专利名称：积雪草酸衍生物以及含有该衍生物的用于治疗创伤的药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及化学结构式Ⅰ所示的积雪草酸衍生物
其中，R1表示氢、可由乙酰基或苄基保护的羟基、甲磺酰氧基、(甲硫基)硫代羰氧基、卤素、乙氧基甲氧基或辛氧基甲氧基；R2表示氢或羟基；R1和R2可以形成一个氧代基；R3表示氢或可被乙酰基或苯甲酰基保护的羟基；R2和R3可以形成环氧基；R4表示可被乙酰基或苯甲酰基保护的羟甲基；R3和R4可以形成-OC(R6)(R7)OCH2-[其中，R6是氢、含有1至4个碳原子的低级烷基或苯基，R7表示氢、含有1至4个碳原子的低级烷基或苯基，并且R6和R7可以形成-(CH2)5-]；R5表示氢、含有1至4个碳原子的低级烷基、含有1至4个碳原子的烷氧基甲基、辛氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基、苄氧基甲基或2-四氢吡喃基；以及含有上述衍生物作为活性组分用于治疗创伤的药物。
背景技术：
由积雪草中提取出的化合物积雪草酸、羟基积雪草酸(madecassic acid)和积雪草皂苷(积雪草酸的三糖)是由Bontems在1941年首次分离[J.E.Bontems,Bull.Sci.Pharmacol.,49,186-91(1941)]并由Polonsky确定了其结构[J.Polonsky,Compt.Rend,,232,1978-80(1951)；J.Polonsky,Bull.Soc.Chim.,173-80(1953)]。自早期以来，包括积雪草酸和积雪草皂苷在内的积雪草提取物被用于治疗创伤皮肤或慢性溃疡，同时也被用于治疗因顿挫性结核和麻风引起的皮肤变形[P.Boiteau,A.Buzas,E.Lederer & J.Polonsky,Bull.Soc.Chim.,31,46-51(1949)]。据报导，这些化合物治疗创伤皮肤的机理包括活化马尔皮基层细胞以及诱发角质化[May.Anne,Eur.J.Pharmacol.,4(3),331-9(1968)]。
市售皮肤病治疗药一积雪草总苷(madecassol)是上述三种组分，即积雪草皂苷(40％)与积雪草酸和羟基积雪草酸(60％)的混合物。现已知道，治疗作用主要来源于三个组分中的积雪草皂苷，即积雪草酸的三糖，而积雪草酸本身并无治疗功效[Kiesswetter,Wien.Med.Wochschr.114(7),124-6(1964)]。然而，有报导称，该结果归因于上述化合物在体内的吸收过程存在差异，而且实际显示治疗作用的原料是积雪草酸本身[L.F.Chasseaud,B.J.Fry,D.R.Hawkins,J.D.Lewis,T.Talor & D.E.Hathway,Arzneim-Forsch,21(9),179-84(1971)]。因此，积雪草酸的合成及其治疗效果成为关注焦点。但是，当从简单反应原料开始合成时，积雪草酸的全合成需要相当多的合成步骤，由于过程复杂并且经济上的缺点使这种方法存在许多问题。
发明公开本发明人以从积雪草获得的积雪草酸作为起始物合成多种积雪草酸衍生物。同时还发现所述衍生物在治疗创伤方面具有优异的治疗作用，并且完成了本发明。
本发明涉及由下式Ⅰ所示积雪草酸衍生物
其中，R1表示氢、可由乙酰基或苄基保护的羟基、甲磺酰氧基、(甲硫基)硫代羰氧基、卤素、乙氧基甲氧基或辛氧基甲氧基；R2表示氢或羟基；R1和R2可以形成一个氧代基；R3表示氢或可被乙酰基或苯甲酰基保护的羟基；R2和R3可以形成环氧基；R4表示可被乙酰基或苯甲酰基保护的羟甲基；R3和R4可以形成-OC(R6)(R7)OCH2-[其中，R6是氢、含有1至4个碳原子的低级烷基或苯基，R7表示氢、含有1至4个碳原子的低级烷基或苯基，并且R6和R7可以形成-(CH2)5-]；R5表示氢、含有1至4个碳原子的低级烷基、含有1至4个碳原子的烷氧基甲基、辛氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基、苄氧基甲基或2-四氢吡喃基；以及含有上述衍生物作为活性组分并用于治疗创伤的药物。
本发明所述积雪草酸衍生物的制备方法将在下文加以描述。方法1将积雪草的滴定提取物(TECA)水解，得到积雪草酸和羟基积雪草酸的混合物(2)，将该混合物在酸性催化剂下与2,2-二甲氧基丙烷与反应。所得反应产物经柱色谱纯化，分离出3,23-二羟基被保护的3,23-O-异亚丙基积雪草酸(3)。用重氮甲烷处理该产物以合成3,23-O-异亚丙基积雪草酸甲酯(4)[参见合成路线1]。合成路线1
将积雪草酸3-和23-位上的两个羟基用不同的酮或醛进行保护合成出通式(5)所示化合物。[条件是R6=H并且R7=H，该化合物的合成采用了二甲基亚砜和三甲基氯硅烷]。通式(5)化合物在用氯甲基辛基醚处理后可合成出通式(6)所示化合物。[参见合成路线2]
(其中，R6和R7如上述定义)方法3将所得化合物(4)的2-位羟基用氢化钠和咪唑处理，从而将其转化为烷氧基。加入二硫化碳并将混合物加热至回流，随后用碘甲烷处理得到黄原酸酯(7)。所得混合物用氢化三丁基锡和催化量的AIBN处理，得到2-脱氧-3,23-O-异亚丙基积雪草酸甲酯(8)，随后将该化合物脱保护，生成2-脱氧积雪草酸甲酯(9)。将所得化合物(9)水解成为2-脱氧积雪草酸(10)。由2-脱氧草酸(10)合成得到2-脱氧-3,23-O-异亚丙基积雪草酸(11)，随后将该化合物在方法2所述的条件下反应，合成得到通式(12)所示化合物。[参见合成路线3]。
