一种夏枯草总黄酮的提取纯化方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及化学及医药技术领域，尤其涉及一种夏枯草总黄酮的提取纯化方法及 其应用。
【背景技术】
[0002] 癌症是一大类恶性肿瘤的统称，是当今世界上第一大严重威胁人类健康的疾病， 多种诱发因素如环境污染、化学污染(化学毒素)、电离辐射、自由基毒素等都可导致癌症的 发生。目前癌症的治疗包括手术治疗、化学治疗、放射治疗、中医治疗等，这些治疗手段对 癌症均有一定疗效，但是其作用效果有限，且放射治疗、化学治疗对正常组织损害也较大， 因此，癌症的治疗仍然是人类面对的极大考验。中医药治疗癌症现在已经被国内外医疗专 家广泛的认可，大量的临床试验及科研研宄已经证实了中医治疗癌症的效果，无论在抑制 或杀伤肿瘤细胞方面还是术后调理，减轻放、化疗不良反应，改善症状和体征，提高生存质 量等方面，均发挥了重要的作用，因此，近年来中医中药在癌症的治疗方面日益被人们所关 注。
[0003] 夏枯草为唇形科植物夏枯草的干燥果穗，2010版《中国药典》收载的中药材，始载 于《神农本草经》。《神农本草经》言："主寒热、瘰疬、鼠瘘、头疮，破症，散瘿结气，脚肿湿痹"； 《本草通玄》:"夏枯草，补养厥阴血脉，又能疏通结气。目痛、瘰疬皆系肝症，故建神功。然久 用亦防伤胃，与参、术同行，方可久服无弊"；《纲目》:"黎居士《易简方》，夏枯草治目疼，用沙 糖水浸一夜用，取其能解内热，缓肝火也。楼全善云，夏枯草治目珠疼至夜则甚者，神效，或 用苦寒药点之反甚者，亦神效。盖目珠连目本，肝系也，属厥阴之经。夜甚及点苦寒药反甚 者，夜与寒亦阴故也。夏枯禀纯阳之气，补厥阴血脉，故治此如神，以阳治阴也"。从古代各家 本草对其性状、产地、用途等方面进行考证与目前习用的夏枯草，即主要为含黄酮类及三萜 皂苷类等物质相符。临床上夏枯草用于淋巴结核、甲状腺肿、乳痈、头目眩晕、口眼歪斜、筋 骨疼痛、肺结核、血崩、带下、急性传染性黄疸型肝炎及细菌性痢疾等疾病的治疗；而有关其 有效成分之一总黄酮富集物的高纯度纯化方法、抗肝肿瘤活性研宄迄今为止尚未见报道。
[0004] 夏枯草中黄酮类化合物作为其中主要的活性成分，具有广泛的生物活性，在心血 管系统、中枢神经系统、血液系统、免疫系统、抗炎、抗衰老、抗肿瘤等方面都有较显著的疗 效，但其生物活性的研宄主要集中在抗氧化活性方面。夏枯草化学成分复杂，除黄酮类化合 物，还含有其它类多种化学成分，主要有黄酮类、三萜皂苷类、苯丙素、留体、有机酸、挥发油 及糖等。因此，药材提取液中含有大量非黄酮类杂质，不利于阐明药效物质组分和作用机 制，难以投入到新药的研发中，故对夏枯草总黄酮纯化方法的研宄具有现实意义。根据文献 报道，对夏枯草中总黄酮富集纯度未达到90%以上，不利于研宄其发挥药效的物质基础、作 用机制及其药效组分的解析和表征，很难将其研发成临床新药。
【发明内容】
[0005] 针对上述问题，本发明提供一种夏枯草总黄酮的提取纯化方法及其应用，该方法 使夏枯草中总黄酮富集物纯度达到94%以上，用于制备治疗肝癌的药物。
[0006] 为实现本发明的上述目的，本发明提供一种夏枯草总黄酮的提取纯化方法，包括 以下步骤。
[0007] 步骤1、取夏枯草药材粉碎过筛，加1-30倍量5-95%的乙醇，回流提取1-3次，每次 1-5 h，过滤，合并滤液，作为提取液，备用。
[0008] 步骤2、将步骤1中的提取液，加热浓缩至浓度为0. 05-0. 5 g/mL，再用HCl和NaOH 溶液调节pH值为1-7,作为上样液。
[0009] 步骤3、上样液纯化：将步骤2中的上样液，上NKA-9大孔吸附树脂，所述夏枯草药 材与树脂用量比为〇. 1-1.0 g/mL，用1-10 BV水除杂后，再用1-10BV的10-95%乙醇洗脱。
