专利名称：超声浓差酸碱法生产盐酸阿霉素脂质体注射剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种生产盐酸阿霉素脂质体注射剂的方法及其产品。
盐酸阿霉素是目前临床常用的抗肿瘤药物之一，自70年代进入临床使用以来，经过20多年临床应用，证明其抗肿瘤疗效高，抗肿瘤范围广。对急性白血瘤、多发性骨髓瘤、乳腺癌、小细胞肺癌、恶性淋巴病、消化道癌(胃癌、食道癌等)、卵巢癌、睾丸肿瘤、子宫颈癌、膀胱癌、神经母细胞瘤、骨及软组织肉瘤等二十多种肿瘤有良好的疗效。它已成为世界卫生组织规定的十四个基本药品之一。但盐酸阿霉素对人体毒副作用较大，表现为心脏毒性与骨髓抑制，还有部分消化道反应。临床常规剂量仅能保持9个月，另一方面许多癌症逐渐发展为对盐酸阿霉素耐药，使其临床应用受到限制，为克服上述缺点，国内外对盐酸阿霉素采取了两种改进途径。其中有一种途径是，将盐酸阿霉素包入脂质体中，使其缓慢释放，降低毒副作用，提高治疗效果。即利用脂质体对细胞的亲和作用，改变盐酸阿霉素的给药方式及其在各脏器的分布，降低其心脏毒性及骨髓抑制作用。该方法不改变盐酸阿霉素的结构即可提高疗效，降低毒性且成本也较为低廉。而脂质体生产技术已日渐成熟，注射用大豆磷脂已获得卫生部批准文号，用其制成的脂肪乳剂已有临床应用多年，盐酸阿霉素的生产也已实现国产化，这就使得研制生产盐酸阿霉素脂质体注射剂成为可能。八十年代开始，美、英、日等国即已开始了盐酸阿霉素脂质体的研究工作，至90年代已研制出多种制备方法，有薄膜分散法、注入法、乳化法、PH梯度法、逆相蒸发法及冷冻干燥法等十多种。但生产规模无法扩大，灭菌及除热原困难(脂质体不能加热)，生产出的脂质体稳定性差，上述方法不能克服上述所有不足，因此上述方法仅适用于科研而无法规模生产。
本发明的目的是提供一种超声浓差酸碱法生产盐酸阿霉素脂质体注射剂的方法及其制品。使用该方法制得的盐酸阿霉素脂质体包裹率高，脂质体粒径均匀，稳定性好，也方便于灭菌及除热原，该方法可以规模生产。
为实现上述目的，本发明采取以下技术方案这种超声浓差酸碱法生产盐酸阿霉素脂质体注射剂的方法包括下述步骤(1)配制缓冲溶液，调节其PH值为3.5-5.5，(2)制备大单层空白脂质体先分别配制注射用大豆磷脂氯仿液和胆固醇氯仿液，并将上述两种液体混合，其中注射用大豆磷脂与胆固醇的混合重量比为300-600∶50-150，然后将上述混合液体真空抽干成膜，再将该膜浸泡步骤(1)中得到的缓冲溶液中，之后，用水浴式超声机使该膜成为乳状液，然后将该乳状液经高温蒸汽灭菌后再冷却至室温，最后再用水浴式超声机使之还原为乳状液，(3)制备灭菌小单层脂质体将上述乳状液放入超声瓶中进行超声，超声后将其置于冰浴中得到小单层空白脂质体，再调节其PH值为7-8，再用层析柱除去部分大粒径空白脂质体和其它杂质，即得到纯化的小单层空白脂质体，(4)制备盐酸阿霉素脂质体按盐酸阿霉素原料与前述步骤中所用的注射用大豆磷脂、胆固醇的重量份数比为50-60∶300-600∶50-150进行备料，然后将其放入35-40℃水浴中进行温热，温热后，加入步骤(3)中得到的纯化的小单层空白脂质体，进行振荡后，再在水浴式超声机上超声，使小单层空白脂质体打开，并使盐酸阿霉素进入小单层空白脂质体中，冷却至室温后，经柱层析除去游离的盐酸阿霉素、热原及其它杂质，即得到盐酸阿霉素脂质体成品。
本方法是利用盐酸阿霉素在酸性条件易溶而在碱性条件难溶的性质，首先制备出酸性条件下的空白脂质体，再将空白脂质体外部PH值调至碱性，加入盐酸阿霉素后，利用超声波打开脂质体膜，使盐酸阿霉素进入脂质体内。这样制得的盐酸阿霉素脂质体包裹率高(大于92％)，且由于预先制备空白脂质体，可使脂质体粒径均匀，稳定性好，也方便于灭菌及除热原，因此已具备了规模生产的条件。