方法4按照方法2所述方式、从所得化合物(4)开始合成2-O-辛氧基甲基-3,23-异亚丙基积雪草酸甲酯(13)[参见合成路线4]。合成路线4
方法5将所得化合物(3)与烷基卤化物在方法2所述的条件下反应，得到通式(14)所示化合物，随后将该化合物的2-位乙酰化，得到通式(15)化合物。[参见合成路线5]。合成路线5
(其中，R5如上所述)方法6由上述化合物(3)起始、在方法2所述但反应时间延长的条件下制得2-O-乙氧基甲基-3,23-O-异亚丙基积雪草酸乙氧基甲酯(16)。按照相同的方式，利用氯甲基苄基醚使苄氧基甲基基团与28-位的COOH基团连接。所得化合物乙酰化后成为3,23-O-二乙酰基积雪草酸苄氧基甲酯(17)。[参见合成路线6]合成路线6
方法7将积雪草酸的2,3-羟基转化为2,3-环氧基，并将所得化合物与多种亲核性化合物反应以使环氧基开环，制得一系列本发明所述新化合物。也就是说，将化合物(4)与甲磺酰基氯反应，得到2-O-甲磺酰基-3,23-O-异亚丙基积雪草酸甲酯(18)，随后将该化合物用PTSA处理，生成2-O-甲磺酰基积雪草酸甲酯(19)。进而在甲醇溶剂中用碳酸钾处理所得化合物，生成2,3-环氧积雪草酸甲酯(20)。将化合物(20)用碘化锂三水合物和乙酸处理，生成为环氧基开环的2-α-碘-2-脱氧积雪草酸甲酯(21)。[参见合成路线7]合成路线7
方法8利用二甲基亚砜和三甲基氯硅烷将积雪草酸3-和23-位的两个羟基进行亚甲基保护以制得通式(5,R6=R7=H)所示化合物，随后将该化合物用重铬酸吡啶鎓(PDC)处理，得到通式(22)所示的化合物。将所得化合物与氯甲基辛基醚反应，得到通式(23)化合物。[参见合成路线8]合成路线8
本发明的积雪草酸表现出与参比试剂，1％积雪草的定量提取物(TECA)相似或更优异的作用。
通式(1)化合物的成人剂量是10至100mg/天。该剂量通常根据患者的年龄和体重以及症状的状况决定。
利用常规方法可以将本发明所述用于治疗创伤的药物配制为软膏剂。
实施本发明的最佳方式现在，本发明以实施例、试验例和制剂例作为参考加以说明。然而，本发明不局限在这些实施例中。实施例1积雪草皂苷和积雪草酸的大规模分离和提纯通过柱色谱(硅胶，230-400目；二氯甲烷/甲醇=10/1)直接分离积雪草的定量提取物(5g)，得到积雪草酸(1.5g)、羟基积雪草酸(1.4g)以及积雪草皂苷和羟基积雪草皂苷的混合物(2.0g)。将所得混合物溶解在最少量的处于100℃水浴中的60％甲醇中，随后冷却至室温，得到纯的积雪草皂苷，该产物为针状结晶(熔点230-240℃)。
另外，将提取物(62g)溶解在甲醇(700ml)中并加入5N氢氧化钠溶液(50ml)，所得混合物在回流条件下加热10小时。将反应混合物在减压条件下浓缩、中和、过滤并干燥，制得积雪草酸和羟基积雪草酸的混合物2.43g。实施例2制备3,23-O-异亚丙基积雪草酸(3)将积雪草酸和羟基积雪草酸的混合物(12g)和对甲苯磺酸(200g)溶解在无水DMF(100ml)中，以注射方式加入2,2-二甲氧基丙烷(5ml)。在室温下将所得混合物搅拌14小时，随后中和并在减压条件下浓缩除去溶剂。在提取、洗涤和干燥后，将残余物通过柱色谱(二氯甲烷∶甲醇=30∶1)纯化得到8.04g 3,23-O-异亚丙基积雪草酸(3)。IR(neat):3440,1698,1200cm-1Mass(EI):m/e5 28(M+),513(M--Me),482(M+-HCOOME),452,424,407,248,203,189,1331H-NMR(CDCl3):δ0.75,1.04,1.06,1.09,1.45,1.46(each s,3H),0.85(d,3H,J=6.4Hz),0.95(d,3H,J=6.4Hz),2.18(d,1H,J=11.2Hz),3.32(d,1H,J=9.6Hz),3.46,3.51(ABq,2H,J=10.8Hz),3.78(m,1H),5.24(brt,1H)实施例33,23-O-异亚丙基积雪草酸甲酯(4)的制备将3,23-O-异丙基积雪草酸(3)(5g)溶解在乙醚中，并在0℃下缓慢滴加重氮甲烷的乙醚溶液。在室温下搅拌1小时后，将反应混合物在减压条件下浓缩除去乙醚，将该残余物通过柱色谱(己烷∶乙酸乙酯=3∶1)纯化得到4.9g 3,23-O-异亚丙基积雪草酸甲酯。
IR(neat):3466,1724,1201cm-1Mass(EI):m/e542(M+),527(M+-Me),482(M+-HCOOME),483,467,451,407,262,203,189,1331H-NMR(CDCl3):δ0.66,0.97,1.00,1.02,1.40,1.39(each s,3H),0.79(d,3H,J=6.4Hz),0.87(d,3H,J=6.0Hz),2.15(d,1H),3.25(d,1H,J=9.6Hz),3.41 3.43(ABq,2H),3.53(s,3H),3.72(m,1H),5.18(brt,1H)实施例4:3,23-O-亚烷基积雪草酸(5)的制备(1)R6=H,R7=H在搅拌下将二甲基亚砜(2.5当量)和三甲基氯硅烷(2.5当量)加入到THF中。将所得积雪草酸(2)(2.53g,5.18mmol)加入其中，并在回流和氩气氛的条件下将混合物加热3天。