专利名称：微分子胎活素复合物及其制取法和在化妆品中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种生物活性物质及其制取法和在化妆品中的应用，特别是涉及微分子胎活素复合物及其制取法和在化妆品中的应用。
近十多年，国内外许多学者从人胎盘中提取的一种非蛋白类小分子生物活性物质，具有很强的免疫活性，并被命名为胎盘免疫调节因子(PF)。近年的研究发现，PF具有显著双向免疫调节、抗病毒、抗肿瘤及抗衰老作用，被临床用于治疗各种病毒感染性疾病(特别是反复感染)如病毒性肝炎、脊髓灰质炎、疱疹病毒性皮肤病、恶性肿瘤、自身免疫性疾病及其免疫功能低下性疾病等，取得了显著疗效。
近年，我国著名生物技术专家吴祖泽教授发现，从人胚胎组织中提取的小分子生物活性物质具有显著的抗癌作用和免疫调节作用，并命名为低分子抑瘤物[见吴祖泽，人胎肝细胞分泌的低分子抑瘤物对白血病细胞的抑制作用，中国应用生理学杂志1993；(1)20-24]。中国专利93115199亦提出人早期胚胎因子具有很强的杀癌力和免疫增强作用。但他们的研究仅限于医疗及制药方面。
本发明人用类似于PF的检查方法发现人胚胎和胎盘的提取物中具有高效非蛋白类小分子生物活性物质，并将其命名为微分子胎活素(Micro-molecular Embryo Active Factor)，即MEAF，胎肝MEAF和胎盘MEAF中含有非常丰富的肽类、核苷酸、各种细胞生长因子及多种维生素等，但免疫调节因子相对较少。迄今为止，尚未见有关微分子胎活素复合物及类似复合物的报道。
用常规方法制取微分子胎活素的步骤如下一、选择健康足月的产儿胎盘和胎肝和从人胚胎中取出的心脏、胸腺、脾脏及肾脏作原料，要求新鲜干净，30℃以下室温放置不超过8小时。二、产妇检查，肝功能正常，HBsAg、HCAb、梅毒抗体及HIV抗体检查均应为阴性。三、用蒸馏水冲洗胎盘，剪去筋膜，称重、剪碎，加入等量的无菌蒸馏水、用高速组织捣碎机捣碎、匀浆。四、将匀浆低温离心后装入透析袋进行透析(透析液为生理盐水或无菌蒸馏水)。该方法的不足在于获取的产量偏低且低温离心需较昂贵的设备并增加了污染的机会。
在化妆品领域中，传统护肤化妆品多为化学合成品，常含有各种化学物质如漂白剂氢醌、汞、铝及其它重金属、香料、激素、维生素等，长期使用具有明显的细胞毒性，令皮肤提早老化；或含有大分子活性物质(蛋白质)、动植物油脂、凡士林等，不易被皮肤表皮细胞吸收，影响细胞的呼吸与生长，甚至引起各种化妆品皮肤病(如接触性皮炎、过敏性皮炎等)。因此，现代生物高技术使新型化妆品原料替代一些副作用大而且有害的合成化妆品成为一种必然。生物技术化妆品的诞生，越来越受到消费者的青睐，大有取代传统化妆品和化学化妆品的趋势，成为第三代化妆品。然而这些含有生物活性物质(如EGF、IL-2、AHA、透明质酸、皮肤生长素、酵素、中草药提取物及其它动植物提取物等)的生物技术化妆品几乎都要采用传统化学性基质成分制成膏霜类制品，常常室温保存。经生物学专家研究发现，绝大部分生物活性物质(生物技术产品)在化妆品的膏霜基质中活性减弱或完全丧失活性；非低温状态下(低温状态指2-8℃)，许多生物活性物质的生物活性明显减弱甚至完全丧失，而真正起作用的可能只是膏霜的基质(保湿、润滑)。部分生物技术化妆品中含异体(或异种)蛋白质类生物高分子如胶原蛋白、弹性蛋白、金属硫蛋白(MT)、IL-2、水解蛋白酶类等，这些高分子物质很难经皮肤吸收，很难发挥生物活性作用；或含有一些刺激性很强的小分子生物活性物质，如果酸(AHA)、曲酸、透明质酸等，虽具有很好的近期美容效果，但远期效果尚未可知。含有胎盘提取物的化妆品虽有上市，但由于均采用传统化学性基质成分制成膏霜类制品，因此美容效果受到限制。
