调节胃肠动力的方法

专利名称：调节胃肠动力的方法
相关申请本申请为1993年9月7日提交的美国专利申请第08/118381号的部分继续，后者引入本文作为参考。
本发明的领域本发明涉及调节胃肠动力的方法。更具体地说，本发明涉及支链淀粉素或支链淀粉激动剂在治疗使用延迟和/或减慢胃排空的药剂有帮助的疾病中的用途。本发明还涉及支链淀粉素抗剂加速胃排空的用途，例如，用于治疗胃动力低下和相关的疾病。
背景支链淀粉素支链淀粉素是一种37个氨基酸的蛋白激素。作为人类II型糖尿病的胰岛淀粉样沉淀的主要成分它已被分离，提纯并确定化学性质(Cooper等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.848626-8632(1987))。支链淀粉素分子具有两个重要的翻译后修饰C-末端被酰胺化，以及半胱氨酸的2位和7位上交联形成一个N-末端环。人类支链淀粉素基团的开放阅读骨架的序列显示在编码赖氨酸的N-末端密码子前存在赖一精二碱基氨基酸蛋白水解剪切信号，和在CLAMS-末端位置的赖一精蛋白水解信号前存在甘氨酸，这是一个通过蛋白质酰胺化酶(PAM)酰胺化的典型序列(Coopre等人，Biochem.Biophys.Acta.1014247-258)(1989))。支链淀粉素是1987年4月27日提交的英国专利申请第8709871号的主题，并对应于1988年4月27日，1988年11月23日和1989年5月2日提交的美国申请。
在I型糖尿病，支链淀粉素被显示是缺乏的，并且认为与胰岛素合用替代治疗是比单用胰岛素优选的治疗，例如在限制纸血糖发作方面。应用支链淀粉素治疗糖尿病是由G.J.S.Copper.于1987年8月26日提交的英国专利申请第8720115号的主题，并于1988年8月26日在美国以专利申请第236985号提交。在1992年6月23日发布的美国专利第5124314号中描述了包含支链淀粉素和支链淀粉素加胰岛素的药物组合物。
过量支链淀粉素的作用摹拟II型糖尿病的关键特征而支链淀粉素的阻断已被作为一种新的治疗策略提出。这一点公开于公开的美国专利申请第275475号，由Cooper，G.J.S.等人在1988年11月23日提交，其内容并入本文作为参考，即支链淀粉素在基础的和胰岛素刺激的两种情况下减少被标记的葡萄糖结合到骨骼肌的溏原中。后一种作用也被发现为CGRP所其有(还参见Leighton，B.和Cooper，G.J.S.，Nature，335632-635(1988))。支链淀粉素和CGRP近乎等效力，在1至10nM显示明显的活性。据报告支链淀粉素还可减少胰岛素刺激的葡萄糖摄入骨骼机内并减少糖原含量(Young等人，Aner.J.Physiol.259457-461(1990))。应和支链淀粉素拮抗对II型糖尿病和胰鸟素抗性的治疗已被公开。
据称，支链淀粉素的化学结构和基因序列两者均支持它是一种生物活性的或“信使”分子的判断。其化学结构与降钙素基因相关肽(CGRP)具有50％的一致性，该CGRP也是一种37个氨基酸的蛋白并具有多种高效生物活性(包括血管扩纯)的广泛的神经递质。支链淀粉素和CGRP都有“半胱-”半胱二硫键和C-末端酰胺，这两者都是所有的生物活性所必需的(Coopre等人，Proc.Natl.Acad.Sci.)85-7763-7766(1988))。
支链淀粉素可以是包括CGRP，胰岛素，胰岛素样生长因子，和松驰素家族中的一员，它们都具有共同的基团遗传特征(Coper，G.J.S.等人，Prog，Growth Factor Research 199-105(1989))。两种肽降钙素和CGRP-1都具有降钙素基团中的共同部分，而对原始mRNA转录本的选择性加工导致产生两种不同的肽，这两种肽只有有限的序列同源性(约30％)(Amara，S.G.等人，Science.2291094-1097(1985))。支链淀粉素基因序列对于一种分泌型信使蛋白质是典型的，其mRNA编码具有供在高尔基体或分泌颗粒内产生该分泌型蛋白质的加工位点的前肽。支链淀粉素主要与胰岛素共存于β-细胞颗粒中并可共享从胰岛素原产生胰岛的蛋白水解加工酶。
支链淀粉素主要在胰腺β-细胞中合成并应答于营养性刺激如葡萄糖和精氨酸而分泌。应用克隆的β-细胞肿瘤系(Moore等，Biochem.Biophys.Res.Commun.179(1)(1991))，分离的胰岛(Kanatsuka等人，FEBS Lett.，259(1)，199-201(1989))和灌注的大鼠胰腺(Ogawa等人，J.Clin Invest.，85973-976)(1990))的研究已显示10至20分钟的营养性促分泌物质如葡萄糖的精氨酸，的短脉冲可刺激支链淀粉素和胰岛素的释放。分泌的蛋白质支链淀粉素胰岛素的克分子比率随制品的不同从约0.01至0.4不等，但在任何一种制品中随不同的刺激没有太大的变化。然而，以升高的葡萄糖延长刺激期间，该支链淀粉素胰岛素比率可不断上升(Gedulin等人.，Biolhem.Biophys.Res Commun.，180(1)782-789(1991))。因此，可能由于基因表达和翻译率是独立被控制的，支链淀粉素和胰岛素不总是以一个稳定的比率分泌。
啮齿动物和人类循环血中的支链淀粉素样免疫活性已应用多种放射免疫测定法测定，这些方法都使用免抗-支链淀粉素抗血清，其中多数方法使用一种提取和浓缩的步骤以增加测定敏感性。在正常人类中，从1至10pM的空腹支链淀粉素水平和5至20pM的餐后或应用葡萄糖后水平已被报导(例如，Hartter等人，Diabetologia，3452-54(1991)；Sanke等人，Diabetologia，34129-132(1991)；Koda等人，The Lancet，3391179-1180(1992))。在肥胖者，胰岛素抗药个体，进食后支链淀粉素水平可升得更高，达到约50pM。作为比较，在健康人中空腹和餐后胰岛素值分别为20至50pM，和100-300pM，在胰岛素抗药者可高达此水平的3-4倍。在β细胞被破坏的I型糖尿病中，支链淀粉素水平处于或低于测定水平并且对葡萄糖反应不升高(Koda等人，The Lancet，339-1179-1180(1992))。已有报告在正常小鼠和大鼠中，基础的支链淀粉素水平为30-100pM，而某些胰岛素抗药种系，糖尿病种系的啮齿动物中已测得该值高达600pM(例如，Huang等人，HypertenSion，19I-101-I-109(1992)Gill等人，Life Science，48703-710(1991))。
已发现支链淀粉素的某些作用与已知的CGRP和降钙的非一代谢作用相似；然而，在这一新确定的蛋白质的研究中被发现的支链淀粉素的代谢作用似乎反映其最首要的生物作用。尽管是在具有显著血透扩张作用的剂量下，CGRP还是摹拟了至少某些此类代谢作用(见，例如，Leighton等人，Nature 335632-635(1988)Molina等人，Diabetes，39260-265(1990))。
最先发现的支链淀粉素的作用是减少受胰岛素刺激的葡萄糖结合到大鼠骨骼肌中的糖原(Leighton等人，Nature.335632-635(1988))；该肌肉即为“胰岛素抗药”。用离体的大鼠比目鱼肌在体外进行的下一步工作说明支链淀粉素减少糖原-合酶活性，促进糖原磷酸化酶从非活性b型带变为活性a型，促进糖原的净损失(在胰岛素存在或不存在下)，增加葡萄糖-6-磷酸水平，并能增加乳酸盐产量(见，例如，Deem等人，Biochem.Biophys.Res Commun.181(1)116-120(1991)；Young等人，FEBS Letts，281(1，2)149-151(1991))。是否支链淀粉素妨碍葡萄糖转运本身尚不清楚(见，如Young等人，Am.J.Physiol.，259E457-E461(1990)；Zierath等人，Diabetologia.3526-31(1992))。对支链淀粉素和胰岛素的剂量应答关系的研究显示支链淀粉素在骨骼肌中作为胰岛素的非竞争性的或功能性的拮抗剂起作用(Young等人，Am.J.Physiol.，263(2)E274-E281(1992))。尚无证据说明支链淀粉素妨碍胰岛素结合于其受体，或下一步胰岛素受体酪氨酸激酶的激活(Foilett.等人，ClinicalResearch 39(1)39A(1991)；Koopmans等人，Diabetologia，34，218-224(1991))。支链淀粉素对骨骼肌的作用类似于肾上腺素的作用。然而，据信肾上腺素的作用主要是通过cAMP介导的，而一些研究者已得出结论支链淀粉素的作用不受cAMP介导(见Deems等人，Biochem.Biophys.ResCommunl.，181(1)116-120(1991)，而另有一些人报告支链淀粉素确实激活腺苷酸环化酶并增加骨骼肌中的cAMP(Moore和Rink，Diabetes 425，821 June(1993))，与其通过合酶和磷酸化酶的cAMP依赖的蛋白激酶磷酸化，对糖原代谢的作用的转导一致。
一般认为支链淀粉素通过质膜上存在的受体起作用。已报告支链淀粉素通过激活糖原裂解的限速酶，磷酸化酶a，在骨骼肌中通过促进糖原分解的受体介导的机制起作用。(Young，A等人，FEBS，Letts.，281149-151(1991)。对支链淀粉素和CGRP，以及拮抗剂L37CGRP作用的研究提示支链淀粉素通过其自己的受体起作用(Wang等人，FEBS Letts.，219195-198(1991b))，与其它研究者的支链淀粉素可主要作用于CGRP受体的结论相反(例如，Chantry等人，Biochem.J.，277139-143(1991)；Galeazza等人，Petides，12585-591(1991)；Zhu等人，Biochem.Bio Phys.Res.Commun.，177(2)771776(1991)。最近，在1992年10月1日出版的，题目为“基于受体的支链淀粉素激动剂和拮抗剂的筛选方法”的国际申请PCT/US 92/02125中描述了支链淀粉素的受体及其在筛选和测定支链淀粉素激动剂和拮抗剂化合物的各种方法中的应用。
