专利名称:一种抗肝脏疾病的药物组合物的制作方法
1、技术领域：
本发明属于医药技术领域：
，涉及一种抗肝脏疾病的药物组合物及其制备方法，主要由人参或其提取物、麦冬或其提取物、五味子或其提取物、甘草酸或其药学上可接受的盐制成。
2、背景技术肝炎是一种常见病和多发病，据不完全统计，我国肝炎患者和病毒携带者占总人口的10％。其中以病毒性肝炎为主，病毒性肝炎又可分为急性肝炎、慢性肝炎、重症肝炎和胆型肝炎。肝炎是一种传染性疾病，由于其流行性广、危害性大、发病率高，是目前国内外公认的疑难病症之一。中国是乙型肝炎的高流行区，有超过40％的人受过乙型肝炎病毒(HBV)感染，有1亿多人口为慢性HBsAg携带者。乙型肝炎治愈率仅为10％，绝大部分转为慢性肝炎，严重的转化为肝腹水、肝癌。其中，肝纤维化的形成和发展是影响预后和病情转危的关键病理变化之一，也是临床慢性肝病治疗中最为复杂的疑难问题。国内外近年来治疗肝炎的药物虽然有许多，但大多疗效并不理想，治疗后病情易反复，且价格又十分昂贵。至今，市场上仍缺少抗肝炎疗效确切，副作用又较小的药物。
人参为五加科植物人参Panax ginsengC.A.Mey.的干燥根及根茎。味甘、微苦，性平，归脾、肺、心经，具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神的功效。国内外研究表明，人参的主要有效成分为人参总皂苷和人参多糖等。现代药理学研究表明，人参具有增强机体抵抗力，调整机体功能，促进物质代谢等作用，还具有加速肝脏排毒，保护肝脏，抑制肝纤维增生的作用。
麦冬为百合科植物麦冬Ophiopogon japonicus(Thunb.)Ker-Gawl.的干燥块根。味甘、微苦，性微寒，归心、肺、胃经，具有养阴生津、润肺清心的功效。国内外研究表明，麦冬的主要化学成分为甾体皂苷、高异黄酮、多糖、氨基酸等。药理作用研究表明，麦冬具有提高免疫力的功能，可显著增加小鼠免疫器官胸腺、脾脏重量，并激活小鼠网状内皮系统的吞噬功能，提高血清溶血素抗体水平。
五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实。味酸、甘，性温，归肺、心、肾经，具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心的功效。现代药理研究表明，五味子具有调节免疫、稳定肝脏细胞膜、保护细胞器、细胞核，促进病理修复、改善肝功能。五味子及五味子甲素、乙素、丙素、醇甲、醇乙、酯甲、酯乙等对化学毒物引起的动物肝细胞损伤有明显保护作用，可抑制转氨酶的释放，使ALT活性降低；能明显诱导小鼠和大鼠肝微粒体细胞色素P-450活性；增加肝脏解毒能力。
甘草酸(glycyrrbizie acid，GA)为豆科植物甘草、光果甘草、胀果甘草的根及根茎的主要有效成分之一，具有抗炎、抗病毒、保肝解毒及增强免疫功能等作用。甘草酸有糖皮质激素样药理作用，能提高肝炎病人血清氢化可的松的浓度，降低慢性肝炎患者血清及外周单个核细胞中白介素-6和肿瘤坏死因子，减轻免疫病理反应，促进肝功能恢复，清除症状，缩小肝脾肿大，降酶快，退黄疸显著。甘草酸单铵和甘草酸二铵分别为甘草酸的单铵盐和二铵盐。甘草酸单铵盐A和甘草酸单铵盐S已分别载入国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准第十二册和第十三册(国家药典委员会编)，其中规定按干燥品计算，含甘草酸单铵盐(C42H61O16NH4)分别不得少于67.0％和73.0％。甘草酸单铵对各型急慢性肝炎、肝纤维化、中毒性肝炎、外伤性肝炎有一定的辅助治疗作用。甘草酸二铵为20β-羧基-11氧代正齐墩果烷-12-烯-3β基-2-β-D-葡萄吡喃糖苷醛酸基-α-D-葡萄吡喃糖苷醛酸二铵盐，已载入国家药品标准新药转正标准第43册(国家药典委员会编)，其中规定按干燥品计算，含C42H68N2O16应为97.0％～103.0％。甘草酸二铵是中药甘草有效成分的第三代提取物，具有较强的抗炎、保护肝细胞膜及改善肝功能的作用；药理实验证明，小鼠口服能减轻因四氯化碳、硫代乙酰胺和D-氨基半乳糖引起的血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶升高，还能明显减轻D-氨基半乳酸对肝脏的形态损伤和改善免疫因子对肝脏形态的慢性损伤。
目前，利用人参或其提取物、麦冬或其提取物、五味子或其提取物和甘草酸或其药学上可接受的盐的相互作用，配伍组方，制备用于治疗肝脏疾病方面的药物，尚未见报道。
发明内容为了满足临床需要，更好的治疗肝脏疾病，延缓或减少肝炎向肝腹水或肝癌的转化，提高肝炎患者的生命质量，本发明提供了一种主要用于抗肝脏疾病的药物组合物及其制备方法，主要由人参或其提取物、麦冬或其提取物、五味子或其提取物和甘草酸或其药学上可接受的盐制成，对四氯化碳、D-氨基半乳糖所致的小鼠急性肝损伤、四氯化碳诱导的大鼠慢性肝损伤、酒精诱导的小鼠慢性肝损伤均具有显著的保护作用，并且可显著抑制鸭乙型肝炎病毒，产生了意想不到的效果。
本发明药物组合物主要由人参、麦冬、五味子和甘草酸或其药学上可接受的盐制成，其重量份数为人参50～1000份、麦冬100～1500份、五味子50～1000份、甘草酸或其药学上可接受的盐1～50份，优选为人参100～500份、麦冬200～1000份、五味子100～500份、甘草酸或其药学上可接受的盐2～30份，进一步优选为人参300份、麦冬600份、五味子300份、甘草酸或其药学上可接受的盐4～15份。
上述药物组合物中甘草酸药学上可接受的盐可以为金属盐或有机氮盐，金属盐可以是钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、锌盐，有机氮盐可以是单铵盐、二铵盐；优选为单铵盐和二铵盐。人参、麦冬、五味子、甘草酸单铵的最优重量份数为人参300份、麦冬600份、五味子300份、甘草酸单铵4份，人参、麦冬、五味子、甘草酸二铵的最优重量份数为人参300份、麦冬600份、五味子300份、甘草酸二铵15份。
上述药物组合物中人参、麦冬、五味子可以用适宜的溶剂和方法单独或混合提取加工得到提取物，总提取物再与甘草酸或其药学上可接受的盐和药学上可接受的辅料混合制成任一临床上或药学上可接受的剂型。“单独提取”是指，人参、麦冬、五味子每一味药材分别通过不同的工艺单独提取得到提取物，再将各提取物混合得到总提取物。“混合提取”是指，人参、麦冬、五味子三味药材一起提取得到总提取物；或者其中的两味药材一起提取得到提取物，再与另一味药材的提取物混合得到总提取物。所得的总提取物中所含的所含的主要有效成分为总皂苷、五味子醇甲，或者为总多糖、五味子醇甲，主要有效成分的总含量不低于20％。
上述药物组合物的制备方法中，所用的溶剂是指药学上常用的溶剂，可以是水或乙醇等；所用的方法是指中药提取的一般方法，可以是煎煮法、回流提取法、浸渍法、渗漉法或连续提取法等。例如，人参可以通过回流提取法等提取制备得到人参总皂苷，人参还可以通过煎煮法、回流提取法等提取制备得到人参多糖，麦冬可以通过煎煮法、回流提取法等提取制备得到麦冬提取物，五味子可以通过煎煮法、回流提取法等提取制备得到五味子提取物。
原料药的具体制备方法如下因为人参总皂苷和人参多糖在保肝方面均有活性，所以人参的“单独提取”方法因其主要有效成分的不同可采用不同的提取方法，分别如下人参的优选提取工艺一(以总皂苷为主要有效成分)，如下取人参药材，粉碎成细粒，加10倍量乙醇回流提取二次，每次3小时，合并提取液，冷藏，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏，加水至适量(使每1ml相当于原药材1g)，搅匀，冷藏，滤过，滤液加于已处理好的大孔树脂柱上，先用2倍～3倍柱体积的水进行洗脱，弃去水洗液，再用3倍柱体积的80％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇并减压浓缩至相对密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。通过本工艺制备的人参总皂苷得率为1％～2％，总皂苷的含量不低于50％，人参皂苷Re、人参皂苷Rg1的总含量不低于30％。
人参还可以通过下述工艺提取制备，但不仅限于下述工艺工艺一取人参药材，粉碎成细粒，加乙醇回流提取三次，第一次加醇10倍量，二、三次为8、8倍量，每次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇并浓缩至稠膏，加水至适量，搅匀，冷藏，滤过，滤液加1/2倍量水饱和正丁醇提取三次，合并正丁醇液，减压回收正丁醇至稠膏状，真空干燥，即得。通过本工艺制备的人参总皂苷得率为3～5％，总皂苷的含量不低于40％，人参皂苷Re、人参皂苷Rg1的总含量不低于20％。
