一种甘草活性提取物的制备方法及在抑制幽门螺杆菌中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药制备技术领域。
【背景技术】
[0002] 现代社会生活节奏加快、工作压力大以及饮食习惯不健康，加剧了相关胃肠道疾 病的发生率，其中胃癌的发病率和死亡率长期居高不下，极大地威胁着人们的健康。幽门螺 杆菌（Helicobacterpylori)简称Hp，是一种单极、多鞭毛、末端钝圆、螺旋形弯曲的细菌， 在胃粘膜上皮细胞表面常呈典型的螺旋状或弧形。幽门螺杆菌感染是慢性胃炎、溃疡以及 胃黏膜相关淋巴组织瘤的主要致病因素，特别是越来越多的研宄数据表明幽门螺杆菌感染 和胃癌发病有很强的相关性。因此，寻找或者研发有效的幽门螺杆菌抑制剂具有很好的应 用前景，特别是从天然产物来源资源中筛选功效成分。
[0003] 根据《中国药典》说明，甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis FischJK 果甘草Glycyrrhiza inflate Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根和根莖， 春、秋二季采挖，除去须根，晒干。大量研宄表明，甘草可以治疗咳嗽、胃溃疡、口腔溃疡以及 回肠炎、肠易激综合症等，常见药物为甘草片。中国专利CN102552239B公开了一种从甘草 中制备抗炎、抗肿瘤有效成分的方法，中国专利CN102151296B公开了一种从甘草废渣中提 取降血糖活性的成分，中国专利CN102858359B公开了一种药物组分包含醇溶性且非水溶 性的甘草提取物，和至少一种抗肿瘤药或降糖降脂的药物。
【发明内容】
[0004] 本发明目的在于提供一种抑制幽门螺杆菌生长甘草活性提取物的制备方法。
[0005] 本发明通过以下技术方案实现。
[0006] 本发明所述的一种甘草活性提取物的制备方法，其特征是按如下步骤。
[0007] (1)取一定量烘干或自然晒干的甘草(果实)，经中药粉碎机粉碎后待用。
[0008] (2)称取步骤（1)所制备得到的甘草粉末，加入50-95%质量分数的乙醇回流提取， 甘草和乙醇的料液比为1:5~1:25 (kg/L，质量体积比)，于50-70°C温度下水浴提取1~3h， 提取次数为1~2次，得甘草提取液。
[0009] (3)将步骤（2)中的提取液合并，趁热过滤，然后于4800r/m转速下离心15min， 收集上层清液并再次进行抽滤。
[0010](4)将步骤（3)中的滤液置于旋转蒸发仪上浓缩，浓缩温度为45°C，最后用质量分 数为25%的乙醇溶液稀释，经巴氏灭菌后冷却，于4°C条件下密封保存，即可获得甘草活性 提取物。
[0011] 本发明所述的甘草活性提取物在抑制幽门螺杆菌中的应用。
[0012] 本发明的优点是：提供了含有甘草活性提取物的制备方法，甘草是一种传统的药 食两用资源，本发明制备得到的提取物可以作为原料或者产品应用于相关保健食品、药品 等方面，有利于甘草开发和价值提升；制备得到的甘草提取物具有较好地抑制幽门螺杆菌 生长的作用，是一种天然的、植物源的活性提取物；制备工艺简单，成本低，具有广阔的开发 前景。
【具体实施方式】
[0013] 下面对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本 发明一部分实施例，而不是全部的实施例。在不脱离本发明上述思想、方法的情况下，根据 本领域普通技术知识和常规手段做出的各种替换方法或变更，均包含在本发明之内。
[0014] 实施例1。
[0015] 取一定量烘干或自然晒干的甘草，经中药粉碎机粉碎后待用。称上述制备的甘草 粉末70g，加入95%质量分数的乙醇回流提取，料液比为1:10(kg/L，质量体积比)，于70°C 温度下水浴回流提取2h，提取次数为2次，合并提取液，趁热过滤，然后于4800r/m转速下 离心15min，收集上层清液并再次进行抽滤。将上述滤液置于旋转蒸发仪上浓缩，浓缩温度 为45°C，最后用质量分数为25%的乙醇溶液稀释至所得样品提取液对应的生药质量浓度为 Ikg/L，经巴氏灭菌后冷却，于4°C条件下密封保存，即可获得甘草活性提取物A。
[0016] 实施例2。
