一种桔梗皂甙的提取方法
【专利说明】
[0001]本发明属于生物技术领域，涉及一种生物酶解技术与大孔吸附树脂相结合的方法提取、纯化桔梗皂甙。
【背景技术】
[0002]桔梗(学名:Platycodon grandiflorus，英语:Balloon Flower)，别名包揪花、铃铛花、僧帽花，桔梗科桔梗属植物，多年生草本，叶子卵形或卵状披针形，花暗蓝色或暗紫白色，可作观赏花丼；朝鲜族人用作野菜食用；其根可入药，有止咳祛痰、宣肺、排脓等作用，中医常用药。
[0003]桔梗所含的化学成分为:根含多种皂甙，迄今已分得18种三萜皂甙，它们是;桔梗阜式(platycodin) A、C、D、D2、D3，去序菜糖基桔梗阜式(deap1platycodin)D、D3，2-0-=乙酰基桔梗皂甙(2-0-acetylplatycodin) D2，3_0_乙酰基桔梗皂甙(3-0-acetylplaty-codin) D2,远志阜式(polyglalacin) D、D2，2_0-乙酰基远志阜式(2-0-acetylpolygalacin) D、D2，3_0-乙酰基远志阜 ft (3-0-acetylpolygalacin)D、D2，桔梗式酸-A甲醋(methyl platyconate-A)，2_0_甲基桔梗式酸-A甲醋(methyl-2-O-methyplatyconate-A)，桔梗式酸-A 内醋(platyconic acid-A lactone),其中主成分是桔梗皂甙D，桔梗皂甙A又叫做2-0-乙酰基桔梗皂甙D，桔梗皂甙C又叫做3-0-乙酰基桔梗皂甙D。多种混合皂甙经完全水解所产生的皂甙元有:桔梗皂甙元(platycodigenin)，远志酸(polygalacic acid)，以及少量的桔梗酸(platycogenic acid)A、B、C ;
皂苷(saponin)别称:碱皂体、皂素、皂甙、皂角苷或皂草苷。“皂苷” 一词由英文名Saponin意译而来，英文名则源于拉丁语的Sapo，意为肥阜。阜苷(Saponin)是苷元为三酿或螺旋留烷类化合物的一类糖苷，主要分布于陆地高等植物中，也少量存在于海星和海参等海洋生物中。许多中草药如人参、远志、桔梗、甘草和柴胡等的主要有效成分都含有皂苷。有些皂苷还具有抗菌的活性或解热、镇静、抗癌等有价值的生物活性。
[0004]经现代研宄证明，桔梗皂甙具有的药理作用:1.祛痰与镇咳作用；2.抑制胃液分泌和抗溃疡作用；3.抗炎作用；4.对循环系统的作用；5.其他作用，粗桔梗皂甙有镇静、镇痛和解热作用。
[0005]目前，在我国有关提取桔梗皂甙的工艺文献和专利很多，其主要是采取溶剂浸提，超声波提取，这两种方法制备的桔梗皂甙不仅提取率低，而且纯度不高。本发明采用生物酶解技术与大孔吸附树脂相结合的方法提取、纯化桔梗皂甙，可以很好地解决这些问题。
【发明内容】
[0006]本发明的目的是为了弥补现有提取桔梗皂甙的技术不足和缺陷，提供一种操作简单、提取效率高、所得纯度高、污染小的桔梗皂甙的提取方法。
[0007]为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案:
I)将桔梗烘干，粉碎，过20~60目筛； 2)称取一定量的桔梗粉末加水浸润，然后加入桔梗粉末重量0.5%-2%的生物酶进行酶解处理；
3)在步骤(2)所得物料中加入乙醇水溶液回流提取，得到提取液；
4)将提取液过滤，滤渣重复提取2-3次，合并提取液，减压浓缩成浸膏状；
5)将步骤(4)中所得浸膏用水溶解，并将溶解液上大孔吸附树脂柱、60°/『70%的乙醇洗脱，收集洗脱液减压浓缩，干燥，即得桔梗皂甙。
[0008]步骤2)中所述的粉末与水的质量体积比为1:0.5-1，浸泡时间为20-60分钟。
[0009]步骤2)中所述的生物酶为纤维素酶、淀粉酶、半纤维素酶和果胶酶中的一种，酶解时的温度设定在30-45°C，酶解时间为2-4小时。
[0010]步骤3)中所述的乙醇水溶液浓度为50%-70%，体积为粉末重量的3-6倍。
[0011]步骤5 )中所述的大孔吸附树脂为 X-5、AB-8、NK-2、NKA-2、NK-9、D3520、D101、WLD中的一种。
[0012]步骤5)中所述洗脱过程为先用2~4倍柱体积水洗去糖分，然后用2~5倍柱体积、10%~20%乙醇洗去部分杂质，最后用2~5倍柱体积、60%~70%的乙醇洗脱，收集洗脱液。
[0013]采用本方法生产桔梗皂甙，利用生物酶解技术与大孔吸附树脂相结合的方法，充分破坏细胞壁，增加和加快了活性成分的流出，通过大孔吸附树脂柱纯化过程，不仅大大提高了桔梗皂甙的纯度，而且大孔吸附树脂可以回收再利用，从而降低了生产成本。该工艺简便易操作、提取效率高、污染小、所得产品纯度高、易于实现工业化生产。
