一种银黄颗粒的制备方法及应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药制剂技术领域，具体涉及一种银黄颗粒的制备方法及应用。
【背景技术】
[0002] 银黄颗粒记载于中国药典标准，处方为金银花100g、黄苳150g，采用水提醇沉的 方法制备，用于急慢性扁桃体炎，急慢性咽喉炎，上呼吸道感染，开水冲服，一次1袋，一日3 次，20日为一个疗程，每袋装20g。
[0003] 现有技术中，尚未有银黄颗粒在提取制备方面采用超临界技术的报道，而采用水 提取等方法，工艺粗糙、复杂、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响了本 品在临床上应用。
【发明内容】
[0004] 发明目的：为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种银黄颗粒的制备方法。
[0005] 本发明的另一个目的在于提供一种银黄颗粒在制备抑制人血管内皮细胞EC-304 增殖药物中的应用。
[0006] 技术方案：本发明的目的是通过如下的方案实现的：
[0007] -种银黄颗粒的制备方法，由金银花100g、黄芩150g作为原料药制成，所述的方 法由下列步骤组成：取上述药材加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总 萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50°C，C02流量l-3ml/g生 药· min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，制粒，制备成颗粒剂，每袋重20g。
[0008] 所述银黄颗粒的制备方法，所述C02超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分 比为5%。
[0009] 所述银黄颗粒的制备方法，所述C02超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40°C，C02 流量2ml/g生药· min，萃取时间160min。
[0010] 所述银黄颗粒在制备抑制人血管内皮细胞EC-304增殖药物中的应用，银黄颗粒 由金银花l〇〇g、黄芩150g作为原料药制成，制备方法为：取金银花100g、黄芩150g，加入到 C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取 压力15-30MPa，温度30-50°C，C02流量l-3ml/g生药· min，萃取时间150-180min，得超临 界萃取物，制粒，制备成颗粒剂，每袋重20g。
[0011] 所述银黄颗粒在制备抑制人血管内皮细胞EC-304增殖药物中的应用，其特征在 于银黄颗粒的制备方法中所述C02超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
[0012] 所述银黄颗粒在制备抑制人血管内皮细胞EC-304增殖药物中的应用，其特征在 于银黄颗粒的制备方法中所述C02超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40°C，C02流量2ml/ g生药· min，萃取时间160min。
[0013] 现有技术中，银黄颗粒每袋20g，口服，一次1袋，一日3次，采用本发明制备成的银 黄颗粒每袋20g，但含有的药材量比原来多，在同样服用量的情况下具有更多活性成分。
【具体实施方式】
[0014] 以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此 理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均 属于本发明的范围。
[0015] 实施例1 :取金银花100g、黄芩150g，加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带 剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%，萃取压力30MPa，温度30°C，C02流量Iml/ g生药· min，萃取时间180min，得超临界萃取物，粉碎成细粉，制粒，制备成颗粒齐I」，每袋重 3g〇
[0016] 实施例2 :取金银花100g、黄芩150g，加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带 剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为6%，萃取压力15MPa，温度50°C，C02流量Iml/ g生药· min，萃取时间180min，得超临界萃取物，粉碎成细粉，制粒，制备成颗粒齐I」，每袋重 3g〇
[0017] 实施例3 :取金银花100g、黄芩150g，加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带 剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力20MPa，温度40°C，C02流量2ml/ g生药· min，萃取时间160min，得超临界萃取物，粉碎成细粉，制粒，制备成颗粒齐lj，每袋重 3g〇
[0018] 实施例4 :银黄颗粒抑制人血管内皮细胞EC-304增殖的实验研宄资料
[0019] 1实验材料
[0020] I. 1实验用细胞株：人血管内皮细胞EC-304,南京医科大学实验室细胞库， DMEM+10% FBS常规培养。
[0021] 1. 2实验药物：研宄药物：本发明银黄颗粒：按实施例3方法制备。药液储液：称 取IOOmg银黄颗粒内容物，混悬于5ml无水乙醇中，0. 2 μ m滤器过滤，500 μ I doff管分 装，-20°C存储，同时0. 2 ym滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
[0022] L 3 实验试剂：DMEM(GIBCO 公司 Cat. No. 12100-061Lot. No. 758137);胎牛血清 (浙江天杭生物科技有限公司Lot. No. 100419) ;NaHC03(上海久亿化学试剂有限公司Cat. No.11810-033Lot. No. 1088387) Jrypsin(AMRESC0 公司批号：2010/04) ;EDTA(AMRESCO 公司批号：2009/10) ;Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0公司批号：2010242); Str印tomycin Sulfate(AMRESO)公司批号：2010382);无水乙醇（南京化学试剂有限公司 批号：080310182) ;MTT(Biosharp 批号：0793) ;PBS(实验室自配）；
