专利名称：Cd23结合剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及可用于治疗炎症性，自身免疫或变态反应性疾病的特殊的结合剂。
CD(FCεRII)是一种C-凝集素家族的II型分子，该家族还包括淋巴细胞归巢(homing)受体(MEL-14)和内皮白细胞粘附分子-1(ELAM-1)。它是对IgE具有低的亲和性的受体。在人类，多种类型的造血细胞在它们的表面表达CD23，包括滤泡树状细胞，B细胞，T细胞和巨噬细胞。CD23分子还被发现以可溶的形式存在于生物体液中。可溶性CD23(sCD23)分子通过对跨膜受体的蛋白酶酶切产生。CD23具有多效活性，包括介导细胞粘附，调节IgE和组胺的释放，从编程性细胞死亡中挽救B细胞，调节髓样细胞的生长。这些功能性活性通过与细胞相关的CD23或sCD23的特异性配体结合来介导，后者以类似于细胞因子的方式起作用(Conard，D.H免疫学年鉴(Annu RevImmunol 8，623-645 1990)；Delespesse，G.等，高级免疫学49，149-191(1991)；Bonnefby，J.Y.等，免疫学最新进展(Curr OpinImmunol)5, 944-947(1933))。
在许多炎症性疾病中观察到CD23的表达增加。在慢性滑膜炎的病人的滑液活组织检查中已鉴定出CD23，在类风湿关节炎病人的血清和滑液中可测量出超过正常范围的浓度的sCD23。(Bansal，A.S.，Oliver，W.Marsh，M.N.Pumphrey，R.S.和Wilson，P.B.，免疫学79，285-289(1973)；Hellen，E.A.，Rowlands，D.C.，Hansel，T.T.，Kitas，G.D.，和Crocker，J.J.，临床病理学44，293-296(1991)；Chomarat，P.，Brioloay，J.，Banchereau，J.，和Miossec，D.，关节炎和风湿病(ArthritisRheum)86，234-242(1993)；Bansal，A.，等，临床实验免疫学89，452-455(1992)；Rezonzew，R.，和Newkirk，M.M.，临床免疫病理学71，156-163(1994)。此外，类风湿关节炎病人的血清中的sCD23水平与疾病的状况有关，与血清类风湿因子相关(Bansal，A.S.，等，临床实验类风湿病学12，281-285(1994))。促炎症细胞因子看来在类风湿性关节炎中尤为重要。并已认为TNF-α和IL-1β在损伤患关节炎的关节中起着重要的作用(Brennan，F.M.，Chantry，D.，Jackson，A.，Maini，R.和Feldman，M.，柳叶刀2，244-247(1989)；Brennan，F.M.，Maini，R.M.和Feldman M.，英国风湿病学杂志31，293-298(1992))。
还认为CD23-CD21的相互作用可能在调控IgE产生中起作用(Flores-Romo L等，科学261 1038-1041(1993)；Aubry等，自然358，505-507(1992))。
CD11b和CD11c是参与许多细胞与细胞和细胞与基质相互作用的粘附分子。CD11b/CD18和CD11c/CD18(分别为CD11b与CD18的结合，CD11c与CD18的结合)被报道结合许多配体，包括CD54，纤维蛋白原，因子X，LPS，伴刀豆球蛋白A和酵母聚糖(Springer，T.A.，自然346，425-434(1990))。然而这些结合分子的作用不完全清楚。CD11b/CD18和CD11c/CD18也被分别称为MAC-1和p150，95。它们是β2整合蛋白家族的成员(有时称为Leu-CAM，即白细胞粘附分子)。该家族还包括它的成员中的LFA-1(也称为CD11a/CD18)。
EP 0205405声称公开了与人免疫球蛋白E结合因子(IgE-BF)交叉反应的IgE(FCεR)的淋巴细胞受体的单克隆抗体，和它的衍生物。
WO 93/04173声称公开了一种多肽，该多肽能与FCEL(低亲和性IgE受体FCεRII)或FCEH(高亲和性受体FCεRI)之一结合，但基本上不能与其它的FCEL或FCEH结合。变态性疾病的治疗被断定与FCEL或FCEH特异性多肽有关(前提是FCEH特异性多肽不能与FCEH交联及诱导组胺释放)。
EP 0269728声称公开了人淋巴细胞IgE受体的单克隆抗体。
EP 0259585声称公开了识别人B淋巴细胞上的IgE表面受体的单克隆抗体。
WO 93/02108声称公开了用于治疗用途的灵长目来源的(primatised)抗体。
本发明人惊奇地发现CD23的结合剂可用于治疗或预防各种疾病，尤其是治疗或预防关节炎。早在本发明之前，没有证据支持该用途，尽管公开了大量讨论CD23的文献。
根据本发明，提供了用于治疗或预防炎症性，自身免疫或变态反应性疾病的CD23结合剂。
该结合可通过阻断CD23与和它结合的配体的相互作用来发挥作用。体外分析，例如放射免疫分析可用来研究这一阻断效果。
结合剂可为分离形式或作为药物组合物的一部分，所需要的是它为无菌形式，通常来说CD23特异性的结合剂可用于治疗/预防所公开的疾病中。
本发明人还证实了在本发明范围内的结合剂在体内治疗或预防炎症性或自身免疫疾病中起作用。
尽管长期对其特征和原因进行研究，在许多这些疾病难以或不可能进行有效治疗的条件下，这个发现非常重要。这尤其对于通常在中年对人造成损伤，并可致使他们过早地放弃工作的关节炎是这样。对关节炎的有效治疗已成为许多研究人员长期不变的目标。
优选的结合剂包括抗体，其片段或包括抗体或其片段的人工构建物或设计用来模拟抗体或其片段的结合的人工构建物。这些结合剂已被Dougall等在Tibtech 12，372-379(1994)中讨论。
