专利名称:注射用盐酸伊立替康脂质体的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种脂质体的制备方法，具体涉及一种注射用盐酸伊立替康脂质体的制备方法。
背景技术：
盐酸伊立替康是喜树碱的半合成衍生物。喜树碱可特异性地与拓扑异构酶I结合，后者诱导可逆性单链断裂，从而使DNA双链结构解旋；伊立替康代谢物SN-38可与拓扑异构酶I-DNA复合物结合，从而阻止断裂单链的再连接。现有研究提示，伊立替康的细胞毒作用归因于DNA合成过程中，复制酶与拓扑异构酶I-DNA一SN-38三联复合物相互作用，从而引起DNA双链断裂。哺乳动物细胞不能有效地修复这种DNA双链断裂。由此达到杀灭肿瘤细胞的目的。
伊立替康可以溶于水，但是其代谢物盐酸伊立替康才为其活性成分，而在代谢过程中可以产生严重的不良反应，比如迟发性腹泻，恶心，呕吐，并且可以导致中性粒细胞减少，呼吸困难、肌肉收缩、痉挛及感觉异常等，这些不良反应严重的影响了临床使用。
发明内容本发明的目的是为克服背景技术的不足，而提供一种提高盐酸伊立替康疗效并降低其毒副作用的注射用盐酸伊立替康脂质体的制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是一种注射用盐酸伊立替康脂质体的制备方法，其特征在于该方法通过将脂质混合物溶解于有机溶剂中，至溶液澄清透明，得脂质溶液，脂质溶液与缓冲液按照1∶1～8体积比在梯度泵中混合，混合后的空白脂质体通过均质机均质或铺有聚碳酸脂膜的挤压器挤压统一粒径，流出的脂质体混合溶液立即通过超滤器超滤，除去有机溶剂，中间不断补充缓冲液，得到空白脂质体，加入盐酸伊立替康溶液，并用脂质体pH调节剂调节pH值至碱性，制成载药脂质体；或者将脂质混合物及盐酸伊立替康溶解于有机溶剂中，通过喷雾干燥或真空干燥除去有机溶剂，使脂质成膜，通过加入含盐酸伊立替康的水合溶液水合形成载药脂质体。
所述盐酸伊立替康用量与空白脂质体摩尔数比为0.001～1∶1；所述有机溶剂为氯仿、甲醇、乙醇、叔丁醇、异丙醇和正丁醇中的单一溶剂，或其中的两种或两种以上溶剂制成的混合溶剂；所述缓冲液为pH值在3.3～8之间的柠檬酸缓冲液，或pH值在3.3～13之间的酒石酸缓冲液，或其它pH值在2.5～10之间的有机酸缓冲液；所述聚碳酸脂膜的孔径为20～400nm，层数1～10层；所述脂质混合物中含有以下摩尔百分比的原料磷脂酰胆碱20～80％；鞘磷脂0～30％；心肌磷脂0～30％；胆固醇20～80％；聚乙二醇衍生物0～10％；所述磷脂酰胆碱是蛋黄磷脂酰胆碱、大豆磷脂酰胆碱或氢化大豆磷脂酰胆碱；聚乙二醇衍生物为HSPE-S-mPEG2000或DSPE-PEG2000；所述脂质体pH调节剂是Na2CO3溶液、NaOH溶液、NH4Cl溶液、NaHCO3溶液或Ca(OH)2溶液；所述调节pH值至碱性指的pH范围为7.5～3.5。
梯度泵用于按比例混合脂质溶液与缓冲液制备空白脂质体，挤压器用于控制空白脂质体的粒径，超滤器用于除去空白脂质体中的有机溶剂并将脂质体浓缩到合适的浓度。
本发明通过现代脂质体技术制备的注射用盐酸伊立替康脂质体，该脂质体是由磷脂酰胆碱、鞘磷脂、胆固醇和聚乙二醇衍生物等脂质与盐酸伊立替康形成的脂质复合物，该复合物可以改变伊立替康在活体内的药代动力学，从而改变其作用效果及毒性特征。
