吡嗪酰胺在制备抑制肿瘤细胞转移和扩散的药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及吡嗪酰胺在制药领域新的用途，具体涉及吡嗪酰胺在制备抑制肿瘤细 胞转移和扩散的药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 吡嗪酰胺是类似烟酰胺，进入细胞可起杀菌作用。在pH较低的条件下，抗菌活性 较强，该品为二线抗结核药的主要成分，与其它抗结核药无交叉耐药性，主要用于经一线药 物治疗无效的病例。单用该品易产生耐药性需与其它抗结核药物联合应用。
[0003] 作用机制可能为PZA渗入含结核杆菌的巨噬细胞内，转化为吡嗪酸而发挥抗菌作 用。该品为烟酰胺的衍生物，具有抑菌或杀菌作用，取决于药物浓度和细菌敏感度。该品仅 在pH偏酸时有抗菌活性。
[0004] 现有公开文献中尚未发现吡嗪酰胺的其他药理作用。
【发明内容】
[0005] 发明目的：本发明目的在于提供一种吡嗪酰胺在制备抑制肿瘤细胞转移和扩散的 药物中的应用。
[0006] 技术方案：啦嗪酰胺在制备抑制肿瘤细胞转移和扩散的药物中的应用。
[0007] 优选地，所述肿瘤细胞为结肠癌细胞。
[0008] 优选地，其中吡嗪酰胺的浓度为0. 5?luM。
[0009] 发明人通过细胞层面的实验研宄发现，吡嗪酰胺对肿瘤细胞的转移能力有一定的 抑制作用。目前针对现有的一般服用方法为口服：每6小时按体重5?8. 75mg/kg或每8 小时按体重6. 7?11. 7mg/，最高每日3g。口服后由胃肠道迅速吸收。口服后广泛分布至 全身组织中，血脑屏障通透好，在肝、肺、脑脊液中的药物浓度与同期血药浓度相近。
[0010] 本发明需要根据现有的制剂服用方法为参考依据，在现有的细胞层面实验基础上 根据新的适应症疗效以及后续相关实验设计确定新的临床给药方法及剂量。
[0011] 本发明通过将肿瘤细胞采集培养后，再利用药物刺激细胞，观察细胞形态、并定量 分析细胞层的面积，即细胞能够与其他细胞接触的面积，从而判断肿瘤细胞的扩散能力。细 胞层面积越大越有利于与其他细胞形成连接。细胞迀移需要内外因素的配合。外部的因素 指的是细胞外的信号分子。内部因素则指细胞的信号传导系统和执行运动的细胞骨架和分 子马达，还有参与粘着斑形成的各种分子。细胞外信号结合胞膜受体完成其使命后，需要 细胞内信号分子接力，将运动信息进一步传给细胞迀移的执行单位一一细胞骨架和分子马 达。种类繁多的细胞内信号分子会相互作用，影响后述这两种分子的分布，结构和活性，达 到精细调整细胞运动的目的。由此可见，肿瘤细胞的转移，与细胞本身以及细胞之间的关系 紧密。
[0012] 癌细胞与其同源正常组织相比，细胞间的粘着性降低，故癌细胞在体内容易分散 和转移。在正常细胞外被中的纤粘连蛋白是一种细胞外粘着糖蛋白，它增强了细胞与细胞 外基质间的粘着。癌细胞的纤粘连蛋白显著减少或缺失，钙粘蛋白合成发生障碍，从而破 坏了细胞与基质之间和细胞与细胞之间的粘着，因此癌细胞具有易于侵润组织和转移的属 性。癌细胞的面积的增大增强了各个细胞之间的接触面积更利于相互之间的粘连和附着。
[0013] 虽然肿瘤细胞的转移是由多种因素共同形成导致的，但是以细胞层的面积，即细 胞能够与其他细胞接触的面积作为细胞转移能力大小的依据，以此作为细胞间连接强度的 测定的方法，具有成本低廉、操作简便、结果易判的优点，其表现出来的细胞面积增大是最 容易直接观察辨别的，主要就是通过加药刺激后对细胞间连接分子Ε-cadherin蛋白质进 行免疫染色，继而进行定量测定。细胞层面积越大越有利于与其他细胞形成连接。