在体内，支链淀粉素对于肝脏的能量代谢具有显著的作用，但对于支链淀粉素在分离的肝细胞或灌注的肝中作用如何尚无一致的意见。现有的资料不支持支链淀粉素促进肝糖原分解的意见，即，它不象胰高血糖素那样起作用(例如，Stephens等人，Diabetes，40395-400(和1991)；Gomez-Foix等人，Biochem.J.，276607-610(1991))。有研究者提出支链淀粉素可作用于肝脏以促进乳酸盐向溏原的转化和增加可由糖原释放出的葡萄糖的量(见Roden等，Diabetologia，35116-120(1992))。因此支链淀粉素在肝脏中可作为胰岛素的同化合作者起作用，与其在肌肉中的分解作用相反。
在清醒的大鼠中支链淀粉素对包括肾血流在内的局部血液动力的作用的效果最近已被报告(Gardiner.等人，Diabetes.40948-951(1991))。作者们注意到用大鼠支链淀粉素灌注比用人类α-CGRP灌注引起更强的肾血管扩张和更弱的肠系膜血管收缩。他们认为大鼠支链淀粉素通过促进肾充血达到比α-CGRP引起的更高的程度，可对肾素血管紧张素系统产生较不明显的刺激，从而，产生更弱的继发性的血管紧张素II介导的血管收缩。还注意到，在用人类α-L37CGRP与大鼠支链淀粉素共灌注时观察到肾和肠系膜的血管收缩，可能是因为血管紧张素II的非对立的血管收缩作用所致，并且这一发现与在用人类A-CGRP和人类α-L37CGRP共灌注时所见到的相似(id.at951)。
在脂肪细胞中，与其在肌肉中的肾上腺素样作用相反，观测不到支链淀粉素对胰岛素-刺激的葡萄糖摄取，葡萄糖结合到甘油三酯中，CO2产生(Cooper等人，Proc.Natl.Acad.Sci.，857763-7766(1988))，肾上腺-刺激的脂肪溶解，或胰岛素对脂肪溶解的抑制作用(Lupien J.R.，和Young.A.A.，“Diabetes Nutrition and metabolism-Clinical andexperimental”，Vol.6(1)。13-18页(1993年2月))。因此支链淀粉素发挥组织-特异的效果，对骨骼肌有直接的作用，对肝脏具有显著的间接(通过底物的提供)和可能的直接作用，而脂肪细胞对支链淀粉素的存在与否显得是“盲”的。还没有支链淀粉素对肾组织的直接作用的报告。
还已报导支链淀粉素对胰岛素的分泌可有显著的作用。在分离的胰岛(Ohsawa等，Biochem Biophys.Res.Commun.，160(2)961-967(1989))，在灌注的胰腺(Silvestre等，Reg.Pept.，31-23-31(1990))，和在完整的大鼠中(Young等人，Mol.Cell.Endoerinol.，84R1-R5(1992))，一些实验表明支链淀粉素下降调节胰岛素的分泌。灌注的胰腺实验表明对葡萄糖的分泌反应呈选择性下降调节而对精氨酸无反应。然而，其它研究者未能测到支链淀粉素对分离的β-细胞，对分离的胰岛，或在整体动物中的作用(见Broderick等人，Biochem.Niophys.Res.Comm.，Vol177932-938(1991)及其参考文献。)支链淀粉素在体内最显著的作用是刺激血浆乳酸盐急剧升高，继而是血浆葡萄糖的升高(Young等人，FEBS Letts，281(1，2)149-151(1991))。有证据表明增加的乳酸盐为葡萄糖的产生提供底物并且支链淀粉素的作用可不依赖胰岛素或胰高血糖素的改变而发生。在“葡萄糖钳夹”实验中，支链淀粉素的输注引起“胰岛素抗性”，这是通过减少外周葡萄糖贮存，和限制胰岛素介导的对肝脏葡萄糖输出的抑制两种机制实现的(例如，Frontoni等人，Diabetes，40568-573(1991)；Koopmans等人，Diabetologia，34，，218-224(1991))。
禁食18小时耗尽其肝糖原贮存的轻微麻醉的大鼠中，支链淀粉素注射刺激血浆乳酸盐从约0.5上升至1.5mM，继而血浆葡萄糖水平从约6延长增加至11mM。对于静脉内和皮下注射两者都观察到这些效果(Young等人，FEBS Letts.，281(1，2)149-151(1991))。支链淀粉素在喂食的动物中的作用在量上不同于其在禁食动物中的作用。在据信具有正常肝糖原贮存的喂食的大鼠中，支链淀粉素引起血浆乳酸盐更明显和延长时间的升高，但是血浆葡萄糖只有中等度的升高。已有人提出支链淀粉素促进葡萄糖乳酸盐循环的“返回支”(return limb)，即，经裂解成为乳酸盐的肌糖原提供底物用于肝糖异生和糖原产生及可能的甘油三酯合成。胰岛素促进前进支(forward limb)，即，将葡萄糖摄入肌肉并产生肌糖原。因此胰岛素和支链淀粉素可被看作调节餐后肝糖原充实(repletion)的“间接”途径的配合者。肌肉和肝脏中的“胰岛素抗性”可处于支链淀粉素的正常生理调节之下。
支链淀粉素的非代谢作用包括可被支链淀粉素与CGRP血管受体的相互作用介导的血管扩张作用。已报告的体内试验提示支链淀粉素作为一种血管扩张剂比CGRP至少弱100至1000倍(Brain等，Eur.J.Pharmacol.，1832221(1990)Wang等人，FEBS Letts.，291195-198(1991))。已报告将支链淀粉素注射入大脑可抑制食物摄取(例如Chance等人，BralnRes.539 352-354(1991))，这是一种与CGRP和降钙素共有的作用。介导此作用的细胞中的有效浓度尚未知。据报告支链淀粉素作用于分离的破骨细胞，引起细胞静止，并且有报告它可在大鼠，兔和在患佩吉特氏病的人体内使血钙下降20％(见例如，Gilbey等人，J.Bone Meneral Res.，S293(1991))。从可得到的资料看，与人降钙素的这些作用相比，支链淀粉素的作用似乎弱10至30倍。有趣的是，据报导支链淀粉素显示出增中破骨细胞CAMP的产生但不增加胞浆的(cytosolic)Ca++，而降钙其可使两者都增加(Alam等，Biochem.Biophys.ResCommun.，179(1)134-139(1991))。已有文提出，虽然尚未确定，降钙素可通过两种受体类型起作用而支链淀粉素可与其中一种相互作用。
输注支链淀粉素受体拮抗剂可被用于改变糖调节。已证实在体外和在体内L37CGRP均是一种支链淀粉素拮抗剂(Wang等人，Biochem Biophys.Res.Commun.，181(3)1288-1293(1991))，并已发现在喂食的大鼠中精氨酸输注后改变糖调节(Young等人，Mol.Cell.Endocrinol.，84R1-R5(1992))。葡萄糖浓度最初的升高归因于精氨酸刺激的胰高血糖素从胰岛α细胞的分泌，随后基础葡萄糖水平的恢复则归因于胰岛素作用及其它糖调节激素的改变。当用L37hCGRP预输注阻断支链淀粉素的作用时，最初的葡萄糖上升无显著不同，但是有一个随后的葡萄糖浓度下降直至远低于基础水平，只需经约80分钟后才恢复正常。因此，在使用胰岛促分泌剂的这种刺激后的糖调节由于输注了一种支链淀粉素受体拮抗剂而改变。另外，每隔半小时测定胰岛素浓度并发现在精氨酸输注后30分钟的胰岛素浓度在输注支链淀粉素受体拮抗剂的动物中几乎是正常对照动物的2倍高。L37CGRP也是一种有效的CGRP拮抗剂。然后，使用另一种支链淀粉素拮抗剂，AC66也可见到类似的结果，与CGRP受体相比，该AC66对支链淀粉素受体是选择性的(Young等人，Mol.Cell.Endocrino.，84；R1-R5(1992))。据称这些结果支持在II型糖尿病中阻断支链淀粉素的作用可产生极有益的治疗效果的结论。
I型糖尿病患者除缺乏胰岛素外，据报导还显著的缺乏支链淀粉素。如上所述，资料显示在I型糖尿病中由胰腺的β细胞表达和分泌的支链淀粉素是缺乏或远低于正常的。在几种I型糖尿病的动物模型中，支链淀粉素的分泌和基因表达是受抑制的(Cooper等人，Diabetes，497-500(1991)；Ogawa等人，J.Clin.Invest.，85973-976(1990))。在I型糖尿病病人中血浆支链淀粉素的测定显示在经过夜禁食的这些病人中支链淀粉素是缺乏的，并且葡萄糖负荷不引起支链淀粉素水平的任何升高(Koda等人，The lancet，3391179-1180(1992))。
还已发现，以前描述的支链淀粉素的肾血管扩张和其它特性是令人惊奇的，在完整的大鼠中当以一种避免任何血压的波动的皮下方式给药时支链淀粉素显著地增加血浆肾素活性。这一点是重要的，因为降低的血压对于肾素释放是一种强刺激。支链淀粉素拮抗剂，例如支链淀粉素受体拮抗剂，包括那些与CGRP和/或降钙受体相比，对支链淀粉素受体具有选择性的拮抗剂，可用于阻断支链淀粉素引起的血浆肾素活性的升高。这些意外的发现支持支链淀粉素拮抗剂可降低血浆肾素活性从而有益于高血压和心力衰竭和其它与升高的，不适当的或不希望的肾素活性相关的疾病治疗的判定。而且，支链淀粉素拮抗剂能有利地调节胰岛素抗性和经常与高血压和心脏疾病相关联的其它常见的代谢紊乱的这种额外的能力提供了一种特别理想的治疗侧面。
胃动力低下延迟液体和/或固体内容物的排空的胃动力低下是许多胃肠道疾病中的一种。对于总体的讨论，参见Goodman and Gilman’s ThePharmaloloyical Basis of Therapentics.Chapter 38(PergamonPress，Eighth Edition 1990)。这类疾病的症状可包括恶心、呕吐、烧心、餐后不适和消化不良。胃食道返流是常见的证据并能引起食道溃疡；还可有呼吸系症状或强烈的胸骨下疼痛，可分别与哮喘或心肌梗塞混淆。虽然其原因在大多数患者中不明确，但胃停滞或动力低下经常是糖尿病神经病变的结果；这种病症还常出现于神经性厌食或胃酸缺乏或胃手术后的患者中。Id.在第928页。
对有胃动力低下的患者的医疗处理通常包括施用一种促动力剂。虽然止吐的吩噻嗪或氨基甲酰甲基胆碱可使症状得到一些缓解，但在大多数病人中这些药物不加速胃排空并常产生不能接受的副作用。目前，可得到的促动力剂包括灭吐灵和西沙比利(cisapride)，但其它一些(如吗丁啉)正被评价。Id.