工艺二取人参药材，粉碎成细粒，加乙醇回流提取二次，每次4小时，每次加醇10倍量，合并提取液，冷藏，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏，加水稀释至相对密度为1.15～1.20，加1/2倍量水饱和正丁醇提取三次，合并正丁醇液，减压回收正丁醇至稠膏状，真空干燥，即得。通过本工艺制备的人参总皂苷得率为4～5％，总皂苷的含量不低于35％，人参皂苷Re、人参皂苷Rg1的总含量不低于20％。
人参的优选提取工艺二(以多糖为主要有效成分)，如下取人参药材，切碎，用75％乙醇回流提取4小时，滤过，药渣晾干，加水煎煮五次，每次1小时，合并煎液，加入0.3％活性炭，搅拌30分钟，静置过夜，滤过，滤液过树脂柱，收集流出液，减压浓缩，加乙醇使含醇量达95％，冷藏，滤过，取沉淀用丙酮洗涤，抽干丙酮，取沉淀于60～80℃干燥，粉碎，即得。通过本工艺制备的人参多糖得率为0.5％～2％，多糖的含量不低于50％。
人参还可通过下述工艺提取制备，但不仅限于下述工艺工艺一取人参药材，切碎，用80％乙醇回流提取3小时，滤过，药渣晾干，加水煎煮三次，每次2小时，加水10倍量，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15～1.20，过大孔树脂，流出液减压浓缩至稠膏状，真空干燥，即得。通过本工艺制备的人参多糖得率为2～4％，多糖的含量不低于40％。
工艺二取人参药材，切碎，加水提取三次，每次2小时，第一次加水10倍量，二、三次为8、8倍量，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.16～1.24，过大孔树脂柱，收集流出液，减压浓缩至稠膏状，真空干燥，即得。通过本工艺制备的人参多糖得率为3～5％，多糖的含量不低于30％。
麦冬的优选提取工艺，如下取麦冬药材，粉碎成细粒，加8倍量水煎煮二次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至稠膏状，加乙醇使含醇量达80％，冷藏放置24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏状，加乙醇使含醇量达85％，冷藏放置24小时，滤过，回收乙醇并浓缩至稠膏状，加水至适量(使每1ml相当于原药材2g)，搅匀，冷藏，滤过，滤液喷雾干燥，即得。通过本工艺制备的麦冬提取物得率为1～2％。
麦冬还可以通过下述工艺提取制备，但不仅限于下述工艺工艺一取麦冬药材，粉碎成细粒，加80％乙醇回流提取三次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇至稠膏状，加水至适量，搅匀，冷藏，滤过，滤液浓缩至稠膏状，加乙醇使含醇量达85％，冷藏放置24小时，滤过，回收乙醇并浓缩至稠膏状，加水至适量，搅匀，冷藏，滤过，滤液喷雾干燥，即得。通过本工艺制备的麦冬提取物得率为2～4％。
工艺二取麦冬药材，粉碎成细粒，60℃下加50％乙醇回流提取二次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇至稠膏状，加水至适量，搅匀，冷藏，滤过，滤液浓缩至稠膏状，加乙醇使含醇量达85％，冷藏放置24小时，滤过，回收乙醇并浓缩至稠膏状，加水至适量，搅匀，冷藏，滤过，滤液喷雾干燥，即得。通过本工艺制备的麦冬提取物得率为2～4％。
五味子的优选提取工艺(以五味子醇甲为主要有效成分)，如下取五味子药材，粉碎成粗粉，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15，加乙醇使含醇量达60％，冷藏放置24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.10～1.15，再加乙醇使含醇量达80％，冷藏放置24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.30～1.35，真空干燥，即得。通过本工艺制备的五味子提取物得率为2～4％，五味子醇甲的含量不低于10％，醚溶性浸出物的含量不低于30％。
五味子还可以通过下述工艺提取制备，但不仅限于下述工艺工艺一取五味子药材，粉碎成粗粉，加水煎煮三次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15，加乙醇使含醇量达60％，冷藏放置24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.10～1.15，再加乙醇使含醇量达80％，冷藏放置24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.30～1.35，真空干燥，即得。通过本工艺制备的五味子提取物，得率为3～5％，五味子醇甲的含量不低于8％，醚溶性浸出物的含量不低于25％。
工艺二取五味子药材，粉碎成粗粉，加80％乙醇回流提取二次，每次2小时，第一次次加醇6倍量，第二次加醇4倍量，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.10～1.15，加水至适量，搅匀，冷藏，滤过，滤液浓缩至稠膏状，再加乙醇使含醇量达80％，冷藏放置24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.30～1.35，真空干燥，即得。通过本工艺制备的五味子提取物得率为4～6％，五味子醇甲的含量不低于5％，醚溶性浸出物的含量不低于20％。
本发明药物组合物，还可以由人参总皂苷或者人参多糖代替人参、麦冬提取物代替麦冬、五味子提取物代替五味子投料制得，按照提取物相对于药材的得率计算，本发明药物组合物可以有以下两种不同配比，重量份数分别为配比1人参总皂苷0.5～10份、麦冬提取物1.5～22.5份、五味子提取物1.5～30份、甘草酸或其药学上可接受的盐1～50份，优选为人参总皂苷1～5份、麦冬提取物3～15份、五味子提取物3～15份、甘草酸或其药学上可接受的盐2～30份，进一步优选为人参总皂苷3份、麦冬提取物9份、五味子提取物9份、甘草酸或其药学上可接受的盐4～15份。
配比2人参多糖0.5～10份、麦冬提取物1.5～22.5份、五味子提取物1.5～30份、甘草酸或其药学上可接受的盐1～50份，优选为人参多糖1～5份、麦冬提取物3～15份、五味子提取物3～15份、甘草酸或其药学上可接受的盐2～30份，进一步优选为人参多糖3份、麦冬提取物9份、五味子提取物9份、甘草酸或其药学上可接受的盐4～15份。
上述药物组合物中甘草酸药学上可接受的盐可以为金属盐或有机氮盐，金属盐可以是钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、锌盐，有机氮盐可以是单铵盐、二铵盐；优选为单铵盐和二铵盐。人参总皂苷或者人参多糖、麦冬提取物、五味子提取物、甘草酸单铵的最优重量份数为人参总皂苷或者人参多糖3份、麦冬提取物9份、五味子提取物9份、甘草酸单铵4份，人参总皂苷或者人参多糖、麦冬提取物、五味子提取物、甘草酸二铵的最优重量份数为人参总皂苷或者人参多糖3份、麦冬提取物9份、五味子提取物9份、甘草酸二铵15份。
上述药物组合物中，人参总皂苷的主要有效成分为总皂苷，总皂苷的含量不低于30％，最好不低于50％，人参皂苷Re、人参皂苷Rg1的总含量不低于20％，最好不低于30％；人参多糖的主要有效成分的为多糖，多糖的含量不低于30％，最好不低于50％；五味子提取物的主要有效成分为五味子醇甲，五味子醇甲的含量不低于5％，最好不低于10％，醚溶性浸出物的含量不低于20％，最好不低于30％。
人参总皂苷、人参多糖、麦冬提取物、五味子提取物均可参照前述方法制备。按上述两种配比得到的总提取物中的主要有效成分为总皂苷、五味子醇甲，或者为总多糖、五味子醇甲，主要有效成分的总含量不低于20％。
本发明药物组合物，药物组分的用量是经过发明人进行大量摸索总结得出的，各组分用量在上述重量份数范围内都具有较好疗效。上述组成，若以克为单位，可以制成10～1000次用量的制剂。如作为水针或粉针，可制成10～1000支，每次用量1～10支。如作为片剂或胶囊剂，可制成10～1000片，每次服用1～10片。上述组成是按重量份数作为配比的，如大规模生产可以千克或吨为单位，小规模生产也可以克为单位。上述重量份数对于特殊病人，可以相应调整组成的比例，增加或者减少不超过100％。