它们包括完全抗体，F(ab′)2片段，Fab片段，Fv片段，ScFv片段，其它片段，CDR肽和模拟物。这些可被本领域技术人员获得/制备。例如，可用酶消化来获得F(ab′)2和Fab片段(通过分别让IgG分子进行胃蛋白酶或木瓜蛋白酶酶解)。下面描述中的“抗体”的范围应被认为包括上述所有的可能性。可使用重组抗体。抗体可以是人源化的，或嵌合的。
人源化抗体的一般制备被公开在EP-A-0239400中，其中CDRs来自不同于抗体可变区框架的种类。CDRs可来自于大鼠或小鼠单克隆抗体。变化的抗体的可变区和恒定区的框架可来自人抗体。当被施用于人时，这一来自人的抗体引发了与由人抗大鼠或小鼠抗体的免疫应答微不足道的免疫应答。
可替换地，抗体可为嵌合抗体，例如为WO 86/01533中描述的那种类型。
根据WO 86/01533的嵌合抗体包含一个抗原结合区和一个非免疫球蛋白区。抗原结合区为抗体轻链可变区或重链可变区。通常，嵌合抗体包含轻链和重链可变区。在C-末端，非免疫球蛋白区与抗原结合区融合。非免疫球蛋白区通常为非免疫球蛋白蛋白质，并且可为酶区域，该区域来自具有已知结合特异性的蛋白质，来自蛋白毒素或来自由基因表达的任何蛋白质。嵌合抗体的两个区可借助于可酶解的接头序列相连。
抗体可为人IgG，例如IgG1，IgG2，IgG3，IgG4；IgM；IgA；IgE或带有大鼠或小鼠可变区的IgD(嵌合的)或CDRs(人源化的)。
还可采用灵长目来源化(Primatizing)技术，例如公开在WO 93/02108中的那些。
本领域技术人员应理解在本文描述特异性结合剂的地方，也可采用这些结合剂的衍生物。术语“衍生物”包括具有1个或多个氨基酸取代基的，相对于所述结合剂具有缺失或插入的所描述的结合剂的变异体，然而这些变异体仍然具有所描述的结合活性。这些衍生物优选具有与所述结合剂基本相同的氨基酸序列。
氨基酸序列同一性的程度可使用例如“最佳吻合”的方法(Smith和Waterman，应用数学进展，482-489(1981))找到任何两个序列之间的相似的最佳片段来计算。这种比较以使氨基酸相似性矩阵而得到的分数达到最大为基础，例如Schwarz和Dayhof(1979)在蛋白质序列和结构图谱集，Dayhof.M.O.，Ed pp 353-358中描述的。
序列同一性的程度优选为至少50％，较优选为至少75％。至少90％或至少95％的序列同一性是最优选的。
本领域技术人员还应理解高水平的序列同一性不是必需的，因为许多氨基酸可通常被其它氨基酸取代，这些氨基酸具有相似的性质，基本上不改变或对蛋白质的某些性质产生不利影响，这些有时被称为“保守的”氨基酸变化。因此氨基酸甘氨酸，缬氨酸，亮氨酸或异亮氨酸可经常被取代为另一种(具有脂族羟基侧链的氨基酸)。可被取代为另一种的其它的氨基酸包括苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸(具有芳香侧链的氨基酸)；赖氨酸、精氨酸和组氨酸(具有碱性侧链的氨基酸)；天冬氨酸和谷氨酸(具有酸性侧链的氨基酸)；天冬酰胺和谷氨酰胺(具有酰胺侧链的氨基酸)和半胱氨酸和甲硫氨酸(具有含硫侧链的氨基酸)。因此术语“衍生物”还可包括包含一个或多个这种相对于所述序列来说为“保守”变化的氨基酸序列的变异体。
本发明还包括仍然具有所描述的结合活性的本发明结合剂的片段或其衍生物。优选的片段为至少10个氨基酸长，但它们可以更长(例如长达50或长达100个氨基酸)。
本发明结合剂被认为可用于治疗或预防多种人的疾病，它们包括关节炎，红斑狼疮，Mashimotos甲状腺炎，多发性硬化，糖尿病，眼色素层炎，皮炎，牛皮癣，荨麻疹，肾病综合症，肾小球肾炎，炎症性肠疾病，溃疡性结肠炎，节段性回肠炎，斯耶格伦氏(Sjogren)综合症，变应性疾病，哮喘，鼻炎，湿疹，GVH，COPD，胰岛炎，支气管炎(尤其是慢性支气管炎)或糖尿病(尤其是I型糖尿病)。
它们还可用于研究CD23与各种配体之间的相互作用，例如CD23与CD21，CD23与CDllb，CD23与CDllc，CD23与70-85KD内皮细胞蛋白(它可能为76，80或85KD内皮细胞蛋白)，或CD23与115KD内皮细胞蛋白(它被认为与70-85KD内皮细胞蛋白有关)的相互作用。一种或多种上述相互作用被认为在体内发生。尤其优选能阻断这些相互作用的抗体或其它结合剂，因为它们被认为可能尤其适于降低或减轻由细胞因子介导的炎症性作用。它们还可用于抗B细胞恶性肿瘤，例如慢性淋巴细胞白血病和毛状(hairy)细胞白血病。
本发明的结合剂特别适用于治疗或预防类风湿性关节炎。不被理论所束缚，提出了下面可能的解释。
在类风湿性关节炎发炎的滑膜中，表达CD23和β2整合蛋白CDllb和CDllc，使得可能的同型相互作用在该组织中发生。此外，可溶性CD23分子透过滑膜的扩散和它们与整合蛋白配体的结合也是可能的。因此，涉及正的活化作用环的CD23-CD11b/CD11c的相互作用可存在于体内。在类风湿性关节炎病人中，它可解释一些疾病恶化和成为慢性的病理学机理，并且将支持这一假说，即一旦集中在关节处，巨噬细胞本身可借助涉及CD23分子，β2整合蛋白CD11b和CD11c，以及促炎症细胞因子TNF-α，IL-1β和IL-6的途径来继续并恶化炎症。
抗CD23治疗的另一种作用机理可包括阻断IgE免疫应答。
在以前公开的文献中，已表明用抗CD23抗体对大鼠的体内治疗导致了IgE产生的抗原特异性抑制，这可能通过阻断被IgE定型的B细胞的完全分化所必需的CD23-CD21相互作用来进行(Flores-Roma等，科学261，1038-1041(1993))。
本发明还包括阻断这种应答的CD23结合剂。