[0017] 取一定量烘干或自然晒干的甘草，经中药粉碎机粉碎后待用。称取上述制备的甘 草粉末20g，加入70%质量分数的乙醇回流提取，料液比为1:15 (kg/L，质量体积比)，于 50°C温度下水浴回流提取Ih，提取次数为2次，合并提取液，趁热过滤，然后于4800r/m转 速下离心15min，收集上层清液并再次进行抽滤。将上述滤液置于旋转蒸发仪上浓缩，浓缩 温度为45°C，最后用质量分数为25%的乙醇溶液稀释至所得样品提取液对应的生药质量浓 度为Ikg/L，经巴氏灭菌后冷却，于4°C条件下密封保存，即可获得甘草活性提取物B。 [0018] 实施例3。
[0019] 取一定量烘干或自然晒干的甘草，经中药粉碎机粉碎后待用。称取上述制备的甘 草粉末20g，加入50%质量分数的乙醇回流提取，料液比为1:5(kg/L，质量体积比)，于60°C温度下水浴回流提取3h，提取次数为1次，合并提取液，趁热过滤，然后于4800r/m转速下 离心15min，收集上层清液并再次进行抽滤。将上述滤液置于旋转蒸发仪上浓缩，浓缩温度 为45°C，最后用质量分数为25%的乙醇溶液稀释至所得样品提取液对应的生药质量浓度为 Ikg/L，经巴氏灭菌后冷却，于4°C条件下密封保存，即可获得甘草活性提取物C。
[0020] 下面结合具体实验说明本方法制备得到的甘草活性提取物体外抑制幽门螺杆菌 作用。
[0021] 1、幽门螺杆菌来源。
[0022] 选择来自门诊胃病患者胃粘膜标本，实验室保存的国际标准菌株ATCC11637。
[0023] 经电子胃镜检查，取胃窦小弯侧距幽门口约5cm处胃黏膜组织1块，进行胃黏膜 组织幽门螺杆菌（Hp)培养，在Hp培养阳性的患者中，加做药物敏感试验。
[0024] 2、Hp培养及鉴定。
[0025] 将胃组织置于灭菌的组织研磨器中研磨成混匀液，用灭菌滴管，吸取组织混匀液， 接种于含10%绵羊全血哥伦比亚琼脂平板上，37°c，在5% 02、10% 0)2和85% 1的环境中 培养4天，观察结果。结果判定标准：革兰染色阴性，氧化酶试验阳性，触酶试验阳性，尿素 酶试验阳性，氯化三苯四氮唑试验在斜面培养基上菌落呈现金属光泽，符合以上全部者为Hp阳性。
[0026] 3、药物作用实验。
[0027] 选取分离的临床菌株，将菌株进行传代3~4次，扩大培养至实验所需，接种于含 10%绵羊全血哥伦比亚琼脂平板上，打孔，加入甘草乙醇提取物继续培养3天后观察药敏实 验结果，测量抑菌圈直径。
[0028] 4、实验结果。
[0029] 表1甘草活性提取物对幽门螺杆菌体外抑制作用（n=3)
实验结论： 采用不同乙醇浓度提取得到的甘草提取物A、B和C，与25%乙醇对照组相比，体外实验 中均具有较好的抑制幽门螺杆菌生长的作用。
【主权项】
1. 一种甘草活性提取物的制备方法，其特征是按如下步骤： (1) 取一定量烘干或自然晒干的甘草，经中药粉碎机粉碎后待用； (2) 称取步骤（1)所制备得到的甘草粉末，加入50-95%质量分数的乙醇回流提取，甘 草和乙醇的料液比（1^/1)为1:5~1 :25，于50-701：温度下水浴提取1~3 11，提取次数为1~2 次，得甘草提取液； (3) 将步骤（2)中的提取液合并，趁热过滤，然后于4800r/m转速下离心15min，收 集上层清液并再次进行抽滤； (4) 将步骤（3)中的滤液置于旋转蒸发仪上浓缩，浓缩温度为45°C，最后用质量分数为 25%的乙醇溶液稀释，经巴氏灭菌后冷却，于4°C条件下密封保存，即可获得甘草活性提取 物。2. 权利要求1所述的甘草活性提取物在抑制幽门螺杆菌中的应用。
【专利摘要】一种甘草活性提取物的制备方法及在抑制幽门螺杆菌中的应用，按如下步骤：（1）取烘干或自然晒干的甘草，粉碎机粉碎；（2）称取甘草粉末，加入质量分数为50-95%的乙醇回流提取，甘草和乙醇的料液质量体积（kg/L）比为1:5~1:25， 50-70℃，水浴提取1~3 h，提取1~2次，得甘草提取液；（3）将甘草提取液合并，趁热过滤，离心，收集上层清液，抽滤；（4）将45℃滤液浓缩，用质量分数为25%的乙醇溶液稀释，巴氏灭菌后冷却，4℃密封保存。本发明甘草活性提取物，具有抑制幽门螺杆菌的作用，是一种天然的、植物源性的活性提取物，可以作为原料或者产品应用于保健食品、药品等方面；制备工艺简单，成本低。
【IPC分类】A61P31/04, A61K36/484, A23L1/29
【公开号】CN104887745
【申请号】CN201510276906
【发明人】谢明勇, 殷军艺, 王小银, 聂少平
【申请人】南昌大学
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年5月27日