减压条件下蒸除溶剂，所得残余物通过柱色谱(二氯甲烷∶甲醇=20∶1)纯化，制得2.01g浅黄色固体(收率79.45％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.75,1.05,1.08,1.12(each s,3H),0.85(d,3H,J=6.18Hz),0.95(d,3H,J=5.76Hz),2.19(d,1H,J=10.9Hz),3.04,3.76(ABq,2H,J=10.11Hz),3.23(d,1H,J=10.23Hz),3.87(dt,1H,J=4.26Hz,10.02Hz),4.95(d,d,2H,J=5.9Hz),5.24(t,1H)(2)R6=H,R7=CH3在减压条件下，将所得积雪草酸(255mg,0.52mmol)用对甲苯磺酸干燥。随后将该化合物溶解在无水THF中，并且滴加CH3CH(OEt)2(0.15ml)，将所得混合物在室温下搅拌2小时。向该反应混合物中注入碳酸钠的饱和溶液，减压条件下蒸发除去溶剂。将残余物用乙酸乙酯稀释、洗涤并干燥，通过柱色谱(二氯甲烷∶甲醇=20∶1)纯化得到178g标题化合物(收率66.2％)。IR(neat)2926,1695cm-1Mass(EI)m/e514[M+]
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.14(t,1H),4.64(qt,1H,J=4.92Hz),3.75(m,1H),3.63,2.97(ABq,2H,J=10.1Hz),3.17(d,1H,J=10.4Hz),0.98,0.95,0.65(each s,3H),0.85(d,3H,J=5,49Hz),0.75(d,3H,J=6.39Hz)(3)R6=H,R7=C6H5除用C6H5CH(OMe)2代替CH3CH(OEt)2之外，采用与实施例4(2)相同的方法(收率32.1％)。IR(neat)3437,1696cm-1Mass(EI)m/e576[M-]5781H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.52～7.49(m,2H),7.37～7.35(m,3H),5.53(s,1H),5.24(t,1H),3.90,3.30(ABq,2H,J=10.11Hz),3.47(d,1H,J=10.47Hz),2.18(d,1H,J=11.46Hz),1.19,1.09,4.07,0.77(each s,3H),0.93(d,3H,J=6.09Hz),0.85(d,3H,J=6.33Hz)(4)R6=CH3,R7=C2H5除用C2H5COCH3代替CH3CH(OEt)2之外，采用与实施例4(2)相同的方法(收率58.96％)。IR(neat)3436,1694cm-1Mass(EI)m/e542[M+]1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.18(t,1H),3.68,3.47(ABq,2H,J=4.26Hz),3.48(d,1H,J=7.05Hz),2.12(d,1H,J=10.65Hz),0.97,0.89,0.69(each s,3H)(5)R6=CH3,R7=C3H7除用C3H7COCH3代替CH3CH(OEt)2之外，采用与实施例4(2)相同的方法(收率43.01％)。IR(neat)3369,2928,1694cm-1
Mass(EI)m/e558[M+2]1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.18(t,1H),3.79～3.75(m,1H),3.18(d,1H,J=10.23Hz),3.67,2.98(ABq,2H,J=9.8Hz),2.12(d,1H,J=10.65Hz),1.05,1.01,0.98,0.69(each s,3H),0.88(d.3H,J=5.55Hz),0.79(d,3H,J=6.39Hz)(6)R6.R7=-(CH2)5-除用环己酮代替CH3CH(OEt)2之外，采用与实施例4(2)相同的方法。
Mass(EI)m/e1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.77,0.96,1.07(each s,3H),0.85(d,3H,J=6.33Hz),2.18(d,1H,J=11.46Hz),3.24(d,1H,J=9.51Hz),3.41,3.59(ABq,2H,J=10.47Hz),3.76(dt,1H,J=8.54Hz),5.23(t,1H)实施例5制备3,23-O-亚烷基积雪草酸辛氧基甲酯(6)(1)R6=H,R7=H将实施例4(1)所得化合物5(258.4mg,0.52mmol)溶解在无水二氯甲烷中。将二异丙基乙基胺(0.18ml)加入其中并在室温下搅拌10分钟。在0℃下，滴加氯甲基辛基醚(0.1ml)并搅拌5分钟。向其中加入甲醇，将残余物通过柱色谱(二氯甲烷∶甲醇=30∶1)纯化得到138mg白色固体(收率41.6％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ0.76,1.05,1.09,1.13(each s,3H),0.88(d,3H,J=5.6Hz),0.95(d,3H,J=6.36Hz),2.25(d,1H,J=10.8Hz),3.04,3.76(ABq,2H,J=10.0Hz),3.22(d,1H,J=10.8Hz),3.58(m,2H),4.94(d,d,2H,J=6.0Hz)5.21,5.24(ABq,2H,J=5.88Hz),5.26(t,1H)(2)R6=H,R7=CH3