本发明药物组合物，可以制成任一临床上或药学上可接受的剂型，以口服或胃肠外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。口服给药时，可制成口服常释剂型(如片、肠溶片、分散片、咀嚼片、口腔崩解片、胶囊、软胶囊、肠溶胶囊等)、缓释控释剂型(如缓释片、控释片、缓释胶囊、控释胶囊等)、口服液体制剂(如口服溶液、糖浆等)、滴丸、颗粒剂等；胃肠外给药时，可将其制成注射用的溶液、注射用水或油悬浮剂等。优选剂型为注射剂和口服制剂，如粉针、水针、输液、片、胶囊、颗粒等。
上述药物组合物，可采用现有制药领域中的常规方法生产，必要时可以添加各种药学上可接受的辅料，包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。
上述药物组合物在制成注射剂时，为了增加其溶解度，可以加入聚山梨酯-80等增溶剂。输液中可以加入氯化钠、葡萄糖等用于调节渗透压的等渗调节剂。粉针中可加入甘露醇等赋形剂。
本发明药物组合物，主要用于制备抗肝脏疾病的药物。药理药效研究表明，人参或其提取物、麦冬或其提取物、五味子或其提取物、甘草酸或其药学上可接受的盐合并用药对四氯化碳(CCl4)和D-氨基半乳糖所致的小鼠肝损伤、四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠慢性肝损伤、酒精诱导的小鼠慢性肝损伤均具有显著的保护作用，并可显著抑制鸭乙型肝炎病毒(DHBV)；提示其在治疗病毒性肝炎、药物性肝损伤、脂肪肝、酒精肝方面等将有显著疗效。
本发明药物组合物，具有下列优点(1)提供了一种新的复方抗肝炎药物，满足临床需要。
(2)对本发明药物组合物中药物组份的用量进行了大量摸索研究，通过不同配比制成的注射液对四氯化碳(CCl4)致肝损伤小鼠血清ALT和AST水平的影响的研究，筛选出具有显著疗效的重量配比。
(3)药理药效研究表明，本发明药物组合物对D-氨基半乳糖(DAG)致小鼠急性肝损伤有显著保护作用，能显著降低血清AST水平，升高血清ALB水平，降低肝指数；对四氯化碳诱导的大鼠慢性肝损伤有显著保护作用，能显著降低血清ALT和AST水平，升高血清ALB水平，减轻肝纤维化程度和降低纤维化发生率；对酒精诱导的小鼠慢性肝损伤也有显著的保护作用，能显著降低血清ALT、AST、TG水平，减轻肝组织病变；可以显著抑制鸭乙型肝炎病毒(DHBV)，高剂量组的效果与阳性对照组的效果相当，并且停药后无反跳现象。产生了意想不到的效果。
(4)本发明药物组合物，可以人参、麦冬、五味子、甘草酸或其药学上可接受的盐投料，也可以人参总皂苷或者人参多糖、麦冬提取物、五味子提取物、甘草酸或其药学上可接受的盐为原料，可制成任一临床上或药学上可接受的剂型。
(5)对本发明药物组合物制成的制剂或所用的提取物，进行了鉴别、含量测定、稳定性研究等，有效成分明确、含量高，制剂稳定性好，便于控制产品质量，保证临床用药安全。
(6)提供了优选的制备工艺，简便易行，且制剂质量高，适应于工业化大生产。
以下通过试验例来进一步阐述本发明药物组合物的有益效果，这些试验例包括本发明药物组合物的药效学试验和稳定性试验。本发明药物组合物具有下列有益效果，但不应将此理解为本发明药物组合物仅具有下列有益效果。
以下试验例中用RMWG1代替以人参总皂苷、五味子醇甲、甘草酸单铵为主要有效成分的药物组合物，用RMWG2代替以人参总皂苷、五味子醇甲、甘草酸二铵为主要有效成分的药物组合物，用RMWG3代替以人参多糖、五味子醇甲、甘草酸单铵为主要有效成分的药物组合物，用RMWG4代替以人参多糖、五味子醇甲、甘草酸二铵为主要有效成分的药物组合物。以下试验例中所用的人参总皂苷为实施例1制备所得，所用的人参多糖为实施例2制备所得，所用的麦冬提取物为实施例3制备所得，所用的五味子提取物为实施例4制备所得。试验例2～6中所用的RMWG1注射液、RMWG2注射液、RMWG3注射液、RMWG4注射液为实施例5制备所得。
试验例1 人参、麦冬、五味子、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药对四氯化碳致小鼠肝损伤的影响受试动物 健康小鼠，230只，体重20～25g，雌雄兼用，随机分为23组，每组10只。
供试品 氯化钠注射液250ml2.25g，山东长富洁晶药业有限公司五味子注射液自制，2ml，含五味子提取物92mg(相当于原药材3g)甘草酸单铵注射液自制，5ml40mg甘草酸二铵注射液自制，10ml150mg(人参+麦冬+五味子+甘草酸单铵)不同配比的注射液自制，见表1-1(以人参总皂苷、五味子醇甲、甘草酸单铵为主要有效成分)(人参+麦冬+五味子+甘草酸二铵)不同配比的注射液自制，见表1-1(以人参总皂苷、五味子醇甲、甘草酸二铵为主要有效成分)给药剂量 见表1-1。
试验方法 小鼠随机分为23组，每组10只，分别为正常对照组、模型组和各给药组。正常对照组和模型组尾静脉注射生理盐水20ml/kg，每日1次，连续7天；各给药组按表1-1尾静脉注射给药，每日1次，连续7天。最后一次尾静脉注射2h后，正常对照组腹腔注射花生油10ml/kg，其余各组均腹腔注射0.12％四氯化碳(CCl4)花生油溶液10ml/kg。16h后断头处死动物，取血，离心，取血清，测定血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平。断头取血后，肝组织作常规病理组织学检查。
表1-1 人参、麦冬、五味子、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药对CCl4肝损伤小鼠的影响(平均值±标准偏差，n＝10)
与正常对照组相比较#p＜0.05，##p＜0.01；与模型组相比较*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001；与五味子注射液组相比较ap＜0.05，bp＜0.01；与甘草酸单铵注射液组相比较cp＜0.05，dp＜0.01；与甘草酸二铵注射液组相比较ep＜0.05，fp＜0.01。
试验结果 见表1-1。与正常对照组相比较，模型组的血清ALT和AST水平均极显著升高(p＜0.01)，病理组织学检查发现肝组织明显受损，并出现坏死，说明造模成功。与模型组相比较，各给药组对CCl4诱导的小鼠肝损伤均具有保护作用，能降低血清ALT和AST水平，减轻肝组织病变和坏死；五味子注射液、甘草酸单铵注射液、甘草酸二铵注射液对CCl4诱导的小鼠肝损伤的具有显著的保护作用(p＜0.05)；人参50～1000份、麦冬100～1500份、五味子50～1000份、甘草酸或其药学上可接受的盐1～50份制成的注射液对CCl4诱导的小鼠肝损伤均具有极显著的保护作用(p＜0.01，p＜0.001)，人参100～500份、麦冬200～1000份、五味子100～500份、甘草酸或其药学上可接受的盐2～30份制成的注射液的保护作用更好，尤其以人参300份、麦冬600份、五味子300份、甘草酸单铵4份或甘草酸二铵15份制成的注射液的保护作用最好。
与五味子注射液组相比较，各个配比的(人参+麦冬+五味子+甘草酸单铵)注射液和(人参+麦冬+五味子+甘草酸二铵)注射液对CCl4诱导的小鼠肝损伤均具有显著的保护作用(p＜0.05，p＜0.01)。与甘草酸单铵注射液相比较，各个配比的(人参+麦冬+五味子+甘草酸单铵)注射液对CCl4诱导的小鼠肝损伤具有显著的保护作用(p＜0.05，p＜0.01)。与甘草酸二铵注射液相比较，各个配比的(人参+麦冬+五味子+甘草酸二铵)注射液对CCl4诱导的小鼠肝损伤具有显著的保护作用(p＜0.05)。
结论 试验结果表明，人参、麦冬、五味子、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药对CCl4诱导的小鼠肝损伤具有显著的保护作用，并且，相同给药剂量下，各个配比的(人参+麦冬+五味子+甘草酸单铵)注射液和(人参+麦冬+五味子+甘草酸二铵)注射液对CCl4诱导的小鼠肝损伤的保护作用均优于五味子注射液、甘草酸单铵注射液、甘草酸二铵注射液单独使用的效果。提示，人参、麦冬、五味子、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药具有协同作用，在抗肝炎、肝损伤方面有显著作用。
试验例2 人参、麦冬、五味子、甘草酸二铵合并用药对D-氨基半乳糖致小鼠肝损伤的作用受试动物 健康小鼠，100只，体重20～25g，雌雄兼用，随机分为10组，每组10只。
