专利名称：含有一种酚化合物和蜂胶的治疗组合物，用作抗脂包膜病毒，特别是抗疱疹病毒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种新型治疗组合物，它含有一种酚成分和蜂胶。这种组合物用作抗病毒制剂，通常是抗脂包膜病毒(缩写为LCV′S)，尤其对疱诊病毒以及LCV属组成部分的类似物。
已经知道，鉴于酚类具有抑制细菌和霉菌作用的特性，治疗学上早已将它们推荐为抗感染制剂。
所说这些酚类，尤其可从下列文献中了解到法国专利FR-B-2507891，W.Snipes等人的文章(Sciences，187，pp64-65，1975)和同一作者的“Hydrophobic Alcohols and Di-tert-butyl Phenols as Antiviral Agents”，并已发表著作“Symposium on the Pharmacological Effects of Lipids”中pp63-73，(The American Oil Chemists′ Society，Champaign，Illinois，1978)。已知下面所说的通式Ⅰ中的BHT′S，即4-烷基-2，6-二叔丁基苯酚，其4位上的烷基带有一个包含1-12个碳原子的直烃链，BHT′S对LCV′S特别是疱疹病毒有抑制和/或杀病毒效应。按照上面所引用的W.Snipes等人的第二篇文章，BHT的抗疱疹病毒活性取决于其4-烷基基团的性质，而且，4位上带一个正丁基基团的BHT实际上是抗HSV2的唯一活性物质。
进一步了解到，蜂胶是一种从蜂房得到的粘胶状物质，更确切地说，这种物质是蜜蜂从某些植物，特别是白杨树的鳞皮和赤杨嫩芽中采集的，用来填充蜂房的裂缝以加固蜂巢和涂亮房壁。在养蜂业领域中，蜂胶被称为是蜂房的抗菌素或消毒剂，它可以防止细菌和霉菌繁殖。
粗蜂胶中通常含有树脂和香液胶物质(约占重量的50-55%)，蜂蜡(约占重量的30-35%)，香精油(约占重量的10%)和花粉(约占重量的5%)[参见EP-A-O061508(P2，lines 1-28)，EP-A-O109993(P1，lines 24-26)，E，M.Schneidewind et al.，Die Pharmazie 34，103，1979]。
从蜂房中提取和纯化的蜂胶，其抗病毒特性，如抗疱疹病毒(特别是HSV1和HSV2)，抗流行性感冒病毒(特别是IVA)，可以从上面曾引用的专利文献EP-A-O061508(P3，lines 6-7)和EP-A-O 109993(P2，lines 3-8;P10，lines 7-11;P11，lines 1-4)以及另外从专利文献EP-A-O310757(P3，lines 31-32)详细地了解到。
更进一步，在Derwent公司出版的DATABASE WPI/L中，属于文件号RO-A-81 340)的n°83-762896号文摘中了解到了一种治疗病毒感染的技术，它包括(a)一种蜂胶的醇溶液可以口服，(b)同时可以在感染的局部涂敷含有某种酚成分(在某种程度上还有争议的是水杨酸作为一种抗炎剂)和/或维生素的醇蜂胶组合物，此外，从化学文摘(CA，103，220838q，属于文献号RO-A-86 003)上还知道了一种抗疱疹病毒组合物，它含有蜂胶(占重量的一份)，酚(占重量的1/2份)和甲醇(占重量的一份)。
目前的情况是，在上述提及的后两篇文献中，既没有描述又没有提示本发明的组合物为酚成份/蜂胶的重量比为100/1-650/1时有增效作用。
本发明是要提供一种新型抗病毒组合物，它是由某种酚成分与蜂胶共同组成的一种增效混和物，被用作抗病毒剂。
这种新型的专用溶液的优点在于，它在某种意义上可能使以前以酚成分和蜂胶用于抗病毒适应症时实用剂量明显减少。
本发明的另一个特征是提供了上述组合物的制备方法。
已经意外发现含有酚成分和蜂胶的特殊混合物具增效特性。
