双氯芬酸钠在制备抑制肿瘤细胞转移和扩散的药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及双氯芬酸钠在制药领域新的用途，具体涉及双氯芬酸钠在制备抑制肿 瘤细胞转移和扩散的药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 双氯芬酸钠通过抑制环氧合酶从而减少前列腺素的合成，以及一定程度上抑制脂 氧酶而减少白三烯、缓激肽等产物的生成而发挥解热镇痛及抗炎作用。主要用于：
[0003] 1.炎性和退行性风湿病：类风湿性关节炎、青少年型类风湿性关节炎、强直性脊 椎炎、骨关节炎和脊椎关节炎。脊椎痛性综合征。
[0004] 2.非关节性风湿性病，如肩痛，腱鞘炎，滑囊炎，肌痛及运动后损伤性疼痛等。 [0005] 3.痛风急性发作。
[0006] 4.创伤后及术后炎症性疼痛如：创伤后，劳损后，牙痛，头痛等；妇科中出现的疼 痛或炎症，例如：原发性痛经或附加炎。
[0007] 5.对耳、鼻、喉的严重痛性感染可作为辅助治疗药，例如：咽扁桃体炎，耳炎。原发 疾病可根据一般治疗原则给予适当的治疗。
[0008] 6.对成年和儿童的发热有解热作用。
[0009] 现有公开文献中尚未发现双氯芬酸钠的其他药理作用。
【发明内容】
[0010] 发明目的：本发明目的在于提供一种双氯芬酸钠在制备抑制肿瘤细胞转移和扩散 的药物中的应用。
[0011] 技术方案：双氯芬酸钠在制备抑制肿瘤细胞转移和扩散的药物中的应用。
[0012] 优选地，所述肿瘤细胞为结肠癌细胞。
[0013] 优选地，其中双氯芬酸钠的浓度为40uM~60uM。
[0014] 发明人通过细胞层面的实验研宄发现，双氯芬酸钠对肿瘤细胞的转移能力有一定 的抑制作用。目前针对现有的适应症给药途径为口服肠溶片，作为常规，最初每日剂量为 100-150mg，对轻度病人或需长期治疗的病人，每日剂量为75-100mg。
[0015] 本发明需要根据现有的制剂服用方法为参考依据，在现有的细胞层面实验基础上 根据新的适应症疗效以及后续相关实验设计确定新的临床给药方法及剂量。
[0016] 本发明通过将肿瘤细胞采集培养后，再利用药物刺激细胞，观察细胞形态、并定量 分析细胞层的面积，即细胞能够与其他细胞接触的面积，从而判断肿瘤细胞的扩散能力。细 胞层面积越大越有利于与其他细胞形成连接。细胞迀移需要内外因素的配合。外部的因素 指的是细胞外的信号分子。内部因素则指细胞的信号传导系统和执行运动的细胞骨架和分 子马达，还有参与粘着斑形成的各种分子。细胞外信号结合胞膜受体完成其使命后，需要 细胞内信号分子接力，将运动信息进一步传给细胞迀移的执行单位一一细胞骨架和分子马 达。种类繁多的细胞内信号分子会相互作用，影响后述这两种分子的分布，结构和活性，达 到精细调整细胞运动的目的。由此可见，肿瘤细胞的转移，与细胞本身以及细胞之间的关系 紧密。
[0017] 癌细胞与其同源正常组织相比，细胞间的粘着性降低，故癌细胞在体内容易分散 和转移。在正常细胞外被中的纤粘连蛋白是一种细胞外粘着糖蛋白，它增强了细胞与细胞 外基质间的粘着。癌细胞的纤粘连蛋白显著减少或缺失，钙粘蛋白合成发生障碍，从而破 坏了细胞与基质之间和细胞与细胞之间的粘着，因此癌细胞具有易于侵润组织和转移的属 性。癌细胞的面积的增大增强了各个细胞之间的接触面积更利于相互之间的粘连和附着。
[0018] 虽然肿瘤细胞的转移是由多种因素共同形成导致的，但是以细胞层的面积，即细 胞能够与其他细胞接触的面积作为细胞转移能力大小的依据，以此作为细胞间连接强度的 测定的方法，具有成本低廉、操作简便、结果易判的优点，其表现出来的细胞面积增大是最 容易直接观察辨别的，主要就是通过加药刺激后对细胞间连接分子E-cadherin蛋白质进 行免疫染色，继而进行定量测定。细胞层面积越大越有利于与其他细胞形成连接。