供试品 氯化钠注射液250ml2.25g，山东长富洁晶药业有限公司五味子注射液自制，2ml，含五味子提取物92mg(相当于原药材3g)甘草酸二铵注射液自制，10ml150mgRMWG2注射液自制，5ml374mg，含人参总皂苷42mg(相当于原药材3g)、麦冬提取物90mg(相当于原药材6g)、五味子提取物92mg(相当于原药材3g)、甘草酸二铵150mgRMWG4注射液自制，5ml366mg，含人参多糖34mg(相当于原药材3g)、麦冬提取物90mg(相当于原药材6g)、五味子提取物92mg(相当于原药材3g)、甘草酸二铵150mg给药剂量 见表1-2。
试验方法 小鼠随机分为10组，每组10只，分别为正常对照组、模型组和各给药组。正常对照组和模型组每日尾静脉注射生理盐水20ml/kg，每日1次，连续10天；各给药组按表1-2尾静脉注射给药，每日1次，连续10天。正常对照组在最后一次尾静脉注射1h后，腹腔注射生理盐水；其余各组均腹腔注射100g/L的D-氨基半乳糖(DAG)500mg/kg。24h后，处死动物取血，离心，取血清，测定血清谷草转氨酶(AST)和白蛋白(ALB)水平。取血后，肝组织作常规病理组织学检查。
试验结果及结论 结果见表1-2。与正常对照组相比较，模型组的血清AST水平极显著升高(p＜0.01)，血清ALB显著下降(p＜0.05)，肝指数显著升高(p＜0.01)，说明造模成功。与模型组相比较，各给药组对D-氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤均具有保护作用，能降低血清AST水平，升高血清ALB水平，降低肝指数；五味子注射液、甘草酸单铵注射液、甘草酸二铵注射液对DAG诱导的小鼠肝损伤具有显著的保护作用(p＜0.05)，各剂量RMWG2注射液和RMWG4注射液对DAG诱导的小鼠肝损伤均具有极显著的保护作用(p＜0.01，p＜0.001)。
表1-2 人参、麦冬、五味子、甘草酸二铵合并用药对D-氨基半乳糖致急性肝损伤小鼠的作用(平均值±标准偏差，n＝10)
与正常对照组相比较#p＜0.05，##p＜0.01；与模型组相比较*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001；与五味子注射液组相比较ap＜0.05，bp＜0.01；与甘草酸二铵注射液组相比较ep＜0.05，fp＜0.01。
结论 试验结果表明，人参、麦冬、五味子、甘草酸二铵合并用药对D-氨基半乳糖诱导的小鼠肝损伤具有显著的保护作用，并且保护作用与给药剂量相关，呈剂量依赖性；各剂量RMWG2注射液和RMWG4注射液对DAG诱导的小鼠肝损伤的保护作用均优于五味子注射液、甘草酸单铵注射液、甘草酸二铵注射液单独使用的效果。提示，人参、麦冬、五味子、甘草酸二铵合并用药具有协同作用，在抗急性肝损伤、脂肪肝方面有显著作用。
试验例3 人参、麦冬、五味子、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药对大鼠慢性肝损伤的作用受试动物 健康大鼠，110只，体重180～200g，雌雄兼用，随机分为11组，每组10只。
供试品 氯化钠注射液250ml2.25g，山东长富洁晶药业有限公司五味子注射液自制，2ml，含五味子提取物92mg(相当于原药材3g)甘草酸单铵注射液自制，5ml40mg甘草酸二铵注射液自制，10ml150mgRMWG1注射液自制，5ml264mg，含人参总皂苷42mg(相当于原药材3g)、麦冬提取物90mg(相当于原药材6g)、五味子提取物92mg(相当于原药材3g)、甘草酸单铵40mgRMWG2注射液自制，5ml374mg，含人参总皂苷42mg(相当于原药材3g)、麦冬提取物90mg(相当于原药材6g)、五味子提取物92mg(相当于原药材3g)、甘草酸二铵150mg给药剂量 见表1-3。
试验方法 健康大鼠10只，皮下注射花生油3ml/kg，每周2次，共8周，作为正常对照组。其余大鼠，皮下注射40％四氯化碳(CCl4)花生油溶液3ml/kg，每周2次，共8周，诱导肝纤维化；随后随机分为10组，每组10只，分别为模型组和各给药组。此后，正常对照组和模型组每日腹腔注射生理盐水20ml/kg，每日1次，连续10周；各给药组按表1-3腹腔注射给药，每日1次，共10周。末次给药24h后，下腔静脉采血，测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和白蛋白水平(ALB)；同时，取肝组织作常规病理组织学检查。
试验结果 见表1-3。与正常对照组相比较，模型组的血清ALT、AST水平均极显著升高(p＜0.01)，血清ALB水平极显著下降(p＜0.01)，病理组织学检查发现试验大鼠出现比较典型的肝纤维化，说明造模成功。与模型组相比较，各给药组对肝纤维化大鼠均具有保护作用，能降低血清ALT和AST水平，升高血清ALB水平，减轻肝纤维化程度和纤维化发生率；五味子注射液、甘草酸单铵注射液、甘草酸二铵注射液对肝纤维化大鼠具有显著的保护作用(p＜0.05)；各剂量RMWG1注射液和RMWG2注射液对肝纤维化大鼠具有极显著的保护作用(p＜0.01，p＜0.001)。
表1-3 人参、麦冬、五味子、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药对肝纤维化大鼠的影响(平均值±标准偏差，n＝10)
与正常对照组相比较#p＜005，##p＜0.01；与模型组相比较*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001；与五味子注射液组相比较ap＜0.05，bp＜0.01；与甘草酸单铵注射液组相比较cp＜0.05，dp＜0.01；与甘草酸二铵注射液组相比较ep＜0.05，fp＜0.01。
结论 试验结果表明，人参、麦冬、五味子、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药对肝纤维化大鼠具有显著的保护作用，并且保护作用与给药剂量相关，呈剂量依赖性；各剂量RMWG1注射液和RMWG2注射液对肝纤维化大鼠的保护作用均优于五味子注射液、甘草酸单铵注射液、甘草酸二铵注射液单独使用的效果。提示，人参、麦冬、五味子、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药具有协同作用，在抗肝纤维化、慢性肝损伤方面有显著作用。
试验例4 人参、麦冬、五味子、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药对小鼠慢性酒精性肝损伤的作用受试动物 健康小鼠，110只，体重20～25g，雌雄兼用，随机分为11组，每组10只。
供试品 氯化钠注射液250ml2.25g，山东长富洁晶药业有限公司五味子注射液自制，2ml，含五味子提取物92mg(相当于原药材3g)甘草酸单铵注射液自制，5ml40mg甘草酸二铵注射液自制，10ml150mgRMWG3注射液自制，5ml256mg，含人参多糖34mg(相当于原药材3g)、麦冬提取物90mg(相当于原药材6g)、五味子提取物92mg(相当于原药材3g)、甘草酸单铵40mgRMWG4注射液自制，5ml366mg，含人参多糖34mg(相当于原药材3g)、麦冬提取物90mg(相当于原药材6g)、五味子提取物92mg(相当于原药材3g)、甘草酸二铵150mg给药剂量 见表1-4。
试验方法 健康小鼠10只，灌胃给予蒸馏水12ml/kg，每天1次，共5周，作为正常对照组。其余小鼠，灌胃给予50％乙醇12ml/kg，每天1次，共5周；随后随机分为10组，分别为模型组和各给药组。此后，正常对照组和模型组每日腹腔注射生理盐水20ml/kg，每日1次，连续8周；各给药组按表1-4腹腔注射给药，每日1次，共8周。末次给药24h后，下腔静脉采血，测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和甘油三酯(TG)水平；同时，取肝组织作常规病理组织学检查。
表1-4 人参、麦冬、五味子、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药对小鼠慢性酒精性肝损伤的影响(平均值±标准偏差，n＝10)
与正常对照组相比较#p＜0.05，##p＜0.01；与模型组相比较*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001；与五味子注射液组相比较ap＜0.05，bp＜0.01；与甘草酸单铵注射液组相比较cp＜0.05，dp＜0.01；与甘草酸二铵注射液组相比较ep＜0.05，fp＜0.01。