[0010] 步骤4、连续多次经过步骤3的纯化工艺得富集物，将富集物减压干燥至粉末或浸 膏，即得。
[0011] 本发明还提供夏枯草总黄酮在制备治疗肝癌药物中的应用。
[0012] 所述夏枯草总黄酮可加入药学上可接受的辅料或载体，制成不同剂型的治疗肝癌 的药物。
[0013] 与现有技术相比本发明的有益效果。
[0014] 本发明提供夏枯草总黄酮的提取纯化方法及其应用，该方法从夏枯草干燥果穗中 提取纯化总黄酮富集物，纯度达到94%以上，可以有效排除杂质对药效成分的干扰并且为 药效物质组分的解析及阐明其作用机制奠定基础；通过药理药效研宄表明夏枯草总黄酮具 有明显的抗肝肿瘤活性，并呈明显的量效关系，同时纯度增加，可减小服用剂量、降低不良 反应，为研宄其发挥药效的物质基础及作用机制奠定基础，扩大了夏枯草的应用范围；同时 为开发以夏枯草总黄酮富集物为原料的具有广泛临床使用价值和商业开发价值的抗肝肿 瘤新药和工业生产提供理论和实验依据。
【具体实施方式】
[0015] 下面结合具体实施例进一步详细说明本发明。
[0016] 1、夏枯草总黄酮提取工艺研宄。
[0017] 1.1单因素水平考察。
[0018] 表1 :夏枯草药材不同粉碎粒径提取总黄酮的含量（％)。
【主权项】
1. 一种夏枯草总黄酮的提取纯化方法，包括以下步骤： 步骤1、取夏枯草药材粉碎过筛，加1-30倍量5-95%的乙醇，回流提取1-3次，每次1-5 h，过滤，合并滤液，作为提取液，备用； 步骤2、将步骤1中的提取液，加热浓缩至浓度为0. 05-0. 5g/mL，再调节pH值为1-7， 作为上样液； 步骤3、上样液纯化：将步骤2中的上样液，上NKA-9大孔吸附树脂，用1-10 BV水除杂 后，再用1-10BV的10-95%乙醇洗脱； 步骤4、连续多次经过步骤3的纯化工艺得富集物，将富集物减压干燥至粉末或浸膏， 即得。
2. 如权利要求1所述的夏枯草总黄酮的提取纯化方法，其特征在于，所述步骤2中采用 HCl和NaOH溶液调节pH值为1-7。
3. 如权利要求1所述的夏枯草总黄酮的提取纯化方法，其特征在于，所述步骤3中夏枯 草药材与树脂用量比为〇. 1-1. 〇g/mL。
4. 如权利要求1所述的夏枯草总黄酮的提取纯化方法，其特征在于，所述纯化工艺的 次数为三次。
5. 如权利要求1所述的夏枯草总黄酮的提取纯化方法，其特征在于，所述连续三次纯 化工艺后得到的夏枯草总黄酮纯度大约达到94%以上。
6. 夏枯草总黄酮在制备治疗肝癌药物中的应用。
7. 如权利要求1所述的夏枯草总黄酮的应用，其特征在于，所述夏枯草总黄酮可加入 药学上可接受的辅料或载体，制成不同剂型的治疗肝癌的药物。
【专利摘要】一种夏枯草总黄酮的提取纯化方法，步骤为：（1）取夏枯草药材粉碎过筛，加1-30倍量5-95%的乙醇，回流提取1-3次，每次1-5h，过滤，合并滤液，得提取液；（2）将所述提取液加热浓缩至浓度为0.05-0.5g/mL，再调节pH值为1-7，得上样液；（3）将所述上样液，上NKA-9大孔吸附树脂，用1-10BV水除杂后，再用1-10BV的10-95%乙醇洗脱；（4）连续多次经过步骤3的纯化工艺得富集物，减压干燥至粉末或浸膏，即得。本发明还提供夏枯草总黄酮在制备治疗肝癌药物中的应用，通过药理药效研究表明夏枯草总黄酮具有明显的抗肝肿瘤活性，并呈明显的量效关系，为开发以夏枯草总黄酮富集物为原料的具有广泛临床使用价值和商业开发价值的抗肝肿瘤新药和工业生产提供理论和实验依据。
【IPC分类】A61K36-536, A61P35-00
【公开号】CN104873570
【申请号】CN201510302298
【发明人】孟宪生, 李楠楠, 包永睿, 王帅
【申请人】辽宁中医药大学
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2015年6月5日