本发明所推荐的治疗组合物含有一种酚成分和蜂胶，用作抗LCV′S的抗病毒剂，它包括(ⅰ)100-650份重量的酚成分，比(ⅱ)1份重量的蜂胶按本发明的制备方法，包括将酚成分与蜂胶按重量比为100/1-650/1进行混合组成。
为了简便起见，本说明书应用了下列缩写形式BHT＝下面所说的通式Ⅰ的2，6-二叔丁基苯酚化合物[BHT三个字母来源于“丁基化羟甲苯”这一短语]BpA＝双酚ABpB＝双酚BBzP＝下述通式Ⅱ的2-苄基苯酚化合物Cp＝酚成分EBV＝EB病毒(Epstein Borr病毒)Et＝乙基
EtO＝乙氧基HG1＝2，6-二叔丁基对甲苯酚(即通式Ⅰ的BHT中R为甲基)HG4＝2，6-二叔丁基-4-丁基苯酚(即通式Ⅰ的BHT中R为正丁基)HGt4＝2，4，6-三叔丁基苯酚(即通式Ⅰ的BHT中的R为叔丁基)HGt5＝2，6-二叔丁基-4-(2，2-二甲丙基)苯酚[即通式Ⅰ的BHT中R为CH2C(CH3)3]HG6＝2，6-二叔丁基-4-己基苯酚[即通式Ⅰ的BHT中R为正己基)HGt8＝2，6-二叔丁基-4-(1，1，3，3-四甲基丁基)苯酚[即通式Ⅰ的BHT中R为C(CH3)2-CH2-C(CH3)3]HSV1＝单纯疱疹病毒Ⅰ型HSV2＝单纯疱疹病毒Ⅱ型HSV1R＝具无环鸟苷抗性的Ⅰ型单纯疱疹病毒(一种有关的抗病毒物质，其结构式为2-氨基-1，9-二氢-9-[(2-羟乙氧基)甲基]-6H-嘌呤-6-酮]IVA＝流行性感冒病毒A型LCV＝脂包膜病毒Me＝甲基MeO＝甲氧基Prp＝蜂胶
Rw＝重量比RT＝室温(15-20℃)TV＝病毒样品的感染滴度ZV＝带状疱疹病毒正如上文指出的，当酚成分与蜂胶的重量比(Rw＝Cp/Prp)为100/1和650/1之间，特别是位于135/1和560/1之间时具有增效作用这一着眼点，来看待本发明所推荐的治疗组合物是很重要的。
本发明所用的酚成分(Cp)是从酚类及其混合物中挑选出的某种化合物，这种酚成分可以是单羟基或多羟基化的化合物，在其分子中至少含有一个非稠合苯环。至少一个稠合苯环或者至少三个稠合苯环，在它的这些酚羟基基团中有一个可能被醚化，以一个羧基取代或一个CHO基团取代。
下面所特别提及的与本发明有关的物质是已经明确定义为酚类的化合物苯酚，邻苯二酚，间苯二酚，对苯二酚(1，4-苯二酚)，1，2，4-苯三酚，焦棓酚(或1，2，3-苯三酚)，间苯三酚(或1，3，5-苯三酚)，没食子酸(或3，4，5-三羟基苯甲酸)，水杨醇(或2-羟基苯甲醇)，香草醛(或4-羟基-3-甲氧基苯甲醛)，香草醇(或4-羟基-3-甲氧基苯甲醇)，香草酸(或4-羟基-3-甲氧基苯甲酸)，香草扁桃酸(或4-羟基-3-甲氧基苯乙醇酸)，邻甲苯酚，间甲苯酚，对甲苯酚，邻甲基水杨酸(或2-羟基-3-甲基苯甲酸)，间甲基水杨酸(或2-羟基-4-甲基苯甲酸)，对甲基水杨酸(或2-羟基-5-甲基苯甲酸)，邻甲氧基苯酚(或2-甲氧基苯酚)，丁子香酚(或4-烯丙基邻甲氧基苯酚)，甲氧甲酚(或2-甲氧基-4-甲基苯酚)，麝香草酚(或2-异丙基-5-甲基苯酚)，地衣酚(或5-甲基-1，3-二苯酚)，对1-丙烯基苯酚[或4-(丙烯-1-基)苯酚]，水杨酸(或2-羟基-苯甲酸)，对烯丙基苯酚[或4-(丙烯-2-基)苯酚]，香芹酚[或2-甲基-5-(1-甲基乙基)苯酚或异丙基邻甲苯酚]，4-叔丁基苯酚，对羟苯甲酸丁酯(4-羟基苯甲酸丁酯)，苯并间苯二酚[或2，4-二羟苯基苯基甲酮(methanone)]，双酚A[或4，4′-(1-甲基亚乙基)双酚，缩写为BpA]，双酚B[或4，4′-(1-甲基亚丙基)双酚，缩写为BpB]，二(2-羟基-4-甲氧基苯基)甲酮(methanone)，1-萘酚，2-萘酚，蒽酚(或蒽-9-酚)，脱氧茜素(或蒽-1，2，10-三酚)，蒽三酚[或1，8-二羟基-(10H)-蒽-9-酮]，蒽降酚(或1，5-二羟基蒽-9，10-二酮)以及上述酚类物质的混合物。
下面通式Ⅰ和通式Ⅱ中分别包括的BHT′S和Bzp′s也属适于本发明的酚类。