试验结果 见表1-4。与正常对照组相比较，模型组的血清ALT、AST、TG水平均极显著升高(p＜0.01)，病理组织学检查发现肝组织明显受损，肝细胞脂肪性病变、空泡变性、凋亡等，说明造模成功。与模型组相比较，各给药组对小鼠慢性酒精性肝损伤均具有保护作用，能降低血清ALT、AST、TG水平，减轻肝组织病变；五味子注射液、甘草酸单铵注射液、甘草酸二铵注射液对小鼠慢性酒精性肝损伤具有显著的保护作用(p＜0.05)；各剂量RMWG3注射液和RMWG4注射液对小鼠慢性酒精性肝损伤具有极显著的保护作用(p＜0.01，p＜0.001)。
结论 试验结果表明，人参、麦冬、五味子、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药对小鼠慢性酒精性肝损伤具有显著的保护作用，并且保护作用与给药剂量相关，呈剂量依赖性；各剂量RMWG3注射液和RMWG4注射液对小鼠慢性酒精性肝损伤的保护作用均优于五味子注射液、甘草酸单铵注射液、甘草酸二铵注射液单独使用的效果。提示，人参、麦冬、五味子、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药具有协同作用，在抗酒精性肝损伤方面有显著作用。
试验例5 人参、麦冬、五味子、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药抗鸭乙型肝炎病毒的作用受试动物 1日龄北京鸭，雌雄兼用。
供试品 注射用阿昔洛韦(阳性对照组)0.25mg，湖北科益药业股份有限公司五味子注射液自制，2ml，含五味子提取物92mg(相当于原药材3g)甘草酸单铵注射液自制，5ml40mg甘草酸二铵注射液自制，10ml150mgRMWG3注射液自制，5ml256mg，含人参多糖34mg(相当于原药材3g)、麦冬提取物90mg(相当于原药材6g)、五味子提取物92mg(相当于原药材3g)、甘草酸单铵40mgRMWG4注射液自制，5ml366mg，含人参多糖34mg(相当于原药材3g)、麦冬提取物90mg(相当于原药材6g)、五味子提取物92mg(相当于原药材3g)、甘草酸二铵150mg给药剂量 见表1-5。
试验方法 1日龄北京鸭足静脉注射DHBV-DNA阳性血清，每只0.2ml，感染后7天取血，分离血清，-20℃保存待检。筛选出感染成功的阳性鸭66只，随机分为11组，每组6只，分别为模型组、阳性对照组和各给药组。感染后第13天开始，模型组每日静脉注射生理盐水20ml/kg，每日1次，连续2周；阳性对照组静脉注射注射用阿昔洛韦30mg/kg，每日1次，连续2周；各给药组按表1-5静脉注射给药，每日1次，连续2周。分别于给药前、给药第7天、给药第14天和停药后第3天，自鸭腿胫静脉抽血，分离血清，-20℃保存待检。用DHBV-DNA Dot Blot法检测上述鸭血清，以杂交斑点吸光度(OD)值作为标本DHBV-DNA水平值。
试验结果 见表1-5。与模型组相比较，各给药组对鸭DHBV病毒均有显著抑制作用(p＜0.05，p＜0.01，p＜0.001)。阳性对照注射用阿昔洛韦对鸭DHBV病毒有极显著的抑制作用(p＜0.001)，但是停药后DHBV水平又升高；五味子注射液、甘草酸单铵注射液、甘草酸二铵注射液对鸭DHBV病毒均有显著的抑制作用(p＜0.05)，但是停药后甘草酸单铵注射液、甘草酸二铵注射液给药组的DHBV水平又明显升高；低剂量RMWG3注射液和低剂量RMWG4注射液对鸭DHBV病毒均有显著的抑制作用(p＜0.05)，中、高剂量RMWG3注射液和RMWG4注射液有极显著的抑制作用(p＜0.01)，并且停药后DHBV水平无明显升高。
表1-5 人参、麦冬、五味子、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药对鸭DHBV-DNA的抑制作用(平均值±标准偏差，n＝6)
与模型组相比较*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001；与五味子注射液组相比较ap＜0.05，bp＜0.01；与甘草酸单铵注射液组相比较cp＜0.05，dp＜0.01；与甘草酸二铵注射液组相比较ep＜0.05，fp＜0.01。
结论 试验结果表明，人参、麦冬、五味子、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药对鸭DHBV病毒具有显著的抑制作用，并且抑制作用与给药剂量相关，呈剂量依赖性；各剂量RMWG3注射液和RMWG4注射液对鸭DHBV病毒的抑制作用均优于五味子注射液、甘草酸单铵注射液、甘草酸二铵注射液单独使用的效果。给药期间，高剂量组RMWG3注射液和RMWG4注射液对鸭DHBV病毒的抑制作用略低于阳性对照组注射用阿昔洛韦的效果，但是，停药后RMWG3注射液和RMWG4注射液的效果明显优于注射用阿昔洛韦的效果。提示，人参、麦冬、五味子、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药具有协同作用，在抗病毒性肝炎方面有显著作用，并且停药后无反跳现象。
试验例6 RMWG注射液稳定性试验供试品 RMWG1注射液自制，5ml264mg，含人参总皂苷42mg(相当于原药材3g)、麦冬提取物90mg(相当于原药材6g)、五味子提取物92mg(相当于原药材3g)、甘草酸单铵40mgRMWG2注射液自制，5ml374mg，含人参总皂苷42mg(相当于原药材3g)、麦冬提取物90mg(相当于原药材6g)、五味子提取物92mg(相当于原药材3g)、甘草酸二铵150mgRMWG3注射液自制，5ml256mg，含人参多糖34mg(相当于原药材3g)、麦冬提取物90mg(相当于原药材6g)、五味子提取物92mg(相当于原药材3g)、甘草酸单铵40mgRMWG4注射液自制，5ml366mg，含人参多糖34mg(相当于原药材3g)、麦冬提取物90mg(相当于原药材6g)、五味子提取物92mg(相当于原药材3g)、甘草酸二铵150mg考察项目 性状、pH值、澄明度、有关物质、标示含量。
长期试验 置温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置12个月。分别于第3个月、6个月、9个月、12个月，比较外观后，测试各项指标，将结果与0个月比较；12个月末增加无菌和热原检查。
试验结果 温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置12个月，各项指标均无明显变化；长期试验12个月末，热原、无菌检查均符合规定。
结论 上述考察结果表明，RMWG1注射液、RMWG2注射液、RMWG3注射液、RMWG4注射液的各项指标均比较稳定，可以长期储存，适应于工业大生产。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式
，对本发明的上述内容作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。以下实施例中各剂型的辅料可以用药学上可接受的辅料替换，或者减少、增加。
以下实施例中用RMWG1代替以人参总皂苷、五味子醇甲、甘草酸单铵为主要有效成分的药物组合物，用RMWG2代替以人参总皂苷、五味子醇甲、甘草酸二铵为主要有效成分的药物组合物，用RMWG3代替以人参多糖、五味子醇甲、甘草酸单铵为主要有效成分的药物组合物，用RMWG4代替以人参多糖、五味子醇甲、甘草酸二铵为主要有效成分的药物组合物。实施例5～11中所用的人参总皂苷为实施例1制备所得，所用的人参多糖为实施例2制备所得，所用的麦冬提取物为实施例3制备所得，所用的五味子提取物为实施例4制备所得。
实施例1 人参总皂苷的制备以及含量测定人参总皂苷的制备取人参药材，粉碎成细粒，加10倍量乙醇回流提取二次，每次3小时，合并提取液，冷藏，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏，加水至适量(使每1ml相当于原药材1g)，搅匀，冷藏，滤过，滤液加于已处理好的大孔树脂柱上，先用2倍～3倍柱体积的水进行洗脱，弃去水洗液，再用3倍柱体积的80％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇并减压浓缩至相对密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。
分别制备四批人参总皂苷，得率见表2-1。
人参总皂苷的鉴别取人参总皂苷0.5g，加水0.5ml搅拌润湿，加水饱和正丁醇10ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Re、Rg1对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点。