[0019] 本发明以为双氯芬酸钠为实验对象，评估考量其在抑制肿瘤细胞转移的能力评 价。具体以药物刺激前后细胞面积的变化为主要依据。
[0020] 有益效果：1、本发明利用双氯芬酸钠制备的药物对肿瘤细胞的转移能力进行抑 制，双氯芬酸钠为低毒药物，可在肿瘤扩散过程中起到较大的阻断作用，与此同时再采用其 他相关肿瘤药物进行治疗，可以大量减少正常细胞的死亡量；而现有的肿瘤药物多为细胞 毒药物，在杀死肿瘤细胞的同时大量正常细胞也一起死亡；2、本发明所使用的双氯芬酸钠 为成药库的现有药物化合物，研发周期与新药研发的周期相比可明显减少。
【附图说明】
[0021] 图1为10uM浓度双氯芬酸钠处理后的结肠癌细胞图；
[0022] 图2为40uM浓度双氯芬酸钠处理后的结肠癌细胞图；
[0023] 图3为50uM浓度双氯芬酸钠处理后的结肠癌细胞图；
[0024] 图4为60uM浓度双氯芬酸钠处理后的结肠癌细胞图；
[0025] 图5为80uM浓度双氯芬酸钠处理后的结肠癌细胞图
[0026] 图6为阳性对照组，由10uM浓度nocodazole处理后的结肠癌细胞图；
[0027] 图7为阴性对照组。
【具体实施方式】
[0028] 下面通过附图对本发明技术方案进行详细说明，但是本发明的保护范围不局限于 所述实施例。
[0029] 实施例1 :双氯芬酸钠在制备抑制结肠癌细胞转移和扩散的药物中的应用。具体 实验方案如下：
[0030] 1、实验材料
[0031] 本发明实验阶段采用的是结肠癌细胞（HT29)，阳性对照采用的药物是 nocodazole (实验浓度为10uM)。阴性对照组没有经过任何处理。
[0032] 其中实验采用双氯芬酸钠化合物C14H1QCl 2NNa02，CAS NO?为15307-79-6,浓度分别 为 80uM，60uM，50uM，40uM，10uM。
[0033] 2、实验方法
[0034] 对培养24小时的结肠癌细胞（细胞密度：105)进行药物刺激2小时处理：
[0035] (1)将培养皿中状态较好的结肠癌细胞离心，加入适量培养液制成细胞悬浮液；
[0036] (2)取细胞悬液计数，按照105的密度加入24孔盘中，放入37°C的C02培养箱中培 养；
[0037] (3)24小时后，换液，培养液中加入相应量的双氯芬酸钠化合物配置到实验所需浓 度，以及阳性对照药物，然后继续培养2小时；
[0038] (4)培养2小时后将细胞于2%的PFA溶液下37°C固定10分钟，再进行荧光染色。
[0039] 3、实验结果处理
[0040] 对荧光染色后的结肠癌细胞观察，将观察的图片用ImageJ处理并计算其细胞面 积在加药前后的数据，Ratio是实验组与阴性对照组的比值。结果见表1。
[0041] 表1双氯芬酸钠对HT29细胞刺激2小时后的面积大小
[0042]
【主权项】
1. 双氯芬酸钠在制备抑制肿瘤细胞转移和扩散的药物中的应用。
2. 根据权利要求1所述的应用，其中肿瘤细胞为结肠癌细胞。
3. 根据权利要求1所述的应用，其中双氯芬酸钠的浓度为40uM~60uM。
【专利摘要】本发明公开双氯芬酸钠在制备抑制肿瘤细胞转移和扩散的药物中的应用。本发明利用双氯芬酸钠制备的药物对肿瘤细胞的转移能力进行抑制，双氯芬酸钠为低毒药物，可在肿瘤扩散过程中起到较大的阻断作用，与此同时再采用其他相关肿瘤药物进行治疗，可以大量减少正常细胞的死亡量；而现有的肿瘤药物多为细胞毒药物，在杀死肿瘤细胞的同时大量正常细胞也一起死亡。
【IPC分类】A61K31-196, A61P35-04
【公开号】CN104622859
【申请号】CN201510068123
【发明人】董梅
【申请人】南京格耀生物科技有限公司
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年2月9日