用本发明的方法所制成的盐酸阿霉素脂质体注射剂，该盐酸阿霉素脂质体是由脂质体包裹盐酸阿霉素所组成，其中，盐酸阿霉素与脂质体中的注射用大豆磷脂、胆固醇的重量份数比为50-60∶300-600∶50-150。在该盐酸阿霉素脂质体的脂质体中仅有注射用大豆磷脂与胆固醇两种。其中注射用大豆磷脂是组成脂质体的主要成份，它是构成脂质体双分子层的基础物质，注射用大豆磷脂的组成为卵磷脂与少量脑磷脂的混合物，它在血浆中起乳化剂的作用，易被机体代谢分解，因此成为无毒无害的药物载体。胆固醇在处方中仅占少数，它与注射用大豆磷脂是共同构成脂质体的基础物质，它具有调节膜的流动性的作用。对脂质体的相变及稳定性有重要影响，若含量过高，则膜的成形性差无法制得均匀稳定的空白脂质体，若含量过低则膜很易破裂使得盐酸阿霉素泄漏，造成盐酸阿霉素脂质体不稳定。
在本发明的方法中，该方法还包括下述步骤将得到的盐酸阿霉素脂质体成品过0.22um微孔膜除菌封装。
在本发明的方法中，在制备大单层空白脂质体的步骤中，分别按450mg注射用大豆磷脂溶于15-20ml氯仿、80mg胆固醇溶于15-20ml氯仿的配比，配制注射用大豆磷脂氯仿液、胆固醇氯仿液。
在本发明的方法中，在配制缓冲溶液步骤中，是采用NaH2PO4溶液和Na2HPO4溶液混合均匀后，再加入固体NaCl溶解并混合均匀，再用HCl调节PH值。其中，所用的NaH2PO4的浓度为0.7％-0.9％(重量百分比)，Na2HPO4溶液的浓度为0.8％-1％(重量百分比)，HCl溶液的浓度为0.4-0.6mol.l-1，并按850-950ml的NaH2PO4溶液，90-110ml的Na2HPO4溶液，4.6-4.9克的NaCl的配比进行混合。在制备大单层空白脂质体的步骤中，所用的缓冲液的体积为所用的氯仿的1/2。用缓冲溶液浸泡该膜的时间为5-8分钟。
在本发明的方法中，在制备大单层空白脂质体的步骤中，其中用水溶式超声机使该膜成为乳状液的超声时间为5-7分钟。蒸汽灭菌的蒸汽温度为120℃-125℃，蒸汽灭菌的时间为20-25分钟。在水浴式超声机中的超声时间为20-25分钟。
在本发明的方法中，在制备灭菌小单层脂质体的步骤中，乳状液在超声瓶中的超声时间为5-10分钟。并采用0.4-0.6mol.l-1NaOH调节PH值。
在本发明的方法中，在制备盐酸阿霉素脂质体的步骤中，其中盐酸阿霉素脂质体在35-40℃水浴中的温热时间为3-5分钟，加入纯化的小单层空白脂质体后的振荡时间为2-3分钟。用水浴式超声机使空白脂质打开的超声时间为3-4分钟。
下面用实施例结合附图作进一步说明。
图1为超声浓差酸碱法生产盐酸阿霉素脂质体注射剂的工艺流程图。
实施例。如图1所示。
(1)PH4.5的PBS缓冲溶液的配制配制0.8％NaH2PO4溶液和0.9437％Na2HPO4溶液，然后按0.8％NaH2PO4900ml与0.9437％ Na2HPO4100ml混和均匀，加入NaCl4.79克溶解并混合均匀。再用0.5mol.l-1HCl溶液调节其PH值为4.5。
(2)大单层空白脂质体的制备与灭菌取注射用大豆磷脂450mg，胆固醇80mg分别溶于15-20ml氯仿中，置于圆底烧瓶中，在旋转蒸发仪上真空抽干成膜。加入PH4.5的PBS缓冲液15ml浸泡5分钟后在水浴式超声机上超声5-7分钟使膜完全洗脱并成为乳状液。将乳状液装入灭菌瓶中，120℃蒸汽灭菌20分钟后冷却至室温，在水浴式超声机中超声20分钟使之还原为乳状液。
(3)灭菌小单层脂质体的制备与纯化将制好的乳状液放入超声瓶中超声8-9分钟，其中探头超声功率100W，探头直径8mm。超声停，置于冰浴中，得到小单层空白脂质体，用0.5mol.l-1NaOH调节其PH值为7.2，再经sepedex G-25层析柱以除去部分大粒径空白脂质体和其它杂质，即得到纯化的小单层空白脂质体。
(4)盐酸阿霉素脂质体的制备与纯化准确称取盐酸阿霉素原料药56mg于三角烧瓶中，将其放入35-40℃水浴中温热3分钟后，加入纯化的小单层空白脂质体，振荡2-3分钟后，在水浴式超声机上超声3-4分钟，使空白脂质体打开，盐酸阿霉素进入空白脂质体中。冷却至室温后，经sephadex G-25柱层析除去游离的盐酸阿霉素、热原及其它杂质，即得到盐酸阿霉素脂质体成品，过0.22um微孔膜除菌封装。