对上述四批人参总皂苷进行鉴别，均符合要求。
人参总皂苷的含量测定人参总皂苷含量测定对照品溶液制备 取人参皂甙Rg1对照品约10mg，经60℃真空干燥2小时，精密称定，置100ml量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得每1ml含Rg1对照品0.1mg的溶液，即得。
供试品溶液制备 精密称取人参总皂苷50mg，置50ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法 精密量取供试品溶液和对照品溶液各1ml，分别置10ml具塞试管中，在水浴上蒸干，放冷，加入5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml，再加入高氯酸0.8ml，于60℃保温15分钟，冷却至室温，加冰醋酸5ml，摇匀；同时作空白对照。分光光度法，在560nm波长处测定吸收度，计算，即得。
人参皂苷Re、人参皂苷Rg1含量测定色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(22∶78)为流动相；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Re峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rg1对照品、Re对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的混合溶液。
供试品溶液的制备 取人参总皂苷0.2g，精密称定，精密加入水饱和正丁醇30ml，密塞，放置过夜，超声处理(功率250W，频率50kHz)30分钟，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液15ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
测定法 分别精密吸取对照品和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
对上述四批人参总皂苷进行含量测定，结果见表2-1。
通过本工艺制备的人参总皂苷得率为1％～2％，总皂苷的含量不低于50％，人参皂苷Re、人参皂苷Rg1的总含量不低于30％。
表2-1 人参总皂苷的含量测定结果和得率
实施例2 人参多糖的制备以及含量测定人参多糖的制备取人参药材，切碎，用75％乙醇回流提取4小时，滤过，药渣晾干，加水煎煮五次，每次1小时，合并煎液，加入0.3％活性炭，搅拌30分钟，静置过夜，滤过，滤液过树脂柱，收集流出液，减压浓缩，加乙醇使含醇量达95％，冷藏，滤过，取沉淀用丙酮洗涤，抽干丙酮，取沉淀于60～80℃干燥，粉碎，即得。
分别制备四批人参多糖，得率见表2-2。
人参多糖的鉴别(1)取人参多糖约0.2g，加水5ml溶解后，加碱性酒石酸铜试液5滴，加热即产生红色沉淀，冷却，滤过，取滤液加盐酸l滴使成酸性，水浴加热10分钟，放冷，调节pH值至中性，加碱性酒石酸铜试液0.5ml，水浴加热即产生红色的氧化亚铜沉淀。
(2)取人参多糖约0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml摇匀，缓缓加入硫酸3ml，两液面交界处显紫红色环。
对上述四批人参多糖进行鉴别，均符合要求。
人参多糖的含量测定对照品溶液的制备 精密称取60℃真空干燥至恒重的半乳糖醛酸约100mg，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备 精密称取人参多糖50mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法 精密量取对照品溶液、供试品溶液及水各1ml，分别精密加入0.25mol/L硼砂硫酸溶液6ml，置水浴中加热30分钟，放冷，再分别精密加入0.125％咔唑无水乙醇溶液0.4ml，置水浴中加热10分钟，放冷至室温，分光光度法，在530nm波长处测定吸收度，计算，即得。
对上述四批人参多糖进行含量测定，结果见表2-2。
通过本工艺制备的人参多糖得率为0.5％～2％，多糖的含量不低于50％。
表2-2 人参多糖的含量测定结果和得率
实施例3 麦冬提取物的制备取麦冬药材，粉碎成细粒，加8倍量水煎煮二次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至稠膏状，加乙醇使含醇量达80％，冷藏放置24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏状，加乙醇使含醇量达85％，冷藏放置24小时，滤过，回收乙醇并浓缩至稠膏状，加水至适量(使每1ml相当于原药材2g)，搅匀，冷藏，滤过，滤液喷雾干燥，即得。
分别制备四批麦冬提取物，得率见表2-3。
通过本工艺制备的麦冬提取物得率为1～2％。
表2-3 麦冬提取物的得率
实施例4 五味子提取物的制备以及含量测定五味子提取物的制备取五味子药材，粉碎成粗粉，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15，加乙醇使含醇量达60％，冷藏放置24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.10～1.15，再加乙醇使含醇量达80％，冷藏放置24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.30～1.35，真空干燥，即得。
分别制备四批五味子提取物，得率见表2-4。
五味子提取物的鉴别取本品1g，加三氯甲烷20ml，加热回流20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
对上述四批五味子提取物进行鉴别，均符合要求。
五味子提取物的含量测定五味子醇甲的含量测定色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(13∶7)为流动相；检测波长为250nm。理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备 取五味子醇甲对照品15mg，精密称定，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含五味子醇甲0.3mg)。
供试品溶液的制备 取本品约0.1g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇约20ml，超声处理(功率250W，频率44kHz)20分钟，取出，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
醚溶性浸出物的含量测定取本品4g，粉碎，过四号筛，置五氧化二磷干燥器中干燥12小时，置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流8小时，取乙醚液，置干燥至恒重的蒸发皿中，放置，挥去乙醚，残渣置五氧化二磷干燥器中干燥18小时，精密称定，缓缓加热至105℃，并于105℃干燥至恒重。其减失重量即为挥发性醚浸出物的重量。计算醚浸出物含量。
对上述四批五味子提取物进行含量测定，结果见表2-4。
通过本工艺制备的五味子提取物得率为2～4％，五味子醇甲的含量不低于10％，醚溶性浸出物的含量不低于30％。
表2-4 五味子提取物的含量测定结果和得率
实施例5 RMWG注射液的制备1、处方RMWG1注射液处方人参总皂苷 42g(相当于原药材3kg)麦冬提取物 90g(相当于原药材6kg)五味子提取物 92g(相当于原药材3kg)甘草酸单铵 40g盐酸半胱氨酸 30g甘氨酸 400g聚山梨酯-80 20g注射用水 加至5000ml共制备 1000支RMWG2注射液处方人参总皂苷 42g(相当于原药材3kg)麦冬提取物 90g(相当于原药材6kg)五味子提取物 92g(相当于原药材3kg)甘草酸二铵 150g注射用水 加至5000ml共制备 1000支