灭吐灵在胃的上部降低接受的放松并增加胃窦的收缩。幽门和十二指肠松驰，而下食道括约肌的张力增加。这些作用加在一起加速胃内容物的排空并减少从十二指肠的返流和胃向食道的返流。另外，作为空肠蠕动增加的结果，食物从十二指肠到回盲瓣的通过时间减少。灭吐灵对胃分泌或结肠动力几乎没有影响。Id，第928页。
总的来说，多巴胺能的激动剂产生相反类型的作用，并且这些作用受至少部分位于胃肠道内的D2受体介导。Id.
灭吐灵的作用机制尚不清楚，虽然已明确它是一种多巴胺能拮抗剂并能阻断由局部或全身施用多巴胺能激动剂引起的胃肠作用。虽然迷走神经切断术不取消灭吐灵的作用，其促动力作用可被阿托品或其它毒蕈碱的拮抗剂阻断。而且，不是所有的多巴胺能拮抗剂都加速胃排空。该药被认为可促进乙酰胆碱从肠系膜神经原的释放，虽然缺乏这一作用的直接证据。由于氨基甲酰甲基胆碱可增强灭吐灵的作用，可能还与对乙酰胆碱的反应性增强有关。Id.第928-929页。
吗丁啉(Domperidone)是具有促动力和止吐两种特性的苯并咪唑衍生物。它是一种多巴胺能拮抗剂，并且它产生显著的高促泌乳素血症；其对胃肠动力的作用也与灭吐灵的那些作用非常类似。但是，与灭吐灵的不同的是，这些作用不被阿托品所拮抗；目前还尚未提出关于这个区别的解释。吗丁啉只能有限度地穿过血脑屏障，因而它只很罕见地引起锥体外系副作用。结果，它不干扰帕金森氏病的治疗，并且它可用于对抗左旋多巴和溴隐亭引起的胃肠失调。迄今，在有胃动力低下患者的治疗中，该药表现出与灭吐灵具有同样的治疗效用。但是，它具有较弱的止吐作用。Id.第929页。吗丁啉在口服后表现为被迅速吸收，但其生物利用度仅为约15％；大部分药物及其代谢产物在粪便中排出。其从血浆中清除的半衰期约为7至8小时。Id.吗丁啉在美国末广泛上市；在其它地区它作为MOTILIUM被得到。最佳的剂量尚未被确立，但每日40至120mg的口服剂量已被用于治疗胃动力低下。Id.第929页。
西沙比利是一种苯甲酰胺并且它对胃和小肠动力的作用与灭吐灵和吗丁啉非常相似；但是，与这些药物不同的是，它也增加结肠的运动并能引起腹泻。它的胃肠作用的机制很不清楚。象灭吐灵一样，这些作用被阿托品阻断并可能涉及肠系膜乙酰胆碱的释放。西沙比利不表现出多巴胺能的阻断活性，并且它不影响血浆中的促泌乳素浓度或引起锥体外系症状。该药在大鼠回肠中结合于并阻断5-HT2色胺能受体，但这一作用与其在人中的作用关系尚未被确立。Id.迄今该药在胃动力低下疾病治疗中的功效与灭吐灵和吗相啉相同，并且没有由于多巴胺能的阻断导致的的副作用。另外，西沙比利可用于治疗慢性特发性便秘或由于脊髓操作导致的结肠动力低下的患者。Id.929页。
与上面的相反，作来延缓胃排空的药剂在医药中也占有一定位置，特别是在胃-肠放射检查中作为诊断的辅助物。例如，胰高血糖素是胰腺的胰岛的α细胞产生的一种多肽激素。它是通过激活肝糖原分解动员葡萄糖的高血糖剂。它能在较小程度上刺激胰腺胰岛素的分泌。胰高血糖素以盐酸胰高血糖素形式应用；剂量通常按胰高血糖素表示。
当静脉施用葡萄糖不可能时，胰高血糖素被用于治疗胰岛素引起的低血糖。它是通过皮下、肌内、或静脉注射以0.5至1mg(单位)的剂量给药，如果需要右在20分钟后重复。然而，由于胰高血糖素降低胃肠动力，它在胃肠放射学检查中可被用作论断辅助物。给药的途径根据诊断的程序而定。通过肌内给药的1至2mgs(单位)的剂量作用开始时间为4至14分钟并且效果持续10至40分钟；经静脉方法给药的0.2至2mgs(单位)在1分钟内产生效果并持续9至25分钟。
在几项研究中，胰高血糖素被用于治疗与痉挛有关的多种疼痛性胃肠功能紊乱。Daniel等人(Br.Med.J.，1974，3，720)据报导用胰高血糖素治疗急性憩炎患者的症状缓解比那些用镇痛药或解痉药者更快。Glauser等人的一篇综述(J.Am.Coll.Emergency Phtsns.1979，8，228)描述了急性食道食物梗阻在胰高血糖素治疗后的缓解。在另一项研究中，与用安慰剂治疗的22例病人比较，胰高血糖素显著缓解21例胆道疾病患者的疼痛和压痛(M.J.Stower等人.Br.J.Surg.1982，69，591-2)。然而，Franken等人(Radiology，1983，146，687)在一项30个儿童的研究中对回结肠套迭的流体静力复位术，胰高血糖素未能显示比安慰剂有任何优越性。并且Webb等人(Med.J.Aust.1986，144，124)总结到胰高血糖素在伤亡科的输尿管绞痛的治疗中无效。
本发明的摘要我们现在发现，既往所述的其高血糖特性令人诧异。支链淀粉素及支链淀粉素激动剂，包括本文所述的那些如支链淀粉素激动剂类似物25，28，29脯-人-支链淀粉素(也被称为AC-0137”)，可降低胃动力并延缓胃排空。这一点已被该类化合物降低餐后血浆葡萄糖水平的能力所证实。
本发明旨在降低胃动力和延续胃排空的新方法，该方法包括施用一种支链淀粉素或一种支链淀粉素激动剂，例如支链淀粉素激动剂类似物AC-0137。这些方法将用在例如餐后高血糖，一种与II型(非胰岛素依赖的)糖尿病有关的并发症的治疗中。
应该理解术语“支链淀粉素”包括如那些由Young和Cooper在1993年8月10日发布的美国专利第5234906号中的“高血糖组合物”定义的化合物，该专利的内容引入本文中作为参考。例如，它包括被称为支链淀粉素并且是从胰腺的β细胞分泌的人类肽类激素和它的种属变异型。“支链淀粉素激动剂”也是本领域中公知的术语，是指摹拟支链淀粉素作用的化合物。因此，支链淀粉素本身和支链淀粉素激动剂类似物可被统称为支链淀粉素激动剂。术语“支链淀粉素激动剂类似物”应理解为是指作用如同支链淀粉素激动剂的支链淀粉素衍生物。一般来说，目前认为，它是由于结合于支链淀粉素受体或其它受体或支链淀粉素自身可与之起作用的受体或者与其相反，直接或间接地与上述受体相互作用而产生上面所述的那些生物学特性。除本文所述的那些外，其它有用的支链淀粉素激动剂类似物在题为“用于治疗和预防低血糖和II型糖尿病的新支链淀粉素激动剂肽”的国际申请WPIAcc.第93-182488/22号中被鉴定。该文的内容也引入本文作为参考。
在第一方面，本发明描绘出一种有利地调节受治疗者胃肠动力的方法，该方法通过向所述受治疗者施用治疗有效量的支链淀粉素或支链淀粉素激动剂，优选一种支链淀粉激动剂类似物来实现。在一项实施方案中，本发明的方法旨在降低胃动力。在另一项实施方案中，本发明的目的是延缓胃排空的方法。
这些方法用于经受胃肠诊断过程，如放射检查或核共振显像的受治疗者。这些方法可选择性地用于胃肠疾病，如痉挛(可能与急性憩室炎，一种胆道的疾病或Oddi氏括约肌病症有关)的患者以降低胃动力。
在另一方面，本发明的目的为一种治疗餐后倾倒综合征的方法，该方法通过将治疗有效剂量的支链淀粉素激动剂施用于治疗对象来实现。
在又一另外的方面，本发明的目的为一种治疗餐后高血糖的方法，该方法通过向治疗对象施用治疗有效量的支链淀粉素激动剂来实现。在一项优选的实施方案中，该餐后高血糖是II型糖尿病的后果。
优选的支链淀粉素激动剂包括25，28，29脯-人-支链淀粉素。优选的支链淀粉素激动剂类似物也包括25，28，29脯-人-支链淀粉素。
在另一方面，本发明的目的是一种治疗受治疗者胃动力低下的方法，该方法通过向受治疗者施用治疗有效量的一种支链淀粉素拮抗剂来实现。在优选的实施方案中，这些方法可应用于糖尿病神经病变后果的动力低下或神经性厌食后果的动力低下的情况。动力低下还可作为胃酸缺乏或胃手术的后果而发生。
在另一方面，本发明的目的是一种加速受治疗者胃排空的方法，它通过向受治疗者施用治疗有效量的支链淀粉素拮抗剂而实现。支链淀粉素拮抗剂意指阻碍支链淀粉素作用的化合物，例如，一种本身缺乏明显的药理学活性但通过对特定激动剂作用的抑制(例如通过竞争激动剂的结合位点)产生作用的化合物。用于这些方法的支链淀粉素拮抗剂优选是支链淀粉素受体拮抗剂。一种优选的拮抗剂是乙酰-11，18精，30天冬酰胺，32酪9-32降钙素(鲑鱼)。
在另一方面，本发明的目的是一种治疗毒素摄入的方法，它通过施用防止或减少胃内容物排向小肠的有效量的支链淀粉素或支链淀粉素激动剂并吸引胃内容物而实现。
图的简要描述

图1显示在口服葡萄糖负荷后支链淀粉素对狗的血浆葡萄糖水平的作用，与对照相比。
图2显示施用安慰剂或静脉快速浓注30μg的AC-0137的人临床志愿者的餐后葡萄糖曲线。
图3显示施用安慰剂或静脉快速浓注100μg的AC-0137的人临床志愿者的餐后葡萄糖曲线。
图4显示施用安慰剂或静脉快速浓注300μg的AC-0137的人临床志愿者的餐后葡萄糖曲线。
图5显示施用安慰剂或以15μg/小时静脉输注AC-0137 2小时的人临床志愿者的餐后葡萄糖曲线。
图6显示施用安慰剂或以50μg/小时静脉输注AC-0137 2小时的人临床志愿者的餐后葡萄糖曲线。
图7显示施用安慰剂或以150μg/小时静脉输注AC-01372小时的人临床志愿者的餐后葡萄糖曲线。
图8a-8b显示从静脉输注25μg/hr三脯-支链淀粉素开始前60分钟开始的曲浆葡萄糖(mg/dl)，血浆三脯-支链淀粉素(pM)，和血浆游离胰岛素浓度(μu/ml)Sustacal餐在开始三脯-支链淀粉素输注后60分钟给予。
图9a-9b显示从静脉输注50μg/hr三脯-支链淀粉素开始前60分钟开始的血浆葡萄糠(mg/dl)，血浆三脯-支链淀粉素(pM)和血浆游离胰岛素浓度(μu/ml)。Sustacal餐在开始三脯-支链淀粉素输注后60分钟给予。