[0014] 本发明以为吡嗪酰胺为实验对象，评估考量其在抑制肿瘤细胞转移的能力评价。 具体以药物刺激前后细胞面积的变化为主要依据。
[0015] 有益效果：1、本发明利用吡嗪酰胺制备的药物对肿瘤细胞的转移能力进行抑制， 吡嗪酰胺为低毒药物，可在肿瘤扩散过程中起到较大的阻断作用，与此同时再采用其他相 关肿瘤药物进行治疗，可以大量减少正常细胞的死亡量；而现有的肿瘤药物多为细胞毒药 物，在杀死肿瘤细胞的同时大量正常细胞也一起死亡；2、本发明所使用的吡嗪酰胺为成药 库的现有药物化合物，研发周期与新药研发的周期相比可明显减少。
【附图说明】
[0016] 图1为0. 5uM浓度吡嗪酰胺处理后的结肠癌细胞图；
[0017] 图2为IuM浓度吡嗪酰胺处理后的结肠癌细胞图；
[0018] 图3为5uM浓度吡嗪酰胺处理后的结肠癌细胞图；
[0019] 图4为IOuM浓度吡嗪酰胺处理后的结肠癌细胞图；
[0020] 图5为阳性对照组，由IOuM浓度nocodazole处理后的结肠癌细胞图；
[0021] 图6为阴性对照组。
【具体实施方式】
[0022] 下面通过附图对本发明技术方案进行详细说明，但是本发明的保护范围不局限于 所述实施例。
[0023] 实施例1 :吡嗪酰胺在制备抑制结肠癌细胞转移和扩散的药物中的应用。具体实 验方案如下：
[0024] 1、实验材料
[0025] 本发明实验阶段采用的是结肠癌细胞（HT29)，阳性对照采用的药物是 nocodazole (实验浓度为IOuM)。阴性对照组没有经过任何处理。
[0026] 其中实验采用吡嗪酰胺化合物C5H5N3O, CAS NO.为98-96-4,浓度分别为10uM， 5uM，luM，0. 5uM。
[0027] 2、实验方法
[0028] 对培养24小时的结肠癌细胞（细胞密度：105)进行药物刺激2小时处理：
[0029] (1)将培养皿中状态较好的结肠癌细胞离心，加入适量培养液制成细胞悬浮液；
[0030] (2)取细胞悬液计数，按照IO5的密度加入24孔盘中，放入37°C的CO 2培养箱中培 养；
[0031] (3) 24小时后，换液，培养液中加入相应量的吡嗪酰胺化合物配置到实验所需浓 度，以及阳性对照药物，然后继续培养2小时；
[0032] (4)培养2小时后将细胞于2%的PFA溶液下37°C固定10分钟，再进行荧光染色。
[0033] 3、实验结果处理
[0034] 对荧光染色后的结肠癌细胞观察，将观察的图片用Image J处理并计算其细胞面 积在加药前后的数据，Ratio是实验组与阴性对照组的比值。结果见表1。
[0035] 表1吡嗪酰胺对HT29细胞刺激2小时后的面积大小
【主权项】
1. 吡嗪酰胺在制备抑制肿瘤细胞转移和扩散的药物中的应用。
2. 根据权利要求1所述的应用，其中肿瘤细胞为结肠癌细胞。
3. 根据权利要求1所述的应用，其中吡嗪酰胺的浓度为0. 5~luM。
【专利摘要】本发明公开吡嗪酰胺在制备抑制肿瘤细胞转移和扩散的药物中的应用。发明利用吡嗪酰胺制备的药物对肿瘤细胞的转移能力进行抑制，吡嗪酰胺为低毒药物，可在肿瘤扩散过程中起到较大的阻断作用，与此同时再采用其他相关肿瘤药物进行治疗，可以大量减少正常细胞的死亡量；而现有的肿瘤药物多为细胞毒药物，在杀死肿瘤细胞的同时大量正常细胞也一起死亡。
【IPC分类】A61K31-4965, A61P35-04
【公开号】CN104546853
【申请号】CN201510067780
【发明人】滕文臣
【申请人】江苏澳格姆生物科技有限公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2015年2月9日