本发明的目的之一是提供一种高纯度、高效生物活性及使用高度安全的微分子胎活素复合物；目的之二是提供一种经济、高效并易于操作的制取该微分子胎活素复合物的制取方法；目的之三是提供将微分子胎活素复合物用于化妆品的应用用途。
本发明的目的通过如下技术方案来实现本发明的微分子胎活素复合物主要由胎盘微分子胎活素和胚肝微分子胎活素与混合组织微分子胎活素复合而成，其主要成分的含量为(体积％)胎盘微分子胎活素 3-60胎肝微分子胎活素 95-5混合组织微分子胎活素 2-35上述主要成分的分子量均小于6000道尔顿，所述混合组织微分子胎活素是由从人胚胎中取出的心脏、胸腺、脾脏及肾脏的混合组织中提取而成。
本发明的微分子胎活素复合物通过如下方法制取；一、选取合格人胎盘、胎肝和从人胚胎取出的心脏、胸腺、脾脏及肾脏作原料，即选择健康足月产儿胎盘，要求新鲜干净，30℃以下室温放置不超过8小时。选择计划生育水囊引产的健康胎儿，胎龄为4-8个月。二、产妇肝功检查、HBsAg、HCAb、梅毒抗体及HIV抗体检查，即产妇检查肝功能正常，其余抗体检查均应为阴性。三、将胎盘和胎肝及从人胚胎中取出的心脏、胸腺、脾脏及肾脏清洗、称重、剪碎、捣碎、匀浆，本发明的方法特征在于匀浆后直接将匀浆分别装入装有透析液的透析袋中进行透析而分别得到胎盘、胎肝和混合组织微分子胎活素，然后将上述三种微分子胎活素按下述比例(体积％)混合胎盘微分子胎活素3-60，胎肝微分子胎活素95-5，混合组织微分子胎活素2-35，即得到微分子胎活素复合物。
与常规方法不同的是，本发明所用透析液为0.5％的盐水。
经透析所得微分子胎活素复合物成品封装于特制的无菌玻璃瓶内。
本发明的微分子胎活素复合物可用作美容化妆品。
本发明的微分子胎活素复合物的主要成分为小分子肽类及核苷酸，并含有16种氨基酸(其中8种为人体必需氨基酸)、核糖、脱氧核糖及DNA、RNA、有机酸、无机微量元素、小分子细胞生长因子和多种维生素。其主要性质和试验结果如下(1)肽类含量1.0-15/ml；(2)核苷酸260nm有吸收峰(OD260/OD280)；(3)分子量小于6000道尔顿；(4)PE值6.5-7.0；(5)微生物检查(细菌培养)阴性；(6)蛋白质试验阴性；(7)HBsAg、HCAb、梅毒抗体及HIV抗体检查阴性；(8)动物毒性试验小鼠腹腔注射MEAF0.5-1.5ml，观察1-2周，小鼠仍健康，体重增加、局部无浓肿、结痂；(9)刺激试验将MEAF滴入动物眼结膜，无红肿、无充血现象；(10)过敏试验阴性；(11)灯检澄清、透明、无混浊沉淀及其它异物。
本发明的微分子胎活素复合物的生物活性可保持1年以上，较耐热，不含蛋白质，无过敏、无刺激、无毒副作用。
