专利名称：一种犬瘟热弱毒高产细胞株的培养方法
技术领域：
本发明涉及毛皮动物病毒疫苗的制备方法，确切地说公开了一种犬瘟热弱毒高产细胞株的培养方法。
犬瘟热是毛皮动物的主要疾病，发病率最高，死亡率也最高；虽然有用非洲绿猴肾传代细胞(VERO)生产的犬瘟热弱毒疫苗预防动物犬瘟热发生，但效果很不理想，原因在于每毫升疫苗中的病毒含量太低，所以其免疫性差保护性低。
本发明的目的是公开一种犬瘟热弱毒高产细胞株的培养方法，提供高含量的犬瘟热弱毒疫苗。
为达到上述目的，本发明的构思是选用猫肾传代细胞株(FK81)培养犬瘟热弱毒。具体方案如下采用同步法进行接毒培养，用大方瓶将猫肾传代细胞株(FK81)消化下来，把其中的2/3细胞吸入转瓶中，并加入原方瓶培养液2～3倍的维持液，按转瓶中液体量的2％接种犬瘟热弱毒种，摇匀后进行旋转培养96小时，出现融合细胞后即可收毒，得本发明产品。
本发明的积极效果在于应用猫肾传代细胞株(FK81)来接种培养犬瘟热弱毒，大大提高了病毒的产量，每毫升中的病毒含量由原来的低于106，提高到了108以上，比原来多了数十倍。在组织培养细胞上测定TCID50，即半数细胞培养物感染量法测得的结果表明由原来的TCID50效价为104，提高到了105.625，比原来提高了42倍多。采用37℃培养病毒与毛皮动物的体温接近，保证了犬瘟热弱毒不受温度变化的影响而保持其免疫性，并且提高了其保护率，保护率达7/7。本发明大大缩短了犬瘟热弱毒疫苗的培养周期，加快了疫苗的生产进程，原来用非洲绿猴肾传代细胞和鸡胚原代细胞培养该疫苗的5～7天一周期缩短为4天，经裸鼠进行细胞试验，未发现有致突变、致畸和致癌的任何毒性。
下面结合实施例进一步说明本发明实施例1首先，将猫肾传代细胞株(FK81)100毫升瓶置于37℃温箱中长成单层，倾弃其中的培养液，用消化液洗三次后，再加入1毫升的消化液，在室温下消化3～5分钟，单层细胞脱落后，加入原培养液3倍的生长液吸打均匀后，按1∶3的比例进行传代，再置于37℃恒温箱中生长增殖，得下一代传代细胞。取4个2000毫升大方瓶猫肾传代细胞(FK81)将其消化下来，把每瓶中的2/3的细胞吸入转瓶中，再往转瓶中加入1500毫升维持液，按转瓶中液体的2％接犬瘟热弱毒种，摇均后置于转瓶机上进行旋转培养96小时，该接毒细胞就有60～70％出现细胞病变(CPE)，便得本发明产品。
权利要求
1.一种犬瘟热弱毒高产细胞株的培养方法，其特征在于用猫肾传代细胞株(FK81)培养犬瘟热弱毒。
2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于采用同步法进行接毒培养，用大方瓶将猫肾传代细胞株(FK81)消化下来，把其中的2/3细胞吸入转瓶中，并加入原方瓶培养液2～3倍的维持液，按转瓶中液体量的2％接种犬瘟热弱毒种，摇匀后进行旋转培养96小时，出现融合细胞后即可收毒。
全文摘要
本发明公开一种犬瘟热弱毒高产细胞株的培养方法,是用猫肾传代细胞株(FK
文档编号A61K39/155GK1232704SQ9911289
公开日1999年10月27日 申请日期1999年5月4日 优先权日1999年5月4日
发明者杨盛华 申请人:杨盛华