[0014]下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
[0015]【具体实施方式】:
实施例1:
取新鲜的桔梗烘干、粉碎、过20目筛。称取桔梗粉末50克放入提取器中，加入25毫升的水浸泡20分钟，然后加入0.25克的果胶酶试剂，在温度为30°C的条件下酶解2分钟，收集酶解原料，然后加入250毫升60%的乙醇水溶液回流提取，滤渣提取2次，合并3次滤液，减压浓缩成浸膏，将所得浸膏溶解，并将溶解液倒入X-5大孔吸附树脂柱中，先用2倍柱体积水洗去糖分，然后用2倍柱体积、10%乙醇洗去部分杂质，最后用2倍柱体积、60%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液减压浓缩，干燥，即得总皂苷。经检测总皂苷的含量为88.53%，总皂苷的提取率为57.5%。
[0016]实施例2:
取新鲜的桔梗烘干、粉碎、过40目筛。称取桔梗粉末50克放入提取器中，加入30毫升的水浸泡40分钟，然后加入0.5克的果胶酶，在温度为40°C的条件下酶解3分钟，收集酶解原料，然后加入250毫升60%的乙醇水溶液回流提取，滤渣提取2次，合并3次滤液，减压浓缩减压浓缩成浸膏，将所得浸膏溶解，并将溶解液倒入D3520大孔吸附树脂柱中，先用3倍柱体积水洗去糖分，然后用4倍柱体积、15%乙醇洗去部分杂质，最后用4倍柱体积、65%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液减压浓缩，干燥，即得总皂苷。经检测总皂苷的含量为89.13%，总皂苷的提取率为60.52%。
[0017]实施例3:
取新鲜的桔梗烘干、粉碎、过60目筛。称取桔梗粉末50克放入提取器中，加入50毫升的水浸泡60分钟，然后加入Ig克的生物酶试剂，在温度为45°C的条件下酶解4分钟，收集酶解原料，然后加入250毫升60%的乙醇水溶液回流提取，滤渣提取3次，合并4次滤液，减压浓缩成浸膏，将所得浸膏溶解，并将溶解液倒入AB-8大孔吸附树脂柱中，先用4倍柱体积水洗去糖分，然后用5倍柱体积、20%乙醇洗去部分杂质，最后用5倍柱体积、70%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液减压浓缩，干燥，即得总皂苷。经检测总皂苷的含量为90.55%，总皂苷的提取率为61.45%ο
【主权项】
1.一种桔梗皂甙的提取方法，其特征在于采用以下步骤: 1)将桔梗烘干，粉碎，过20~60目筛； 2)称取一定量的桔梗粉末加水浸润，然后加入桔梗粉末重量0.5%-2%的生物酶进行酶解处理； 3)在步骤(2)所得物料中加入乙醇水溶液回流提取，得到提取液； 4)将提取液过滤，滤渣重复提取2-3次，合并提取液，减压浓缩成浸膏状； 5)将步骤(4)中所得浸膏用水溶解，并将溶解液上大孔吸附树脂柱、60°/『70%的乙醇洗脱，收集洗脱液减压浓缩，干燥，即得桔梗皂甙。2.根据权利要求1所述的桔梗皂甙的提取方法，其特征在于:步骤2)中所述的粉末与水的质量体积比为1:0.5-1，浸泡时间为20-60分钟。3.根据权利要求1所述的桔梗皂甙的提取方法，其特征在于:步骤2)中所述的生物酶为纤维素酶、淀粉酶、半纤维素酶和果胶酶中的一种，酶解时的温度设定在30-45?，酶解时间为2-4小时。4.根据权利要求1所述的桔梗皂甙的提取方法，其特征在于:步骤3)中所述的乙醇水溶液浓度为50%-70%，体积为粉末重量的3-6倍。5.根据权利要求1所述的桔梗皂甙的提取方法，其特征在于:步骤5)中所述的大孔吸附树脂为 X-5、AB-8、NK-2、NKA-2、NK-9、D3520、DlOUffLD 中的一种。6.根据权利要求1所述的桔梗皂甙的提取方法，其特征在于:步骤5)中所述洗脱过程为先用2~4倍柱体积水洗去糖分，然后用2~5倍柱体积、10%~20%乙醇洗去部分杂质，最后用2~5倍柱体积、60%~70%的乙醇洗脱，收集洗脱液。
【专利摘要】本发明公开了一种桔梗皂甙的提取方法。方法步骤如下：1）将桔梗烘干，粉碎，过筛；2）称取一定量的桔梗粉末加水浸润，然后加入桔梗粉末重量0.5%-2%的生物酶试剂进行酶解处理；3）酶解完成后，加入乙醇水溶液回流提取，得到提取液；4）将提取液过滤，滤渣重复提取，合并提取液，减压浓缩成浸膏状；5）将浸膏溶解并将溶解液上大孔吸附树脂柱洗脱，收集洗脱液减压浓缩，干燥，即得桔梗皂甙。采用本发明制备桔梗皂甙，工艺操作简单、生产成本低、所得产品纯度高。
【IPC分类】A61K36/34
【公开号】CN104906165
【申请号】CN201510263738
【发明人】刘东锋, 杨成东
【申请人】南京泽朗医药科技有限公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年5月22日