本发明在医学美容方面的应用主要体现在以下三个方面一、改善局部血液循环、恢复皮肤弹性。这是医学美容中最重要的作用之一。本发明人的应用试验表明，MEAF不仅能提高机体的细胞免疫功能，而且还具有营养局部血管和神经，改善局部血液循环、软化皮肤的作用。因MEAF中不含大分子的激素、酶和其它蛋白质，很容易经皮肤和粘膜吸收，能迅速改善皮肤粘膜局部血液循环，恢复皮肤弹性，不会引起皮肤过敏。二、营养皮肤、消除细皱纹MEAF中含有丰富的小分子生物活性物质，很容易被皮肤吸收，对皮肤有很强的营养作用，同时许多小分子物质能改善局部血液循环，刺激表皮细胞分化增生，胶原合成，促进皮肤新陈代谢，因此具有很好的抗皱、养颜作用。三、美白、润肤、抗衰老本发明的微分子胎活素复合物中含有许多美容抗衰老因子如多种天然保湿因子、小分子细胞生长因子、维生素及微量小分子酶和激素，同时还有丰富的免疫调节因子，这些小分子生物活性物质具有较强生物催化作用，能明显地改善皮肤组织的脂色素代谢、滋润皮肤、增强皮肤的免疫功能，有紫外光防御作用及创伤的治疗作用，局部皮肤的应用，能使皮肤增白、柔嫩、红润、细滑，增加皮肤的弹性，消除皮肤的细小皱纹，坚持使用，能延缓衰老、永葆青春。
本发明的微分子胎活素复合物由于是按一定的比例将胎盘MEAF、胎肝MEAF和混合组织MEAF复合而成，因此兼容了各成分的精华，具有更为有效的美容抗衰老作用。
本发明的制取方法既减少了低温离心所需的昂贵设备、减少了污染的机会，又能增加产量。同时本发明所用透析液为0.5％的盐水，既避免了生理盐水中氯化钠含量过高影响美容效果的缺点，又克服了纯蒸馏水因渗透压过低影响透析效果的不足。
本发明从制取方法到产品包装及贮存均采用了先进的生物制品技术，确保了产品的高纯度(纯天然性)、高效生物活性及使用的高度安全性。
下面给出
具体实施例方式一、本发明的微分子胎活素复合物。
本发明的微分子胎活素复合物主要由胎盘微分子胎活素、胎肝微分子胎活素及混合组织微分子胎活素复合而成，其最佳含量为(体积％)胎盘微分子胎活素 30胎肝微分子胎活素 50混合组织微分子胎活素 20，上述主要成分的分子量均小于6000道尔顿。所述混合组织胎活素是由从人胚胎中取出的心脏、胸腺、脾脏及肾脏的混合组织中提取而成。除上述主要成分外，复合物中加入微量防腐剂尼泊金甲酯0.04％(体积)。二、本发明的微分子胎活素复合物的制取法。
(一)、胎盘MEAF的制取(1)、原料选择健康足月的产儿胎盘，要求新鲜干净，30℃以下室温放置不超过8小时。(2)、产妇检查、HBsAg、HCAb、梅毒抗体及HIV抗体检查产妇检查肝功能应正常抗体检查均应为阴性。再留取胎盘血1ml，进一步检查HBsAg、HCAb、梅毒抗体及HIV抗体，以防产妇漏检。(3)、用蒸馏水冲洗胎盘，剪去筋膜，再用蒸馏水清洗3-4次，然后称重、剪碎，加入等量的无菌蒸馏水、用高速组织捣碎机捣碎、匀浆，(4)、将组织匀浆分装于无菌三角烧瓶内，每瓶不超过1000ml封口倾钭置于冰柜内过液冻结，然后融化。反复冻结、融化2-3次。(5)将透析袋剪成1.5米长(可灌装1kg原料)，用清水浸泡、加洗涤剂轻柔灌洗，用自来水冲洗干净后再用无菌蒸馏水清洗，常规高压30分钟消毒灭菌。(6)、将融化的组织匀浆直接灌装于透析袋内(约1kg)，结扎两端后用生理盐水冲洗外壁，盛放在无菌烧杯内，加入0.5％盐水400ml/kg，封口后置于4℃冰箱透析72小时。(7)、收集透析液，用试纸测PH值并调节至6.5-7.0，正压超滤除菌，加入浓度为0.04％的尼泊金甲脂，用500ml的无菌三角烧瓶分装，封口后置于4℃冰箱保存。
