专利名称：紫杉醇抗肿瘤药物的新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及紫杉醇抗肿瘤药物的用途，特别涉及紫杉醇抗肿瘤药物在治疗原发性肝细胞肝癌中的新用途。
紫杉醇(Taxol)是从紫杉树皮中分离提纯的天然产物，是一种作用于微管的具有独特作用机制的新的抗肿瘤药物。1983-1987年完成Ⅰ期临床试验，1987-1989年完成Ⅱ期临床试验。目前已成为治疗卵巢癌和乳腺癌的一线药物。美国一个妇瘤研究部门(GOG)对394名卵巢癌患者的Ⅲ期临床试验表明，紫杉醇合用顺铂，比环磷酰胺合用顺铂的缓解率更高(分别为77％和62％)。因此，GOG把紫杉醇加顺铂作为治疗晚期卵巢癌的标准方案。美国另一组Ⅱ期临床试验表明，对未经治疗的晚期卵巢癌患者，紫杉醇单独应用即有约60％的缓解率(Ann Med．1995，27127-130)。还有报告称未经治疗的或对阿霉素无效的转移性乳癌应用紫杉醇可取得较好疗效(缓解率分别为62％、20％-48％)，前者甚至可以完全缓解(BreastCancer Res Treat．1995，3327-37)。除卵巢癌和乳腺癌外，紫杉醇还对多种肿瘤具有较好的疗效，单独或联合用药对非小细胞肺癌、小细胞肺癌、头颈部肿瘤、急性白血病等也有较好疗效。由于在治疗卵巢癌、乳腺癌等肿瘤所取得的成功，它被誉为90年代抗癌药物的三大进展之一。一向认为肝癌细胞对化疗药物不敏感，肝癌在欧美的发病率又较低，故对紫杉醇治疗原发性肝细胞肝癌的可行性研究很少，尽管西德癌症中心已完成紫杉醇治疗肝癌的Ⅰ期临床研究，并且推荐Ⅱ期临床的剂量为2．43mg／kg(90mg／m2)，但无疗效报告(Eur J Cancer．1998，341290-1292)。我国台湾的Ⅱ期临床又报道紫杉醇在剂量为4．73mg／kg(175mg／m2)时对原发性肝细胞肝癌无显著疗效(Br J Cancer．1998，78∶34-39)。故迄今尚无任何数据支持紫杉醇可有效地用于治疗原发性肝细胞肝癌。
本发明的目的是提供一种紫杉醇抗肿瘤药物的新用途，即紫杉醇在制备治疗原发性肝细胞肝癌药物中的应用。动物实验效果极为显著，抑瘤率高达97％。
本发明人在阐明一定的理论根据和对剂量学进行了较严格论证的基础上，将紫杉醇对人肝癌异种移植模型进行治疗试验，获得满意的结果。为紫杉醇抗肿瘤药物提供一种新用途，即紫杉醇在制备治疗原发性肝细胞肝癌药物中的应用。
以SMMC-7721人肝癌细胞为实验材料，在体外观察紫杉醇对人肝癌生长的影响，并探讨其抗肝癌作用的机制。在体外，紫杉醇对SMMC-7721细胞的生长有明显抑制作用，IC50为18．96nmol／L，并有一定的浓度和时间依赖关系。普通光镜下，10nmol／L紫杉醇作用于SMMC-7721细胞24h后，细胞脱壁变圆，折光性增强，个别细胞有出泡现象，提示细胞出现周期阻滞，并有凋亡发生。48h后，细胞成碎片状，飘浮在培液中。作用48h后电镜下可见凋亡小体。细胞经碘化丙锭染色后以荧光显微镜观察，处理24h后的细胞多处于分裂期并可见部分多核细胞，处理48h可见凋亡小体。流式细胞仪分析发现10nmol／L紫杉醇作用于细胞4h后，G2／M期百分率明显增高，表明细胞被阻滞在有丝分裂期，随后出现凋亡。