一种microRNA在制备治疗流感的药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，具体的，涉及一种microRNA在制备治疗流感的药物中 的应用。
【背景技术】
[0002] microRNA(小RNA)是一段由20-24个碱基组成的微小RNA，其在植物、动物、微生 物以及部分病毒中广泛存在。microRNA在体内的作用主要是通过转录后调节的方式对靶 mRNA的翻译过程进行调节。调节模式在不同物种中有所差异，在植物中microRNA主要和靶 标mRNA完全互补来调控mRNA翻译，与此不同的是在动物体内microRNA只需要种子区序列 与靶基因mRNA序列互补配对即有可能对该基因进行调控。
[0003] 甲型流感病毒（Influenza A)是一类严重威胁人类健康的RNA病毒，甲型流感病 毒为常见流感病毒，最容易发生变异，甲型流感病毒的亚型则被人们称为"禽流感"，禽流感 (Bird Flu)是由禽流感病毒引起的一种急性传染病，病毒基因变异后能够感染人类，感染 后的症状主要表现为高热、咳嗽、流涕、肌痛等，多数伴有严重的肺炎，严重者心、肾等多种 脏器衰竭导致死亡，病死率很高。此病可通过消化道、呼吸道、皮肤损伤和眼结膜等多种途 径传播，人员和车辆往来是传播本病的重要因素。
[0004] miR_23a位于人体第19号染色体上，与miR-24和miR_27a构成一个microRNA基 因簇。该microRNA基因簇拥有单独的启动子序列，能够独立进行转录。目前对于miR-23a 的研宄有报道认为其可以通过抑制转录因子PU. 1来抑制B淋巴细胞的发育和成熟。也证据 表明miR-23a可以靶向SHP2基因，通过降低SHP2表达来促进红细胞的的生成。c-Myc作为 转录因子能够和miR-23a基因簇上的启动子区结合从而抑制该microRNA基因簇的转录达 到基因调节的功能。例如在肿瘤细胞中c-Myc抑制miR-23a的表达使得其祀标分子谷氨酰 胺酶上调最终影响癌细胞代谢。除了c-Myc信号通路之外，NFkb信号通路中的p65蛋白也 可以与miR-23a基因簇上的启动子区结合抑制miR-23a的表达。近期也有研宄表明在激活 的⑶8阳性T细胞中miR-23a表达下调，而抑制miR-23a的表达能够提高T细胞对肿瘤细胞 的杀伤能力。在人血管内皮细胞中miR_23a能够通过革E1向Caspase7和STK4降低Caspase3 的水平从而抵抗由TNFa引起的凋亡作用。但是目前还没有用miR_23a抑制流感病毒的相 关报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种抑制流感病毒的含有miRNA的药物组合物，从而为治 疗流感病毒提供一种有效途径。
[0006] 流感病毒具有突变能力强的特点，因此特异性的靶向作用不足以应对流感病毒突 变。microRNA是一段小片段RNA其主要通过非完全匹配的方式来调苄基因表达，因此可以 有效避免由于病毒突变引发的脱靶作用。
[0007] 本发明的发明人在研宄抑制流感病毒的治疗方法的过程中发现miR-23a具有抗 流感作用。
[0008] 因此，本发明提供了 miR_23a在制备治疗流感的药物中的应用。
[0009] 可选的，所述应用包括制备抗流感病毒的药物。
[0010] 可选的，所述流感病毒为甲型流感病毒。
[0011] 可选的，包括将miR-23a与药学可接受的载体复配制成药物组合物。
[0012] 可选的，所述药物组合物以mir-23a为活性成分。
[0013] 可选的，所述药物组合物含有miR-23a和药学可接受的载体。
[0014] 可选的，所述组合物还含有治疗和/或预防流感的其它活性成分。
[0015] 可选的，所述载体为inviv〇-jetPEI〇
[0016] 本发明所提供的药物组合物能够通过miR_23a来抑制流感病毒以减轻流感病毒 的致死率，可以降低由病毒突变带来的负面影响。
【附图说明】
[0017] 图1为miR_23a的激动剂和拮抗剂对C57小鼠体重的影响。
[0018] 图2为miR-23a的激动剂和拮抗剂对C57小鼠体温的影响。
[0019] 图3为miR-23a的激动剂和拮抗剂对C57小鼠生存率的影响。
【具体实施方式】
[0020] 下面将通过【具体实施方式】对本发明进行详细说明。
[0021] 在本发明中，术语"miR-23a "是指包含miR-23a的RNA序列或其同源序列的微 小RNA。本领域中已知各种来源的miR-23a，例如，人、鼠、兔等，这些同源序列均包含在本 发明的术语miR-23a中。本发明的术语中还包含上述天然存在的miR-23a序列经取代、缺 失或添加一个或几个核苷酸，或经过生物学化学修饰后仍具有miR-23a生物活性的衍生 RNA。本发明中，人工合成的以及可以通过购买市售商品方式获得的具有miR-23a生物学活 性的miR-23a模拟物也属于本发明的保护范围。例如，一种本领域公知的miR-23a模拟物 miR-23aagomir 的序列如 SEQ ID No. 1 所示（吉玛基因，目录号：B06001) :AUCACAUUGCCAGG GAUUUCCAAAUCCCUGGCAAUGUGAUUU
[0022] 此外，本发明所述的miR-23a也可以为前体形式，miR-23a前体是指在被施用对象 的细胞内或体内可以被加工成为miR-23a的前体。获得天然存在的miR-23a前体的方法为 本领域技术人员所公知。
[0023] 本领域技术人员公知，miR-23a的编码基因位于人体第19号染色体上，与miR-24 和miR-27a构成一个microRNA基因簇。其初始转录产物经过一系列的加工后，形成成熟的 miR-23a。miR-23a前体只有在加工成成熟的miR-23a后才具有相应的生物学功能。
[0024] 本发明所提供的组合物可以用于预防和/或治疗流感病毒感染、以及由流感病毒 感染引起的相关症状和疾病。所述组合物中含有有效量的本发明的miR-23a。
[0025] 在本发明中，所述药物可接受的载体包括各种赋形剂、稀释剂和佐剂。载体其本身 并不是必要的活性成分，且使用后没有过分的毒性。这类载体包括但不限于：生理盐水、缓 冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇等。
[0026] 在本发明的一种实施方式中，所述载体为inviv〇-jetPEI，miR_23a与该载体的混 合比例范围为1 y g :〇. 15-0. 2 y 1，优选的比例为1 y g:0. 2 y 1.
[0027] 在本发明的一种实施方式中，所述组合物的形式适合于：直接裸RNA注射法、脂质 体包裹RNA直接注射法、繁殖缺陷细菌携带质粒DNA法或复制缺陷腺病毒携带目的DNA法 等。
[0028] 本发明的miR_23a的有效剂量可以随给药的模式和待治疗的疾病的严重程度等 进行相应的调整。优选的有效量的选择可以由本领域普通技术人员综合各因素来确定。所 述因素包括但不限于：miR-23a的药代动力学参数、被治疗的患者的健康状况、体重、给药 途径等。
[0029] 在本发明的一种实施方式中，该药物组合物主要剂型为等渗葡萄糖水溶液，大致 在疾病发展中期阶段给药，每两天给药一次，每次给药按照miR-23a核酸剂量38-42 y g进 行。
[0030] 本发明中，所述药物组合物的给药途径为静脉内、动脉内灌注或局部注射等，也可 以采用本领域技术人员所熟知的给药技术进行给药。
[0031] 本发明的药物组合物可以与其它治疗手段联合，用于流感病毒的预防和治疗。
[0032] 实施例1
[0033] (1)实验材料：所用C57小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司；miR_23a 激动剂（miR_23a agomir，目录号：B06001)和诘抗剂（miR_23a antagomir，目录号： B05001)均购自吉玛基因。
[0034] (2)共3组实验，每组10只小鼠分别于病毒感染流感病毒A/WSN/33(H1N1)前1天 以及感染后第1、3、5、7天注射agomir和antagomir，注射剂量为20D/只/次（200微升尾 静脉注射），流感病毒通过滴鼻方式接种，接种剂量为2500pfu/只
[0035] (3)每日监测小鼠体重体温变化情况，统计流感病毒对小鼠体重变化和体温变化 的影响（结果如图1和2)以及致死率的影响（结果如图3)。
[0036] 虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在 本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因 此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
【主权项】
1. miR-23a在制备治疗流感的药物中的应用。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用包括制备抗流感病毒的药物。3. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述流感病毒为甲型流感病毒。4. 根据权利要求1或3所述的应用，其特征在于，包括将miR-23a与药学可接受的载体 复配制成药物组合物。5. -种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物以miR-23a为活性成分。6. 根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有miR-23a和药 学可接受的载体。7. 根据权利要求5或6所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物还含有治疗和/或 预防流感的其它活性成分。8. 根据权利要求5或6所述的药物组合物，其特征在于，所述药物可接受的载体为in viv〇-jetPEI〇
【专利摘要】本发明涉及miR-23a在制备治疗流感的药物中的应用。以及一种以miR-23a为活性成分的药物组合物，本发明所提供的药物组合物能够通过miR-23a来抑制流感病毒致病的过程。
【IPC分类】A61K31/7088, A61K31/7105, A61K48/00, A61P31/16
【公开号】CN104940955
【申请号】CN201510425041
【发明人】李向东, 刘原伍
【申请人】中国农业大学
【公开日】2015年9月30日
【申请日】2015年7月17日