(二)、胎肝及混合组织MEAF的制取(1)、原料选择计划生育水囊引产的健康胎儿，胎龄为4-8个月，30℃以下低温放置不超过8小时。(2)、产妇检查，肝功能应正常，HBsAg、HCAb、梅毒抗体及HIV抗体检查均应为阴性。(3)、用蒸馏水冲洗胚胎，洗净体表的血迹，常规体表消毒后，经胸腹切口取出肝脏、心脏、胸腺、脾脏及肾脏，留取胎血1ml进一步检查HBsAg、HCAb、梅毒抗体及HIV抗体，以防产妇漏检。(4)、分别将上述胚胎组织剪成碎片后放进250ml的烧瓶(其中肝脏放在一个瓶内，心脏、胸腺、脾脏及肾脏放在另一个瓶内)，然后放入低温冰箱保存(-30℃以下)。(5)、解冻后，分别称重，加入等量的0.5％的盐水、用高速组织捣碎机捣碎、匀浆，每次一分钟(间隔5分钟用冰水冷浴)，共四次。以下步骤同胎盘MEAF制取步骤的(4)-(7)。胎肝组织提取物为胎肝MEAF，心脏、胸腺、脾脏及肾脏组织混合提取物为混合组织MEAF。
三、本发明的微分子胎活素复合物的用途。
本发明可用作美容化妆品，具有十分明显的美容抗衰老作用。
临床初步应用情况选择自愿者51例进行试验，男性15例，女性36例，年龄为23-46岁，平均29岁。用法用洗面奶清洗脸部皮肤后，直接用MEAF复合物(针剂型)涂擦面部皮肤，早晚各一次，每次0.5-1.0ml，30天为1个疗程。以自身未用MEAF复合物前作为对照组。结果为经试用1-2个疗程后，粗糙、黑的皮肤变光滑、白嫩、细皱纹消失48例(94.1％)，皮肤变红润柔软47例(92.2％)，面部有雀斑或黄褐斑5例， 颜色均明显变淡。无一例出现任何毒副作用(包括接触性皮炎或过敏性皮炎等)。结果表明，该生物活性物质因含有丰富的多肽、核苷酸、氨基酸、核糖核酸、有机酸和无机微量元素等对人皮肤具有明显的营养作用，同时能促进皮肤组织的代谢、显著改善并增强面部皮肤的微循环和皮脂腺的功能，具有肯定的美容与抗衰老作用。
权利要求
1.一种微分子胎活素复合物，包括胎肝微分子胎活素和胚胎微分子胎活素，其特征在于它主要由上述两种胎活素与混合组织微分子胎活素复合而成，其主要成分的含量为(体积％)胎盘微分子胎活素 3-60胎肝微分子胎活素 95-5混合组织微分子胎活素 2-35，上述主要成分的分子量小于6000道尔顿，所述混合组织微分子胎活素是由从人胚胎中取出的心脏、胸腺、脾脏及肾脏的混合组织中提取而成。
2.一种微分子胎活素复合物的制取法，包括(一)、选择合格人胎盘和人胎肝及从人胚胎中取出的心脏、胸腺 脾脏及肾脏作原料，(二)、产妇肝功检查，HBsAg、HCAb、梅毒抗体及HIV抗体检查，(三)、分别将胎盘和胚胎清洗、称重、剪碎、捣碎、匀浆，其特征在于匀浆后直接将匀浆分别装入装有透析液的透析袋中进行透析而分别得到胎盘、胎肝、和混合组织微分子胎活素，将上述三种微分子胎活素按下述比例(体积％)混合胎盘微分子胎活素3-60，胎肝微分子胎活素95-5，混合组织微分子胎活素2-35。
3.一种微分子胎活素复合物，其特征在于将其用作美容化妆品。
4.根据权利要求2所述的微分子胎活素复合物的制取法，其特征在于所述透析液为0.5％的盐水。
5.根据权利要求4所述的微分子胎活素复合物的制取法，其特征在于经透析所得成品封装于无菌玻璃瓶内。
全文摘要
一种微分子胎活素复合物及其制取法和在化妆品中的应用。该复合物主要由胎盘微分子胎活素、胎肝微分子胎活素与混合组织微分子胎活素复合而成。其制取法的特征是在匀浆后直接装入装有透析液的透析袋中透析而得。该复合物可用作美容化妆品。本发明从制取方法到产品及包装和贮存均采用了先进的生物制品技术,确保了产品的高纯度、高效生物活性及使用的高度安全性。
文档编号A61K35/48GK1181242SQ9611145
公开日1998年5月13日 申请日期1996年11月26日 优先权日1996年11月26日
发明者吴成志 申请人:吴成志