除用实施例4(2)制得的化合物5代替实施例4(1)中的化合物5之外，采用与实施例5(1)相同的方法。IR(neat)3481,2927,1732cm-1Mass(EI)m/e656[M+]1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.22(t,1H),5.20,5.17(ABq,2H,J=6.21Hz),4.69(qt,1H,J=4.95Hz),3.84～3.77(m,1H),3.69,3.03(ABq,2H,J=10.07Hz),3.55(m,2H)2.22(d,1H,J=11.16Hz),1.05,1.00,0.95,0.72(each s,3H),0.84(d,3H,J=2.55Hz),0.82(d,3H,J=2.19Hz)(3)R6=H,R7=C6H5除用实施例4(3)制得的化合物5代替实施例4(1)中的化合物5之外，采用与实施例5(1)相同的方法(收率23.8％)。IR(均相)3697,1730cm-1质谱(EI)m/e719[M++1](4)R6=CH3,R7=C2H5除用实施例4(4)制得的化合物5代替实施例4(1)中的化合物5之外，采用与实施例5(1)相同的方法(收率58.96％)。IR(neat)3469,1733cm-1Mass(EI)m/e684[M+]1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.16(t,1H),5.14,5.11(ABq,2H,J=6.29Hz),3.68(m,1H),3.48(m,2H,),3.24(d,1H,J=9.57Hz),2.16(d,1H,J=11.5Hz),1.00,0.96,0.91,0.66(each s,3H),0.84(d,1 H,J=5.55Hz),0.76(d,1H,J=5.73Hz)(5)R6=CH3,R7=C3H7除用实施例4(5)制得的化合物5代替实施例4(1)中的化合物5之外，采用与实施例5(1)相同的方法(收率80.2％)。IR(neat)3468,2927,1729cm-1Mass(EI)m/e698[M+]1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.26～5.20(m,2H),5.10(t,1H),3.87～3.84(m,1H),3.60～3.56(m,2H),2.27(d,1H),1.08,1.07,1.03,0.76(each s,3H),0.94(d,3H,J=5.84Hz),0.87(d,3H,J=5.4Hz)(6)R6-R7=-(CH2)5-除用实施例4(6)制得的化合物5代替实施例4(1)中的化合物5之外，采用与实施例5(1)相同的方法(收率34％)。
Mass(EI)m/e710[M+],667,596,567,522,5211H NMR(400MHz,CDCl3)δ0.75,0.95,1.03(each s,3H),0.87(d,3H,J=5.86Hz),1.09(d,3H,J=3.9Hz),2.10(d,1H,J=4.40Hz),3.35(d,1H,J=9.77Hz),3.48,3.52(ABq,2H,J=11.24Hz),3.58(m,2H),3.8(m,1H),5.21,5.24(dd,2H,J=5.86Hz),5.26(t,1H)实施例6制备3,23-O-异亚丙基-2-O-[(甲硫基)硫羰基]积雪草酸甲酯(7)将氢化钠(处于矿物油中的60％分散体，18.3mg,0.46mmol)、咪唑(2mg)和四氢呋喃(2ml)加至3,23-异亚丙基积雪草酸甲酯(4)(50mg,0.092mmol)中，并且将所得混合物搅拌30分钟。将二硫化碳(0.2ml，过量)加入其中并回流2小时。加入碘甲烷(0.1ml,过量)并再次于回流条件下加热1小时。反应混合物用水处理并在减压条件下除去溶剂。在提取、洗涤和干燥后，将残余物通过柱色谱(己烷∶乙酸乙酯=10∶1)纯化得到56mg白色固体(收率96％)。IR(neat):1723,1233,1057cm-11H NMR(CDCl3)δ5.78(1H,m),5.24(1H,bt),3.80(1H,d,J=10Hz),3.60(3H,s),3.54,3.58(2H,dd,J=7.2Hz),2.51(3H,s),2.23(1H,d,J=11.2Hz),0.94(3H,d,J=5.2Hz),0.84(3H,d,J=6Hz),0.73,1.09,1.11,1.14,1.41,1.45(each 3H,s).实施例72-脱氧-3,23-O-异亚丙基积雪草酸甲酯(8)的制备将催化量的AIBN和苯(10ml)加入到上述黄原酸酯化合物(7)(202mg,0.32mmol)中。加入氢化三丁基锡(0.26ml,0.96mmol)并将生成物在回流条件下加热并搅拌1.5小时。将所得混合物在减压条件下浓缩并除去溶剂。所得残余物通过柱色谱(己烷∶乙酸乙酯=10∶1)精制得到168mg白色固体(收率100％)。该产物用己烷重结晶生成针状结晶。
MS(EI):527(M++1),512,407,262,203,133.