从结构上来看，CD21蛋白由15个(Moore等，编码人B淋巴细胞的EB病毒C3d受体的cDNA的分子克隆(2型补体受体)，美国国家科学院院报849194(1987))或16个(Weis等，C3d和EB病毒的人B淋巴细胞受体的结构和与C3/C4结合蛋白家族的其它成员的相关性，实验医学杂志1671047(1988))具60-75个氨基酸的重复单元组成，该重复单元被称为短共有重复序列(SCRs)，接着是跨膜区(24个氨基酸)和34个氨基酸的胞质内区。使用具有胞质外SCRs缺失的CD21突变体(Carel等，C3d，g/EB病毒受体(CR2/CD21)配体结合，内化和病毒感染的结构要求生物化学杂志26512293(1990))，本发明人最近发现CD23与CD21上的SCRs 5-8和1-2结合。CD23与SCRs 5-8的结合为一个类似于凝集素的相互作用，涉及天冬酰胺295和370上的碳水化合物。相反，CD23与SCRs 1-2的结合为蛋白-蛋白的相互作用(Aubry等，CD23与包含CD21上的通过N端连接的寡糖的新的功能胞质外区发生相互作用，免疫学杂志1525806(1994))。本发明人目前已测试出与CD21结合的CD23上的CD21的其它配体(EBV，C3d，g和IFN-α)的效果以及对在存在IL-4时对调节Ig的产生的影响。仅EBV颗粒和EBV来源的肽能抑制与CD21结合的CD23。而且EBV-肽选择性地降低IgE和IgG4的产生并增加IgM的产生。这些数据表明在IL-4存在下，与CD21上的EBV结合位点结合的CD23选择性地调节人Ig的产生。
仍然不被理论所束缚，认为本发明通过抑制促炎症细胞因子的从头合成可获得有效的治疗。
这与以前使用抗体仅仅用来直接抑制已存在于发炎组织中的细胞因子分子不同。
还应注意到，在现有技术中有推测性的出版物列举了大量抗体以及大量抗体被说成可用于它的治疗的可能的疾病，但是对大多数可能的结合没有提供任何可靠的证据或数据。一个这样的出版物为WO93/02108，它主要涉及特定的嵌合抗体的制备。
本发明明显区别于这些出版物在于提供了特定分子的结合剂，根据本文提供的数据和解释该结合剂被清楚地说明可用于治疗或预防某些疾病。
本发明的结合剂尤其还可用于治疗或预防变态反应性疾病，包括非IgE介导的疾病。它们可被用于治疗和预防溃疡性结肠炎。它们还可被用于治疗和预防结段性回肠炎。
本发明的结合剂可单独或与免疫抑制剂，例如类固醇，环孢菌素或抗体，例如抗淋巴细胞抗体一起结合使用，或较优选与诱导耐受剂，抗自身免疫剂或消炎药，例如CD4+T细胞抑制剂，如抗CD4抗体(优选阻断或非缺失抗体)，抗CD8抗体，TNF拮抗剂，如抗TNF抗体或TNF抑制剂，如可溶性的TNF受体或NSAIDs剂一起使用。
结合剂通常作为无菌的药学上可接受的组合物的一部分来供给。该药物组合物可为任何适宜的形式，它取决于将其施与病人的所需方式。它可以单位剂量的形式来提供，且可作为药盒的一部分来提供。该药盒通常(虽然不是必需的)包括使用说明。
结合剂通常以肠胃外给药，例如静脉内，肌内或皮下。结合剂一般通过注射或输注来给药。为了此目的，结合剂被配制成含药物上可接受的载体或稀释剂的药物组合物。可使用任何适宜的载体或稀释剂，例如等渗盐溶液。可加入稳定剂，例如金属螯合剂以避免铜诱导的降解。适宜的螯合剂为EDTA，DTPA或柠檬酸钠。
尤其对于呼吸紊乱的治疗，可通过喷雾经口或鼻来提供。
尤其对于皮肤病症的治疗，可将它们制成乳剂或软膏。
可将它们制成滴剂等以滴加到眼中而用于治疗如春天性结膜炎的症症。
对于可注射溶液，可使用的赋形剂包括例如水，乙醇，多元醇，甘油和植物油。
药物组合物可包含防腐剂，溶解剂，稳定剂，湿润剂，乳化剂，增甜剂，着色剂，香味剂，盐，缓冲液，包衣剂或抗氧化剂。它们还可包含其它治疗活性剂。
本发明物质的适宜剂量可以变化，它取决于如将要治疗的疾病和紊乱，给药途径以及治疗个体的年龄和体重等因素。不被任何具体的剂量所限制，认为例如对于肠胃外给药，对于治疗一般的成年人，每天0.01-50mg/kg的本发明的结合剂(通常以上述的药物组合物的一部分的形式存在)可能是适宜的。较适宜的剂量可为0.05-10mg/kg，如0.1-2mg/kg。
这个剂量可适当地经常性地重复。给药一般地为每周1-7次。如果产生副作用，可降低剂量和/或给药频率。
因此掺入到药物组合物中的一般的单位剂量至少为1mg结合剂，较适宜地为1-1000mg。
本发明包括确定与CD23结合的特定的制剂是否可用于治疗炎症性，自身免疫或变态反应性疾病的分析法，它包括确定该制剂能否阻断CD23和CD11b的相互作用，或CD23与CD11c的相互作用，或CD23与CD21的相互作用，或CD23和70-85KD(例如76KD，85KD或80KD)的蛋白或在内皮细胞上表达的115KD蛋白之间的相互作用。
这种分析方法可通过使用表达适宜细胞的细胞系用于筛选化合物或分子。以CD11b/CD18，CD11c以CD11c/CD18的形式优选用于这些分析方法中。CD11b/CD18和CD11c/CD18可在细胞表面共表达。
可使用任何适宜的分析方法，例如蛋白质非蛋白质分析法(例如分析蛋白质与化学物质或糖类的相互作用)，蛋白质-蛋白质分析法或蛋白质-细胞分析法。
本发明现将参考附图，通过实施例来进行描述；其中
图1说明使用抗CD23抗体对小鼠关节炎的预防性治疗的效果；图2说明用抗CD23抗体对小鼠已形成的关节炎进行治疗的效果，其中采用抗体的多次治疗；图3说明用抗CD23抗体对小鼠已形成的关节炎进行治疗的效果，其中采用一次治疗；图4a)和b)说明用单克隆抗CD23抗体对小鼠已形成的关节炎进行治疗的效果，其中采用多次治疗；图4c)和d)说明用单克隆抗CD23抗体的F(ab′)2和Fab片段对小鼠已形成的关节炎进行治疗的效果，其中采用多次治疗；图5a说明与CD14阳性血液单核细胞结合的CD23脂质体；图5b说明SDS-PAGE上的各种CD23亲和纯化的蛋白质；图6说明抑制CD23脂质体与使用某些单克隆抗体获得的活化的血液单核细胞结合的百分数；
图7说明CD23脂质体与各种转染细胞的结合；图8说明各种物质对CD23-CD11b与CD23-CD11c的相互作用的影响；图9说明对在单核细胞中由于CD23与CD11b和CD11c结合而造成的亚硝酸盐的产生和氧化性释放(burst)的影响；图10说明重组CD23与CD11b和CD11c的结合特别地增加了单核细胞的细胞因子的产生。