RMWG3注射液处方人参多糖 34g(相当于原药材3kg)麦冬提取物 90g(相当于原药材6kg)五味子提取物 92g(相当于原药材3kg)甘草酸单铵 40g盐酸半胱氨酸 30g甘氨酸 400g聚山梨酯-80 20g注射用水 加至5000ml共制备 1000支RMWG4注射液处方人参多糖 34g(相当于原药材3kg)麦冬提取物 90g(相当于原药材6kg)五味子提取物 92g(相当于原药材3kg)甘草酸二铵 150g注射用水 加至5000ml共制备 1000支2、具体步骤(1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗；(2)取配液量80％的注射用水，加入聚山梨酯-80搅拌溶解，然后加入处方量的人参总皂苷或者人参多糖、麦冬提取物、五味子提取物和甘草酸单铵、盐酸半胱氨酸、甘氨酸，加热搅拌溶解完全，补加注射用水至全量；或者取配液量80％的注射用水，加入聚山梨酯-80搅拌溶解，然后加入处方量的人参总皂苷或者人参多糖、当麦冬提取物、五味子提取物和甘草酸二铵，加热搅拌溶解完全，补加注射用水至全量；(3)加入配液量0.1％的针剂用活性炭，加热搅拌15分钟；(4)经砂滤棒过滤脱炭，测定并调节溶液的pH值；(5)经0.45μm的微孔滤膜精滤；(6)检查溶液的澄明度，半成品化验；(7)将溶液灌装、熔封于玻璃安瓿中；(8)100℃流通蒸汽灭菌30分钟；(9)趁热将样品放入0.01％的亚甲蓝溶液中检漏；(10)灯检，成品全检，包装入库。
实施例6 注射用RMWG的制备1、处方注射用RMWG1处方人参总皂苷 42g(相当于原药材3kg)麦冬提取物 90g(相当于原药材6kg)五味子提取物 92g(相当于原药材3kg)甘草酸单铵 40g盐酸半胱氨酸 30g甘氨酸 400g聚山梨酯-80 20g甘露醇 200g无菌注射用水 加至3000ml共制备 1000支注射用RMWG2处方人参总皂苷 42g(相当于原药材3kg)麦冬提取物 90g(相当于原药材6kg)五味子提取物 92g(相当于原药材3kg)甘草酸二铵 150g甘露醇 200g无菌注射用水 加至3000ml共制备 1000支注射用RMWG3处方人参多糖 34g(相当于原药材3kg)麦冬提取物 90g(相当于原药材6kg)五味子提取物 92g(相当于原药材3kg)甘草酸单铵 40g盐酸半胱氨酸 30g甘氨酸 400g聚山梨酯-80 20g甘露醇 200g无菌注射用水 加至3000ml共制备 1000支注射用RMWG4处方人参多糖 34g(相当于原药材3kg)麦冬提取物 90g(相当于原药材6kg)五味子提取物 92g(相当于原药材3kg)甘草酸二铵 150g甘露醇 200g无菌注射用水 加至3000ml共制备 1000支2、具体步骤(1)首先将配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，胶塞等进行无菌处理；
(2)按照处方量称取原料和辅料；(3)取配液量80％的无菌注射用水，加入聚山梨酯-80搅拌溶解，然后加入人参总皂苷或者人参多糖、麦冬提取物、五味子提取物和甘草酸单铵、盐酸半胱氨酸、甘氨酸，加热搅拌溶解完全，再加入甘露醇加热搅拌溶解完全，补加无菌注射用水至全量；或者取配液量80％的无菌注射用水，加入聚山梨酯-80搅拌溶解，然后加入人参总皂苷或者人参多糖、麦冬提取物、五味子提取物和甘草酸二铵，加热搅拌溶解完全，再加入甘露醇加热搅拌溶解完全，补加无菌注射用水至全量；(4)加入配液量0.1％的针剂用活性炭，加热搅拌15分钟；(5)经砂滤棒过滤脱炭，测定并调节溶液的pH值；(6)经0.22μm的微孔滤膜精滤；(7)检查溶液的澄明度，半成品化验；(8)分装于抗生素玻璃瓶中，半压塞；将样品放入冻干机中冷冻干燥；-40℃预冻4小时，低温真空干燥-40℃～0℃18小时，然后升温至20℃真空干燥4小时；(9)冻干结束，压塞，轧盖；(10)成品全检，包装入库。
实施例7 RMWG氯化钠注射液的制备1、处方RMWG1氯化钠注射液处方人参总皂苷 42g(相当于原药材3kg)麦冬提取物 90g(相当于原药材6kg)五味子提取物 92g(相当于原药材3kg)甘草酸单铵 40g盐酸半胱氨酸 30g甘氨酸 400g聚山梨酯-80 20g氯化钠 900g注射用水 加至100000ml共制备 1000瓶RMWG2氯化钠注射液处方人参总皂苷 42g(相当于原药材3kg)麦冬提取物 90g(相当于原药材6kg)五味子提取物 92g(相当于原药材3kg)甘草酸二铵 150g氯化钠 900g注射用水 加至100000ml共制备 1000瓶
RMWG3氯化钠注射液处方人参多糖 34g(相当于原药材3kg)麦冬提取物 90g(相当于原药材6kg)五味子提取物 92g(相当于原药材3kg)甘草酸单铵 40g盐酸半胱氨酸 30g甘氨酸 400g聚山梨酯-80 20g氯化钠 900g注射用水 加至100000ml共制备 1000瓶RMWG4氯化钠注射液处方人参多糖 34g(相当于原药材3kg)麦冬提取物 90g(相当于原药材6kg)五味子提取物 92g(相当于原药材3kg)甘草酸二铵 150g氯化钠 900g注射用水 加至100000ml共制备 1000瓶2、具体步骤(1)前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗；(2)取配液量20％的注射用水，加入聚山梨酯-80搅拌溶解，然后加入人参总皂苷或者人参多糖、麦冬提取物、五味子提取物和甘草酸单铵、盐酸半胱氨酸、甘氨酸，加热搅拌溶解完全；将氯化钠用配液量40％的注射用水溶解完全；或者取配液量20％的注射用水，加入聚山梨酯-80搅拌溶解，然后加入人参总皂苷或者人参多糖、麦冬提取物、五味子提取物和甘草酸二铵，加热搅拌溶解完全；将氯化钠用配液量40％的注射用水溶解完全；(3)合并上述溶液，补加注射用水至全量；(4)加入配液量0.1％的针剂用活性炭，加热搅拌15分钟；(5)经砂滤棒过滤脱炭，测定并调节溶液的pH值；(6)经0.45μm的微孔滤膜精滤；(7)检查溶液的澄明度，半成品化验；(8)灌装于100ml的输液瓶中；(9)115℃热压灭菌30分钟；(10)灯检，成品全检，包装入库。
实施例8 RMWG葡萄糖注射液的制备1、处方RMWG1葡萄糖注射液处方人参总皂苷 42g(相当于原药材3kg)麦冬提取物 90g(相当于原药材6kg)五味子提取物 92g(相当于原药材3kg)甘草酸单铵 40g盐酸半胱氨酸 30g甘氨酸 400g聚山梨酯-80 20g葡萄糖 5000g注射用水 加至100000ml共制备 1000瓶RMWG2葡萄糖注射液处方人参总皂苷 42g(相当于原药材3kg)麦冬提取物 90g(相当于原药材6kg)五味子提取物 92g(相当于原药材3kg)甘草酸二铵 150g葡萄糖 5000g注射用水 加至100000ml共制备 1000瓶RMWG3葡萄糖注射液处方人参多糖 34g(相当于原药材3kg)麦冬提取物 90g(相当于原药材6kg)五味子提取物 92g(相当于原药材3kg)甘草酸单铵 40g盐酸半胱氨酸 30g甘氨酸 400g聚山梨酯-80 20g葡萄糖 5000g注射用水 加至100000ml共制备 1000瓶RMWG4葡萄糖注射液处方人参多糖 34g(相当于原药材3kg)麦冬提取物 90g(相当于原药材6kg)五味子提取物 92g(相当于原药材3kg)甘草酸二铵 150g葡萄糖 5000g注射用水 加至100000ml共制备 1000瓶2、具体步骤(1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗；
(2)取配液量20％的注射用水，加入聚山梨酯-80搅拌溶解，然后加入人参总皂苷或者人参多糖、麦冬提取物、五味子提取物和甘草酸单铵、盐酸半胱氨酸、甘氨酸，加热搅拌溶解完全；将葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全；或者取配液量20％的注射用水，加入聚山梨酯-80搅拌溶解，然后加入人参总皂苷或者人参多糖、麦冬提取物、五味子提取物和甘草酸二铵，加热搅拌溶解完全；将葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全；(3)合并上述溶液，补加注射用水至全量；(4)加入配液量0.1％的针剂用活性炭，加热搅拌15分钟；(5)经砂滤棒过滤脱炭，测定并调节溶液的pH值；(6)经0.45μm的微孔滤膜精滤；(7)检查溶液的澄明度，半成品化验；(8)灌装于100ml的输液瓶中；(9)115℃热压灭菌30分钟；(10)灯检，成品全检，包装入库。
实施例9 RMWG片的制备1、处方RMWG1片处方人参总皂苷 21g(相当于原药材1.5kg)麦冬提取物 45g(相当于原药材3kg)五味子提取物 46g(相当于原药材1.5kg)甘草酸单铵 20g蛋氨酸 20g甘氨酸 20g淀粉 60.0g预胶化淀粉 50.0g微晶纤维素 50.0g2％HPMC50％乙醇溶液 适量硬脂酸镁 2.0g羧甲淀粉钠 20.0g共制备 1000片
