一种光甘草定的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种光甘草定的应用，尤其是涉及一种光甘草定在制备用于预防和/ 或治疗脑缺血性疾病药物中的应用，属于有效成分应用技术领域。
【背景技术】
[0002] 脑缺血性疾病严重威胁着人类的健康，并且随着老年人口的不断增加，其发病率 不断升高，给家庭及社会带来较重的压力。急性缺血性中风以其高发病率、高致残率、高死 亡率对人类危害极大，急性缺血性中风如果能够早期治疗能防止病情发展，减轻脑功能损 害及改善预后，研宄其预防、治疗的药物具有重要的理论和实际意义。
[0003] 光甘草定是光果甘草中的主要黄酮类成分之一。已有研宄表明，它显示出抗自由 基氧化作用，可以防治与自由基氧化有关的某些病理变化，而至今，光甘草定是否有确切的 神经保护作用及其作用机制还不清楚，而从以往研宄发现，自由基生成和过度炎症反应又 是造成缺血性脑血管病的中心环节。
【发明内容】
[0004] 为了克服现有技术问题，本发明的目的在于提供一种光甘草定的应用，其在预防 和/或治疗脑缺血性疾病中具有显著疗效。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为： 一种光甘草定在制备用于预防和/或治疗脑缺血性疾病药物中的应用。
[0006] 进一步，所述的用于治疗脑缺血性疾病药物为神经保护剂。
[0007] 本发明的有益效果为：本发明通过将光甘草定应用于预防和/或治疗脑缺血性疾 病药物中，对神经损伤有显著的保护作用，可用于脑缺血性疾病的预防和治疗，具有重要的 现实意义。
【附图说明】
[0008] 图1为氧糖缺乏诱导SH-SY5Y细胞损伤实验细胞存活率比较（n=3); 图2为光甘草定对大鼠缺血再灌注损伤引起的神经功能缺损的影响； 图3为光甘草定对大鼠缺血再灌注损伤梗死面积的影响。
【具体实施方式】
[0009]下面结合具体实施例详细说明本发明。
[0010] 实施例1:光甘草定对氧糖缺乏诱导SH-SY5Y细胞损伤的影响 I. 1药品 光甘草定，由江苏天晟药业有限公司提供，符合相关国家质量标准要求。药物均按实验 要求配制成适宜浓度。
[0011] SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞）细胞株购自美国ATCC公司。
[0012] 1.2实验方法 SH-SY5Y细胞经胰蛋白酶消化后，悬于含10%胎牛血清的MEM/F12培养液中。以2X105cells/ml的密度将SH-SY5Y细胞接种于96孔培养板上，置于含5% C02的37°C 恒温培养箱内培养。SH-SY5Y细胞培养约24小时后，在给药组中加入相应浓度的待测 化合物，正常对照组及氧糖缺乏损伤组加入化合物溶剂对照。孵育2小时后，将氧糖缺 乏损伤组及给药组均用无糖EBSS平衡盐溶液润洗一遍细胞，随后换成DMEM(无糖）培 养液，并再次在给药组中加入相应浓度的待测化合物，正常对照组换成含糖DMEM并加入 化合物溶剂对照。将给药组及损伤组放入厌氧工作站内，通入5%C02、10%H2、85%N2混合 气体缺氧1小时。正常对照组放入含5% C02的37°C恒温培养箱中。1小时后将培养 板从厌氧工作站内取出，并将给药组及损伤组加入l〇g/L的葡萄糖，终浓度为lg/L。继 续培养24小时后，加入5 mg/ml MTT，进行活细胞染色。孵育3小时后，弃去培养液，加 入100% DMS0,并在摇板机上振摇使之充分溶解。490nm的波长下测定各组的OD值， 重复试验三次，采用统计学方法对数据进行分析，计算出细胞存活率，用平均值（Mean) 土标准误（SEM)表示。
[0013] 图1为氧糖缺乏诱导SH-SY5Y细胞损伤实验细胞存活率比较（n=3)。