图10a-10c显示从静脉输注50μg/hr三脯-支链淀粉素开始前60分钟开始的血浆葡萄糖(mg/dl)，血浆三脯-支链淀粉素(pM)和血浆游离胰岛素浓度(uU/ml)。在三脯-支链淀粉素输注开始后60分钟给予一个静脉内的葡萄糖负荷(300mg/Kg)。
图l1a-11c显示每日3次餐前施用30μg三脯-支链淀粉素(AC-0137)共14天的人临床志愿者的基线(第1天，第7天和第14天的Sustacal餐耐试验的Sustacal餐后葡萄糖曲线。
图12a-12b显示每日3次餐前施用100ug三脯-支链淀粉素(AC-0137)共14天的人临床志愿者的基线(第1天)，第7天和第14天的Sustacal餐耐试验的Sustacal餐后葡萄糖曲线。
图13a-13b显示每日3次餐前施用300ug三脯-支链淀粉素(AC-0137)共14天的人临床志愿者的基线(第1天)，第7天和第14天的Sustacal餐耐试验的Sustacal餐后葡萄糖曲线。
图14显示在先皮下注射，大鼠支链淀粉素对正常和糖尿病BB大鼠(对每个点n＝3-9)管饲后20分钟胃内容物残留的剂量反应作用。符号为均值±平均标准误而曲线明确显示最符合对数函数。“0”表示存留在未用支链淀粉素处理的正常和糖尿病大鼠中的胃内容物的分数。(差异为P＜0.001)。
图15显示在皮下注射1ug或10ug合成的大鼠支链淀粉素(每组n＝3)后测定的血浆支链淀粉素。符号为均值±平均标准误。
图16描绘在管饲盐水或AC-0187后血浆中来源于葡萄糖的氚(cpm/10ul)。★表示有统计学差异。最下面的描绘线(用断续的线标记的“本底”)来自剖腹术和幽门结扎后管饲的4只被麻醉的大鼠。它表明几乎没有氚直接被胃壁吸收，并且氚的摄取反映葡萄糖从小肠进入血液循环。
图17描绘在用盐水或AC-0187管饲后的血浆葡萄糖(mg/dl)。
本发明的详细描述用于本发明的各种支链淀粉素激动剂类似物的名称是指基于其序列和对任何基础的肽类支链淀粉素序列(如人类支链淀粉素)进行修饰的肽类。在一个氨基酸之前写上一个数字表示所述氨基酸取代正常情况下位于基础氨基酸序列中数字所标的氨基酸位置的氨基酸。例如，18精25，28脯-人-支链淀粉素指的是基于“人-支链淀粉素”或“人类-支链淀粉素”的序列的具有下述替代的肽精氨酸在第18位残基取代组氨酸，在第25位残基脯氨酸取代丙氨酸和在第28位残基脯氨酸取代丝氨酸。术语“去-赖-人-支链淀粉素”指的是一种基于人类支链淀粉素，第1位或N-末端氨基酸被删除的肽。
鉴于其药理学特性，本发明的支链淀粉素激动剂类似物是有用的。支链淀粉素激动剂的活性可以下述的受体结合测定和比目鱼肌测定的活性显示。化合物的支链淀粉素激动剂活性也可根据在哺乳动物中产生高血钙和/或高血糖，或降低餐后血浆葡萄糖水平的能力来评价，正如本文所述。
优选的支链淀粉素激动剂类似物化合物去-赖-人-支链淀粉素，28脯-人-支链淀粉素，25，28，29脯-人-支链淀粉素，18精25，28脯-人-支链淀粉素，和去-1赖18精25，28脯-人-支链淀粉素，均在被试动物体内显示支链淀粉素淀粉活性，在高血糖后诱发显著的高血钙。还发现某些优选的化合物除具有支链淀粉素特征的活性外，与人类支链淀粉素比较具有更理想的可溶性和稳定性。这些优选的化合物包括25脯26缬28，29脯-人-支链淀粉素，25，28，29脯-人-支链淀粉素(在本文中也被称为AC-0137)，和18精25，28脯-人-支链淀粉素。
本发明的方法可使用支链淀粉素激动剂，包括支链淀粉素或支链淀粉素激动剂类似物，例如，支链淀粉素受体激动剂类似物如18精25，28脯-人-支链淀粉素，去-1赖18精25，28脯-人-支链淀粉素，18精25，28，29脯-人-支链淀粉素，去-1赖18精25，28，29脯-人-支链淀粉素，25，28，29脯-人-支链淀粉素，去-1赖25，28，29脯-人-支链淀粉素，和25脯26缬25，28脯-人-支链淀粉素。其它适合的支链淀粉素激动剂类似物的实例包括23亮25脯26缬28，29脯-人-支链淀粉素；23亮25脯26缬28脯-人-支链淀粉素；去-1赖22亮25脯26缬28脯-人-支链淀粉素；18精23亮25脯26缬28脯-人-支链淀粉素；18精23亮25，28，29脯-人-支链淀粉素；18精22亮25，28脯-人-支链淀粉素；17异亮23亮25，28，29脯-人-支链淀粉素；17异亮25，28，29脯-人-支链淀粉素；去-1赖17异亮23亮25，28，29脯-人-支链淀粉素；17异亮18精23亮-人-支链淀粉素；17异亮18精23亮26缬29脯-人-支链淀粉素；17异亮18精23亮25脯26缬28，29脯-人-支链淀粉素；13苏21组23亮26丙28亮29脯31天冬-人-支链淀粉素；13苏21组23亮26丙29脯31天冬-人-支链淀粉素；去-1赖13苏21组23亮26丙28脯31天冬-人-支链淀粉素；13苏18精21组23亮26丙29脯31天冬-人-支链淀粉素；13苏18精21组23亮28，29脯31天冬-人-支链淀粉素；和
13苏18精21组23亮25脯26丙28，29脯31天冬-人-支链淀粉素。
其它支链淀粉素激动剂还包括支链淀粉素激动剂类似物，它们公开于WPI ACC第93-182488/22号，“用于治疗和预防低血糖和糖尿病的新支链淀粉素激动剂肽”中，该文献公开的内容并入本文作为参考。
可使用本文描述的某些生物测定法评价支链淀粉素激动剂的活性。受体结合测定可鉴定候选的支链淀粉素激动剂和拮抗剂两者，并可用于评价结合，而比目鱼肌测定法区分支链淀粉素激动剂和拮抗剂。可使用下面实施例中描述的方法，或其它本领域公知的或相当的测定胃动力的方法鉴定、评价或筛选支链淀粉素或支链淀粉素激动剂对胃动力的作用。
一种用于鉴定或评价一种化合物降低胃动力的能力的此类方法包括a)将测定样本和测定系统放在一起，所述测定样本包含一种或多种测试化合物，而所述测定系统包括一个评价胃动力的系统，所述系统的特征在于，例如，在向所述系统引入葡萄糖或一餐时反应为血浆葡萄糖升高，和b)测定所述系统中血浆葡萄糖升高的存在和量。也可使用阳性和/或阴性对照。可将预先测定量的支链淀粉素拮抗剂(例如5-32鲑鱼降钙素)加或不加到该测定系统中。
在受体结合测定法中激动剂化合物优选在小于约1至5nM级别表现活性，优选小于约1nM并更优选小于约50pM。在比目鱼肌测定法中这些化合物优选在小于约1至10微摩尔级别显示EC50值。
在1991年3月15日提交的美国专利申请第670231号中描述了受体结合测定法，并作为国际申请第PCT/US 92/02125号于1992年10月1日发表，其内容引入本文作为参考。受体结合测定法是一种测定化合物特异性地结合于膜-结合的支链淀粉素受体的能力的竞争性测定法。一种用于该测定法的优选的膜制品来源是包含来自听神经核和周围区域的膜的基底前脑。被测定的化合物与125I标记的Bolton Hunter大鼠支链淀粉素竞争结合于这些受体制品。应用通过对4参数对数方程式的非线性回归的分析(Inplot程序；GraphPAD Software，San Diego，California)或Delean等人的ALLFIT程序(ALLFIT，Uersion 2.7(NIH，Betheada，MD 20892))，通过计算机分析竞争性曲线，其中结合量(B)按配体浓度的对数函数标绘。Munson，P和Rodbard，D.，Anal Biochem.107220-239(1980)。
支链淀粉素激动剂，包括在比目鱼肌测定法中的支链淀粉素激动剂类似物制品的生物活性的测定，使用先前描述的方法进行(Leighton，B.和Cooper，G.J.S.，Nature，335632-635(1988)；Cooper，G.J.C.，等人，Proc.Natl Acad.Sci.USA.857763-7766(1988))。概括地说是通过测定在比目鱼肌中胰岛素刺激的糖原合成的抑制评价支链淀粉素激动剂的活性。通过测定在100nM大鼠支链淀粉素和一种支链淀粉素拮抗剂存在下胰岛素刺激的糖原结合成的恢复评价支链淀粉素拮抗剂的活性。溶解于无载体缓冲液中肽浓度通过如本文所述的定量氨基酸分析法确定。本测定法中化合物作为激动剂起作用的能力通过测定EC50值确定。通过使用一种4参数对数方程式配合S型剂量反应曲线确定标准误(De lean，A.，Munson，P.J.，Guardabasso，V.和Rodbard，D(1988)ALLFIT，Version 2.7，NationalInstitute of child Health and Human Deuelopment，N.I.H.Bethesda，MD，1 diskette)。使用这些生物测定法已确定了许多种支链淀粉素激动剂的特性。在受体结合测定法中发现化合物18精25，28脯-人-支链淀粉素，去-1赖18精25，18脯-人-支链淀粉素，18精25，28，29脯-人-支链淀粉素，去-1赖18精25，28，29脯-人-支链淀粉素，25，28，29脯-人-支链淀粉素，去-1赖25，28，29脯-人-支链淀粉素，和25脯26缬25，28脯-人-支链淀粉素均与支链淀粉素竞争。这些化合物用比目鱼肌测定法测得具有可忽略的拮抗剂活性，并显示可作为支链淀粉素激动剂。用上面所列的其它激动剂化合物得到类似的结果。