实施例(在一些实施例中采用了术语“ip”，“id”和“n”。这些分别指“腹膜内”，“皮下”和“动物数目”。)实施例1使用抗CD23抗体对小鼠关节炎的预防性治疗将DBA/1雄性小鼠(8-12周龄)用0.1ml 1∶10稀释度的Fentanyl/Fluanisol ′Hypnorm′ip使之镇静，在其尾的底部将100mg乳化在Freund′s完全佐剂(Difco)中的牛II型胶原蛋白(CII)注射至皮下。在CII免疫接种后13天时，用一次注射通过蛋白质-A琼脂糖(Bioprocessing，UK)纯化的兔抗CD23 IgG(2mg/小鼠，腹膜内)来处理试验小鼠(动物数目＝16，■-■)。纯化的抗CD23 IgG含有3-5％特异性抗体。
关于它的制备的详细描述由Flores-Eomo L等，科学261 1038-1041(1993)中提供。简单地说，将兔多克隆抗体制备成相当于全长CD23的氨基酸150-321的截短形式的人CD23[Kikutani等，细胞47657(1986)]。在大肠杆菌中产生截短的多肽，并通过离子交换和凝胶过滤从大肠杆菌的被洗涤的沉淀中纯化。它具有25KD的分子量，纯化后注射至兔中。在ELISA和使用重组人CD23的蛋白质免疫印迹中所得到的抗血清被测试为阳性。接着通过蛋白质A-琼脂糖亲和层析分离IgG级分。对照组动物获得来自正常兔血清的蛋白质-A纯化的IgG(2mg/小鼠)(动物数目n＝17，●-----●)。每天观察小鼠关节炎临床症状的发展，使用如Williams等，美国国家科学院院报89 9784-9788(1992)中描述从0＝无症状至3＝明显肿胀，红斑和运动障碍的标准来估算每只脚爪上的疾病的严重程度；肢体的恢复通过计算被损伤的脚爪的数目来分析。通过在(a)中使用两尾t-试验及在(b)中的非参数Mann-Whitney试验的统计分析比较各组；*0.05≥p＞0.01，**0.01≥p＞0.005，***0.005≥p。
在疾病发作(发作的平均天数+sem试验组为20+0.7，对照组为20+0.5)或疾病的发生率(在两组中100％为关节炎小鼠)上无差异，这说明用抗CD23抗体的处理对T细胞增殖时期的疾病的诱导和IgG抗胶原蛋白抗体的诱导没有影响。然而，在用抗CD23抗体处理的小鼠中，所有临床得分均低(图1a)。最明显的是在抗CD23处理组中脚爪恢复的明显抑制(图1b)。这些结果表明治疗对疾病的长期进展的强烈影响。实施例2对已形成的关节炎的治疗(多次治疗)如实施例1描述的来诱导关节炎，每天监测小鼠的可肉眼观察的炎症的进展。在临床炎症的第一天(第1天)和二天后(第3天)对任意划分的三组小鼠进行治疗。试验小鼠获得蛋白质-A纯化的抗CD23IgG(200μg/每次注射， n＝6，■..-…-..■；400μg/每次注射， n＝8，■-■；对照组小鼠获得蛋白质-A纯化的正常兔IgG(200μg/每次注射，n＝15，●-----●)。如实施例1所描述的评价疾病的严重性(图2a)。炎症用从第一只爪的第1天至变成使用卡尺测量的关节炎的逐渐增加的肿胀来评价(Proctest 2T.Kroeplin Langenmesstechnik)。使用两次定位于尾的t-试验来比较各组，*0.05≥p＞0.01，**0.01≥p＞0.005，***0.0005≥p。
可以看到对疾病严重性的明显改善，它与剂量相关。抗CD23 IgG的抗炎症性质通过降低获得抗体治疗的小鼠的爪的肿胀而被清楚地证实。实施例3对已形成的关节炎的治疗(一次治疗)实验设计类似于实施例2，除开小鼠仅在关节炎的第一天，用2mg/小鼠蛋白质-A纯化的抗CD23 IgG(n＝10，■—■)或纯化的正常的兔IgG(n＝10，●-----●)处理一次。临床得分和脚爪的恢复如实施例1一样评价。
在第1天第一次注射后获得的脚爪恢复的明显效果表明对于关节的恢复，在关节炎已形成时进行一次注射足以保护进一步的疾病的发展(图3b)。实施例4对已形成的关节炎的用单克隆抗CD23的治疗如上面实施例1所述获得患关节炎的DBA/1小鼠。在出现临床疾病的第一个信号时，任意将小鼠分成四组，在第1天和第3天用三种剂量的CD23的单克隆抗体处理(B3B4，由D.Conrad，Richmond教授赠送，Virginia，USA，并且它可从Pharmingen购得。在免疫学杂志1381845-1851(1987))中对它进行了讨论；B3B4 25μg/注射，n＝4○……○，B3B4 50μg/注射，n＝4；■-----■；B3B4 100μg/注射，n＝5，■-■)。对照组小鼠接受PBS(n＝6，●-----●)。如实施例2所描述的来评价从第1天开始的临床得分和爪厚度的增加。
如使用这种治疗方案获得的明显降低的临床得分和受影响的爪的数目所示，在腹膜内注射50μg B3B4单克隆抗体足以进行有效的治疗。相反，用25μg单克隆抗体处理的小鼠的疾病的严重性并没有改善用50μgB3B4单克隆抗体而获得的阳性治疗效果(图4)。显示出在获得腹膜内注射50或100μg单克隆抗体B3B4的组中，从第1天起，患关节炎的脚爪的肿胀就没有增加的图4b说明了使用B3B4的与剂量相关的抗炎症效果。与用其它临床测量方法观察到的类似，在疾病发作后使用25μg单克隆抗CD23的剂量为亚治疗(sub-therapeutic)，并且脚爪肿胀的增加类似于对照组(图4b)。同样，在用50μg亲和纯化的多克隆抗CD23 IgG治疗后获得了已形成的关节炎的严重程度的明显降低(数据没有列出)。
在用抗CD23抗体(单克隆和多克隆)治疗后临床严重性的改善通过患关节炎的脚爪的组织学检查而得以证实。处理的小鼠显示出疾病的严重性降低，具有较少的明显的软骨和骨损伤和滑膜套层下的细胞浸入的明显减少。而且，在抗CD23抗体处理的动物中被严重影响的关节的比例与对照组小鼠相比较明显降低(0％与94％)，而且保持正常结构的关节的比例显著增加(80％与0％)。
这在下表1中得到证实。