1H NMR(CDCl3)δ5.25(1H,bt),3.60(3H,s),3.52(1H,t),3.44,3.54(2H,dd,J=10Hz),2.23(1H,dJ=11.2Hz),0.94(3H,d,J=5.6Hz),0.86(3H,d,J=6.4Hz),0.73,0.97,1.07,1.09,1.42,1.45(each 3H,s)实施例8:2-脱氧积雪草酸(9)的制备将四氢呋喃(10ml)和1N盐酸溶液(1ml)加入到所得化合物(8)(460mg,0.87mmol)中并在室温下搅拌5小时。减压下蒸馏除去全部溶剂。所得残余物通过柱色谱(己烷∶乙酸乙酯=3∶2)精制得到402mg白色固体(收率95％)。所得粗产物用乙酸乙酯重结晶得到针状结晶。IR(均相)3400,1724cm-1MS(EI):486(M+),426,262,203,133施例9:2-脱氧积雪草酸(10)的制备将LiI-3H2O(450mg,2.39mmol)和2,4,6-三甲吡啶(colidine)(5ml)加至2-脱氧积雪草酸甲酯(9)(38mg,0.78mmol)中并在回流条件下加热10小时。用铝箔将反应烧瓶覆盖起来以阻断回流过程中的光线。在减压条件下浓缩所得溶液除去可力丁。所得残余物通过柱色谱(二氯甲烷∶甲醇=20∶1)纯化得到浅黄色固体(收率99％)。所得产物用甲醇重结晶得到280mg针状结晶(收率76％)。IR(KBr):3436,1693cm-1MS(EI):472(M+),426,248,203,1331H NMR(CDCl3+pyridine-d5)δ5.21(1H,bt,J=2.8Hz,3.6Hz),3.60(1H,t,J=7.2Hz,8.2Hz),3.36,3.70(2H,dd,J=10.0Hz),2.21(1H,d,J=11.2Hz).实施例10:2-脱氧-3,23-O-异亚丙基积雪草酸(11)的制备除用化合物10代替积雪草酸和羟基积雪草酸的混合物之外，采用与实施例2相同的方法(收率59.9％)。IR(neat)2928,1697cm-11H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.25(d,1H),3.52(t,1H),2.17(d,1H)1.44,1.40,1.10,1.04,0.98,0.78(each s,3H),0.95(d,3H,J=6.4Hz),0.87(d,3H,J=6.4Hz)实施例11:2-脱氧-3,23-O-异亚丙基积雪草酸辛氧基甲酯(12,R5=辛氧基甲基)的制备除用化合物11代替实施例5(1)中的化合物5之外，采用与实施例5(1)相同的方法(收率53.9％)。
IR(neat)2929,1733cm-1Mass(EI)m/e654[M+]
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ5.17(t,1H),5.14,5.12(ABq,2H,J=6.02Hz),3.49～3.48(m,2H),3.46,3.34(ABq,2H,J=6.17Hz),2.15(d,1H),1.35,1.32,1.01,0.96,0.67(each s,3H),0.87(d,3H,J=7.04Hz),实施例12:2-脱氧-3,23-O-异亚丙基积雪草酸乙氧基甲酯(12,R5=乙氧基甲基)除用化合物11代替实施例5(1)中的化合物5以及用氯甲基乙基醚代替氯甲基辛基醚之外，采用与实施例5(1)相同的方法(收率46％)。
IR(neat)2929,1733cm-1Mass(EI)n/e570[M+]1H NMR(500MHz,CDCl3)δ5.16(t,1H),5.16(s,2H),3.60,3.58(ABq,2H,J=1.36Hz),3.45～3.35(m.3H),2.15(d,1H),1.45,1.38,1.34,1.04,0.98,0.70(each s,3H),0.88(d,3H,J=6.32Hz),0.79(d,3H,J=2.24Hz)实施例13:2-脱氧-3,23-O-异亚丙基积雪草酸四氢吡喃基酯(12,R5=2-四氢吡喃基)化合物11(133mg,0.26mmol)和对甲苯磺酸吡啶鎓(催化量)溶解在无水二氯甲烷中。将二氢吡喃(0.07ml)滴加其中并在室温下搅拌40小时。将生成物中和并在减压条件下除去溶剂。在提取、洗涤和干燥后，所得残余物通过柱色谱(己烷∶乙酸乙酯=8∶1)纯化得到73mg化合物(12,R5=2-四氢吡喃基)(收率47.2％)。
IR(neat)2945,1733cm-11H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.96(t,1/2H),5.92(t,1/2H),5.28(t,1/2H),5.26(t,1/2H),3.88(t,1H),3.67(t,1H),3.52(t,2H),3.46(t,2H),1.45,1.42,1.11,1.05,
0.96(each s,3H),0.87(d,3H,J=6.4Hz)实施例14:2-O-辛氧基甲基-3,23-O-异亚丙基积雪草酸甲酯(13)的制备除用化合物4代替实施例5(1)中的化合物5之外，采用与实施例5(1)相同的方法。
