一种大鼠急性应激反应的造模方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及医学研究用动物模型的造模方法，具体是一种大鼠急性应激反应的 造模方法。
【背景技术】
[0002] 应激是机体对有害刺激所做出的适应性综合反应，是机体对抗有害刺激的适应 性防御机制。近几十年，全球地震、水灾等自然灾害频繁发生，奥运会等各种大型集会活动 出现拥挤和踩踏事件，均造成大规模的人员创伤，受伤类型多为急性创伤所致的外伤。急性 外伤的发生不仅给伤者带来剧烈的疼痛，而且会诱发机体产生一系列的强应激反应，还可 能由于应激反应过强产生创伤后应激障碍等严重并发症。最新的研究显示，急性应激会改 变晒齿类动物的认知灵活度，甚至影响人类的味觉，更有学者证明急性应激反应对人类大 脑基因改变有一定影响。因此，有关急性应激反应的研究在国内外均是热点课题。进行急 性应激反应的研究，首先要复制标准理想的急性应激反应动物模型。理想的急性应激反应 动物模型应具备W下要求：1.临床相似性：即制作的急性应激反应动物模型应与临床相 近似，动物模型能够模拟人类发生急性应激反应的病理过程，尽量接近人类情况。II.可重 复性：即对急性应激反应动物模型造模的关键步骤客观化、定量化，造模动物的存活率高。 III.可操作性：即模型操作技术简单，易于掌握，便于推广。
[0003] 目前，急性应激反应模型造模的主要方法有手术腹腔探查或截肢、烧伤、胸部撞击 等：1.对大鼠行腹腔探查：大鼠经腹腔注射4%戊己比妥钢（40ml/kg体重）麻醉后，分别 沿其背部中线、腹部中线做6cm及5cm纵行切口，并模拟腹部脏器探查，暴露腹部脏器1 -2minW检查有无病灶及损伤，随后进行缝合，术后适当保暖。经过实验发现，该种造模方式 有W下缺点：术者操作动作不能完全统一，易造成不同大鼠的应激程度不一致。
[0004] 2.行截肢术：按30mg/kg体重腹腔注射4%戊己比妥钢麻醉后，于左下肢足面上 约0. 5cm处行截肢术，术后加压缝合，无菌纱布包扎，出血量较多者舍弃。经过实验发现，该 种造模方式有W下缺点：术后大鼠易出血过多，导致休克，休克本身也会诱发机体产生应激 反应，影响大鼠实验室指标的结果。此外，截肢影响大鼠的自由活动，影响后续行为学评价。 [000引 3.行烧伤手术：备皮，肌注3%戊己比妥钢（lOml/kg体重）麻醉后，将其背部朝下 固定于制好的木板（留有2. 1cm2的矩形开口），置于电子恒溫水浴锅（60°C)内40s后造成 30%总体表面积的III度烫伤。经过实验发现，该种造模方式有W下缺点：烧伤的面积和深度 难W把握，且烧伤后大鼠并发症较多，易诱发感染性休克，影响后续实验。
[0006] 4.行胸部撞击手术：动物经水合氯醒300mg/kg腹腔注射麻醉，取平邸位固定于动 物台，右上肢上举，W右蔽前线第5肋间为撞击点，剪除撞击区毛发。选择直径1cm的撞击 头，按设定能量从相应高度落下，进行致伤。经过实验发现，该种造模方式有W下缺点：撞击 部位、力度难W把握，易造成肋骨骨折、肺挫伤，而且创伤后大鼠死亡率高。
[0007]国内早有应用断尾作为外周神经疼痛的模型，鉴于此，发明人发现该种模型用于 模拟人类急性应激反应，能排除传统方式中的复合应激，避免在造成急性应激反应的同时 出现的失血性休克、感染性休克等引发的应激反应。该断尾模型具有操作简洁，条件易于控 审IJ，致伤程度较一致，是最能反映急性应激反应的造模方法。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的是提供一种成模率高，死亡率低，操作简单，结果稳定，宜于标准化 的大鼠急性应激反应的造模方法。
[0009] 实现本发明目的的技术方案是：
[0010] 一种大鼠急性应激反应的造模方法，包括W下步骤：
[0011] (1)选择体重280g-320g的健康雄性SD大鼠，实验前大鼠禁食12h，自由饮水； [001引似将选取的雄性SD大鼠按每lOOg体重4mg的剂量注射2%戊己比妥钢溶液，大 鼠镇静后俯邸，四肢固定于动物操作台上，在靠近尾端的尾干处，具体为S3和S4脊髓神经 之间，横切断尾，即切断支配尾部的神经纤维，模拟外周神经急性损伤造成的应激反应。
[0013] 本发明的造模方法中所用材料都可W在市场上购买到。