随着作用时间延长，G2／M期阻滞增强，凋亡细胞百分率也随之增高，凋亡的出现滞后于有丝分裂阻滞，其峰值亦滞后于细胞周期阻滞的峰值。本发明的研究表明，紫杉醇有一定的抗肝癌活性。紫杉醇体外抑制人肝癌细胞生长与其引起细胞周期阻滞、异常的有丝分裂以及细胞凋亡等有关。关于紫杉醇引起人肝癌细胞有丝分裂阻滞和诱导细胞凋亡之间的关系，这可能是经紫杉醇作用后，细胞被阻滞于有丝分裂期，激活了有丝分裂检查点，通过检查点的作用，再激活诱发凋亡的机制，从而使细胞发生凋亡。在此体外实验的基础上，本发明进行了紫杉醇的体内实验。实验动物为裸小鼠BALB／c。将其接种人原发性肝癌细胞SMMC-7721。紫杉醇以体积比为1∶1的无水乙醇-蓖麻油为溶剂溶解，再以大于其一倍体积的生理盐水按治疗剂量的要求稀释。临用前配制，稍现雾状即可。紫杉醇动物实验治疗的剂量范围是5-15mg／kg。每鼠注射量均为200μl。注射途径为腹腔注射(ip)。注射方案为按设定剂量每日一次，连续注射10天，并通过疗效曲线、肿瘤抑制率观察疗效。在一定的安全剂量范围内，肿瘤抑制的有效率高达100％，注射10天后实验组的平均瘤重仅为溶剂对照组的3％，为5-氟脲嘧啶(5-Fu)的4％；抑瘤率高达97％。显示紫杉醇对治疗恶性肿瘤肝癌具有显著的临床前的药效，见表1。
表1紫杉醇、5-Fu及对照组腹腔给药对荷SMMC-7721人体肝癌的裸小鼠的疗效比较样品剂量给药方案瘤重 抑制率mg／kg x±SD ％紫杉醇 10 ip×10qd 0．06±0．06 96．97*5-Fu 10 ip×10qd 1．26±0．46 34．38对照组 相应溶剂**ip×10qd 1．92±0．46*P＜0．001**相应溶剂是以体积比为1∶1∶10的无水乙醇-蓖麻油-生理盐水混合液紫杉醇动物实验治疗肝癌的剂量范围是5-15mg／kg，临床使用的剂量为0．42-1．25mg／kg(或15-50mg／m2)，临床使用经血管注射，在10天的治疗方案中总剂量不超过12．5mg／kg。
本发明优点紫杉醇是一种新型的抗肿瘤药物，目前被应用在卵巢癌及乳腺癌等肿瘤的化疗上，疗效甚好。关于紫杉醇对肝癌的作用，西德癌症中心对其一定剂量下的毒性进行了评价，无疗效报道；台湾的研究则认为一定剂量的紫杉醇对原发性肝细胞肝癌无效。故尚无确凿数据表明紫杉醇可以有效地治疗原发性肝细胞肝癌，而肝癌是我国最常见的、恶性程度最高的肿瘤之一，迄今临床上尚无有效的化疗手段。本发明在阐明一定的理论根据和对剂量学进行了较严格论证的基础上，突破已有研究的框框，提供了紫杉醇在治疗原发性肝细胞肝癌中的新用途。采用紫杉醇剂量为5-15mg／kg对人肝癌异种移植模型进行治疗试验，获得满意的结果。试验表明肿瘤抑制的有效率高达100％，注射10天后实验组的平均瘤重仅为溶剂对照组的3％，为5-Fu的4％；证明抑瘤率高达97％。本发明为紫杉醇治疗恶性肿瘤肝癌获得的显著的临床前的药效，表明了紫杉醇临床治疗原发性肝细胞肝癌的可行性，不但有可能用于临床以提高肝癌患者的生存率，而且，有可能修改肝癌的化疗方案，重新评估化疗，特别是紫杉醇在肝癌治疗中的地位。有可能改变晚期肝癌患者目前几乎束手无策的局面。