表1脚爪的组织病理学如图4处理小鼠并对关节进行处理。如方法学中所描述的，将组织样品进行切片。<
此表表明了对于从用抗CD23处理的小鼠或从对照组小鼠中取得的关节的组织样品的比较。如与图4有关的上面所描述的方式处理小鼠。
组织病理学评价如下死后取下第一个开始产生炎症的足，固定在10％(重量/体积)缓冲型福尔马林中，并在缓冲型福尔马林中的EDTA中脱钙(5.5％)。接着将脚爪用石蜡包埋，切片，用苏木精和曙红染色。使用下列标准记录组织样品(3片/脚爪)轻微+最小的滑膜炎，软骨损失和骨侵蚀局限在分散的点；中等＝滑膜炎和出现侵蚀，但关节结构完整；严重＝广泛的滑膜炎和带有关节结构损伤的侵蚀。评价存在于每个切片中的所有关节，确定代表正常，轻微，中等或严重记录的百分数。通过相对于处理第一天时的脚爪厚度的脚爪厚度的增加来评价炎症，测量使用卡尺(Proctest 2T，Kroeplin Langenmesstechnik)。
通过用B3B4单克隆抗体的Fab和F(ab′)2片段处理患关节炎的小鼠获得了支持这种治疗特异性的其它证据。虽然不如完整的IgG分子有效，B3B4的Fab和F(ab′)2片段仍然有效，从而证明了抗体的Fc部分不是为活性所必需的(表2)。而且，在B淋巴细胞中高度表达的CD72和B220分子的抗体显出很小的活性或没有活性(表2)。此外，与TNF-α(Williams等，美国国家科学院院报369784-9788(1992))和CD5(Plater-Zyberk等，临床实验免疫学98442-447(1994))的抗体比较表明在我们的实验条件下，抗CD23抗体的治疗是最为有效的(表2)。
表2对不同治疗方法的反应的比较用II型胶原蛋白免疫小鼠，在出现临床关节炎症状的第1天和第3天通过腹膜内注射单克隆抗体进行治疗性处理。第5天临床数值的降低被以用于每次实验的同种型对照的百分数来计算。
在图4c和4d中提供了单克隆抗体和其片段的其它数据。这些数据以下面方法基础将100μg乳化在完全Freund′s佐剂的II型胶原蛋白注射至8-12周龄DBA/1雄性小鼠皮下。
在第一次出现临床疾病的信号时(±三周后)，将下列单克隆抗体的制剂注射至小鼠腹膜内，(在第1天和第3天注射)B3B4全IgG2a 50μg/注射至腹膜内，n＝8B3B4的Fab 150μg/注射至腹膜内，n＝6B3B4的F(ab′)275μg/注射至腹膜内，n＝7M6对照IgG2a 50μg/注射至腹膜内，n＝7每天观察小鼠，记录每只脚爪的临床病症的严重程度(最大/脚爪＝3；最大/小鼠＝12)。临床病症的记录结果示于图4c中。
在患关节炎的第10天杀死小鼠，将第一个患有关节炎的脚爪切片，固定，脱钙以用于组织病理学检查。CD23与CDllb及CD23与CDllc的相互作用不愿被理论所束缚，由于没有完全了解抗CD23抗体是如何取得上面所公开的意外的结果，所以这可能是由于CD23与CDllb和/或CDllc相互作用的结果。实施例5-10及附图(见后面)证实了这一点。
在这些实施例中，掺入到荧光脂质体中的全长重组CD23被证实与COS细胞结合，其中该COS细胞用编码CD11b/CD18或CD11c/CD18的cDNA转染，而不用表达CD11a/CD18的转染子转染。CD23-脂质体与CD11b/CD18或CD11c/CD18转染的COS细胞之间的相互作用分别被抗CD11b或抗CD11c和抗CD23单克隆抗体特异性抑制。通过用重组CD23或抗CD11b和抗CD11c单克隆抗体触发单核细胞上的CD11b和CD11c，致使产生亚硝酸盐(NO2)，氧化产物(H2O2)和促炎症细胞因子(IL-1β，IL-6和TNFα)的显著增加而证实了配体配对的功能重要性。这些CD23介导的活性被CD11b，CD11c和CD23的单克隆抗体的Fab片段降低。这些结果表明表面粘附分子CD11b和CD11c为CD23的受体，这个新的配体配对调节单核细胞的重要活性。
下面的描述简要地说明后面的实施例5-10的实验设计和基本原理将全血单核细胞与掺入到荧光脂质体中的重组全长CD23一起温育，用流式细胞光度术分析(Pochon，S.等，实验医学杂志，176，389-398(1992))。接着用双染色显示的与CD23-脂质体结合的部分由CD14阳性细胞组成(即单核细胞)。为了证明单核细胞能与CD23-脂质体结合，将血液单核细胞按FACS分成CD14阳性和CD14阴性群(实施例5，图5a)。CD23-脂质体被证明只与CD14阳性群结合(实施例5，图5a)。由于发现单核细胞既不表达膜IgE也不表达已知为CD23配体的CD21(未显示)，则对单核细胞是否表达CD23的不同受体进行研究。使单核细胞溶胞，在偶联有重组可溶性CD23的亲和柱上纯化细胞提取物。对洗脱物进行的SDS-PAGE和银染色分析显示出约为80和160KD分子量的带(实施例5，图5b)。通过检测它们抑制CD23-脂质体与单核细胞结合的能力的FACS测试了识别此分子量范围的抗原，并被报道在单核细胞中表达的抗体(实施例6，图6)。抗CD11b和抗CD11c单克隆抗体在不同程度上都抑制CD23-脂质体与单核细胞的结合(实施例6，图6)。抗CD13，抗CD49d，抗CD21(不在单核细胞中表达)和抗CD11a(粘附分子的β2整合蛋白家族的第三个成员)没有明显的效果(实施例6，图6)。还测试了MHC I型，II型，CD14和D45的抗体对CD23-脂质体结合的影响，其中所有这些抗体均在单核细胞中高度表达。然而它们都不具有任何作用(未显示)。抗CD18单克隆抗体产生对CD23结合的部分抑制。这可由于位阻现象或诱导抗CD18Mab结合中的CD11b和CD11c分子中的构象变化。从CD23亲和柱上洗脱的单核细胞来源的蛋白质与抗CD11c(实施例5，图5b)和抗CD11c/CD18抗体(未显示)发生免疫反应。