[0014] 本发明与传统造模方法相比较，具有W下有益效果：
[0015] 本发明根据急性应激反应的发生机制W及急性应激反应模型的特征性指标，主要 为ACTH(a化enocorticotropichormone,促肾上腺素皮质激素）、C0RT(^corticosterone，皮 质醇激素）、c-fos蛋白，通过大量实验，结果显示，模型组大鼠的外周血清ACTH值、C0RT值 与正常组大鼠相比明显升高，断尾应激后，神经元c-fos表达增加明显，故急性应激反应动 物模型造模成功，该模型可W很好的用于急性应激反应的发病机制研究。
【附图说明】
[0016] 图1为实施例中正常组大鼠下丘脑室旁核c-fos表达阳性细胞数的变化（X400 箭头显示的C-化S阳性体征）；
[0017] 图2为实施例中模型组大鼠下丘脑室旁核c-fos表达阳性细胞数的变化（X400 箭头显示的C-化S阳性体征）。
【具体实施方式】
[0018] 下面通过具体实施例对本
【发明内容】
作进一步说明，但不是对本发明的限制。
[001引实施例
[0020] -种大鼠急性应激反应的造模方法，包括W下步骤：
[0021] (1)选择体重280g-320g的健康雄性SD大鼠，随机分成正常组和模型组，实验前大 鼠禁食12h，自由饮水；
[002引 似将实验雄性SD大鼠按每lOOg体重4mg的剂量注射2%戊己比妥钢溶液，SD大 鼠镇静后俯邸，四肢固定于动物操作台上，在靠近尾端的尾干处，具体为S3和S4脊髓神经 之间，横切断尾，即切断支配尾部的神经纤维，模拟外周神经急性损伤造成的应激反应。
[0023] (3)正常组大鼠不进行任何操作。
[0024] 实验结果；
[00巧]各组大鼠之间的体重比较差异无统计学差异（p〉〇. 05);实验中取血时间控制在 12点左右，排除皮质醇昼夜节律性的干扰。
[0026] 本实验分别对正常组和模型组进行实验室指标检测，具体检测实验结果如下表所 示：
[0027]
[0028] 由上表的实验结果表明，与正常组大鼠相比，模型组大鼠血清ACTH、C0RT水平明 显升高（p<0. 01)，说明造模成功。
[0029] 本实验分别对正常组和模型组进行下丘脑室旁核C-化S蛋白检测，具体检测实 验结果如图1和图2所示，实验结果表明，胞浆中出现黄栋色颗粒的即为阳性细胞（光镜 下X400,观察10个高倍视野记平均值）。断尾应激后，神经元c-fos表达增加明显，说明 造模成功。
[0030] 通过对大鼠的ACTHX0RT，还有c-fos蛋白结果的观察证实：可W通过断尾来制作 大鼠的急性应激反应模型。本发明作为一种新型的急性应激反应大鼠模型造模方法具有并 发症少、成模率高、重复性好等特点，且能排除其他的应激反应对机体的干扰，为系统的研 究急性应激反应的发病机制提供了新的工具。
【主权项】
1. 一种大鼠急性应激反应的造模方法，其特征在于包括以下步骤： 1) 选择体重280g-320g的健康雄性SD大鼠，实验前大鼠禁食12h，自由饮水； 2) 将选取的雄性SD大鼠按每100g体重4mg的剂量注射2%戊巴比妥钠溶液，大鼠镇静 后俯卧，四肢固定于动物操作台上，在靠近尾端的尾干处，具体为S3和S4脊髓神经之间，横 切断尾，即切断支配尾部的神经纤维，模拟外周神经急性损伤造成的应激反应。
【专利摘要】本发明公开了一种大鼠急性应激反应的造模方法，包括以下步骤：选择体重280g-320g的健康雄性SD大鼠，按每100g体重4mg的剂量注射2%戊巴比妥钠溶液，大鼠镇静后俯卧，四肢固定于动物操作台上，在靠近尾端的尾干处，具体为S3和S4脊髓神经之间，横切断尾，即切断支配尾部的神经纤维，模拟外周神经急性损伤造成的应激反应。本发明造模方法，能避免造模的同时对大鼠造成额外的应激反应，是制作单纯急性应激反应的最佳方式。该方法不影响其日常活动，成模率高，致伤程度较一致，操作简单，结果稳定，宜于标准化的急性应激反应模型。为急性应激反应的研究提供纯粹、简便、可量化应激程度的模型。
【IPC分类】A61D1/00
【公开号】CN105147410
【申请号】CN201510364624
【发明人】蒋奕红, 胡越
【申请人】桂林医学院附属医院
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2015年6月26日