BHT′S是通式Ⅰ中的2，6-二叔丁基苯酚化合物，通式Ⅰ为
其中的R是H原子或者是一个含有一条直烃链或分支烃链的C1-C12烷基基团。
下面专门提及的化合物包括在通式Ⅰ中2，6-二叔丁基邻甲苯酚(HG1)，2，6-二叔丁基-4-丁基苯酚(HG4)，2，6-二叔丁基-4-叔丁基苯酚(HGt4)，2，6-二叔丁基-4-(2，2-二甲丙基)苯酚(HGt5)，2，6-二叔丁基-4-己基苯酚(HG6)，2，6-二叔丁基-4-(1，1，3，3-四甲基丁基苯酚(HGt8)以及它们的混合物。
Bzp′s是通式Ⅱ中的2-苄基苯酚化合物，通式Ⅱ为
其中彼此独立的x和y可以分别是氢原子，OH基团，OMe基团，或者OEt基团，它们也可能结合在一起成为一个3，4-亚甲二氧基基团。
A是H或CH2C6H3xy基团，其中x和y按上文所述定义。
B是H原子或是带有一条直烃链或支烃链的一个C1-C12烷基基团。
这些含酚成分的化合物还含有一条不饱和脂肪族侧链，如丙烯-1-基或丙烯-2-基，它们通常是与在侧链上没有烯或炔类不饱和键的至少一个其它酚联用，而不是单用，实际上，含有烯或炔不饱和键的酚成分化合物在光作用下易于聚合，鉴此，按本发明将酚成分与至少一种具有抗紫外线特性的其它酚类联用以避免在储存过程中发生聚合现象。
本发明中酚成分优选BpA，焦棓酚，邻苯二酚，香芹酚，BHT′S及其混合物。按照本发明，最有价值的酚类化合物是BHT′S，特别是HG1，HGt4，HG4，HG6，HGt5和HGt8。
本发明组合物的另一成分是纯化的蜂胶，特别是可以溶解于水或常规有机溶剂中的蜂胶，纯化的蜂胶是用某种醇物质，如甲醇或乙醇，或者是用某种水/醇混和物处理粗蜂胶而得。蜂胶的获取方法参见下列文献DE-A-1037651，FR-A-2256764，FR-A-2374030，FR-A-2594336，EP-A-O 061508，EP-A-0 109993，EP-A-0 135601，EP-A-0 310757。所得的蜂胶以白色或浅棕色粉末或颗粒最适合于本发明目的。
用于治疗由LCV′S引起的病毒性疾病的本发明治疗组合物将包括按重量比为100/1-650/1的酚成分与蜂胶的混和物，同时含有一种或多种赋形剂以便口服、注射或局部使用。
这种组合物用作抗疱疹病毒和疱疹病毒类似物所致疾病时特别有效。事实上已经发现这种组合物抗Ⅰ型单纯疱疹病毒和Ⅱ型单纯疱疹病毒有特别效果，尤其是一方面治疗由HSV1和HSV1R病株引起、通过粘膜间接触传染的疾病，另一方面能治疗由HSV2引起，通过性传染的疾病，尤其是湿疣latum。
本发明所说的抗病毒组合物可以通过一种已知方法制得，所说的方法包括将酚成分和蜂胶在一种适宜的水溶液或油性生理介质中于室温到75℃之间混合。
实施本发明的最佳方案包括使用BHT和Prp组合物，其中BHT是2，6-二叔丁基对甲苯酚(HG1)，2，4，6-三叔丁基苯酚(HGt4)，2，6-二叔丁基-4-正-己基苯酚(HG6)，或者2，6-二叔丁基-4-(1，1，3，3-四甲基丁基)苯酚(HGt8)。两种成分的重量比为135/1-560/1。
本发明推荐一种新型治疗剂的应用，它包括酚成分和蜂胶以重量比100/1-650/1，优选为135/1-560/1构成的组合物，用作人类或兽医治疗上的抗病毒药以治疗由脂包膜病毒引起的疾病，特别是由(ⅰ)HSV1，HSV2和HSV1R，及(ⅱ)IVA，EBV和ZV这些菌株引起的疾病。
下面有关对比实验和样品制备的描述将使本发明的更进一步的优点和特性得以更清楚地理解。当然，下面这些数据通过实例的方式给出应从整体上理解，本发明决不局限于此。
实施例1-对比实验本实验用到了下面的材料一种培养基，含HG1，其浓度为50mg/ml或25mg/ml，还有一系列Prp溶液，其浓度递减为0.363mg/ml，0.272mg/ml，0.180mg/ml，0.136mg/ml，0.090mg/ml。所说的培养基与上述溶液等体积相加，在有HSV1R存在下于37℃摇育1h，离心后，用所谓的有限稀释法按常规方法测定感染滴度，并且与在相同条件下孵育的HSV1R病毒的对照样本、蜂胶的对照样本以及HG1的对照样本进行比较(无需设赋形剂的对照样品，因为以前的实验已经证实了赋形剂对病毒，尤其是对HSV1R无影响)。