为了证实CD11b/CD18和CD11c/CD11b的α链是CD23的受体，用CD18 cDNA将编码CD11b和CD11c的全长cDNA暂时性地转染到COS细胞中。已证实表达CD11b/CD18和CD11c/CD18的转染子都与CD23-脂质体结合，而与表达CD11a/CD18的转染子相反(实施例7，图7)。这可通过当将它们的同源性与CD11a比较时而获得的CD11b和CD11c之间高度的同源性而得到解释。相互作用的特异性通过使用抗CD11b，抗CD11c和抗CD23单克隆抗体来抑制CD23-脂质体结合而得以证实。使用表达CD11b/CD18和CD11c/CD18的BHK细胞获得相同的结果(未显示)。作为CD23相互作用的特异性的进一步证据，来自白细胞粘附缺陷病人的由于在编码β亚基的基因突变导致的缺乏β2整合蛋白的表达的活化的血液单核细胞不能结合CD23-脂质体(未显示)。这些数据一起证明了在正常人单核细胞和转染子中CD23与CD11b和CD11c发生相互作用。
CD11b和CD11c为参与许多细胞-细胞和细胞-基质相互作用的粘附分子。这些实施例表明由于它们能与CD23结合，CD11b/CD18和CD11c/CD18可能显示出另外的粘附功能。如通过在剂量依赖方法中，因子X抑制CD23-脂质体结合(实施例8，图8)而不影响单核细胞中的CD11b或CD11c的表面表达的能力所观察到的，CD23似乎能识别与因子X接近或相同的表位。试验的其它配体没有任何作用。在它与CD11b和CD11c的相互作用中CD23可能相当于C-类型凝集素。EDTA通过螯合对CD23的结合必需的Ca2+(实施例8，图8)和/或螯合对于配体与CD11b和CD11c的结合所必需的二价阳离子(Altieri，D.C.免疫学杂志147，1891-1898(1991))而降低CD23与单核细胞的结合。如通过衣霉素，而不是神经氨酸苷酶降低CD23与单核细胞的结合所观察到，CD23-CD11b/CD11c的相互作用似乎涉及到糖类而不是唾液酸。CD23在细胞外拥有氨基酸三联体(Asp，Gly，Arg)(Kikutani，H.等，细胞47，867-885(1986))，它在反方向为整合蛋白受体的共同识别部位。因此，测试了针对该三联体的多克隆抗体对抑制CD23与单核细胞结合的能力的影响。没有观察到抑制作用，证实了不存在使用纤维蛋白原获得的抑制(实施例8，图8)。在CD23的凝集素区结合的IgE部分抑制CD23与单核细胞的结合(实施例8，图8)。这些结果表明CD23似乎起着部分识别糖和蛋白质结构的C类型凝集素的作用，这使人想起对于CD23与CD23相互作用所观察到的(Aubry，J-P等免疫学杂志152，5806-5813(1994))。
为了评价CD23与CD11b或CD11c相互作用的重要性，我们实验了CD23-CD11b/CD11c的相互作用是否能单核释放促炎症性介质，例氧化氮，H2O2和细胞因子。使用重组可溶性CD23，抗CD11b或抗CD11c抗体导致的粘附活化的正常单核细胞的触发增加了意味着NO途径的活化的NO2的产生(Moncada，S.，Palmer，R.M.J.和Higgs，E.A.药物学评论43，109-144(1991))。CD23对硝酸的产生的作用被抗CD23单克隆抗体的Fab片段和NO合成酶途径的特异性抑制剂的硝基精氨酸所抑制(实施例9，图9a)。由于在单核细胞重组可溶性CD23，抗CD11b和抗CD11c单克隆抗体均使氢化乙锭氧化成溴化乙锭，氧化释放看来也被通过CD11b和CD11c调节(实施例9，图9b)。这证实和扩展了在单核细胞中抗CD11b单克隆抗体诱导氧化释放(Trezzini，C.，Schüepp，B.，Maly，F.E.和Jungi，T.W.英国血液学杂志77，16-24(1991))。CD23与CD11b和CD11c的结合与血液单核细胞中的早期特异性Ca2+流动相关(未显示)。
由于活化的巨噬细胞是促炎症细胞因子的重要来源，我们测定了重组可溶性CD23和抗CD11b和抗CD11c单克隆抗体对单核细胞此类细胞因子的产生的影响。重组可溶性CD23，抗CD11b和抗CD11c单克隆抗体是IL-1β，IL6和TNFα的有效的刺激子。而且通过使用抗CD11b，抗CD11c和抗CD23单克隆抗体证实了这种诱导的特异性(实施例10，图10)。令人感兴趣的是，IL-1和TNFα为CD23-脂质体与单核细胞结合的有效的诱导物(未显示)，这意味着一个经CD11b和CD11c刺激和调节的可能的细胞因子自分泌环。实施例5a)CD23-脂质体与CD14-阳性血液单核细胞的结合(见图5a)将血液单核细胞用抗CD14单克隆抗体(Becton Dickinson，Erembodegem，比利时)并接着用抗小鼠IgG和IgM的羊FITC偶联的F(ab′)2抗体染色(Bioart，Meudon，法国)，在FACS分类(FACStar Plus，Becton Dickinson)成CD14阳性和CD14阴性细胞群之前，这两种抗体被稀释在PBS，0.5％BSA和0.05％叠氮化钠中。接着将分离的细胞用CD23-脂质体或对照(将血型糖蛋白A)-脂质体稀释在0.5％BSA，0.1％叠氮化钠，2mM CaCl2，140mM NaCl，20mM Hepes，pH7中并在4℃下温育2小时(Pochon，S.等，实验医学杂志176 389-398(1992))染色。洗涤后，通过FACS分析细胞(5,000事件/条件)。b)CD23-亲和纯化的血液单核细胞蛋白质的表观分子量和与抗CD11c单克隆抗体的免疫反应性(见图5b)将血液单核细胞的溶胞产物在CD23-柱上亲和纯化，洗脱的蛋白质在SDS-PAGE凝胶上被分开，并转移至硝酸纤维膜上。分子量标记示于左边。将凝胶用银染色(左边的道)。将滤器与同种型匹配的抗体(中间的道)或与抗CD11c单克隆抗体(BU-15，右边的道)一起保温，接着与辣根过氧化物酶偶联的山羊抗鼠抗体保温(Kpl；Gaithersburg，Massachusetts)。