图1．紫杉醇，5-Fu及对照组对荷SMMC-7721人体肝癌裸小鼠的疗效曲线图。
图2．紫杉醇，5-Fu及对照组腹腔给药对荷SMMC-7721人体肝癌裸小鼠的治疗后肿瘤实体中C相应溶剂ip×10pdTa10mg／kg紫杉醇ip×10pdFu10mg／kg 5-Fuip×10pd。
本发明通过以下的实施例作进一步阐述。
实施例紫杉醇用于治疗荷原发性肝细胞肝癌的裸小鼠试验紫杉醇以1∶1(体积比)的无水乙醇-蓖麻油(Cremophor EL)为溶剂溶解，再以生理盐水稀释成所需剂量的混合液。临用前配制，稍现雾状即可。实验裸小鼠体重20g±2g，均为雌性，接种SMMC-7721细胞3×106个／只，待瘤块长至5-10mm时随机分组，每组5或10只，开始治疗。动物实验治疗的剂量高剂量组为10mg／kg、中剂量组为2mg／kg、低剂量组为0．4mg／kg，5-FU组为10mg／kg。经腹腔注射，每鼠注射量均为200μl，每日一次，连续注射10天。
观察疗效(1)疗效曲线每隔2天用游标卡尺测量体积一次，以肿瘤体积(mm3)为纵坐标，以治疗后天数为横坐标，绘出疗效曲线(见图1)。
(2)肿瘤抑制率的计算停药24小时后处死全部动物，解剖瘤块，称瘤重，按以下公式计算肿瘤抑制率肿瘤抑制率=1-(实验组瘤重／对照组瘤重)×100％试验结果高剂量组的肿瘤抑制率为96．97％、中剂量组的肿瘤抑制率为25％、低剂量组的肿瘤抑制率为29．17％，标准剂量的5-FU组的肿瘤抑制率为34．38％(见表2及图2)。
表2不同浓度的紫杉醇，5-Fu及对照组腹腔给药治疗荷原发性肝癌细胞SMMC-7721的裸小鼠的肿瘤抑制率 *P＜0．001**相应溶剂是以体积比为1∶1∶10的无水乙醇-蓖麻油-生理盐水混合液
权利要求
1.一种紫杉醇抗肿瘤药物的应用，其特征在于紫杉醇在制备治疗原发性肝细胞肝癌药物中的应用。
2.如权利要求1所述的紫杉醇抗肿瘤药物的应用，其特征在于紫杉醇治疗原发性肝细胞肝癌药物的临床使用剂量为每天0．42-1．25mg／kg或15-50mg／m2。
3.如权利要求1所述的紫杉醇抗肿瘤药物的应用，其特征在于紫杉醇治疗原发性肝细胞肝癌药物在10天治疗中的总剂量不超过12．5mg／kg。
4.如权利要求1所述的紫杉醇抗肿瘤药物的应用，其特征在于紫杉醇治疗原发性肝细胞肝癌药物是溶解于体积比为1∶1的无水乙醇∶蓖麻油的溶剂中，再以大于其一倍体积的生理盐水按剂量需要稀释。
全文摘要
一种紫杉醇抗肿瘤药物的新用途,即紫杉醇在制备治疗原发性肝细胞肝癌药物中的应用。体外研究表明,紫杉醇可以抑制人肝癌细胞生长,该抑制作用与其引起细胞周期阻滞、异常的有丝分裂以及细胞调亡等有关。在此研究基础上,将紫杉醇用于治疗荷原发性肝细胞肝癌的裸小鼠,实验治疗的剂量范围是5—15mg/kg。结果肿瘤抑制的有效率高达100%,抑瘤率高达97%。这一结果使紫杉醇治疗肝癌可能改变晚期肝癌患者目前几乎束手无策的局面。
文档编号A61K31/337GK1292263SQ9911695
公开日2001年4月25日 申请日期1999年10月11日 优先权日1999年10月11日
发明者袁金辉, 谢弘, 张茹萍, 李常法 申请人:中国科学院上海细胞生物学研究所, 上海华联制药有限公司