本发明与现有技术相比具有以下优点本发明所采用的方法将盐酸伊立替康包封在脂质体小囊内，避免了盐酸伊立替康在代谢过程中产生严重的不良反应，提高了盐酸伊立替康的疗效并降低了其毒副作用；根据本工艺生产的注射用盐酸伊立替康脂质体，粒径在50～200nm之间，包封率达95％以上，性质稳定，疗效确切，使用安全可靠，适于工业化生产。
具体实施方式以下结合实施例对本发明作进一步的详细描述。
实施例1实验室小试(1)薄膜法制备盐酸伊立替康脂质体处方蛋黄磷脂酰胆碱 2.12g(2.789473684mmol)心肌磷脂 12.00g(15mmol)胆固醇 5.88g(15.23316062mmol)氯仿 13.00mL200mL制备方法将蛋黄磷脂酰胆碱、心肌磷脂、胆固醇和盐酸伊立替康溶于有机溶剂氯仿中至溶液澄清透明，旋转蒸发仪抽真空除去有机溶剂氯仿并使脂质成膜，盐酸伊立替康1.5g的蔗糖溶液200mL水合，分别过400nm、200nm、100nm膜统一粒径，制得载药脂质体，冻干贮存于2～4℃。
实施例2pH梯度法制备(1)空白脂质体的制备处方磷脂酰胆碱 10.605g(13.95394737mmol)胆固醇 4.395g(11.38601036mmol)乙醇 24.75mL叔丁醇 24.75mL柠檬酸缓冲液 适量150mL制备方法将磷脂酰胆碱和胆固醇溶于乙醇和叔丁醇1∶1(v/v)的混合溶剂中至溶液澄清透明。脂质溶液与柠檬酸缓冲液按照1∶4的体积比在梯度泵中混合制备前体脂质体。梯度泵与挤压器相连，挤压器中铺5张100nm的聚碳酸脂膜。混合后的前体脂质体通过挤压器挤压统一粒径，流出的脂质体混合溶液立即通过超滤器超滤，中间不断补充柠檬酸缓冲液(pH＝4.0)750mL，然后浓缩脂质体至目标浓度(100mg膜材/mL)，即得空白脂质体。
(2)碱注射液的制备称取碳酸钠10.5g，加注射用水225mL溶解，过滤除菌即得碱注射液。
(3)载药将6g盐酸伊立替康溶于300mL含10％(Wt/Wt)蔗糖的水或0.01mol/L的稀盐酸中，加入(1)步制备的空白脂质体中，加入(2)步制备的碱溶液并将pH值调至7.5，搅拌混匀，静置20min，除菌，分装，即得。
实施例3放大生产工艺(1)空白脂质体的制备处方心肌磷脂 211.8g(278.6842105mmol)胆固醇 88.2g(228.4974093mmol)乙醇 495mL叔丁醇 495mL柠檬酸缓冲液 3000mL3000mL制备方法将心肌磷脂和胆固醇溶于乙醇和叔丁醇1∶1(v/v)的混合溶剂中至溶液澄清透明。脂质溶液与柠檬酸缓冲液按照1∶4的体积比在梯度泵中混合制备前体脂质体。梯度泵与挤压器相连，挤压器中铺5张100nm的聚碳酸脂膜。混合后的前体脂质体通过挤压器挤压统一粒径，流出的脂质体混合溶液立即通过超滤器超滤，中间不断补充柠檬酸缓冲液(pH＝4.0)15L，然后浓缩脂质体至目标浓度(100mg膜材/mL)，即得空白脂质体。
(2)碱注射液的制备称取碳酸钠84g，加注射用水1800mL溶解，过滤除菌即得碱注射液。
(3)载药将24g盐酸伊立替康溶于1200mL含10％(Wt/Wt)蔗糖的水或0.01mol/L的稀盐酸中，加入(1)步制备的空白脂质体中，加入(2)步制备的碱溶液将pH值调至7.5，搅拌混匀，静置20min，除菌，加支撑剂蔗糖，分装，冻干，即得。
实施例4pH梯度法制备长循环脂质体