在治疗胃动力低下的方法中有用的支链淀粉素拮抗剂化合物包括1991年11月19日提交的美国专利申请第07/794 288号中述及的化合物，其内容全盘并入本文作为参考。使用标准固相肽合成技术如上所述的那些化合物并优选自动的或半自动的肽合成化。典型地，室温下，在一种惰性溶剂(如二甲基甲酰胺，N-甲基吡咯烷酮或二氯甲烷)中，在偶联剂(如双环己基碳化二亚胺和1-羟苯并三唑)存在下，在一种碱(如二异丙乙胺)存在下，被α-N-氨基甲酰保护的氨基酸与连接在树脂上的增长肽链上的氨基酸进行偶联。使用一种试剂如三氟乙酸或哌啶将α-N-氨基甲酰保护基团从所得的肽-树脂上除去，并用加在肽链上的下一个所希望的N保护的氨基酸重复该偶联反应。适合的N-保护基团在本领域是公知的，而本文优选t-丁氧羰基(tBoc)和芴基甲氧羰基(Fmoc)。
除非另有说明，用于肽合成仪的溶剂，氨基酸衍生物和4-甲基二苯甲基胺树脂均购自Applied Biosystems Inc.(Fostercity，CA)。使用和购自Applied Biosystem.Inc.的侧链保护的氨基酸包括下列Boc-精(Mts，Fmoc-精(pmc)，Boc-苏(Bzl)，Fmoc-苏(t-Bu)，Boc-丝(Bzl)，Fmoc-丝(t-Bu))，Boc-酪(BrZ)，Fmoc-酪(t-Bu)，Boc-赖(Cl-z)，Fmoc-赖(Boc)，Boc-谷(Bzl)，Fmoc-谷(t-Bu)，Fmoc-组(Trt)，Fmoc-谷氨酰胺(Trt)，及Fmoc-谷(Trt)和Boc-组(BOM)购自Applied Biosystems，Inc.或Bachem Inc.(Torrance，CA)。苯甲醚，二甲硫，苯酚，乙基二硫酚，和硫代苯甲醚得自Aldrich Chemical Compang(Milwaukee，WI)。Air Products and Chemicals(Allentowd，PA)提供HF。乙醚，乙酸和甲醇购自Fisher Scientific(Pittsburgh，PA)。
固相肽合成应用自动肽合成仪(Model，Applied BiosystemsInc.，Foster City，CA)进行，使用NMP/HoBt(选择1)系统和加罩的tBoc或Fmoc化学(见Applied Biosystems User’s Manualfor the ABI 430A Peptide Synth sizer，Version 1.3B July 1，1988，Section 6，PP 49-70，Applied Biosystems，Inc.，Foster City CA)。Boc-肽-树脂用HF剪切(-2℃至0℃，1小时)。交替应用水和乙酸从树脂上提取肽，并将滤液冻干。按照标准方法剪切该Fmoc-肽树脂(Introduction to cleavage Techniques，AppliedNiosystems，Inc.，1990，PP 6-12)。一些肽也使用AdvancedChem Tech Synthesizer(Model MPS 350，Louisville，Kentueky)装配。经RP-HPLC(制备的和分析的)使用WatersDelta Prep 3000系统提纯肽。使用C4、C8或C18制备柱(10u，2.2×25cm；Vydac.Hesperia，CA)分离肽，并使用C4、C8或C18分析柱(5u，0.46×25cm；Vydac)测量纯度。溶剂(A＝0.1％TFA/水和B＝0.1％TFA/CH3CN)以流速1.0％ml/min被送至分析柱并以15ml/min被送至制备柱。在Waters Pico Tag系统上使用Maxima程序进行氨基酸分析。通过气相酸水解(115℃，20-24小时)将该肽水解。用标准方法衍生和分析水解产物(Cohen，S.A.，Meys，M.，和Tarrin，T.L.(1989)。The PicoTag MethodA Manual of Aduanced Techniques for Amino AcidAnalgsis pp.11-52。)Milipore Corporation，Milford，MA)。快速原子轰击分析由Scan，Zncorporated进行(WestCtester，PA)。使用碘化铯或磺化铯/甘油进行质量校准。使用射程检测时间的血浆解吸离子化分析在Applied Biosystems Bio-Ion 20质谱仪上进行。
用于本发明的肽化合物也可使用重组DNA技术制备，应用本领域现在已知的方法。见，如Sambrook等人，Molecular CloningA Laboratory Mannal，2d Ed.，Cold Spring Harbor(1989)。
上面提到的化合物与各种无机和有机酸和碱形成盐。此类盐包括用有机的和无机的酸，如HCl、HBr、H2SO4、H3PO4，三氟乙酸、乙酸、甲酸、甲磺酸、甲苯磺酸、马来酸、富马酸和樟脑磺酸制备的盐。用碱制备的盐包括铵盐、碱金属盐，例如，钠和钾盐，和碱土金属盐，例如，钙和镁盐。优选乙酸盐、盐酸盐和三氟乙酸盐。可通过常规方法形成盐，如在一种该盐不可溶的溶剂或介质中，或在一种随后可在真空下或通过冷冻干燥除去的溶剂如水中通过将游离酸或碱形式的产物与一当量或多当量的碱或酸反应，或者通过在一种合适的离子交换树脂上用一些已存在的盐的离子交换另一种离子。
上述化合物鉴于它们的药理学特性，是有用的。特别是，本发明的化合物具有延缓胃排空药物的活性，正如被降低哺乳动物餐后葡萄糖水平的能力所证实。
如实施例1中所述，评价在狗中支链淀粉素对口服葡萄糖耐受性试验的作用。支链淀粉素以往被令人意外地描述为高血糖剂(即，一种导致血糖升高的物质)，但在这些试验动物中却发现它降低餐后血浆葡萄糖水平。在口服葡萄糖耐受性试验中所有被测试剂量比率的支链淀粉素均降低血浆葡萄糖上升的速率和血浆葡萄糖峰值。
实施例2描述在人类临床试验中支链淀粉素激动剂AC-0137对餐后血浆葡萄糖水平的作用。在青少年发病的糖尿病受治疗者中，快速浓注和连续静脉注射AC 0137两者均观察到餐后高血糖的剂量依赖性降低。
实施例3描述在Sustacal餐和静脉葡萄糖负荷后连续输注AC-0137(三脯-支链淀粉素，对血浆葡萄糖水平的作用。静脉内葡萄糖负荷组中，用50μg/hrAC-0137处理的受试者与安慰剂处理的受试者的血浆葡萄糖水平无显著差异。然而以25μg/hr或50μg/hr静脉输注给予了Sustacal餐的受试者，发现AC-0137处理的受试者与安慰剂相比血浆葡萄糖水平下降。在胰岛素依赖型糖尿病患者口服营养物质后AC-0137降低餐后血浆葡萄糖浓度，但在静脉施用葡萄糖后未测得AC-0137对血浆葡萄糖浓度的影响作用。
如在实施例4中所述，在一项14天的双盲、安慰剂-对照的临床研究中，青少年发病的糖尿病患者继续他们通常的胰岛素治疗并每日3次自我注射三脯-支链淀粉素(AC-0137)，他们在测试餐后的平均血糖水平，比接受胰岛素和安慰剂治疗的患者要低。14天后，在30微克组观察到有统计学意义(p＝0.02)的葡萄糖平稳效果(以葡萄糖曲线下面积测定)，三脯-支链淀粉素血浆峰值浓度在发现于非糖尿病个体血中的支链淀粉素范围内。三脯-支链淀粉素引起受治疗者曲线下面积的下降伴随血糖峰浓度平均下降45mg/dl至60mg/dl。
如实施例5中所述，使用通过管饲传送含有酚红的一种无热量甲基纤维素凝胶的潴留测定正常和胰岛素治疗的自发性糖尿病BB大鼠的胃排空。用分光镜测定20分钟后处死后切除的胃中的染料含量，并与管饲后立即处死的大鼠的含量比较以评价排空。与正常Harlan Spragus Dawley大鼠(49.1±4.7％通过；p＜0.001)和非糖尿病BB大鼠(61.1±9.2％通过，p＜0.001)相比，糖尿病大鼠的胃排空显著加快。在IDDM中缺乏的这种胰腺β-细胞肽，支链淀粉素，剂量依赖地抑制正常和糖尿病大鼠胃排空。在正常和糖尿病大鼠两者中反应的ED50是-1ug，这一剂量在注射后20分钟导致76pM的支链淀粉素峰值浓度。这些浓度在体内观察到的浓度范围内。这些结果支持支链淀粉素参与营养素，进入十二指肠的生理控制的确定。
如实施例6中所述，在清醒的、被禁食的肥胖LA/N大鼠中测定食入标记的葡萄糖负荷的摄取。用支链淀粉素受体拮抗剂，AC-0187预注射，加速血浆中葡萄糖衍生的氚的出现。另外，用支链淀粉素拮抗预注射导致管饲后15分钟血浆葡萄糖的大幅度上升和血浆葡萄糖水平的更早的下降。这些资料与支链淀粉素拮抗剂AC-0187抵抗内源性分泌的支链淀粉素的作用是一致的，从而加速胃排空。
在另外的以麻醉大鼠进行的研究中，发现支链淀粉素不影响葡萄糖从小肠吸收入血液。在那些实验中，将麻醉大鼠用大鼠支链淀粉素(0.35n/kg)或盐水连续输注，在对照组连续输注3小时。支链淀粉素输注后1小时，通过一根经食道插入的管子将葡萄糖快速浓注(lg/kg)入胃或十二指肠。因为该研究涉及麻醉的而不是清醒的大鼠，所以在分析胃动力，如果内容物排空进入十二指肠的速度时，不予考虑。然而，该研究表明支链淀粉素不延迟葡萄糖从十二指肠吸收入血液。使用不同的制剂以更直接地说明支链淀粉素是否影响葡萄糖从小肠腔转入血液。在麻醉的大鼠中，一段通过其血供仍与该动物相连的小肠被外置并插管，以便用控制组份的葡萄糖溶液灌注该小肠。使该动物套管插经一条动脉(为取血样)和一条静脉(为输注支链淀粉素、胰岛素和葡萄糖)。用氚标记的葡萄糖溶液灌注该肠腔。通过氚标记在血浆中的出现测定葡萄糖从肠腔通入大鼠。通过施用葡萄糖转运阻断剂根皮甙，测试血浆中这种氚的出现实际测量出葡萄糖从肠的摄取的假设。根皮甙主要防止标记从肠腔向血浆中的转运。为保证在肠腔和血浆间的葡萄糖梯度保持稳定，在支链淀粉素输注过程中，通过应答血浆葡萄糖变化而改变葡萄糖的输注使血浆葡萄糖被“钳夹”。在一准备中，静脉内支链淀粉素输注对输至小肠的标记葡萄糖进入血浆的速度无影响。这些结果显示在上述研究中在支链淀粉素处理的受试者中观察到的血糖下降似乎不是由于从小肠的吸收下降，而相反地是由于胃内容物向十二指肠转移的速度下降，即，由于延迟的胃排空。