[0014] 如图1所示：图1中数值为细胞存活率，用平均值（Mean) ±标准误（SEM)表示， 正常对照组存活率设为100%，其余各组为与正常组相比的百分值。##p〈o. 01相比于正常对 照组，、〈0.01相比于模型组。
[0015] 以上检测结果表明，光甘草定对于氧糖缺乏诱导的SH-SY5Y细胞损伤均有较强的 保护作用，且与其药物浓度呈正相关（P< 0. 01)。
[0016] 实施例2:光甘草定对大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO)的影响 2. 1药品及动物 水合氯醛、75%消毒酒精由国药集团提供；2, 3, 5-三苯基氯化四氮唑（TTC)购自沃凯 公司；栓线2636#、2838#购自北京沙东生物公司。
[0017] SD大鼠45只（购自上海斯莱克实验动物中心），雄性，250-300g。实验前禁食12h， 自由饮水。
[0018] 2. 2实验方法 2. 2. 1实验分组 将大鼠随机分成三组：假手术组（n=15)，缺血再灌注组（n=15)，光甘草定组（n=15)。
[0019] 2. 2. 2实验方法 短暂性MCAO模型主要依据（Longa,etal;Stroke，1989)所描述的方法进行。大鼠 经水合氯醛麻醉（400mg/Kg，i.p.)后，将大鼠固定于手术台，监测动物的直肠温度，手术 过程中控制温度在37±0.5°C范围内；行颈部正中切口，钝性分离组织，暴露右侧颈总动脉 (CCA)及颈外动脉（ECA)与颈内动脉（ICA)分叉处，细线在CCA下打活结，分离并用电凝器 电凝两个小分支血管，分别是ECA上的分支、ECA与ICA的连接血管，用动脉夹夹闭ICA;将 2636 (2838)号栓线从ECA的切口插入，稍微结扎ECA上栓线尾部，并松开ICA上的动脉夹， 栓线经ECA进入ICA，沿ICA推进至有阻力感即停止；结扎ECA上的栓线尾部，并剪断ECA， 松开CCA上的活结，手术结束时，缝合颈部皮肤；缺血2h后，退出栓线即为再灌注，清醒后回 笼，自由进食；手术结束后，按动物体重肌肉注射抗生素（〇. 5mL/200g);假手术组手术步骤 同缺血组，只是将ECA结扎并剪断，不进栓线阻塞大脑中动脉。
[0020] 神经行为学评分：参照（Chen,etal; 2001 )提供的mNSS方法。0分：正常；1-6 分：轻度损伤；7-12分：中度损伤；13-18分：重度损伤。
[0021] 脑梗死区域测定：采用TTC染色方法，再灌注24h后大鼠断头处死，迅速分离取出 大脑，置冰箱（_80°C)内冷冻组织僵化(约2min)，取出进行冠状面切片，均匀切成2mm厚的 脑片共6片，立即投入1 %TTC染色液中，在37°C下避光孵育约15min，染色过程翻动脑片 一次，尽量使两面染色均匀。24h后脑组织片拍照，使用图像处理软件计算各脑片梗死面积， 总的梗死体积=各面积相加X脑片厚度。因为脑组织水肿，所以计算后还需校正，其校正 公式如下：
【主权项】
1. 一种光甘草定在制备用于预防和/或治疗脑缺血性疾病药物中的应用。
2. 根据权利要求1所述的一种应用，其特征在于，所述的用于治疗脑缺血性疾病药物 为神经保护剂。
【专利摘要】本发明公开了一种光甘草定在制备用于预防或治疗脑缺血性疾病药物中的应用。本发明通过将光甘草定应用于预防和/或治疗脑缺血性疾病药物中，对神经损伤有显著的保护作用，可用于脑缺血性疾病的预防和治疗，具有重要的现实意义。
【IPC分类】A61K31-352, A61P25-00, A61P9-10
【公开号】CN104800206
【申请号】CN201510176296
【发明人】季浩, 张宇, 阚建伟, 窦长清, 刘佳
【申请人】江苏天晟药业有限公司
【公开日】2015年7月29日
【申请日】2015年4月15日