用于检测Cp和Prp两者之间相互作用的方法已由R.F.Schinazi等人精确地提出[Antimicrob.Agents Chemother.，22.(n°3)pp499-507，1982]并由J.C.Pottage重新证实[ibidem，30.(n°2)pp215-219，1986]，并引入下面这些定义ya＝Prp/TV存在时的感染滴度yb＝HG1/TV存在时的感染滴度yab＝Prp+HG1/TV存在时的感染滴度yc＝yaxyb如果1°)yab＜yc，相互作用为增效性2°)yab＞yc，但yab＜其中较大活性化合物本身，其相互作用在此时为亚加成反应。
3°)yab＞其中较低活性化合物本身，其相互作用为拮抗性。
4°)yab＞其中较大活性化合物但＜其中较小活性化合物，其相互作用称为干扰作用。
为了简化计算，本实验中有关HG1/Prp组合的感染滴度和对照实验中的感染滴度均以10为底的对数表示。所得结果已归集于下列表Ⅰ中。
表Ⅰ中的结果表明-当所用成分为最大浓度时(Prp0.363mg/ml，HG150mg/ml)，不可能观察到两者的相互作用，因为蜂胶本身在此剂量时也具杀病毒作用，-当Prp浓度为0.272mg/ml时，仅仅观察到了对HG1的干扰作用，-另一方面，Prp为低浓度时(0.090-0.180mg/ml)与HG1为25mg/ml或50mg/ml时均发生增效作用。
在某种程度上有争议的是，当HG1/Prp的重量比为135/1-560/1时存在增效作用。
实施例2-配制-将59g白色凡士林，2.99g倍半油酸脱水山梨醇酯，3g-油酸甘油酯混合，加热至70-75℃，待混合物变得均匀后停止加热，向混合物中加入5gHG6，然后再加入0.01g蜂胶进行搅拌，再加入30g水，并使其温度低于或等于65℃，继续搅拌直至混合物冷至室温，该混合物均化后得到一种含油包水乳剂的软膏，可用作眼洗剂。
实施例3-配制-将56.98g白色凡士林，3.5g倍半油酸脱水山梨醇酯和3.5g一油酸甘油酯于70-75℃混合，当混合物变均匀后停止加热，并加入7gHG1，重新进行混合，再加入由0.02g蜂胶(Rw＝350/1)和30g水组成的混合物，此时温度低于约70℃并搅拌。继续搅拌直至混合物冷却至室温。当混合物均化后便得到一种含油包水乳剂的药膏，即可用作眼洗剂。
实施例4-配制-将4.66g硬脂酸聚亚乙基二醇酯1500与13g一硬脂酸甘油酯，3g一油酸甘油酯，10.5g油酸癸酯，5.5g癸/辛酸甘油三酯和5g异硬脂酸甘油酯混合，混合物逐步加热至70-75℃，混合物一经变得均匀便停止加热，加入8gHGt4并缓慢搅拌混合物，再将3g亚丙基二醇，0.3g柠檬醛，0.04g蜂胶(Rw＝400/l)和47g水倒入上述混合物中所得混合物被搅拌冷至室温，然后将此混合物通过一个均化器，得到一种具有乳油稠度的油包水乳剂。
实施例5-12
在下面的组合物中，仅给出了前面曾介绍过的酚成分，Rw＝Cp/Prp列于括号内，这些组合物是除了酚成分HGt4被其它适量的酚成分取代而外均按实施例4所述的方法获得。
实施例5双酚A(Rw＝250/1)实施例6焦棓酚(Rw＝270/1)实施例7香芹酚(Rw＝300/1)实施例8邻苯二酚(Rw＝270/1)实施例92-(3，4-亚甲二氧苄基)-4-叔丁基酚(Rw＝340/1)实施例102-(3，4-二羟基苄基)-4-(1，1，3，3-四甲基丁基)苯酚(Rw＝450/1)实施例11HGt8(Rw＝420/1)实施例12HGt5(Rw＝190/1)实施例13-纯化蜂胶的制备-上述实施例1-12中所用的纯化蜂胶是用80%的EtOH抽提而获得的(即EtOH/H2O按重量比8/2混合)，具体方法如下。