用于发明的组合物可方便地以适于非胃肠道(包括静脉、肌内和皮下)或鼻腔或口腔施用的形式提供。在某些情况下，将一种支链淀粉素激动剂和另一种抗排空剂，如胰高糖素提供于一种单一组合物或溶液中以共同施用是方便的。在其它情况下，将另一抗排空剂与所述支链淀粉素或支链淀粉素激动剂类似物分开单独应用可能更有利。最好由开业医生为每位患者单独确定一种合适的用药形式。合适的药学上可接受的载体和它们的配方详述于标准配方论文中，如Remignton’s Pharmaceutical Sciences E.W.Martin著。也见Wang.Y.J.和Hanson，M.A.的“ParenteralFormulations of Proteirs and PeptidesStability andStabilixers。”Journal of Parenteral Science and TechnolTechnical Report No.10.Supp.4225(1989)。包括降血糖剂如磺脲类的适宜配方是本领域公知的。
用于本发明的化合物可以以用于注射或输注的非胃肠道组合物的形式提供。比如，将它们悬溶于一种惰性油中，适合的植物油如芝麻、花生、橄榄油或其它可接受的载体。优选地，将它们悬溶于一种水性载体，例如，pH为约5.6至7.4的等渗缓冲液。这些组合物可用常规的灭菌方法灭菌，或可被灭菌过滤。按接近生理条件的需要，该组合物可包括药学上可接受的辅助物质，例如pH缓冲剂。有用的缓冲剂例如包括，乙酸钠/乙酸缓冲剂。可使用一种贮库或“仓库”缓释制剂的形式以使治疗学上有效量的制剂在经皮注射或投药后很多小时或很多天一直释放入血流。
可使用氯化钠或其它药学上可接受的试剂如葡萄糖、硼酸、酒石酸钠、丙二醇、多元醇(例如甘露醇和山梨醇)，或其它无机的或有机的溶质实现所需的等渗性。对于含钠离子的缓冲剂特别地优选氯化钠。
如果需要的话可使用增稠剂如甲基纤维素使上述组合物的溶液增稠。可将它们制成乳化的油包水或水包油形式。可应用很多种药学可接受的乳化剂中的任何一种，例如包括，阿拉伯胶粉，一种非离子的表面活性剂(如一种吐温)，或一种离子的表面活性剂(如聚乙醚醇碱金属硫酸盐或磺酸盐，例如，三硝基甲苯)。
用于发明的组合物通过按通常被接受的程序将各成分混合而制备。例如，所选择的成分可在混合器或其它标准装置中简单地被混合以生产浓缩的混合物，再将其调整至最终浓度和粘度，该调整是通过加入水或增稠剂并可加入缓冲剂以控制pH或另一种溶质以控制等渗性进行的。
为医生使用，该组合物将以包含一定量的支链淀粉素或支链淀粉素激动剂的剂量单位形式提供，例如，一种加入或不加入另一种抗排空剂的支链淀粉素激动剂类似物化合物，在一或多种剂量能有效地将血糖控制在选定的水平。用于控制胃排空和用于延缓或调节胃排空有利的疾病的支链淀粉素或支链淀粉素激动剂如支链淀粉素激动剂类似物的治疗有效量是，降低餐后血葡萄糖水平，优选降至8或9mM以下或使血葡萄糖水平按所希望的下降的剂量。在糖尿病或对葡萄糖耐受的个体，血浆葡萄糖水平比正常个体中高。在这样的个体中，可得到餐后血葡萄糖水平的有利的下降或“变平稳”。正如本领域的人们将会认知的那样，治疗制剂的有效量随很多因素而改变，这些因素包括患者的年龄和体重，患者的身体状况，血糖水平和所得到的支链淀粉素的下降作用及其它因素。
此类药物组合物可用于在受治疗者中产生胃动力低下或也可用于降低胃动力是有利的疾病。
包括18精25，28脯-人-支链淀粉素，去-1赖18精-25，28脯-人-支链淀粉素，18精25，28，29脯-人-支链淀粉素，去-1赖18精25，28，29脯-人-支链淀粉素，25，28，29脯-人-支链淀粉素，去-1赖25，28，29脯-人-支链淀粉素，和25脯26缬25，28脯-人-支链淀粉素的化合物的有效的抗排空每日剂量典型地在0.01或0.03至约5mg/日的范围内，优选约0.01或0.5至2mg/日，并更优选约0.01或0.1至1mg/日，这是对70kg的患者而言，以单一或分开的剂量用药。施用的确切剂量由治疗的医生决定，并依赖上述范围内的特定化合物，以及个体的年龄，重量和身体状况。应在症状最早表现出来时或在诊断为糖尿病后不久开始用药。可通过注射施用，优选皮下或肌内注射。口服有活性的化合物可口服，但剂量应增加5-10倍。
一般地，在治疗或防止升高的，不适当的，或不希望的餐后血葡萄糖水平时，本发明的化合物可施用于需要这样治疗的患者，剂量范围类似于上面所给出的，但是，该化合物的施用更频繁，例如每日一、二或三次。
用于治疗胃动力低下的支链淀粉素拮抗剂可以从0.1至30mg/日，优选0.3至10mg/日和优选0.1至3mg/日的剂量施用。施用可通过，例如，皮下或肌内注射。口服有活性的化合物可口服，但是剂量应增加5-10倍。
为帮助理解本发明，将描述一系列实验的结果的下述实施例包括在内。当然，与本发明相关的实验不构成对本发明的特别限定。并且，现在已知的或以后发展的在本领域熟练技术人员的视界之内的本发明的此类变化形式应被认为落在本文所述和下文权利要求所要求的本发明的范围内。
实施例1以前的研究已证实在葡萄糖耐量试验条件下向空腹的和喂食的大鼠静脉注射支链淀粉素可以以剂量依赖方式降低血浆葡萄糖的下降和增加血浆乳酸盐。在空腹的动物中输注支链淀粉素也显著地抑制胰岛素反应。
然而下述研究和实验显示支链淀粉素输注降低狗的应答口服葡萄糖负荷的血浆葡萄糖水平。这些研究的目的是(1)评价应答口服葡萄糖负荷的血浆葡萄糖，乳酸盐和胰岛素的变化；(2)评价静脉施用支链淀粉素对这些变量的作用；和(3)评价支链淀粉素拮抗剂AC-0253(乙酰-11，18精，30精，32酪，9-32降钙素(鲑鱼)递转支链淀粉素诱导的血浆葡萄糖变化的功效。
本研究使用杂种狗(9只雄性，12-17公斤重量范围)。在每次研究前所有动物均禁食过夜。在所有方案中每只动物以其自身作对照。在每一方案开始前将动物平衡30-60分钟。在t＝-30分，开始给予载体，或支链淀粉素±AC-0253。支链淀粉素剂量速度为50、100和300pmol/kg/min。AC-0253的剂量速度为500和1500pmol/kg/min。在t＝0分钟经口施予25％葡萄糖(1g/kg)。在t＝120分钟时停止支链淀粉素±AC-0253。从t＝-45至t＝180分钟以15分钟的间隔取胰岛素，葡萄糖和乳酸盐的样本。在t＝60和120分钟时取大鼠支链淀粉素和AC-0253的样本。
在正常狗中，血浆葡萄糖峰值在清醒狗口服葡萄糖负荷后30-45分钟间出现。虽然存在可观的狗间变异性，但对每一只个体狗的反应类型是可重复的。支链淀粉素，在所有被测试的剂量速度不仅降低血浆葡萄糖上升的速度还降低峰值血浆葡萄糖。在支链淀粉素输注过程中，血浆葡萄糖以明显低于对照实验的水平在30至45分钟显示达到一个平台，并在支链淀粉素输注中止后又开始上升。在支链淀粉素剂量速度50、100和300pmol/kg/分之间血浆葡萄糖变化无明显差异。
选择50pmol/kg/min的支链淀粉素剂量速度用于为评价AC-0253逆转支链淀粉素的血浆葡萄糖变化的功效进行的实验。AC-0253在高至1500pmol/kg/min的剂量不能完全逆转支链淀粉素(50pmol/kg/min)的作用。单独的AC-0253对血浆葡萄糖的改变没有作用。支链淀粉素和AC-0253对血浆乳酸盐的作用不显著。
实施例224名患有胰岛素依赖型糖尿病的量性受治疗者参与支链淀粉素激动剂AC-0137的临床研究。每个受治疗者被随机地分配至接受安慰剂，30μg、100μg或300μg的AC-0137的四个治疗组中的一个。每个剂量组的受治疗者经历两个阶段的交叉以检验药物静脉快速浓注对静脉输注。每一个阶段包含3天被限制在该研究单位中。在每次研究时，限制的开始的那天用来适应该研究单位。第2和3天以安慰剂对活性药物的包埋交叉组成。例如，随机地先接受静脉快速浓注的受治疗者再进一步安排在一天接受AC-0137的静脉快速浓注并在另一天接受安慰剂的快速浓注(或快速浓注安慰剂随后快速浓注AC-0137的相反次序)。在两周后，该受试者被再收入院以通过相对的用药形式，即静脉内输注形式接受相同剂量的AC-0137。在这次入院的第2和第3天采用包埋交叉设计施用药物和安慰剂以类似于第一次入院采用的方式。被分配至安慰剂组的6个受治疗者在每一研究日接受安慰剂。
在研究日，至少在开始研究前30分，用药前15分钟插入静脉内插管，受试者们通过皮下注射施用他们通常的胰岛素剂量。在0时间，受试者们在两分钟内接受指定剂量的AC-0137或安慰剂的静脉快速浓注，或者开始AC-0137或安慰剂的连续输注并持续两小时。输注速度设计为在两小时内施用指定量的药物。30分钟后，受治疗者们进食他们正常的早餐。在-30至300分之间采血样供测定血浆AC-0137和血浆葡萄糖水平。
在期望的过程后的血浆药物水平在快速浓注后不久达峰值，随后以明显的一级动力学从血浆中消失。与此相反，连续输注导致在30分钟内药物水平接近稳定状态并在整个剩余的输注时间内维持在该水平。停止输注后，血浆水平以类似于在静脉快速浓注中观察到的方式衰减。
血浆葡萄糖水平曲线显示了一些未预料到而有趣的结果。如在每次研究中能从接受安慰剂的受治疗者认识到的，在60至90分钟血浆葡萄糖水平上升至高于基线并维持升高至少至240分钟。静脉快速浓注施用AC-0137，给予30μg剂量不引起血糖水平的显著改变。给予100μg快速浓注，餐后葡萄糖的上升明显地被延迟并较不明显。在300μg快速浓注后，餐后葡萄糖水平的上升被基本消除。