实施例6抗CD11b和抗CD11c单克隆抗体降低CD23-脂质体与活化的血液单核细胞的结合(见图6)通过Ficoll和过夜粘附到添加有2mM谷氨酰胺和10％热灭活的FCS(Flow实验室，Irvine，英格兰)的RPMI 1640(Seromed，柏林，德国)中的塑料上来富集单核细胞。接着在存在不同的单克隆抗体(αCD)或同种型匹配的对照(CTRL)(Becton Dickinson)时，将活化的单核细胞与CD23-脂质体一起保温，所有测试均为10μg/ml。抗CD11a单克隆抗体25.3和B-B15分别从Immunotech(Luminy，法国)和Serotec(牛津，英国)获得。抗CD11b单克隆抗体44来自Serotec，mon.gran 1来自Janssen(Beerse，比利时)，Leu-15来自Becton Dickinson(Erembodegem，比利时)和(Bear-1)来自Sera实验室有限公司(Sussex，大不列颠)。抗CD11c单克隆抗体3.9来自Serotec，SL9来自Sera实验室，BU-15来自Binding Site(Birmingham，英国)。抗CD13(SJ1D1)，抗CD18(BL5)，抗CD23(mAb25)来抗CD49d(HP 2.1)单克隆抗体来自Immunotech。抗CD21单克隆抗体BL13来自Immunotech，OKB7来自Ortho，BU-33来自Dr.MacLennan(伯明翰大学，英国)，HB-5来自ATCC，OKB7来自OrthoDiagnostics System Inc(Raritan，NJ)。抗CD14，抗CD13，抗CD16和抗CD20单克隆抗体来自Becton-Dickinson。细胞用FACS分析，测定平均荧光强度(MFI)。列出代表性实验数据，用对照-脂质体染色的细胞的MFI为6.5，用CD23-脂质体染色的为84.5。根据下式计算使用算术线性MFI值的抑制百分数
实施例7CD23-脂质体与重组转染子中的CD11b/CD18和CD11c/CD18的α链的结合(见图7)将编码CD11a的cDNA(Corbi，A.L.，Miller，L J.，O′Connor，K，Larson，R.S.和Springer，T.A.EMBO J.6，4023-4028(1987))在pCDNA1中再克隆(Invitrogen，San Diego，CA)。将编码CD11b的cDNA(Corbi，A.L.，Kishimoto，T.K.，Miller，L J.和Springer，T.A.生物化学杂志263，12403-12411(1988))和编码CD18的cDNA(Kishimoto，T.K.，O′Connor，K.，Lee，A.，Roberts，T.M.和Springer，T.A.细胞48，681-690(1987))在pCDM8中再克隆(Seed，B.，自然329 840-842(1987))。通过在20mM Hepes pH 7.4，150mMNaCl中使用基因脉冲装置(Bio-Rad，Richmond，CA)的电穿孔(260V，960μFD)将20μg DNA的等分试样在COS7细胞中进行转染。进行CD11a，b或c与CD18的共转染以使β2整合蛋白在细胞表面表达。用单链进行对照转染，转染48小时后，将COS细胞用抗CD11a，抗CD11b和抗CD11c单克隆抗体或同种型匹配的单克隆抗体(对照)进行染色。接着用FITC标记的羊抗小鼠抗体进行染色。通过与各自的单克隆抗体染色，10-15％的细胞显示出表达了CD11a，b，c或CD18。在用CD23-脂质体染色之前，将CD18-阳性转染的COS细胞进行FACS分类以增加表达β2整合蛋白的细胞的百分数。接着将CD11a/CD18，CD11b/CD18和CD11c/CD18转染子与CD23-脂质体(印迹2)或对照(血型糖蛋白A)-脂质体(印迹1)一起保温。通过使用抗CD11b(印迹4)，抗CD23(印迹5)和抗CD11c(印迹6)单克隆抗体分别抑制CD23-脂质体与CD11b/CD18和CD11c/CD18转染子的结合而证实了CD23与CD11b和CD11c相互作用的特异性。在CD11a/CD18转染子上没有观察到CD23-脂质体的结合，没有发现抗CD11a单克隆抗体的作用。实施例8CD23-CD11b，CD11c相互作用的结构表征(见图8)(a)糖类和二价阳离子的参与将纯化的活化的血液单核细胞用或不使用衣霉素(10μg/ml)处理48小时或用或不使用神经氨酸苷酶(0.1U/ml，两者均来自BoehringerMannheim，Mannhein，德国)处理45分钟。接着在存在或不存在EDTA(5mM；上面左边的图)，Ca2+或Mn2+(1-10mM；上面右边的图)时将细胞用CD23-脂质体对照-脂质体一起保温。(b)因子X抑制CD23与单核细胞的结合在不存在或存在因子X(0.1-10U/ml；Sigma)(下面左边的图)，纤维蛋白原(50μg/ml；Sigma)，纯化的重组ICAM-1(本实验室制备)，LPS(1μg/ml；Sigma)，被人血清调节的酵母聚糖(1mg/ml；Sigma)，IgE(50μg/ml；The Binding Site，伯明翰)或RGD多肽的多克隆抗体(1/500，ATCC)(下面右边的图)时，将纯化的活化的血液单核细胞与CD23-脂质体一起保温。用FACS分析细胞，测定MFI。如实施例6计算抑制百分数。实施例9通过与CD11b和CD11c结合，重组CD23特异性地增加了单核细胞a.亚硝酸盐的产生和b.氧化物的释放。
37℃下在不存在或存在重组可溶性CD23(Graber P.等，免疫学方法杂志149 215-226(1992))(50ng/ml)，抗CD11a(克隆25.3)，抗CD11b(克隆44)，抗CD11c(克隆BU-15)单克隆抗体(均为10μg/ml)时，将单核细胞培养a，4天或b，过夜。
