一种红树莓提取物及其在制备肠道细胞氧化损伤抑制剂中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种红树莓提取物及其在制备肠道细胞氧化 损伤抑制剂中的应用。
【背景技术】
[0002] 自由基被认为是引起人体衰老和某些慢性疾病发生的原因之一，当人体内的自由 基产生过多或清除过慢时，就会转而攻击各种细胞器官并使之受到损伤，从而加速机体的 衰老过程并诱发各种疾病。
[0003] 小肠是消化系统的一部分，是人体提取吸收的主要场所。肠道健康对人体健康有 重要影响，如果肠道细胞受损伤，人类营养吸收就会受到影响。
[0004] 氨基甲酸乙醋（Ethyl carbonate，EC)是一种可能致癌的物质，是食物在发酵或者 储存过程中天然产生的物质，普遍存在于发酵食品和饮品中，经人体吸收后对健康存在潜 在威胁。肠道由于是人体消化吸收的主要场所，肠道细胞在接触氨基甲酸乙酯后容易受到 损伤，人类营养吸收就会受到影响。
[0005] 因此，研制一种对肠道损伤有保护作用的物质，尤其是由氨基甲酸乙酯导致的肠 道损伤有保护作用的物质是很有必要的。
[0006] 红树莓（Red Raspberry)是蔷薇科（Rasaceae)悬钩子属（Rubus. L)衆果植物，又 名木莓、托盘、马林、覆盆子等。1993年，联合国粮农组织（FAO)推荐树莓为国际上"第三代 水果"。红树莓果实成熟时呈鲜红色，果实柔嫩多汁、色泽宜人、口感细腻，酸甜可口，风味芳 香，含有丰富的￥〇、￥ 6、￥&、￥13、蛋白质、食用纤维以及1(、？6、211、0&等矿质元素，尤其富含多 酚类、黄酮类、SOD、鞣化酸等活性物质。果实中的活性成分能够清除人体中超氧离子自由 基，具有抗癌、防衰老等功效，同时还具有强化免疫系统功能，改善血液循环，降低血压等作 用。但目前，并没有针对红树莓提取物在保护肠道细胞氧化损伤方面的研宄。
【发明内容】
[0007] 本发明公开了一种红树莓提取物，采用模拟人体胃肠道消化的方式制备得到。本 发明红树莓提取物含有人体最终吸收的有效成分，由于采用体外模拟的方式，最大限度的 保留了有效成分，其功能性具有实用性；传统方法采用80%丙酮提取，其成分进入人体后， 其中会有部分有效物质被人体消化系统分解消化，因而功能性具有不可预测性，不能代表 进入人体后的真实情况。
[0008] -种红树莓提取物，提取步骤如下：
[0009] (1)红树莓鲜果与水等质量混合打浆，加入HCl调节匀浆的pH = 1. 5?2,再加入 胃蛋白酶，37°C、100?200rpm下水浴振荡L 5?3h ;
[0010] ⑵取步骤⑴得到的混合浆液，加入NaOH调节pH = 6?7,再加入胰液，然后用 NaHCO3调节pH至7. 4, 37°C，100?200rpm水浴振荡2?3h后，再经5000?8000rpm下离 心5?IOmin得到上清液；
[0011] ⑶取步骤⑵的上清液，经超滤膜过滤后截留分子量大于IOkDa的成分，滤出液 经真空冷冻干燥，得到所述的红树莓提取物；
[0012] 所述红树莓提取物的成分：矢车菊素-3-葡萄糖苷（cyanidin-3-glucoside)、 矢车菊素-3-芸香糖苷（cyanidin 3-rutinoside)、矢车菊素-3-槐糖 苷（cyanidin-3-sophoroside)、矢车菊素-3-葡萄糖芸香糖苷（cyanidin 3-glucosylrutinoside)、天竺奏素 _3_ 葡萄糖昔（Pelargonidin_3-〇-glucoside)和天竺 葵素-3-芸香糖苷（Pelargonidin-3-O-rutinoside)，质量百分含量如下：
[0013] 矢车菊素-3-葡萄糖苷 15.6%?22.3%; 矢车菊素-3-芸香糖苷 3.5%?6.4%; 矢车菊素-3-槐糖苷 40.8%?49.2%; 矢车菊素-3-葡萄糖芸香糖苷 4.7%?8.1%; 天竺葵素-3-葡萄糖苷 11.3%?16.8%; 天竺葵素-3-芸香糖苷 5.1%?8.5%。
[0014] 作为优选，步骤（1)中，所述HCl的浓度为5mol/L。
[0015] 作为优选，步骤（1)中，所述胃蛋白酶的加入量为5000?7000单位胃蛋白酶/20g 匀浆。
[0016] 作为优选，步骤（2)中，所述NaOH的浓度为lmol/L ;
[0017] 所述似!10)3的浓度为lmol/L〇
[0018] 作为优选，步骤（2)中，所述胰液中胰酶的含量为4?5mg/mL，胆盐的含量为25? 30mg/mL ；
[0019] 所述胰液的加入量为5mL/18mL混合浆液。
[0020] 本发明还公开了所述红树莓提取物在制备肠道细胞氧化损伤的抑制剂中的新用 途，拓展了黑莓的应用领域。
[0021] 进一步公开了所述的红树莓提取物在制备由氨基甲酸乙酯诱导的肠道细胞氧化 损伤的抑制剂中的应用。
[0022] 作为优选，所述的抑制剂中红树莓提取物的有效剂量为lmg/mL。
[0023] 与现有技术相比，本发明具有以下优点：
[0024] 本发明模拟人体胃肠道消化的方式制备黑莓提取物。