采用本发明的工艺所制成的成品经检测盐酸阿霉素的包裹率为92-93％，回收率90％。磷脂及胆固醇的回收率为84-86％。
权利要求
1.一种超声浓差酸碱法生产盐酸阿霉素脂质体注射剂的方法，其特征在于该方法包括下述步骤(1)配制缓冲溶液，调节其PH值为3.5-5.5，(2)制备大单层空白脂质体先分别配制注射用大豆磷脂氯仿液和胆固醇氯仿液，并将上述两种液体混合，其中注射用大豆磷脂与胆固醇的混合重量比为300-600∶50-150，然后将上述混合液体真空抽干成膜，再将该膜浸泡步骤(1)中得到的缓冲溶液中，之后，用水浴式超声机使该膜成为乳状液，然后将该乳状液经高温蒸汽灭菌后再冷却至室温，最后再用水浴式超声机使之还原为乳状液，(3)制备灭菌小单层脂质体将上述乳状液放入超声瓶中进行超声，超声后将其置于冰浴中得到小单层空白脂质体，再调节其PH值为7-8，再用层析柱除去部分大粒径空白脂质体和其它杂质，即得到纯化的小单层空白脂质体，(4)制备盐酸阿霉素脂质体按盐酸阿霉素原料与前述步骤中所用的注射用大豆磷脂、胆固醇的重量份数比为50-60∶300-600∶50-150进行备料，然后将其放入35-40℃水浴中进行温热，温热后，加入步骤(3)中得到的纯化的小单层空白脂质体，进行振荡后，再在水浴式超声机上超声，使小单层空白脂质体打开，并使盐酸阿霉素进入小单层空白脂质体中，冷却至室温后，经柱层析除去游离的盐酸阿霉素、热原及其它杂质，即得到盐酸阿霉素脂质体成品。
2.根据权利要求1所述的超声浓差酸碱法生产盐酸阿霉素脂质体注射剂的方法，其特征在于该方法还包括下述步骤将得到的盐酸阿霉素脂质体成品过0.22um微孔膜除菌封装。
3.根据权利要求2所述的超声浓差酸碱法生产盐酸阿霉素脂质体注射剂的方法，其特征在于在制备大单层空白脂质体的步骤中，分别按450mg注射用大豆磷脂溶于15-20ml氯仿、80mg胆固醇溶于15-20ml氯仿的配比，配制注射用大豆磷脂氯仿液、胆固醇氯仿液。
4.根据权利要求3所述的超声浓差酸碱法生产盐酸阿霉素脂质体注射剂的方法，其特征在于在制备大单层空白脂质体的步骤中，所用的缓冲液的体积为所用的氯仿的1/2。
5.根据权利要求4所述的超声浓差酸碱法生产盐酸阿霉素脂质体注射剂的方法，其特征在于在制备灭菌小单层脂质体的步骤中，乳状液在超声瓶中的超声时间为5-10分钟。
6.根据权利要求5所述的超声浓差酸碱法生产盐酸阿霉素脂质体注射剂的方法，其特征在于在制备大单层空白脂质体的步骤中，其中用水溶式超声机使该膜成为乳状液的超声时间为5-7分钟。
7.根据权利要求6所述的超声浓差酸碱法生产盐酸阿霉素脂质体注射剂的方法，其特征在于在制备盐酸阿霉素脂质体的步骤中，其中用水浴式超声机使空白脂质打开的超声时间为3-4分钟。
8.用权利要求1的方法所制成的盐酸阿霉素脂质体注射剂，该盐酸阿霉素脂质体是由脂质体包裹盐酸阿霉素，其特征在于盐酸阿霉素与脂质体中的注射用大豆磷脂、胆固醇的重量份数比为50-60∶300-600∶50-150。
全文摘要
本发明公开了一种生产盐酸阿霉素脂质体注射剂的方法及其产品。该方法包括下述步骤:(1)配制缓冲溶液,pH值为3.5—5.5,(2)配制注射用大豆磷脂氯仿液和胆固醇氯仿液,经真空抽干成膜、浸泡缓冲溶液、超声、灭菌、冷却、超声为乳状液,(3)将乳状液经超声、水浴得到小单层空白脂质体,调pH值为7—8,并纯化,(4)将小单层空白脂质体经振荡、超声、使盐酸阿霉素进入小单层空白脂质体中,得到成品,该成品包裹率高、脂质体粒径均匀,稳定性好。
文档编号A61K9/127GK1270032SQ9910572
公开日2000年10月18日 申请日期1999年4月13日 优先权日1999年4月13日
发明者吴道澄 申请人:北京中卫华美医药技术开发有限公司