为了估测产生的NO的量(示于图9a)，根据Green等，免疫学年鉴2 199-218(1984)中的疗法测定培养物上清液中的NO，NO2-和NO3-的稳定的最终产物的量。通过抗CD23单克隆抗体(mab25)(测得浓度为10μg/ml)的Fab片段抑制NO2-的产生以及使用硝基精氨酸(N-Arg为1mM)(Sigma)的抑制证实了CD23介导的NO2-的增加的特异性。
37℃下，将活化的单核细胞与氢化乙锭(分子探针，Eugene，OR)一起保温30分钟(Rothe G.等，白细胞生物学杂志47 440-448(1990))，并用FACS分析。列出了与未处理的单核细胞相比的被刺激的单核细胞的红色荧光的增加的百分数(见图9b)。与反映出将氢化乙锭氧化成溴化乙锭的未处理的单核细胞相比，经历了氧化释放的单核细胞显示出红色荧光信号的增加(Lacal P.M.等，生物化学杂志268707-712(1990))。仅有单核细胞的MFI值为159+/-10。列出了6个实验的平均值+/-SD的值。被已知诱导单核细胞中的呼吸释放的伴刀豆球蛋白A被用作阳性对照。通过抗CD11b(克隆44)，抗CD11c(克隆BU-15)和抗CD23(mAb25)单克隆抗体(浓度为10μg/ml时测得)的Fab片段产生的对CD23介导的H2O2产生的增加的抑制证实了CD23与CD11b和CD11c相互作用的特异性。实施例10重组CD23与CD11b和CD11c的结合特异性地增加单核细胞的细胞因子的产生(见图10)在37℃，在不存在或存在重组可溶性CD23(Graber P.等，免疫学方法杂志149 215-226(1992))(50ng/ml)，抗CD11a(克隆25.3)，抗CD11b(克隆44)，抗CD11c(克隆BU-15)，抗CD23(mAb 25-这个抗体可从Immunotech获得。在公开的欧洲专利申请EP-A-0269728中对它进行了讨论)单克隆抗体，伴刀豆球蛋白A(Sigma)(均为10μg/ml)，LPS(1ng/ml)(Sigam)或PMA(5ng/ml)(Calbiochem. La Jolla，加拿大)时将单核细胞保温过夜。通过特异性ELISA测定培养物上清液中的细胞因子。ELISA敏感性的极限对于IL-1β为0.05ng/ml(Ferrua等，免疫学方法杂志114 41-48(1988))，对于TNFα为0.01ng/ml(Medgenix，Biotechnie，Rungis，F)，对于IL-6为＜0.01ng/ml(Manie等，欧洲细胞因子网络451-56(1993))。通过抗CD11b(克隆44)，抗CD11c(克隆BU-15)和抗CD23(mAb25)单克隆抗体的Fab片段(在10gg/ml测定)对CD23介导的细胞因子产生的增加的抑制证实了CD23与CD11b和CD11c相互作用的特异性。列出了4个实验的平均值+/-SD的值。实施例11通过除开使用用淋巴结而不是脾细胞的标准方法在小鼠中产生来自大肠杆菌的重组可溶性人CD23(25KD，氨基酸150-321)的单克隆抗体。在体外这些抗体阻断了人CD23的活性。实施例12溃疡性结肠炎无副作用地用抗CD23 Mab对3只
猴给药，导致了主观粪便得分的改善。
剂量为每4天通过肌肉内注射1mg。实施例13在此报道的任何试验没有观察到毒性作用。
权利要求
1.一种用于治疗或预防炎症性，自身免疫或变态反应性疾病的CD23的结合剂。
2.根据权利要求1的结合剂，其中结合剂为一种抗体，它的片段，包含抗体或包含它的片段的人工构建物，任何一种这些结合剂的模拟物或衍生物。
3.根据权利要求1或2的结合剂，它为人源化的或嵌合抗体。
4.根据前述任一项权利要求的结合剂，它在体内阻断CD23与和它结合的配体之间的相互作用。
5.根据前述任一权利要求的结合剂，用于治疗关节炎，红斑狼疮，系统性红斑狼疮，Mashimotos甲状腺炎，多发性硬化，糖尿病，眼色素层炎，皮炎，牛皮癣，荨麻疹，肾病综合症，肾小球肾炎，炎症性肠疾病，溃疡性结肠炎，节段性回肠炎，斯耶格伦氏(Sjogren′s)综合症，变应性疾病，哮喘，湿疹，GVH，COPD，支气管炎，胰岛炎，鼻炎或糖尿病。
6.根据权利要求1-4任一项的结合剂，用于治疗关节炎，变态反应，溃疡性结肠炎或节段性回肠炎。
7.根据权利要求6的结合剂，用于治疗类风湿性关节炎。
8.CD23结合剂在制备治疗如下疾病的药物中的应用关节炎，红斑狼疮，系统性红斑狼疮，Mashimotos甲状腺炎，多发性硬化，糖尿病，眼色素层炎，皮炎，牛皮癣，荨麻疹，肾病综合症，肾小球肾炎，炎症性肠疾病，溃疡性结肠炎，节段性回肠炎，斯耶格伦氏(Sjogren′s)综合症，变态反应哮喘，湿疹，GVH，COPD，支气管炎，胰岛炎，鼻炎或糖尿病。
9.权利要求8的应用，用于治疗关节炎，变态反应，溃疡性结肠炎或节段性回肠炎。
10.权利要求9的应用，用于治疗类风湿性关节炎。
11.一种药物组合物，包含CD23结合剂和药学上可接受的载体。
12.根据权利要求11的组合物，包含至少1mg的单位剂量的结合剂。
13.根据权利要求11或12的药物组合物，其中结合剂为抗体。
14.根据权利要求13的药物组合物，其中抗体为人源化的或嵌合抗体。
15.根据权利要求11的基本上如本文前面所述的药物组合物。
16.根据前述任一项权利要求的结合剂，应用或药物组合物，其中结合剂与免疫抑制剂，耐受诱导剂，抗自身免疫剂或消炎药结合。
17.根据权利要求16的结合剂，应用或药物组合物，其中结合剂与CD4+T细胞抑制剂或TNF拮抗剂结合。
18.根据权利要求17的结合剂，应用或药物组合物，其中结合剂与抗CD4抗体结合。
19.根据权利要求1的基本上如本文前面所述的结合剂。
20.一种治疗炎症性，自身免疫性疾病或变态反应性疾病的方法，包括给病人施用药用有效量的CD23结合剂。
全文摘要
CD23结合剂可用于治疗炎症性,自身免疫或变态反应性疾病。
文档编号A61K39/395GK1169735SQ95196799
公开日1998年1月7日 申请日期1995年10月20日 优先权日1995年10月20日
发明者J·-Y·M·P·博纳富瓦 申请人:葛兰素集团有限公司