在连续静脉输注组，可观察到餐后高血糖的剂量依赖的降低。从15μg/hr输注得到的数据高度提示有效，并且当输注速度增高到50和150μg/hr时，餐后葡萄糖水平上升显著减弱。类似的趋势出现在应用快速浓注施用药物的研究中。
实施例3进行一项单盲的、安慰剂对照的、两阶段的、在处理间有至少15小时消除时间的交叉研究以进一步说明三脯支链淀粉素在降低餐后高血糖中的作用，并证实餐后高血糖的下降主要是一种胃肠道的作用。
将27各患胰岛素信号型糖尿病的受治疗者分配到2种剂量水平组和2种类型耐受性试验组中。按照交叉设计，受治疗者接受使用连续微输泵注入AC0137和安慰剂的治疗。将受治疗者每组9人分为如下3组A组接受Sustacal餐和25μg/hr剂量的AC-0137。B组接受Sustacal餐后50μg/hr剂量的AC-0137。C组接受静脉内葡萄糖负荷和50μg/hr剂量的AC-0137。
受治疗者们在诊所呆三天。在限制的第一天，使受治疗者们适应诊所。在第2和第3天受治疗者们完成AC-0137对安慰剂的两阶段交叉设计。另外，受治疗者们接受Sustacal餐或者静脉内葡萄糖耐受性试验，按照组的分配确定。
在第一天，稳定受治疗者通常的胰岛素和热卡摄入并且在整个限制于诊所期间每一受治疗者继续这样的胰岛素和饮食治疗方案。
在约7点钟(T＝0，开始连续输注所研究的药物。T＝30分钟时，受治疗者们施用其通常的上午剂量的胰岛素。T＝60分钟，让受治疗者喝下含355卡的标准Sustacal餐，或静脉内给予300mg/kg的葡萄糖负荷，后者使用输液泵在5分钟内静脉输注施用D50W。按照随机安排决定耐受性试验的类型。在规则的间隔取血样以供测定葡萄糖、乳酸盐和胰岛素并供确定AC-0137血浆浓度。在t＝300分钟停止施用研究药物。
在第3天早晨，以与第2天类似的方式再置静脉管线。受治疗者们如在第2天一样应用他们通常的早餐前剂量的胰岛素。受治疗者们与前一天一样采用同样的静脉途径和摄生法以交叉方式接受安慰剂或研究药物(即在第2天在接受AC-0137输注的受治疗者们在第3天接受安慰剂输注)。再次给予与在第2天接受的完全一致的标准化Sustacle餐耐受量或静脉内负荷。在取样阶段结束时撤去静脉管线。
如图10所示，对于给予静脉内的负荷的受治疗者，用50μg/hrAC-0137治疗，其血浆葡萄糖水平与安慰剂治疗的受治疗者无显著差异。当比较校正基线值的葡萄糖曲线下面积时，这些注射后葡萄糖浓度的差异具有统计学意义(P＝0.0015)。因此通过在明显低于以前所用的平均血浆AC-0137的浓度存在下应用标准餐，证实了在施用AC-0137期间餐后高血糖降低的观测。
但是，如在图8和图9中所示，用25μg/hr或50μg/hr AC-0137静脉内输注治疗的给予Sustacal餐的受治疗者，与安慰剂相比，用AC-0137治疗的受治疗者的血浆葡萄糖水平下降。
可耐受的药理学剂量的AC-0137，可降低胰岛素依赖型糖尿病患者口服营养素后的餐后血餐葡萄糖浓度，但对施用静脉葡萄糖负荷后的血浆葡萄糖浓度没有可测到的作用。这些结果与AC-0137改变口服营养素从肠摄取的观点是相符的，并说明胃排空速度的改变至少是这种作用的一部分原因。
实施例4采取随机的、双盲的、安慰剂对照的平行组以确定三脯支链淀粉素(AC-0137)对进食Sustacal标准化餐(Mead-Johnson)后的血浆葡萄糖水平的作用。72名患有胰岛素依赖型糖尿病的受治疗者参加一项14天的临床试验。每个受治疗者被随机分配至通过皮下注射1日3次接受安慰剂，30、100或300μg三脯支链淀粉素14天的4个治疗组中的一个。在整个研究中，受治疗者们也保持他们通常的胰岛素治疗方案。在第1天(基线)第7天和14天进行标准餐耐受性试验。
为进行标准餐耐受性试验，在8点给予受治疗者Sustacal液体餐(360ml，含360卡)。从前一天夜间22点受治疗者禁食物或饮料(水除外)。直至Sustacal餐前30分钟受治疗者才施用他们通常剂量的胰岛素。对基线试验，在第1天一直不施用，三脯支链淀粉素(或安慰剂)直至实验结束后。在第7和第14天，在与通常施用早晨剂量胰岛素同样的时间以分开的注射方式施用三脯支链淀粉素(或安慰剂)。在刺激开始的-30、0、30、60、不20和180分钟取血样以测定血清葡萄糖水平。受治疗者开始服Sustacal餐的时间被认为是时间零点。
如在下面的表1和在图11-13中所示，在14天后，在30μg和100μg剂量水平观察到有统计学意义的(P＝0.02)葡萄糖平稳作用(按葡萄糖曲线下面积测定)。在脯支链淀粉素诱导的曲线下面积(AUC)下降伴随受治疗者峰值血液葡萄糖浓度平均下降45mg/dl至60mg/dl。
表1应用三脯支链淀粉素14后餐后葡萄糖(AUC)的变化三脯支链淀粉素剂量(每日用药3次)安慰剂30微克100微克300微克在14天测试的患者数 211522 12餐后葡萄糖AUC(mg/dl min)(a)变化的平均值 +229 -6.645-6.412 -7.316对安慰剂(b)的“P”值 … 0.02 0.020.11三脯支链淀粉素血浆峰值… 22±4 4±14 173±0(a)AUC是在试验餐开始至3小时后之间的相对于餐前葡萄糖值的葡萄糖浓度曲线下面积。对每一个在两天进行测试的受治疗者AUC的变化是用给药前的值减去第14天的值(b)P值取自非参数的wilcaoon检验实施例5进行下面的研究以检验在自发性自身免疫糖尿病的啮齿动物模型，胰岛素治疗的BB大鼠中支链淀粉素激动剂对胃排空的作用。
使用最初在1989年来源于丹麦Mollegard BreedingCenter，本机构群体(in-house colony)的雄性Harlar SpragueDahley(HSD)大鼠(161-244g)和(Biobreeding(BB)大鼠(181-405g)。在至少两天通过尿糖证实BB大鼠患有糖尿病后，用每日皮下注射超长效重组人胰岛素(Humulin-U，Eli Lilly，Indianapolis)进行治疗。胰岛素治疗的目标是使尿中葡萄糖维持丙酮体减至最少，以避免低血糖死亡。实际上，在88％的测定中尿糖存在，在52％中酮体存在。糖尿病的平均持续时间是53±5天，每日胰岛素需要量为4.7±0.3单位。所有动物被养在22.7±0.8℃，1212小时光照黑暗循环条件下(在光照期间进行实验)，随意喂食和喂水(Diet LM-485，Teklad，Madison，WI)。
用下述的胃排空测定方法通常在禁食-20小时后进行，以保证胃不含会干扰分光光度法吸收测定的食糜。然而，用超长效胰岛素治疗的糖尿病大鼠不能被禁食20小时。大于6小时的禁时期可导致低血糖。因此这样的动物在测定胃排空空只禁食6小时。非糖尿病大鼠在实验前被剥夺食物6至20小时。我们注意到即使非糖尿病BB大鼠也具有升高的糖化血红蛋白浓度，表明可能是亚临床的胰岛素。因此非糖尿病的Harlan Sprague Dawley大鼠和非糖尿病的BB大鼠两种动物均用于与糖尿病大鼠比较。因此，有5个治疗组(1)非糖尿病Harlan Sprague Dawley大鼠，禁食6小时，n＝8。
(2)非糖尿病BB大鼠，禁食6小时，n＝6。
(3)糖尿病的BB大鼠，禁食6小时，n＝10。
(4)非糖尿病Harlan Sprague Dowley大鼠，禁食20小时，n＝20。
(5)非糖尿病BB大鼠，禁食20小时，n＝7。
清醒的大鼠经管饲接受含1.5％甲基纤维素(M-0262，Sigma Chemical Co.St Louis，Mo)和0.05％酚红指示剂的1.5ml的无热量凝胶。管饲后20分钟，用5％氟烷麻醉大鼠，将胃暴露并使用动脉钳在幽门和下食道括约肌钳夹，移离并向由固定容量组成的碱性溶液开口。在波长560nm处测定吸光度得到在碱性溶液中酚红的强度而推知胃容量。在多数实验中；胃是清亮的，在其它实验中，将颗粒的胃内容物离心以使溶液清亮供吸光度的测定。如果被稀释的胃内容物仍混浊，则由酚红的分光镜吸光度推知存在于碱性对酸化的稀释剂之间的区别。在7只大鼠的分别实验中，切下胃和小肠并使其开口入碱性溶液。在管饲后20分钟内从上胃肠道可回收的酚红量为89±4％。为搞清最大染料回收小于100％的原因，20分钟后将剩余的胃内容物表达为从同一实验中管饲后立即处死的对照大鼠回收的胃内容物的分数。
在基线研究中(不注射支链淀粉素)，测定上述5个治疗组中经20分钟的胃排空。在剂量反应研究中，将溶于0.15M盐水中的大鼠支链淀粉素(Bachem，Torrance，CA)在管饲前5分钟以剂量0、0.01、0.1、1、10或100μg的0.1ml溶液皮下快速浓注施用于禁食20小时的46只Harlan Sprague Dawley(非糖尿病)(n分别等于17、2、8、8、6、5)。和禁食6小时的29只糖尿病BB大鼠(n分别等于10、-、3、3、10)。
在一项用于评价有效剂量的皮下支链淀粉素对血浆支链淀粉素浓度产生的变化的独立实验中，血样取自6只皮下快速浓注1μg(n-3)或10g(n＝3)大鼠支链淀粉素后氟烷麻醉的大鼠尾部。在另一实验中，比较非禁食的Harlan SpragueDawley大鼠中(n＝8)和非禁食的糖尿病BB大鼠(n＝5)的血浆支链淀粉素浓度。分离以10分钟间隔收集得到的250μl样品的血浆并将其冰冻于-20℃供用本机构建立的2-位点免疫酶测定法进行测定。