RMWG3片处方人参多糖 17g(相当于原药材1.5kg)麦冬提取物 45g(相当于原药材3kg)五味子提取物 46g(相当于原药材1.5kg)甘草酸单铵 20g蛋氨酸 20g甘氨酸 20g淀粉 60.0g预胶化淀粉 50.0g微晶纤维素 50.0g2％HPMC50％乙醇溶液 适量硬脂酸镁 1.0g羧甲淀粉钠 20.0g共制备 1000片2、具体步骤(1)将人参总皂苷或者人参多糖、麦冬提取物、五味子提取物和甘草酸单铵粉碎过100目筛备用；(2)按照处方量称取原料和辅料；(3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用；(4)将人参总皂苷或者人参多糖、麦冬提取物、五味子提取物和甘草酸单铵、蛋氨酸、甘氨酸、淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材；(5)过20目筛制颗粒；颗粒在60℃的条件下烘干；(6)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁和羧甲淀粉钠，过18目筛整粒，混合均匀；(7)取样，半成品化验；(8)按照化验确定的片重压片；(9)成品全检，包装入库。
实施例10 RMWG胶囊的制备1、处方RMWG2胶囊处方人参总皂苷 21g(相当于原药材1.5kg)麦冬提取物 45g(相当于原药材3kg)五味子提取物 46g(相当于原药材1.5kg)甘草酸二铵 75g淀粉 40.0g预胶化淀粉 40.0g微晶纤维素 40.0g2％HPMC50％乙醇溶液 适量硬脂酸镁 2.0g共制备 1000粒
RMWG4胶囊处方人参多糖 17g(相当于原药材1.5kg)麦冬提取物 45g(相当于原药材3kg)五味子提取物 46g(相当于原药材1.5kg)甘草酸二铵 75g淀粉 40.0g预胶化淀粉 40.0g微晶纤维素 40.0g2％HPMC50％醇溶液 适量硬脂酸镁 2.0g共制备 1000粒2、具体步骤(1)将人参总皂苷或者人参多糖、麦冬提取物、五味子提取物和甘草酸二铵粉碎过100目筛备用；(2)按照处方量称取原料和辅料；(3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用；(4)将人参总皂苷或者人参多糖、麦冬提取物、五味子提取物和甘草酸二铵、淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材；(5)过20目筛制颗粒；(6)颗粒在60℃的条件下烘干；(7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁，过18目筛整粒，混合均匀；(8)取样，半成品化验；(9)按照化验确定的装量装入胶囊；(10)成品全检，包装入库。
实施例11 RMWG颗粒的制备1、处方RMWG1颗粒处方人参总皂苷 42g(相当于原药材3kg)麦冬提取物 90g(相当于原药材6kg)五味子提取物 92g(相当于原药材3kg)甘草酸单铵 40g蛋氨酸 40g甘氨酸 40g糖粉 1150.0g矫味剂 适量2％HPMC50％乙醇溶液 适量共制备 1000包
RMWG2颗粒处方人参总皂苷 42g(相当于原药材3kg)麦冬提取物 90g(相当于原药材6kg)五味子提取物 92g(相当于原药材3kg)甘草酸二铵 150g糖粉 1150.0g矫味剂 适量2％HPMC50％乙醇溶液 适量共制备 1000包RMWG3颗粒处方人参多糖 34g(相当于原药材3kg)麦冬提取物 90g(相当于原药材6kg)五味子提取物 92g(相当于原药材3kg)甘草酸单铵 40g蛋氨酸 40g甘氨酸 40g糖粉 1150.0g矫味剂 适量2％HPMC50％乙醇溶液 适量共制备 1000包RMWG4颗粒处方人参多糖 34g(相当于原药材3kg)麦冬提取物 90g(相当于原药材6kg)五味子提取物 92g(相当于原药材3kg)甘草酸二铵 150g糖粉 1150.0g矫味剂 适量2％HPMC50％乙醇溶液 适量共制备 1000包2、具体步骤(1)将蔗糖粉碎过100目筛备用，人参总皂苷或者人参多糖、麦冬提取物、五味子提取物和甘草酸单铵或者甘草酸二铵粉碎过100目筛备用；(2)按照处方量称取原料和辅料；(3)将人参总皂苷或者人参多糖、麦冬提取物、五味子提取物和甘草酸单铵、蛋氨酸。甘氨酸与糖粉、矫味剂以等量递加的方法混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材；或者将人参总皂苷或者人参多糖、麦冬提取物、五味子提取物和甘草酸二铵与糖粉、矫味剂以等量递加的方法混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材；(4)过20目筛制颗粒；(5)颗粒在60℃的条件下烘干；
(6)干颗粒过18目筛整粒；(7)取样，半成品化验颗粒中主药的含量，确定装量；(8)包装；成品全检，包装入库。
权利要求
1.一种药物组合物，其特征在于，该组合物主要由下列重量份的原料药制成人参50～1000份、麦冬100～1500份、五味子50～1000份、甘草酸或其药学上可接受的盐1～50份。
2.如权利要求
1所述的药物组合物，其特征在于，各原料药的重量份数为人参100～500份、麦冬200～1000份、五味子100～500份、甘草酸或其药学上可接受的盐2～30份。
3.如权利要求
2所述的药物组合物，其特征在于，各原料药的重量份数为人参300份、麦冬600份、五味子300份、甘草酸或其药学上可接受的盐4～15份。
4.如权利要求
1～3所述的任一药物组合物的制备方法，其特征在于，所述的人参、麦冬、五味子可以用适宜的溶剂和方法单独或混合提取加工得到提取物，总提取物再与甘草酸或其药学上可接受的盐和药学上可接受的辅料混合加工制成任一临床上或药学上可接受的剂型。
5.如权利要求
4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，所述的总提取物中所含的主要有效成分为总皂苷、五味子醇甲，或者为总多糖、五味子醇甲，总提取物中所含的主要有效成分的总含量不低于20％。
6.如权利要求
1所述的药物组合物，其特征在于，该组合物还可由下列原料药制成人参总皂苷或者人参多糖、麦冬提取物、五味子提取物和甘草酸或其药学上可接受的盐，其重量份数为人参总皂苷0.5～10份、麦冬提取物1.5～22.5份、五味子提取物1.5～30份、甘草酸或其药学上可接受的盐1～50份，或者为人参多糖0.5～10份、麦冬提取物1.5～22.5份、五味子提取物1.5～30份、甘草酸或其药学上可接受的盐1～50份。
7.如权利要求
6所述的药物组合物，其特在于，各原料药的重量份数为人参总皂苷1～5份、麦冬提取物3～15份、五味子提取物3～15份、甘草酸或其药学上可接受的盐2～30份，或者为人参多糖1～5份、麦冬提取物3～15份、五味子提取物3～15份、甘草酸或其药学上可接受的盐2～30份。
8.如权利要求
6、7所述的任一药物组合物，其特征在于，所述的人参总皂苷中总皂苷的含量不低于35％、人参皂苷Re、Rg1的总含量不低于20％，人参多糖中多糖的含量不低于30％，五味子提取物中五味子醇甲的含量不低于5％，醚溶性浸出物的含量不低于20％。
9.如权利要求
1、2、3、6、7所述的任一药物组合物，其特征在于，所述的甘草酸药学上可接受的盐为甘草酸单铵或甘草酸二铵。
10.如权利要求
1、2、3、6、7所述的任一药物组合物，其特征在于，该组合物可与药学上可接受的辅料混合制成任一临床上或药学上可接受的剂型。
专利摘要
本发明属于医药技术领域：
，公开了一种新的抗肝脏疾病的药物组合物及其制备方法，人参50～1000份、麦冬100～1500份、五味子50～1000份、甘草酸或其药学上可接受的盐1～50份制成。也可以由人参总皂苷或者人参多糖0.5～10份、麦冬提取物1.5～22.5份、五味子提取物1.5～30份、甘草酸或其药学上可接受的盐1～50份制成。可制成任一临床上或药学上可接受的剂型，优选为口服制剂和注射剂。本发明药物组合物有效成分明确，含量确切，共同发挥抗病毒性肝炎、药物性肝损伤、脂肪肝、酒精肝等功效，效果显著，主要用于制备抗肝脏疾病的药物。制备工艺简便，制剂质量高且稳定，适应于工业化大生产。
文档编号A61K31/7028GK1990029SQ200510131122
公开日2007年7月4日 申请日期2005年12月26日
发明者黄振华 申请人:黄振华导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan