乌拉贝宁在制备抗菌药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药领域，涉及乌拉贝宁及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 乌拉贝宁（Uralenin)，又名爱斯形刺桐素B，分子式为C2QH2Q06，分子量为356. 37， mp. 217-218°C，结构式为：
乌拉贝宁主要存在于豆科植物爱斯形刺桐Hua的莖皮.、甘草 Fisch.的地上部分及叶中，其中甘草叶中含量最高。药理研宄 表明，乌拉贝宁具有较强的抗格兰阳性菌作用，对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的抑菌浓度 为50ppm;在固体培养基中对环状芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等的抑菌作用比SigmoidinA 强，在液体培养基的抑制作用比SigmoidinA弱。另外，乌拉贝宁还具有抗氧活性，可抑制 巨噬细胞超氧化物的产生。
[0003] 通过文献检索，国内尚未见乌拉贝宁用于制备抗菌药物或保健品。
【发明内容】
[0004] 为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗细菌感染疾病，应用乌拉贝宁制备抗 菌药物或保健品。
[0005]乌拉贝宁的结构分析：MSm/z:356 (M+，70)，339 (13)，300 (8)，204 (20)，191 (93)， 153 (100),148 (45),123 (18),91 (30),69 (45),55 (30),41 (68)〇
[0006] 上述乌拉贝宁的制备方法，包括以下步骤： 以甘草叶为原料，放入高速组织捣碎机中，在l〇〇〇〇rpm条件下保持lOmin后，取出，加 入一定量的水，再加入0.5%的纤维素酶，在超声功率400-7001、35-40°〇条件下酶解30111111， 再低温干燥，加入乙醇加热回流，合并回流液，滤过，取滤液，减压回收乙醇至尽，用正丁醇 和水的混合溶液进行5-6级逆流萃取，合并萃取液，减压浓缩，加到氧化镁柱层析，正己 烷-乙酸乙酯洗脱，收集含乌拉贝宁的洗脱液，减压回收试剂并干燥即得。
[0007] 所述多级逆流萃取步骤中，正丁醇和水的体积比为10:1。
[0008] 所述正己烷-乙酸乙酯洗脱，按正己烷-乙酸乙酯体积比5:1、3:1、1:1、1:3进行 梯度洗脱 本发明用于制备抗菌药物时，其口服或非口服给药均是安全有效的。口服给药可以制 成任何常规剂型，如：散剂、颗粒、胶囊、片、口崩片、滴丸、软胶囊等；非口服给药，可制成各 种常规剂型，如注射液等。
[0009] 本发明用于制备抗菌药物时，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，包含中链脂肪 酸盐、胆酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。
[0010] 本发明用于制备抗菌药物时，其辅料及制备方法可选用任何药学可接受的形式。
[0011] 下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0012] 实施例1 : 取甘草叶2kg先切成小段，再放入高速组织捣碎机中，在lOOOOrpm条件下保持lOmin后，加入6kg水，再加入0. 5%纤维素酶，在超声功率500W、38°C条件下酶解30min，再在65°C 干燥，加入8L60%乙醇加热回流提取1次，提取2h，收集提取液，过滤，滤液减压回收乙醇至 尽，用体积比为10:1的正丁醇-水混合溶液进行5级逆流萃取，合并萃取液，减压回收试 剂，将浓缩液加入氧化镁柱层析(浓缩液与氧化镁用量比为1:3)，按正己烷-乙酸乙酯体积 比5 :1、3:1、1:1、1:3进行梯度洗脱，每个梯度用量400ml，收集合并乌拉贝宁流分，减压浓 缩干燥、粉碎制得乌拉贝宁白色粉末，含量为92. 4%。
[0013] 实施例2: 取甘草叶2kg先切成小段，再放入高速组织捣碎机中，在lOOOOrpm条件下保持lOmin后，加入6kg水，再加入0. 5%纤维素酶，在超声功率700W、40°C条件下酶解30min，再在70°C 干燥，加入10L70%乙醇加热回流提取3次，提取1. 5h，收集提取液，过滤，滤液减压回收乙醇 至尽，用体积比为10:1的正丁醇-水混合溶液进行6级逆流萃取，合并萃取液，减压回收试 剂，将浓缩液加入氧化镁柱层析(浓缩液与氧化镁用量比为1:5)，按正己烷-乙酸乙酯体积 比5 :1、3:1、1:1、1:3进行梯度洗脱，每个梯度用量400ml，收集合并乌拉贝宁流分，减压浓 缩干燥、粉碎制得乌拉贝宁白色粉末，含量为94. 9%。
[0014] 实施例3: 取甘草叶2kg先切成小段，再放入高速组织捣碎机中，在lOOOOrpm条件下保持lOmin后，加入10kg水，再加入0. 5%纤维素酶，在超声功率400W、35°C条件下酶解30min，再在 75°C干燥，加入6L65%乙醇加热回流提取2次，提取2h，收集提取液，过滤，滤液减压回收乙 醇至尽，用体积比为10:1的正丁醇-水混合溶液进行5级逆流萃取，合并萃取液，减压回收 试剂，将浓缩液加入氧化镁柱层析(浓缩液与氧化镁用量比为1:4)，按正己烷-乙酸乙酯体 积比5 :1、3:1、1:1、1:3进行梯度洗脱，每个梯度用量400ml，收集合并乌拉贝宁流分，减压 浓缩干燥、粉碎制得乌拉贝宁白色粉末，含量为92. 9%。
[0015] 实施例4: 为了更好的理解本发明的实质，下面将用乌拉贝宁的药理实验及药理来说明其在制药 和保健品中的用途。
[0016] 1、受试提取物：乌拉贝宁提取物 (1)性状：白色粉末，味苦。
[0017] (2)规格：含乌拉贝宁彡90%。
[0018] (3)溶剂：乙醇或甲醇。
[0019] (4)储存条件：4°C，密封保存。
[0020] 2、抗菌作用 (1)实验材料：供试菌种，金黄色葡萄球菌，由南京大学生命科学学院实验室提 供，LS-S11全自动立式电热压力蒸汽灭菌器，上海博讯实业有限公司医疗设备厂； GZX-9246MBE电热恒温鼓风干燥箱，上海博讯实业有限公司医疗设备厂。
[0021] (2)实验方法与结果：采用液体培养基法，取乌拉贝宁，用甲醇配置成不同浓度 (2-50yg/ml)的溶液，分别加入液体培养基和金黄色葡萄球菌菌悬液，同时以水和甲醇作 为对照，加入金黄色葡萄球菌菌悬液，搅拌均匀，于37°C恒温震荡8小时，测定吸光度值，各 样品吸光值均出现较大程度下降，结果如下： 表1乌拉贝宁的抗菌实验结果(液体培养法）
液体菌悬液的吸光度降低，说明样品有一定的抗金黄色葡萄球菌的能力，从表1可以 看出，加样菌悬液的吸光度低于水和甲醇对照菌悬液，表明乌拉贝宁对金黄色葡萄球菌有 明显抑制作用，具有一定的应用前景。
[0022] 抑菌成分热稳定性实验：将乌拉贝宁分别置于8 0、10 0、12 0 °C条件下热处理 20min，取金黄色葡萄球菌，测定其吸光值大小，结果无显著差异，表明乌拉贝宁热稳定性良 好。
[0023] 实施例5 : 片剂：乌拉贝宁40g，淀粉135g，鹅去氧胆酸盐25g，制粒，压片制成1000片。服用方法： 成人一次1片，一日2次。
[0024] 实施例6 : 胶囊：乌拉贝宁40g，淀粉135g，壳聚糖25g，混匀，制成1000粒。服用方法：成人一次 1粒，一日2次。
【主权项】
1.结构式如下所示的乌拉贝宁在制备抗菌药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了从甘草叶中分离得到的乌拉贝宁在制备抗菌药物中的应用。乌拉贝宁的制备方法包括以下步骤：以甘草叶为原料，放入高速组织捣碎机中，在10000rpm条件下保持10min后，取出，加入一定量的水，再加入0.5%的纤维素酶，在超声功率400-700W、35-40℃条件下酶解30min，再低温干燥，加入乙醇加热回流，合并回流液，滤过，取滤液，减压回收乙醇至尽，用正丁醇和水的混合溶液进行5-6级逆流萃取，合并萃取液，减压浓缩，加到氧化镁柱层析，正己烷-乙酸乙酯洗脱，收集含乌拉贝宁的洗脱液，减压回收试剂并干燥即得。制备得到的乌拉贝宁可用于制备抗菌药物。
【IPC分类】A61P31/04, A61K31/352
【公开号】CN104940186
【申请号】CN201510263707
【发明人】刘东锋, 杨成东
【申请人】南京泽朗医药科技有限公司
【公开日】2015年9月30日
【申请日】2015年5月22日