为进行免疫测定，用抗体F024-4.4[Phelps JL，Blase E，Koda JE，未发表]在4℃过夜保温我被黑包微滴板(Dynatech，Chantilly，弗吉尼亚)，在50mM碳酸盐中每mL 20μg抗体，pH9.6。用0.05M Tris/0.15M氯化钠/0.02％叠氮化钠/0.1％吐温20(TBS/吐温)洗板，并将1.0％无脂干奶粉在同样以碳酸盐缓冲液中在室温封闭一小时。样品在冰上解冻，如果需要的话将其稀释于4％BSA/200mg/dl牛胆固醇Supertrate(Miles Pentexreagents，Miles Laboratories，Kankakee IL)中。将样品或标准品加至已被包被和封闭的板中并在室温保温1小时。洗涤后，加入结合干碱性磷酸酶的Fo25-27检测抗体。使用得自PierceImmunochemical Co(Rockford IL)的马来酰亚胺碱性磷酸酶结合试剂盒进行抗体-酶的偶联。将结合物在室温保温3小时，之后将板用Tris缓冲的盐水彻底洗涤。通过将板与在1M二氨基乙醇/0.5mM MgCl2(pH9.8)5μg/ml的荧光底物4-甲基系散形基(methylumbelliferyl)磷酸酯在室温下保温40分钟测定结合的酶。使用Dynatech微荧光板阅读器(Microfluor platereader)测定荧光信号，在Multicalc软件(Wallac，GaithersburgMD yH)上分析数据。通过与同样测定的标准曲线作比较而确定血浆样品中支链淀粉素的浓度。当以这种方法进行时，该测定的最低可测浓度为2pM。
使用一种最小平方重复程序(least-squares iterativeroutine)(ALLFIT，V 2.7，NIH，马里兰州)取得ED50’s，胃排空的剂量反应曲线符合4-参数对数模型。因为ED50是对数-正常分布的，它被表达为±对数的标准误。使用变项的单方面分析和Student-New man-Keuls多重比较检验(Instat V 2.0，Grephpad Software，圣地亚哥)，用P＜0.05作为显著性水平进行配对(Pairwise)比较。
在8只非禁食的Harlan Sprague Dawley大鼠中，循环的支链淀粉素浓度为11.7±1.4pM(95％可信限8.4-14.9pM)。作为对比，在5只非禁食的自发糖尿病BB大鼠中检测不到支链淀粉素浓度。
将用酚红管饲后20分钟残留的染料的分数，与相关的统计学比较一起显示于表2。在Harlan Sprague Dawley大鼠和在非糖尿病BB大鼠中，不管动物被禁食6小时或20小时，20分钟后染料的排空是相同的。即，显示出禁食的时间(在6-20小时范围内)并不明显地影响用本技术测定的胃排空。
表2管饲后20分钟存留的胃内容物
胃内容物量表达为在以同样测定法，进行的对另外2-3只大鼠管饲后可立即回收的胃内容物量的分数。a＝与禁食20小时的大鼠无差异。b＝与禁食6小时的HSD大鼠有差异(p＜0.001)c＝与禁食6小时的非糖尿病BB大鼠有差异(p＜0.001)值得注意的是糖尿病BB大鼠的胃排空显著快于其它4个处理组的任何一个(即，非糖尿病动物)。糖尿病BB大鼠比非糖尿病大鼠具有更高的胃排空速度的观测资料提示该资料与糠尿病的存在有关而不是只与BB种系有关。
由于上面所确认的方法学限制，研究了禁食20小时的非糖尿病Harlan Sprague-Dawley大鼠和禁食6小时的糖尿病BB大鼠中支链淀粉素的作用。当用酚红指示剂管饲前5分钟皮下注射支链淀粉素时，存在对胃排空的剂量依赖性抑制。对胃排空的抑制是从施用1μg支链淀粉素的正常HSD大鼠，和施用10μg的糖尿病大鼠可回收的染料与管饲后立即回收的是相同的(p＝0.22，0.14)。在正常大鼠中观察到的胃排空最大变化的50％处的剂量(ED50)为0.43μg(0.60nmol支链淀粉素/kg值重)±0.19对数单位。对糖尿病大鼠胃排空抑制的ED50是2.2μg(2.3n mol/kg)±0.18对数单位。从图14中显示的符合曲线(Fitted curves)，可估计出对糖尿病大鼠施用2μg剂量的支链淀粉素可使胃排空恢复到在未施用支链淀粉素的正常大鼠中观测到的速度。
如图15中所示，当给3只大鼠皮下注射1μg大鼠支链淀粉素时，10分钟后测到的血浆浓度是66±10PM，并且在20分钟时的峰浓度为74±26PM。在皮下快速浓注10μg的3只大鼠中，对应于10和20分钟的浓度分别为347±43PM和301±57PM。经20分钟抑制胃排空至50％的1μg皮下支链淀粉素剂量(ED50)，必须在注射后不久就开始起作用以在20分钟起效。比如，在注射后约20分钟开始作用，则在本系统中检测不到。抑制胃排空50％有效的血浆浓度在血浆浓度达到74PM之前许多即出现了，因此它比74PM低得多。
这些实验的结果显示支链淀粉素有力地并剂量依赖地抑制胃排空。
实施例6进行本实施例中描述的实验以检测支链淀粉素受体拮抗剂对口服葡萄糖耐受性和来自标记的口服葡萄糖负荷的氚的吸收的作用。
在分开14天的两个阶段在11只清醒的禁食24小时的肥胖(500-600g)LA/N大鼠中测定对食入的标记葡萄糖负荷的摄取。在一个阶段，在管饲前3分钟给大鼠皮下注射3μg选择性支链淀粉素拮抗剂AC-0187(ac-10N32Y-32鲑鱼降钙素)，在另一阶段，只用盐水载体给大鼠预注射。用在1mL50％的葡萄糖中的SuCi瓣[33H]葡萄糖管饲大鼠。管饲后0、15、30、60、90和120分钟从麻醉的鼠尾取血样，测定其中来自葡萄糖的氚和葡萄糖。
用支链淀粉素拮抗AC-0187预注射加速血浆中来自葡萄糖的氚的出现，在管饲后15分钟增加48％(p＜0.02)，在管饲后30分钟增加45％(p＜0.01)，(配对的t-检验)。预注射AC-0187还导致用0.5克葡萄糖管饲后15分钟的血浆葡萄糖上升更高(5.89±0.17至8.33±0.28对5.83±0.22至6.83±0.28mM，p＜0.001，配对的t-检验)。此外，在AC-0187处理的动物中，血浆葡萄糖下和得更早(6.89±0.28mM对8.17±0.37mM，葡萄糖管饲的60分钟，p＜0.001，配对的t-检验)。
因此，在LA/N肥胖大鼠中，选择性支链淀粉素拮抗剂加快了口服葡萄糖负荷后标记的葡萄糖在血浆中出现的速度，并且也加快未标记的葡萄糖血浆浓度的上升和下降的速度。这些资料与支链淀粉素拮抗对抗内源性分泌的支链淀粉素的作用因而加速胃排空是一致的。
权利要求
1.一种有利地调节受治疗者胃肠动力的方法，它包含向所述受治疗者施用治疗有效量的支链淀粉素或支链淀粉素激动剂。
2.按照权利要求1的方法，其中所述胃肠动力的有利调节包括降低胃动力。
3.按照权利要求1的方法，其中所述胃肠动力的有利包括延缓胃排空。
4.按照权利要求1、2或3的方法，其中所述受治疗者正经历胃肠道诊断过程。
5.权利要求4的方法，其中所述胃肠诊断过程为一种放射性检查。
6.权利要求4的方法，其中所述胃肠诊断过程为磁共振显像。
7.按照权利要求1、2或3的方法，其中所述胃动力与一种胃肠疾病有关。
8.按照权利要求7的方法，其中所述胃肠病症为痉挛。
9.按照权利要求8的方法，其中所述痉挛与选自急性憩室炎、胆道疾病或Oddi氏括约肌症的疾病有关。
10.一种治疗受治疗者餐后倾倒综合症的方法，它包括向所述受治疗者施用治疗有效量的支链淀粉素激动剂。
11.一种治疗餐后高血糖的方法，它包括施用治疗有效量的激动支链淀粉素剂。
12.按照权利要求11的方法，其中所述支链淀粉素激动剂为支链淀粉素。
13.按照权利要求12的方法，其中所述支链淀粉素为大鼠支链淀粉素。
14.一种治疗作为II型糖尿病后果的餐后高血糖的方法，它包括施用治疗有效量的支链淀粉素激动剂。
15.一种治疗受治疗者胃动力低下的方法，它包括向所述受治疗者施用治疗有效量的支链淀粉素拮抗剂。
16.一种加速受治疗者胃排空的方法，它包括向所述受治疗者施用治疗有效量的支链淀粉素拮抗剂。
17.权利要求15或16的方法，其中所述胃动力低下是糖尿病神经病变的结果。
18.权利要求15或16的方法，其中所述动力低下是神经性厌食症的结果。
19.按照权利要求1-3、10、11或14的任意一种方法，其中所述支链淀粉素激动剂类似物是25，28，29脯-人-支链淀粉素。
20.按照权利要求15-18的任意一种方法，其中所述支链淀粉素拮抗剂为一种支链淀粉素受体拮抗剂。
21.按照权利要求20的一种方法，其中所述支链淀粉素拮抗剂为乙酰-11，18精，30天冬酰胺，32酪-9-32降钙素(鲑鱼)。
22.一种治疗食入毒物的方法，它包括(a)施用防止或减少胃内容物通向小肠的有效量的支链淀粉素或支链淀粉素激动剂；和(b)吸出胃内容物。
23.权利要求1的方法，其中所述支链淀粉素激动剂不是CGRP或降钙素。
24.权利要求10的方法，其中所述支链淀粉素激动剂不是CGRP或降钙素。
25.权利要求11的方法，其中所述支链淀粉素激动剂不是CGRP或降钙素。
26.权利要求14的方法，其中所述支链淀粉素激动剂不是CGRP或降钙素。
全文摘要
本发明公开了治疗与升高的，不适当的或不希望的餐后血葡萄糖水平相关的疾病的方法，它包括单独或与其它抗胃排空剂联合施用有效量的支链淀粉素激动剂。还描述了为治疗和诊断目的而降低胃动力和延缓胃排空的方法。
文档编号A61P3/10GK1134110SQ94193931
公开日1996年10月23日 申请日期1994年9月7日 优先权日1993年9月7日
发明者O·G·科特曼, A·A·杨, T·J·林克, K·K·布朗 申请人:安米林药品公司