粗蜂胶被蜜蜂沉积于装在蜂房框架上带小孔的塑料格子中，从蜂房中取出那些带有粗蜂胶的格子，置冰箱中冷至-30℃，使粗蜂胶变脆，然后放入研钵中磨碎，被磨碎的物质用80%EtOH抽提，其中每一份重量的粗蜂胶加入10份体积的80%的EtOH，在室温下搅拌24h，不溶性残渣过滤掉，收集的滤液在减压条件下蒸发，得到一种浅棕色的干性提取物，产率为初始粗蜂胶重量的65%。
权利要求
1.一种含有酚成分和蜂胶的治疗组合物，用作抗脂包膜病毒的抗病毒剂，所说组合物包括(ⅰ)100-650份重量的酚成分比(ⅱ)1份重量的蜂胶。
2.根据权利要求1的组合物，其中的酚成分选自由苯酚、邻苯二酚、间苯二酚、对苯二酚、苯-1，2，4-三酚、焦棓酚、间苯三酚、没食子酸、水杨醇、香草醛、香草醇、香草酸、香草扁桃酸、邻甲苯酚、间甲苯酚、对甲苯酚、邻甲基水杨酸、间甲基水杨酸、对甲基水杨酸、邻甲氧基苯酚、丁子香酚、甲氧基甲酚、麝香草酚、地衣酚、对丙烯基苯酚、水杨酸、对烯丙基苯酚、香芹酚、4-叔丁基苯酚、对羟苯甲酸丁酯、苯并间苯二酚、双酚A、双酚B、二(2-羟-4-甲氧基苯基)甲酮(methanone)、1-萘酚、2-萘酚、蒽酚、脱氧茜素、蒽三酚、蒽降酚组成的一组酚类以及上述酚类物质的混合物。
3.根据权利要求1的组合物，其中的酚成分是选自下列物质组成的一组酚类物质(ⅰ)下面通式中的2，6-二叔丁基苯酚
其中的R是H原子或者是一个带有一条直烃链或支烃链的C1-C12烷基基团，以及(ⅱ)上述物质的混合物。
4.根据权利要求1的组合物，其中的酚成分是选自下列物质组成的一组酚类物质(ⅰ)下面通式中的2-苄基苯酚
其中彼此独立的x和y分别是H原子，OH基团，MeO基团，或EtO基团。x和y也可能结合一起成为一个3，4-亚甲二氧基基团，A是H或CH2C6H3xy基、其中x和y按上文所述定义，B是氢原子或一个带有一条直烃链或侧烃链的C1-C12的烷基基团，(ⅱ)上述物质的混合物。
5.根据权利要求1所说的组合物，其中的酚成分是选自由下列化合物组成的一组酚类物质(a)2，6-二叔丁基对甲苯酚(b)2，4，6-三叔丁基苯酚，(c)2，6-二叔丁基-4-(2，2-二甲基丙基)苯酚，(d)2，6-二叔丁基-4-正己基苯酚，(e)2，6-二叔丁基-4-(1，1，3，3-四甲基丁基)苯酚，(f)双酚A，(g)焦棓酚，(h)邻苯二酚(i)香芹酚(j)上述物质的混合物。
6.根据权利要求1的组合物，其中酚成分和蜂胶的重量比为135/1-560/1。
7.治疗性用途，所说混合物含有一种酚成分和蜂胶，酚成分和蜂胶重量比为100/1-650/1，用作人类或兽医疗学上的抗病毒药，以治疗由脂包膜病毒引起的疾病。
8.根据权利要求7所说的用途，其中酚成分和蜂胶的重量比为135/1-560/1。
9.根据权利要求7和8所说的用途，其中的酚成分/蜂胶混合物是指用于治疗由Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV1)，Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV2)和无环鸟苷抗性的Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV1R)引起的疾病。
10.一种制备权利要求1的抗病毒组合物的方法，所说的制备方法系将酚成分和蜂胶按重量比为100/1-650/1，于15-75℃下在适当的水溶液或油性生理介质中混合。
全文摘要
本发明涉及一种含有酚成分和蜂胶的治疗组合物，制备该组合物方法及该组合物用作抗脂包膜病毒的抗病毒剂。
文档编号A61P31/20GK1056813SQ9110222
公开日1991年12月11日 申请日期1991年3月11日 优先权日1990年3月12日
发明者罗伯特·瓦齐, 马里沃·阿莫罗思, 弗朗西斯·萨瓦哥 申请人:法勒库公司