IR(neat)2927,1728cm-1Mass(EI)m/e684[M+]1H NMR(500MHz,CDCl3)δ5.18(t,1H),4.73,4.62(ABq,2H,J=6.72Hz),3.70～3,65(m,1H),3.53(s,3H),3.35(d,1H,J=9.76Hz),1.36,1.33,1.02,1.01,0.96,0.66(each s,3H),0.87(d,3H,J=6.18Hz),0.79(d,3H,J=6.46Hz)实施例15:3,23-O-异亚丙基积雪草酸甲氧基甲酯(14,R5=甲氧基甲基)的制备除用化合物3代替实施例5(1)中的化合物5以及用氯甲基乙基醚代替氯甲基辛基醚之外，采用与实施例5(1)相同的方法(收率19％)。熔点104-112℃1H NMR(300MHz,CDCl3):δ0.77,1.04,1.08,1.11,1.45,1.46(each s,3H),0.87(d,3H,J=6.3Hz),0.96(d,3H,J=5.7Hz),2.27(d,1H,J=11.1Hz),3.32(d,1H,J=9.6Hz),3.45(s,3H),3.47(d,1H,9.6Hz),3.55(d,1H,9Hz),3.79(m,1H),5.17(d,1H,6Hz),5.20(d,2H,J=6Hz),5.28(t,1H,J=3.5Hz)IR(KBr)cm-13500,2950,1740,1450,1380,1065,925,860[α]o23=+10.4°(c=0.2,CHCl3)实施例16:3,23-O-异亚丙基积雪草酸乙氧基甲酯(14,R5=乙氧基甲基)的制备除用化合物3代替实施例5(1)中的化合物5以及用氯甲基乙基醚代替氯甲基辛基醚之外，采用与实施例5(1)相同的方法(收率46％)。IR(neat):3468,1734cm-1MS(EI)m/z:586(M+)1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.27(t,1H),5.23(s,2H),3.74-3.82(m,1H),3.66(q,2H,J=7.6Hz),3.53,3.44(ABq,2H),3.32(d,1H,J=9.6Hz),2.25(d,1H),1.46,1.44,1.10(ABq,2H),1.07,1.03,0.76(each s,3H),1.22(t,3H,J=6.8Hz),0.95(d,3H,J=5.6Hz),0.86(d,3H,J=6.4Hz)实施例17:3,23-O-异亚丙基积雪草酸甲氧基乙氧基甲酯(14,R5=甲氧基乙氧基甲基)除用化合物3代替实施例5(1)中的化合物5以及用甲氧基乙氧基甲基氯代替氯甲基辛基醚之外，采用与实施例5(1)相同的方法(收率25％)。熔点76-79℃1H NMR(300MHz,CDCl3):δ0.77,1.04,1.08,1.11,1.45,1.46(each s,3H),0.86(d,6.3Hz,J=3Hz),0.96(d,3H,J=5.7Hz)2.2-0.9(m,21H),2.26(d,1H,J=10.2Hz),3.32(d,1H,J=9.6Hz)3.39(s,3H),3.47(d,J=9.0Hz),3.52(d,1H,J=9.0Hz),3.55(t,2H,J=5.1Hz),3.77(m,1H),3.77(t,2H,J=5.1Hz),5.26(t,1H,J=3.6H2),5.28(s,2H)IR(KBr)cm-13500,2950,1725,1450,1380,1070,940,860[α]o24=+38.7°(c=0.1,CHCl3)实施例18:2-O-乙酰基-3,23-O-异亚丙基积雪草酸甲氧基甲酯(15,R5=甲氧基甲基)的制备将所得化合物(14)(R5=甲氧基甲基,139mg,0.24mmol)溶解在吡啶中并搅拌。向其中加入乙酸酐(0.04ml,0.38mmol)且搅拌2天。将生成物减压浓缩、洗涤、干燥并通过柱色谱(二氯甲烷∶甲醇=30∶1)纯化，得到75mg白色固体(收率52％)。熔点110-115℃1H NMR(300MHz,CDCl3):δ0.77,1.09,1.11,1.12,1.41,1.43,2.01(each s,3H),0.86(d,3H,J=6.3Hz),0.95(d,3H,J=6Hz),2.27(d,1H,J=10.8Hz),3.45(s,3H),3.50(d,1H,J=9.6Hz),3.52(d,1H,J=9.6Hz),3.56(d,3H,J=9Hz),5.0(m,1H),5.17(d,1H,J=6Hz),5.20(d,1H.J=6Hz),5.27(t,1H,J=3.5Hz)IR(KBr)cm-12950,2740,1450,1240,1080,1025,950,800[α]o24=+43.6°(c=0.1,CHCl3)实施例19:2-O-乙酰基-3,23-O-异亚丙基积雪草酸乙氧基甲酯(15,R5=乙氧基甲基)的制备除用化合物14(R5=乙氧基甲基)代替实施例18中所用的化合物14(R5=甲氧基甲基)外，采用与实施例18相同的方法(收率91％)熔点136-137℃1H NMR(300MHz,CDCl3):δ0.85(d,3H,J=6.1Hz),0.95(d,3H,J=5.7Hz),1.01,1.06,1.08,1.41,1.43,2.01(each s,3H),0.9-2.2(m,20H),1.21(t,7.3Hz),2.26(d,1H,11.1Hz),3.48(d,1H,J=9Hz),3.53(d,1H,J=9Hz),3.54(d,1H,J=10.7Hz),3.66(q,2H,J=7.3Hz),5.00(dt,1H,4.3,10.7Hz),5.23(s,2H),5.26(t,1H,J=4.2Hz)[α]o24=-0.66°(c=0.34,CCl4)实施例20:2-O-乙氧基甲基-3,23-O-异亚丙基积雪草酸乙氧基甲酯(16)的制备除用化合物3代替实施例5(1)中所得化合物5并用氯甲基乙基醚代替氯甲基辛基醚外，采用与实施例5(1)相同的方法(收率19％)熔点68-70℃1H