[0025] 本发明首次发现了红树莓提取物能够有效抑制氨基甲酸乙酯诱导的氧化损伤，是 一个具有良好开发前景的物质；
[0026] 本发明为红树莓提取物提供了新的用途，拓展了一个新的应用领域。
【附图说明】
[0027] 图1为实施例1制备的红树莓提取物对氨基甲酸乙酯诱导的Caco-2细胞氧化损 伤的保护作用；
[0028] 图2为实施例1制备的红树莓提取物对氨基甲酸乙酯诱导的Caco-2细胞活性氧 自由基ROS (DCF荧光）的抑制作用；
[0029] 图3为实施例2制备的红树莓提取物对氨基甲酸乙酯诱导的Caco-2细胞线粒体 膜电位（MMP)的保护作用；
[0030] 图4为实施例2制备的红树莓提取物对氨基甲酸乙酯诱导的Caco-2细胞谷胱甘 肽含量降低的抑制作用；
[0031] 图5为实施例3制备的红树莓提取物对氨基甲酸乙酯诱导的Caco-2细胞核损伤 的抑制作用。
【具体实施方式】
[0032] 下面结合具体实施例对本发明作进一步描述，以下列举的仅是本发明的具体实施 例，但本发明的保护范围并不仅限于此：
[0033] 实施例1
[0034] 红树莓鲜果与水等量混合打浆，用5M HCl将红树莓匀浆酸化至pH = 1. 5,加入胃 蛋白酶（7000单位胃蛋白酶/20g匀浆），在37°C，IOOrpm水浴振荡I. 5h，模拟胃消化后，继 续用IM NaOH调pH至6,每18mL胃消化物加入5mL胰液（胰液中胰酶含量为4mg/mL，胆盐 含量为 25mg/mL)，再用 IM NaHCOJjf pH 至 7. 4,在 37°C，IOOrpm 水浴振荡 2. 5h，5000rpm 条 件下离心6min，上清液即为红树莓粗提取物。利用Millipore Pellicon超滤系统，将上述 提取液泵至截留分子量为IOkDa的再生纤维素超滤膜表面，收集滤出液，真空冷冻干燥，得 到红树莓提取物。
[0035] 经液相色谱测试可知，该红树莓提取物的主要成分如下表所示：
[0036] 表 1
[0037]
[0038] 实施例2
【主权项】
1. 一种红树莓提取物，其特征在于，提取步骤如下： (1) 红树莓鲜果与水等质量混合打浆，加入HC1调节匀浆的pH= 1. 5?2,再加入胃蛋 白酶，37°C、100?200rpm下水浴振荡1. 5?3h; (2) 取步骤（1)得到的混合浆液，加入NaOH调节pH= 6?7,再加入胰液，然后用NaHC03 调节pH至7. 4, 37°C，100?200rpm水浴振荡2?3h后，再经5000?8000rpm下离心5? lOmin得到上清液； (3) 取步骤（2)的上清液，经超滤膜过滤后截留分子量大于10kDa的成分，滤出液经真 空冷冻干燥，得到所述的红树莓提取物； 所述红树莓提取物的成分：矢车菊素-3-葡萄糖苷、矢车菊素-3-芸香糖苷、矢车菊 素-3-槐糖苷、矢车菊素-3-葡萄糖芸香糖苷、天竺葵素-3-葡萄糖苷和天竺葵素-3-芸香 糖苷，质量百分含量如下：
2. 根据权利要求1所述的红树莓提取物，其特征在于，步骤（1)中，所述HC1的浓度为 5mol/L〇
3. 根据权利要求1所述的红树莓提取物，其特征在于，步骤（1)中，所述胃蛋白酶的加 入量为5000?7000单位胃蛋白酶/20g匀浆。
4. 根据权利要求1所述的红树莓提取物，其特征在于，步骤（2)中，所述NaOH的浓度为 lmol/L； 所述似110)3的浓度为lmol/L〇
5. 根据权利要求1所述的红树莓提取物，其特征在于，步骤（2)中，所述胰液中胰酶的 含量为4?5mg/mL，胆盐的含量为25?30mg/mL; 所述胰液的加入量为5mL/18mL混合浆液。
6. -种根据所述的红树莓提取物在制备肠道细胞氧化损伤的抑制剂中的应用。
7. -种根据所述的红树莓提取物在制备由氨基甲酸乙酯诱导的肠道细胞氧化损伤的 抑制剂中的应用。
8. 根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于，所述的抑制剂中红树莓提取物的有效 剂量为lmg/mL。
【专利摘要】本发明公开了一种红树莓提取物，按质量百分含量计，该红树莓提取物的组成为：矢车菊素-3-葡萄糖苷15.6％～22.3％；矢车菊素-3-芸香糖苷3.5％～6.4％；矢车菊素-3-槐糖苷40.8％～49.2％；矢车菊素-3-葡萄糖芸香糖苷4.7％～8.1％；天竺葵素-3-葡萄糖苷11.3％～16.8％；天竺葵素-3-芸香糖苷5.1％～8.5％。提取步骤为：红树莓鲜果依次经胃蛋白酶、胰蛋白酶酶解后，离心分离得到上清液，所述上清液经超滤膜过滤后截留分子量大于10kDa的成分，滤出液经真空冷冻干燥，得到所述的红树莓提取物。本发明还公开了该红树莓提取物在制备肠道细胞氧化损伤抑制剂中的应用。
【IPC分类】A61K31-7048, A61P1-00, A61K36-73
【公开号】CN104547112
【申请号】CN201510019573
【发明人】陈卫, 郑晓冬
【申请人】浙江大学
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2015年1月14日