清香桂总生物碱及其制备方法和用图
【技术领域】
[0001] 本发明属药物领域，涉及清香桂总生物碱及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的 用途。
【背景技术】
[0002] 本领域知悉，恶性肿瘤仍然是目前危害人们健康的重大疾病之一，目前，肿瘤的治 疗方案通常采用手术、放疗和化疗手段，其中化疗作为肿瘤治疗的三大传统手段之一，在肿 瘤治疗中占据着重要地位。而从天然药物中寻找发现活性成分也一直是抗肿瘤药物研究的 执占。
[0003] 中药材黄杨科野扇花属植物清香桂（Sarcococca ruscifolia Stapf)富含生物碱 成分，该植物是我国民间药物，主要用于治疗胃病、跌打劳伤、头晕心悸、喉咙肿痛等。多年 来，国内外对相关留体生物碱的活性研究多集中在乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶活性抑制 方面。迄今，尚未见有关清香桂生物碱部位对多种肿瘤细胞具有非常好的抑制活性的报道。
[0004] 本申请的发明人，拟通过抗肿瘤天然产物筛选中，提供清香桂生物碱部位及其制 备方法和对抗肿瘤活性的用途。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种清香桂总生物碱。
[0006] 本发明的进一步目的是提供所述清香桂总生物碱的制备方法。
[0007] 本发明的更进一步目的是提供所述清香桂总生物碱在制备抗肿瘤药物中的用途。
[0008] 本发明通过抗肿瘤天然产物筛选，经提取分离的方法从黄杨科野扇花属植物清香 桂的生物碱部位分离制得清香桂总生物碱，进一步通过实验证实，所述的香桂总生物碱对 多种肿瘤细胞具有显著的抑制活性。
[0009] 本发明提供了所述清香桂总生物碱的制备方法，所述的清香桂总生物碱可以采用 酸水、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇等有机溶剂进行提取获得，并经加热、回流或超声、 微波辅助提取。
[0010] 本发明的一个实施例中，采用乙醇提取及分离获得清香桂总生物碱：
[0011] 清香桂（Sarcococca ruscifolia Stapf)根莖粉碎用95%乙醇分3次加热回流， 合并滤液，减压浓缩至浸膏，悬浮于盐酸水溶液后用石油醚萃取，除去脂溶性杂质，酸水层 用NaOH调节pH，再用氯仿萃取，氯仿层经无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得含生物碱部位， 收率为1. 5%。
[0012] 本发明的另一个实施例中采用酸水提取及分离获得清香桂总生物碱：
[0013] 清香桂（Sarcococca ruscifolia Stapf)根莖粉碎用5%盐酸水溶液分3次超声 提取，每次半小时，合并滤液，并用石油醚萃取，除去脂溶性杂质，酸水层用NaOH调节pH，再 用氯仿萃取，氯仿层经无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得含生物碱部位，收率为1. 2%。
[0014] 本发明的另一个实施例中采用氯仿，酸水提取及分离获得清香桂总生物碱：
[0015] 清香桂（Sarcococca ruscifolia Stapf)根莖粉碎用氯仿分3次加热回流，合并 滤液，减压浓缩至干，2%的盐酸水溶液悬浮后，用石油醚萃取，除去脂溶性杂质，酸水层用 NaOH调节pH至，再用氯仿萃取，氯仿层经无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得含生物碱部位， 收率为1. 0%。
[0016] 进一步，本发明采用萃取或色谱方法制备和纯化清香桂总生物碱。
[0017] 本发明制得的清香桂总生物碱进行了抗肿瘤活性试验，其中分别对人胃癌细胞株 AGS、MGC-803,人肺癌细胞株 A549、H1299,人结直肠癌细胞株 HCT116、HT29、SW480、SW620， 人胶质母细胞瘤细胞株U87、U251和人乳腺癌细胞株MCF-7、BT-549进行不同浓度的抑 制试验，结果显示，所述的香桂总生物碱对多种肿瘤细胞包括AGS、MGC-803、A549、H1299、 HCT116、HT29、SW480、SW620、U87、U251、MCF-7、BT-549 等肿瘤细胞具有显著的抑制活性，所 述的清香桂总生物碱可进一步制备制备抗肿瘤药物，用于但不局限于治疗胃癌、肺癌、结直 肠癌、脑癌及乳腺癌等。
[0018] 更进一步的，所述药物可用载体或赋形剂给予全身或局部给药，或，经鼻、经口、透 皮、非肠道、静脉或肌肉注射给药。
【具体实施方式】
[0019] 实施例1提取及分离清香桂总生物碱的乙醇：
