本发明涉及一种提取分离青钱柳黄酮的方法。属于海洋微藻养殖领域。
背景技术：
青钱柳，（拉丁文名：cyclocaryapaliurus.）别名：摇钱树、麻柳，青钱李、山麻柳、山化树。胡桃科、青钱柳属植物，我国南方多省均有发现，多以零星分布。青钱柳乃冰川四纪幸存下来的珍稀树种，仅存于中国。青钱柳被誉为植物界的大熊猫，医学界的第三棵树。人们知道，医学界的第一棵树——柳树，产生了阿司匹林，消炎杀菌、抗血栓，揭开了人类健康史的第一次变革。
现代研究证实青钱柳叶具有降血糖、降血压、降血脂作用、增强机体免疫功能等作用。其主要活性成分是黄酮类和多糖类化合物。青钱柳中含有丰富的黄酮类物质，黄铜类化合物具有心血管系统活性、抗菌及抗病毒活性、抗肿瘤活性、抗氧化自由基活性、抗炎镇痛活性、保肝活性等多种生物活性。青钱柳叶含有大量的黄酮类化合物，具有降血糖、降血压、降血脂、增强肌体免疫力、抗氧化、防衰老等功能。目前，青钱柳中黄酮类化合物的提取方法较复杂、工艺成本高，不利于大规模工业化。另外，传统的原料预处理方法多为高温干燥，同时，传统的水体方法也需要采用高温加热，才可以提取出较大量的提取物，不仅会大量破坏青钱柳中的有效成分，同时增加工艺能耗。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是：提供一种提取分离青钱柳黄酮的方法。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：
本发明提供的一种青钱柳提取多糖的方法，包括下列步骤：
a.将青钱柳用清水洗涤，40-50℃烘干干燥，样品经粉碎机粉碎，过40目筛。
b.酸解：将青钱柳加入蒸馏水打浆，青钱柳和蒸馏水的重量比为1:1-2，加入食品级盐酸（盐酸≥31.0%），加入食品级盐酸的重量为浆料重量的5-10%，30-40℃维持1-5h。
c.微生物发酵降解：将酸解后的原料加入升温到37-40℃，调节ph为5-6，加入酵母菌、枯草芽孢杆菌菌种0.05-0.3份，充分拌匀，发酵降解0.5-1天。
d.复合酶解:发酵后的待提取物料加入复合酶，复合酶和物料的重量比1:20-40，调节ph7.5-8.0，温度保持30-45℃，同时辅助超声处理，时间1-3h，过滤得滤液。
e.丙酮萃取：滤液中加入丙酮萃取，萃取2-3次，收集有机相，蒸馏后得到粗青钱柳黄酮；
f.粗黄酮纯化：用活性炭纯化黄酮。活性炭纯化黄酮根据现有技术中的操作方法即可，具体为根据总黄酮在不同温度的水中溶解度的差别，可用热水溶解、冷水结晶。使之不断提高纯度。该工艺相对简单，操作方便。在利用重结晶纯化总黄酮，加入一定量活性炭可提高纯化速度。
优选的，复合酶包括纤维素酶和果胶酶，两者的重量比例是0.5：1-2。
本发明的有益效果：
本发明在青钱柳黄酮的提取过程中，首先采用初步微生物发酵的方法，将青钱柳的细胞壁降解掉，同时利用微生物的作用除去一部分杂质等，比如多糖等等。然后再用酶解，将黄酮充分释放出来。
本发明的整个工艺过程中无污染物排放，适合于大规模生产，有益于青钱柳资源的开发利用。具有该步骤简单，成本低，可操作性强，产量高的优点，易于工业化生产。
具体实施方式
实施例1
本实施例提供的一种青钱柳提取多糖的方法，包括下列步骤：
a.将青钱柳用清水洗涤，50℃烘干干燥，样品经粉碎机粉碎，过40目筛。
b.酸解：将青钱柳加入蒸馏水打浆，青钱柳和蒸馏水的重量比为1:2，加入食品级盐酸（盐酸≥31.0%），加入食品级盐酸的重量为浆料重量的10%，40℃维持2h。
c.微生物发酵降解：将酸解后的原料加入升温到40℃，调节ph为6，加入酵母菌、枯草芽孢杆菌菌种0.3份，充分拌匀，发酵降解1天。
d.复合酶解:发酵后的待提取物料加入复合酶，复合酶和物料的重量比1:40，调节ph.0，温度保持45℃，同时辅助超声处理，时间3h，过滤得滤液。
e.丙酮萃取：滤液中加入丙酮萃取，萃取3次，收集有机相，蒸馏后得到粗青钱柳黄酮；
f.粗黄酮纯化：用活性炭纯化黄酮。
青钱柳黄酮得率：
将1千克的青钱柳黄酮按照本实施例的方法进行制备提取，得纯化黄酮13.4g，将纯化黄酮以芦丁为对照品经uv检测，测到其中黄酮含量为84.6%。
实施例2
本实施例提供的一种青钱柳提取多糖的方法，包括下列步骤：
a.将青钱柳用清水洗涤，40℃烘干干燥，样品经粉碎机粉碎，过40目筛。
b.酸解：将青钱柳加入蒸馏水打浆，青钱柳和蒸馏水的重量比为1:1，加入食品级盐酸（盐酸≥31.0%），加入食品级盐酸的重量为浆料重量的5%，30℃维持1h。
c.微生物发酵降解：将酸解后的原料加入升温到37℃，调节ph为5，加入酵母菌、枯草芽孢杆菌菌种0.05份，充分拌匀，发酵降解0.5天。
d.复合酶解:发酵后的待提取物料加入复合酶，复合酶和物料的重量比1:20，调节ph7.5，温度保持30℃，同时辅助超声处理，时间1h，过滤得滤液。
e.丙酮萃取：滤液中加入丙酮萃取，萃取2次，收集有机相，蒸馏后得到粗青钱柳黄酮；
f.粗黄酮纯化：用活性炭纯化黄酮。
青钱柳黄酮得率：
将1千克的青钱柳黄酮按照本实施例的方法进行制备提取，得纯化黄酮11.2g，以芦丁为对照品经uv检测，黄酮含量为86.2%。