[0023] 1. 4实验器材：莱卡倒置显微镜（德国Leica型号：DMlL);可见-紫外光微孔板检 测仪（美国MD公司型号：SPECTRA MAX 190) ;C02培养箱（FORMA型号：3111);超净台（苏 净集团安泰公司制造型号：SW-CJ-ZFD);纯水仪（美国Spring公司型号：S/N 020579);精 密移液器（法国吉尔森公司型号：P2);电子天平（德国赛多利斯有限公司型号：BT323S); 全自动高压灭菌锅（日本SANK)公司型号：MLS-3020);台式电热鼓风干燥箱（上海精密 实验设备公司型号：DHG9123A);冰箱（西门子公司型号：KG18V21TI);液氮罐（CBS型号： 2001);低速离心机（上海安亭科学仪器厂型号：KA-1000) ;0. 2μπι滤器（MILLIP0RE型号： SLGP033RB) ;10cm培养皿（NEST公司）、96孔培养板（NEST公司）；细胞计数板；离心管、移 液管、Tips若干。
[0024] 2实验方法：l)EC-304细胞用DMEM+10%FBS于37°C、5%C02进行常规培养（10cm 培养皿），当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml0. 25%胰 蛋白酶-0. 04% EDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后 将其转入离心管中，1000 rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3 X 104个/ml。2)将细胞种入96 孔培养板中，每孔加入细胞悬液180μ1，培养板放入细胞培养箱中（37°C，5%C02)常规培 养。3)根据细胞生长情况，一般长至50%-70%，加入银黄颗粒溶液，继续培养24h。4) 24h 后加入20 μ I MTT溶液（5mg/ml，即0. 5% MTT)，继续培养4h。5) 4h后扣板法倒去上清，用 吸水纸轻轻拍干，每孔加入200 μ 1二甲基亚砜，置摇床上低速振荡lOmin，使结晶物充分溶 解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。6)同时设置本底（不加细胞，只加培 养液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定6个 复孔。7)结果以药物对细胞的抑制率表示：细胞增值抑制率（％) = (对照孔OD值-给药 孔OD值）/对照孔OD值X 100%。实验重复3次。
[0025] 3实验结果：MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对 EC-304细胞增殖抑制有差异（P〈0. 05)，剂量在10mg/ml时该差异具有显著性（P〈0. 01)，当 剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异（P〈0. 001)。
[0026] 表1银黄颗粒对人血管内皮细胞EC-304增殖抑制影响研宄（X 土 SD)
[0029] 注：与对照组比较，*P〈0. 01 ;#P〈0. 001
[0030] 4实验结论：银黄颗粒可以抑制人血管内皮细胞EC-304增殖，减少人血管内皮细 胞EC-304的细胞生长数目，该作用呈剂量依赖性。
【主权项】
1. 一种银黄颗粒的制备方法，由金银花l〇〇g、黄苳150g作为原料药制成，其特征在 于所述的方法由下列步骤组成：取上述药材加入到〇)2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂， 夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50°C，CO2流量 l-3ml/g生药?min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，粉碎成细粉，制粒，制备成颗粒 剂，每袋重20g。2. 根据权利要求1所述银黄颗粒的制备方法，其特征在于所述CO2超临界萃取夹带剂 占总萃取溶剂的体积百分比为5%。3. 根据权利要求1所述银黄颗粒的制备方法，其特征在于所述CO2超临界萃取的萃取 压力20MPa，温度40°C，CO2流量2ml/g生药?min，萃取时间160min。4. 根据权利要求1所述银黄颗粒在制备抑制人血管内皮细胞EC-304增殖药物中的应 用，其特征在于银黄颗粒由金银花l〇〇g、黄芩150g作为原料药制成，制备方法为：取金银花 100g、黄芩150g加入到0)2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积 百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50°C，C02流量l-3ml/g生药.min,萃取时间 150-180min，得超临界萃取物，粉碎成细粉，制粒，制备成颗粒剂，每袋重20g。5. 根据权利要求4所述银黄颗粒在制备抑制人血管内皮细胞EC-304增殖药物中的应 用，其特征在于银黄颗粒的制备方法中所述CO 2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百 分比为5%。6. 根据权利要求4所述银黄颗粒在制备抑制人血管内皮细胞EC-304增殖药物中的应 用，其特征在于银黄颗粒的制备方法中所述〇)2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40°C， CO2流量2ml/g生药?min，萃取时间160min。
【专利摘要】本发明属于中药制剂领域，具体提供一种银黄颗粒的制备方法，由金银花100g、黄芩150g作为原料药制成，采用超临界萃取制备而成，使得含量有很大提高，用量减少，本发明还提供了银黄颗粒在制备抑制人血管内皮细胞EC-304增殖药物中的应用。
【IPC分类】A61K9/16, A61K36/539, A61P35/00
【公开号】CN104922208
【申请号】CN201510362968
【发明人】赵明亮
【申请人】赵明亮
【公开日】2015年9月23日
【申请日】2015年6月28日