(1)空白脂质体的制备处方磷脂酰胆碱 8.773g(11.543421.5mmol)胆固醇 3.232g(8.373056995mmol)HSPE-S-mPEG20002.995g(1.047202797mmol)乙醇 24.75mL叔丁醇 24.75mL0.1mol/L的NaOH溶液 适量150mL制备方法将磷脂酰胆碱、胆固醇和HSPE-S-mPEG2000溶于乙醇和叔丁醇1∶1(v/v)的混合溶剂中至溶液澄清透明。脂质溶液与柠檬酸缓冲液按照1∶4的体积比在梯度泵中混合制备前体脂质体。梯度泵与挤压器相连，挤压器中铺5张100nm的聚碳酸脂膜。混合后的前体脂质体通过挤压器挤压统一粒径，流出的脂质体混合溶液立即通过超滤器超滤，中间不断补充柠檬酸缓冲液750mL，然后浓缩脂质体至目标浓度(100mg膜材/mL)，即得空白脂质体。
(2)碱注射液的制备称取碳酸钠10.5g，加注射用水225mL溶解，过滤除菌即得碱注射液。
(3)载药将6g盐酸伊立替康溶于600mL含10％(Wt/Wt)蔗糖的水或0.01mol/L的稀盐酸中，加入(1)步制备的空白脂质体中，加入(2)步制备的碱溶液将pH值调至7.5，搅拌混匀，静置20min，除菌，分装，即得。
实施例5pH梯度法制备长循环脂质体(1)空白脂质体的制备处方磷脂酰胆碱 10.605g(13.95394737mmol)胆固醇 3.232g(8.373056995mmol)DSPE-PEG20002.995g(1.047202797mmol)乙醇 24.75mL
叔丁醇 24.75mL0.1mol/L的MaOH溶液 适量150mL制备方法将磷脂酰胆碱、胆固醇和DSPE-PEG2000溶于乙醇和叔丁醇1∶1(v/v)的混合溶剂中至溶液澄清透明。脂质溶液与柠檬酸缓冲液按照1∶4的体积比在梯度泵中混合制备前体脂质体。梯度泵与挤压器相连，挤压器中铺5张100nm的聚碳酸脂膜。混合后的前体脂质体通过挤压器挤压统一粒径，流出的脂质体混合溶液立即通过超滤器超滤，中间不断补充柠檬酸缓冲液750mL，然后浓缩脂质体至目标浓度(100mg膜材/mL)，即得空白脂质体。
(2)碱注射液的制备称取碳酸钠10.5g，加注射用水225mL溶解，过滤除菌即得碱注射液。
(3)载药将6g盐酸伊立替康溶于600mL含10％(Wt/Wt)蔗糖的水或0.01mol/L的稀盐酸中，加入(1)步制备的空白脂质体中，加入(2)步制备的碱溶液将pH值调至7.5，搅拌混匀，静置20min，除菌，分装，即得。
上述实施例的原辅料配比、有机溶剂种类及比例、工艺过程等没有一一列举，经申请人的实践证明所提供的制作工艺、原辅料及其配比、有机溶剂选择及配比、缓冲液选择及配比等均包含在权利要求
中。
根据本工艺生产的盐酸伊立替康脂质体，包封率达95％以上，性质稳定，疗效确切，使用安全可靠，适于工业化生产。
名词解释HSPE-PEG2000表示其平均分子量为2000的聚乙二醇-氢化大豆磷脂酰乙醇胺；DSPE-PEG2000表示其平均分子量为2000的聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺。
权利要求