NMR(300MHz,CDCl3):δ0.86(d,3H,J=6.3Hz),0.95(d,3H,J=5.7Hz),0.80,1.05,1.10,1.41,1.51(each s,3H),0.9-2.2(m,20H),1.22(t,3H,J=7.2Hz),2.26(d,1H,J=11.1Hz),3.35(d,1H,J=9Hz),3.39(d,1H,J=9Hz),3.46(d,1H,J=9.6Hz),3.60(q,2H,J=7.2Hz),3.76(q,2H,J=7.2Hz),3.80(dt,1H,4.2,9.6Hz),4.67(s,2H),5.24(s,2H),5.27(t,1H,J=3.6Hz)IR(KBr)cm-12950,1715,1450,1380,1020,925,860[α]o24=+33.1°(c=0.1,CHCl3)实施例21:3,23-O-二乙酰基积雪草酸苄氧基甲酯(17)的制备除用化合物3代替实施例5(1)中所得化合物5并用氯甲基苄基醚代替氯甲基辛基醚外，采用与实施例5(1)相同的方法并随后通过乙酰化作用进行合成(收率45％)1H NMR(300MHz,CDCl3):δ0.75,0.85,0.99,1.10,2.04,2.09(each s,3H),0.89(d,3H,J=6.3Hz),0.9-2.2(m,21H),2.27(d,1H,J=12.9Hz),3.57(d,J=11.7Hz),3.83(d,J=11.7Hz),3.90(dt,1H,3.9,10.2Hz),4.68(s,2H),5.04(d,1H,J=10.2Hz),5.28(t,1H,J=3.6Hz),5.32(s,3H),7.34(s,5H)IR(neat)cm-12950,2740,1450,1380,1065,925,860,800[α]o25=+25.25°(c=0.1,CHCl3)实施例22:2-O-甲磺酰基-3,23-O-异亚丙基积雪草酸甲酯(18)的制备将3,23-O-异亚丙基积雪草酸甲酯(4)(354.7mg,0.65mmol)溶解在二氯甲烷(15ml)中。向其中加入三乙胺(82.4mg,0.72mmol)和甲磺酰氯(99.2mg,0.98mmol)并在0℃和氮气氛的条件下搅拌3小时。反应完毕后，除去溶剂。在提取、洗涤和干燥后，将残余物通过柱色谱(己烷∶乙酸乙酯=2∶1)纯化，得到380mg纯的化合物(18)，该化合物为白色固体(收率93％)。1H NMR(CDCl3)δ5.24(1H,m),4.69-4.62(1H,m),3.60(3H,s),3.57(1H,d,J=10.5Hz),3.53(1H,d,J=10.5Hz),3.49(1H,d,J=10.5Hz),3.01(3H,s),2.26-2.20(1H,m),2.23(1H,bs),1.44(3H,s),1.40(3H,s),1.11(3H,s),1.09(3H,s),1.07(3H,s),0.94(3H,d,J=6.0Hz),0.83(3H,d,J=7.0Hz),0.72(3H,s)实施例23:2-O-甲磺酰基积雪草酸甲酯(19)的制备将所得化合物(18)(1.2g,1.92mmol)溶解在甲醇(30ml)中。加入对甲苯磺酸(480mg,2.52mmol)并在氮气氛的条件下回流10分钟。将反应物中和、提取、洗涤、干燥并用柱色谱(己烷∶乙酸乙酯=1∶1)纯化，得到1.06g的纯化合物(19)，该化合物为无色油状物(收率94％)。1H NMR(CDCl3)δ5.24(1H,m),4.77-4.74(1H,m),3.69(1H,d,J=10.5Hz),3.61(3H,s),3.44(1H,d,J=10.5Hz),3.70(1H,bs),3.10(3H,s),1.08(3H,s),1.07(3H,s),0.95(3H,s),0.94(3H,d,J=5.1Hz),0.85(3H,d,J=6.5Hz),0.74(3H,s)实施例24:2,3-环氧积雪草酸甲酯(20)的制备将所得化合物(19)(2.78g,4.77mmol)溶解在甲醇(60ml)中。向其中加入碳酸钾(1.32g,9.53mmol)并在室温和氮气氛下搅拌3天。反应完毕后，除去溶剂。在提取、洗涤和干燥后，将残余物用柱色谱(己烷∶乙酸乙酯=2∶1)纯化得到2.05g的纯化合物(20)，该化合物为白色固体(收率89％)。熔点230-234℃IR(KBr):3400,2920,1730,1430,1450,1200,1040cm-11H NMR(CDCl3)δ5.27(1H,m),3.60(3H,s),3.56(1H,m),3.31(1H,m),3.27(1H,m),3.11(1H,d,J=4.0Hz),1.12(3H,s),1.6(3H,s),0.96(3H,s),0.94(3H,d,J=5.1Hz),0.86(3H,d,J=6.4Hz),0.74(3H,s)实施例25:2β-碘-2-脱氧积雪草酸甲酯(21)的制备将化合物20(24.5mg,0.05mmol)、LiI·3H2O(98mg,10.3当量)溶解在THF(5ml)中。在搅拌的同时加入AcOH(0.5ml)并使生成物在氮气氛的条件下反应1天。