[0020] 清香桂（Sarcococca ruscifolia Stapf)根莖粉碎（10.0 g)用 95% 乙醇 300ml 分 3次加热回流，合并滤液，减压浓缩至浸膏，悬浮于2%的盐酸水溶液后用石油醚萃取，除去 脂溶性杂质，酸水层用NaOH调节pH至~10,再用氯仿萃取。氯仿层经无水硫酸钠干燥后， 减压浓缩，得含生物碱部位0. 15g，收率为1. 5%。
[0021] 实施例2提取及分离清香桂总生物碱的酸水：
[0022] 清香桂（Sarcococca ruscifolia Stapf)根莖粉碎（10.0 g)用 5% 盐酸水溶液 300ml分3次超声提取，每次半小时，合并滤液，并用石油醚萃取，除去脂溶性杂质，酸水层 用NaOH调节pH至~10,再用氯仿萃取。氯仿层经无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得含生物 碱部位0. 12g，收率为1. 2%。
[0023] 实施例3提取及分离清香桂总生物碱的酸水：
[0024] 清香桂（Sarcococca ruscifolia Stapf)根莖粉碎（10.0 g)用氯仿 300ml 分 3 次 加热回流，合并滤液，减压浓缩至干，2%的盐酸水溶液悬浮后，用石油醚萃取，除去脂溶性杂 质，酸水层用NaOH调节pH至~10,再用氯仿萃取。氯仿层经无水硫酸钠干燥后，减压浓缩， 得含生物碱部位0. l〇g，收率为1. 0%。
[0025] 实施例4抗肿瘤活性试验
[0026] 试验样品制备：按实施例1中的方法，制备含清香桂总生物碱的供试品。
[0027] 分别采用人胃癌细胞株AGS、MGC-803,人肺癌细胞株A549、H1299,人结直肠癌细 胞株HCT116、HT29、SW480、SW620,人胶质母细胞瘤细胞株U87、U251和人乳腺癌细胞株 MCF-7、BT-549,在37°，含5% CO2条件下培养于含10%胎牛血清、50kU/L青霉素及50mg/ L链霉素的DMEM培养液内，胰酶消化再用培养液稀释细胞浓度至5X IO4个/ml，取100 μ 1 加入96孔板的孔内，然后再加入不同浓度的供试品，培养68h后，每孔加入10 μ 15mg/ml的 MTT再培养4h，然后弃培养液每孔加入100 μ 1的DMS0,用酶标仪在490nm读取每孔的吸光 值。用Bliss法计算IC5tl值，结果显示，所述的香桂总生物碱对多种肿瘤细胞包括具有显著 的抑制活性，具体结果如表1所示。
[0028] 表1.抗肿瘤活性试验（IC5tl, μ g/ml)
[0029]
[0030]
【主权项】
1. 清香桂总生物碱在制备抗肿瘤药物中的用途。
2. 按权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的清香桂总生物碱采用酸水、氯仿、乙 酸乙酯、丙酮、乙醇或甲醇有机溶剂从黄杨科野扇花属植物清香桂的生物碱部位分离提取 制得清香桂总生物碱。
3. 按权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述的清香桂总生物碱采用加热、回流 或超声、微波辅助提取。
4. 按权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述的清香桂总生物碱采用萃取或色谱 方法进行制备和纯化。
5. 按权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的肿瘤是胃癌、肺癌、结直肠癌、脑癌或 乳腺癌。
6. 按权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的药物可用载体或赋形剂给予全身或 局部给药。
7. 根据权利要求6的用途，其特征在于，所述药物经鼻、经口、透皮、非肠道、静脉或肌 肉注射给药。
【专利摘要】本发明属药物领域，涉及清香桂总生物碱及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的用途。本发明通过抗肿瘤天然产物筛选，经采用酸水、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇等有机溶剂提取分离的方法从黄杨科野扇花属植物清香桂的生物碱部位分离制得清香桂总生物碱，通过试验证实，所述的香桂总生物碱对多种肿瘤细胞具有显著的抑制活性，可进一步制备制备抗肿瘤药物，用于但不局限于治疗胃癌、肺癌、结直肠癌、脑癌及乳腺癌等。更进一步，所述药物可用载体或赋形剂给予全身或局部给药。
【IPC分类】A61K36-185, A61K125-00, A61P35-00
【公开号】CN104666374
【申请号】CN201310617117
【发明人】俞培忠, 程科军, 石智, 胡昌奇
【申请人】复旦大学, 丽水市农业科学研究院, 暨南大学
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2013年11月27日