1.一种注射用盐酸伊立替康脂质体的制备方法，其特征在于该方法通过将脂质混合物溶解于有机溶剂中，至溶液澄清透明，得脂质溶液，脂质溶液与缓冲液按照1∶1～8体积比在梯度泵中混合，混合后的空白脂质体通过均质机均质或铺有聚碳酸脂膜的挤压器挤压统一粒径，流出的脂质体混合溶液立即通过超滤器超滤，除去有机溶剂，中间不断补充缓冲液，得到空白脂质体，加入盐酸伊立替康溶液，并用脂质体pH调节剂调节pH值至碱性，制成载药脂质体；或者将脂质混合物及盐酸伊立替康溶解于有机溶剂中，通过喷雾干燥或真空干燥除去有机溶剂，使脂质成膜，通过加入含盐酸伊立替康的水合溶液水合形成载药脂质体。
2.根据权利要求
1所述的注射用盐酸伊立替康脂质体的制备方法，其特征在于所述盐酸伊立替康用量与空白脂质体摩尔数比为0.001～1∶1。
3.根据权利要求
1所述的注射用盐酸伊立替康脂质体的制备方法，其特征在于所述有机溶剂为氯仿、甲醇、乙醇、叔丁醇、异丙醇和正丁醇中的单一溶剂，或其中的两种或两种以上溶剂制成的混合溶剂。
4.根据权利要求
1所述的注射用盐酸伊立替康脂质体的制备方法，其特征在于所述缓冲液为pH值在3.3～8之间的柠檬酸缓冲液，或pH值在3.3～13之间的酒石酸缓冲液，或其它pH值在2.5～10之间的有机酸缓冲液。
5.根据权利要求
1所述的注射用盐酸伊立替康脂质体的制备方法，其特征在于所述聚碳酸脂膜的孔径为20～400nm，层数1～10层。
6.根据权利要求
1所述的注射用盐酸伊立替康脂质体的制备方法，其特征在于所述脂质混合物中含有以下摩尔百分比的原料磷脂酰胆碱20～80％；鞘磷脂0～30％；心肌磷脂0～60％；胆固醇20～80％；聚乙二醇衍生物0～10％。
7.根据权利要求
6所述的注射用盐酸伊立替康脂质体的制备方法，其特征在于所述聚乙二醇衍生物为HSPE-S-mPEG2000或DSPE-PEG2000。
8.根据权利要求
6所述的注射用盐酸伊立替康脂质体的制备方法，其特征在于所述磷脂酰胆碱是蛋黄磷脂酰胆碱、大豆磷脂酰胆碱或氢化大豆磷脂酰胆碱。
9.根据权利要求
1所述的注射用盐酸伊立替康脂质体的制备方法，其特征在于所述脂质体pH调节剂是Na2CO3溶液、NaOH溶液、NH4Cl溶液、NaHCO3溶液或Ca(OH)2溶液。
10.根据权利要求
1所述的注射用盐酸伊立替康脂质体的制备方法，其特征在于所述调节pH值至碱性指的pH范围为7.5～3.5。
专利摘要
本发明公开了一种注射用盐酸伊立替康脂质体的制备方法，该方法通过将一定摩尔比的脂质混合物溶解于有机溶剂中，脂质溶液与缓冲液按照一定体积比混合，通过聚碳酸脂膜挤压统一粒径，并通过超滤除去有机溶剂，得到空白脂质体，加入盐酸伊立替康溶液，并用pH调节剂调节pH值至碱性，制成载药脂质体；或者将一定摩尔比的磷脂、胆固醇等脂质及盐酸伊立替康溶解于有机溶剂中，通过喷雾干燥、真空干燥或其他方法除去有机溶剂，使脂质成膜，通过加入含药物的水合溶液水合形成载药脂质体。根据本发明生产的注射用盐酸伊立替康脂质体，粒径在50～200nm之间，包封率达95％以上，性质稳定，疗效确切，使用安全可靠，适于工业化生产。
文档编号A61K31/4738GK1994279SQ200610105371
公开日2007年7月11日 申请日期2006年12月31日
发明者佐建锋, 王九成, 黄馨惠, 傅经国, 魏春龙, 胡忍乐 申请人:西安力邦医药科技有限责任公司导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan