液，残渣再重复提取2次，将3次得到的上清液合并。6. 根据权利要求1所述的红花酢浆草黄酮类化合物的提取方法，其特征在于所述的步 骤d的具体步骤为:将上清液在旋转蒸发仪上进行浓缩，脱除溶剂，其中旋转蒸发仪真空度 为0.09 MPa，水浴温度控制在50~55°C之间，当脱溶瓶中剩余料液能倾倒出来时，停止脱 溶，将脱除溶剂后的料液倒入表面皿中，置于真空冷冻干燥机中冷冻至干，得红花酢浆草黄 酮类化合物。
【专利摘要】本发明公开了一种红花酢浆草黄酮类化合物的提取方法，该方法的步骤如下：选取红花酢浆草研磨成粉，在红花酢浆草粉中加入乙醇溶液浸提后得到提取液，将提取液采用高速离心机离心除去沉淀，得到上清液，将上清液在旋转蒸发仪上进行浓缩，脱除溶剂，置于真空冷冻干燥机中冷冻至干，得红花酢浆草黄酮提取物。对红花酢浆草黄酮类化合物的提取方法和工艺进行研究,以期为进一步研究红花酢浆草黄酮类化合物的抗氧化及药物作用提供参考，加大了红花酢浆草的利用范围。本工艺简单可行,有较好的参考价值。
【IPC分类】A61K36/185
【公开号】CN105708872
【申请号】CN201610175604
【发明人】廖鲜艳, 王亚茜, 许慧敏, 陈楠楠, 黄俊逸
【申请人】上海大学