该生成物用水稀释、用乙酸乙酯提取、用盐水和10％Na2S2O3洗涤、干燥并通过柱色谱(己烷∶乙酸乙酯=3∶1)纯化，得到16.5mg无色固体(收率53.3％)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ0.74,0.85,1.02,1.08(each s,3H),0.86(d,3H,J=6.3Hz),0.94(d,3H,J=5.13Hz),2.24(d,1H,J=11.2Hz),3.42,3.72(ABq,2H,J=12.7Hz),3.60(s,3H),4.57(dt,1H),5.25(t,1H)Mass(EI)m/e612[M+],552,467,407,349实施例26:3,23-O亚甲基-2-氧代积雪草酸(22)的制备将化合物22(1.1g,2.2mmol)和重铬酸吡啶鎓(0.83g,2.2mmol)溶解在无水二氯甲烷中。向其中加入乙酸酐(0.62ml)并在回流条件下加热2小时。将生成物用乙酸乙酯稀释、过滤并通过柱色谱(二氯甲烷∶甲醇=20∶1)纯化,得到化合物23(0.32g，收率29.2％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.75,1.02,1.07,1.13(each s,3H),0.95(d,3H,J=5.9Hz),0.85(d,3H,J=6.3Hz),2.11-2.21(m,2H),2.39(d,1H,J=12.7Hz),3.42,3.84(ABq,2H,J=10.4Hz),4.10(s,1H),4.69,5.20(ABq,2H,J=5.9Hz),5.23(t,1H)实施例27:3,23-O-亚甲基-2-氧代积雪草酸辛氧基甲酯(23)的制备除用化合物22代替实施例5(1)所用化合物5之外，采用与实施例5(1)相同的方法(收率44％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.78,1.02,1.10,1.14(each s,3H),0.87(d,3H,J=7.3Hz),0.95(d,3H,J=5.9Hz),2.13,2.40(ABq,2H,J=12.7Hz),2.27(d,1H,J=11.5Hz),3.42,3.84(ABq,2H,J=10.1Hz),3.58(dt,2H,J=5.6Hz),4.10(s,1H),4.69,5.24(ABq,2H,J=6.1Hz),5.20-5.25(m,2H),5.25(t,1H)试验例1本发明所述化合物对创伤的治疗作用制剂软膏剂将本发明所述积雪草酸衍生物(200mg)精确称重并置于20ml注射器内。准确称量丙二醇(6g)、硬脂酸乙二醇酯(3g)和白凡士林(1g)并加入其中。使注射器中的内容物在80℃的水浴中完全熔融并搅拌约5分钟使活性组分均匀分散在上述三种载体中。另外，将加热至80℃的纯水置于另一个注射器。将上述两个注射器用三通连接管相连，自两端注射并反复约20次以使内容物均化。将均匀的内容物放置在容器内并在室温下缓慢固化。
试验方法为了测定新合成的积雪草酸衍生物、自天然物分离出的羟基积雪草酸和积雪草皂苷的治疗作用，在大鼠上制造实验创伤并观察结果。在若干创伤治疗效果的测定方法中，所述测定方法是基于通过组织繁殖(例如肉芽)治疗因坏死所造成的创伤或损害的逻辑，牵引韧力的测定是基于牵引韧力将稳定增加直至恢复部位再次撕开的事实。在测定实验中，拉扯创伤两侧，以测定在创伤部位撕开时牵引韧力所达到的最高点。已知，牵引韧力的测量结果反映出被切伤口在恢复质量和速度上均很良好。
在表1中，合成积雪草酸衍生物以及市售积雪草总苷软膏中的主组分一积雪草滴定提取物(TECA)在治疗创伤上的效果均通过牵引韧力试验加以验证和比较。表1．新的积雪草皂苷衍生物对创伤的治疗作用
从上述试验例可看出，本发明所述积雪草酸衍生物显示出优异的创伤治疗效果。
权利要求
1．一种通式Ⅰ所示的积雪草酸衍生物或其可药用的盐或酯
其中，R1表示氢、可由乙酰基或苄基保护的羟基、甲磺酰氧基、甲硫基硫代羰氧基、卤素、乙氧基甲氧基或辛氧基甲氧基；R2表示氢或羟基；R1和R2可以形成一个氧代基；R3表示氢或可被乙酰基或苯甲酰基保护的羟基或氢；R2和R3可以形成环氧基；R4表示可被乙酰基或苯甲酰基保护的羟甲基；R3和R4可以形成-OC(R6)(R7)OCH2-，其中，R6是氢、含有1至4个碳原子的低级烷基或苯基，R7表示氢、含有1至4个碳原子的低级烷基或苯基，并且R6和R7可以形成-(CH2)5-；R5表示氢、含有1至4个碳原子的低级烷基、含有1至4个碳原子的烷氧基甲基、辛氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基、苄氧基甲基或2-四氢吡喃基。
2．一种治疗创伤的药物，该方法含有权利要求1所述的通式1的积雪草酸衍生物或其可药用的盐或酯。
全文摘要
本发明涉及式(1)所示的积雪草酸衍生物以及用于治疗创伤的含有该衍生物作为活性组分的药物。
文档编号A61K31/357GK1238756SQ97180161
公开日1999年12月15日 申请日期1997年11月27日 优先权日1996年11月27日
发明者朱尚涉, 朴亨根, 金熙斗, 郑英薰, 朴恩希, 金洪杓, 徐城基, 南泰圭, 韩德熙, 刘知炯, 林斗然, 金廷勋, 金姬万, 李美卿, 林景花, 林珉廷, 金到河, 金昭延, 沈必钟, 丁珠银, 犯姬英 申请人:东国制药株式会社