一种雪松松针总黄酮的富集方法及其在抗肿瘤中的应用_3

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松松针总黄酮对HepG2肿瘤细胞周期影响(对照组)。
[0036]图2为本发明雪松松针总黄酮对HepG2肿瘤细胞周期影响(lOyg/mL雪松松针总黄 酮)。
[0037] 图3为本发明雪松松针总黄酮对HepG2肿瘤细胞周期影响UOyg/mL雪松松针总黄 酮)。
[0038] 图4为本发明雪松松针总黄酮对HepG2肿瘤细胞周期影响UOyg/mL雪松松针总黄 酮)。
[0039] 图5为本发明雪松松针总黄酮对HepG2肿瘤细胞周期影响(SOyg/mL雪松松针总黄 酮)。
[0040] 图6为本发明雪松松针总黄酮对HepG2肿瘤细胞周期影响(leOyg/mL雪松松针总黄 酮)。
[0041 ]图7为本发明雪松松针总黄酮诱导此?62细胞的凋亡率〇〈0.05,*乍〈0.01^ control group)。
[0042]图8为本发明雪松松针总黄酮对HepG2细胞凋亡的影响(空白对照组)。
[0043]图9为本发明雪松松针总黄酮对HepG2细胞凋亡的影响(lOyg/mL雪松松针总黄 酮)。
[0044] 图10为本发明雪松松针总黄酮对HepG2细胞凋亡的影响UOyg/mL雪松松针总黄 酮)。
[0045] 图11为本发明雪松松针总黄酮对HepG2细胞凋亡的影响UOyg/mL雪松松针总黄 酮)。
[0046] 图12为本发明雪松松针总黄酮对HepG2细胞凋亡的影响(SOyg/mL雪松松针总黄 酮)。
[0047] 图13为本发明雪松松针总黄酮对HepG2细胞凋亡的影响(leOyg/mL雪松松针总黄 酮)。
【具体实施方式】
[0048] 实施例1 一种雪松松针总黄酮的富集方法,包括以下步骤: ⑴将新鲜雪松松针置阴凉处晾干,得到干燥的雪松松针;取〇. 3kg干燥的雪松松针置于 上海雅程仪器设备有限公司生产的YC-10型多功能提取罐中,加入其重量22倍的体积浓度 为40%的乙醇,在温度为85°C的条件下回流提取,共提取2次,其中一次2 h,一次Ih;然后过 滤、合并,得雪松松针提取液及料渣,料渣废弃。
[0049]⑵将雪松松针提取液在压力0.07MPa、水浴温度50°C条件下采用上海雅程仪器设 备有限公司生产的YC-IO型多功能提取罐进行减压回收乙醇至无醇味,得60°C热测密度为 1.05的流浸膏81.60 g;同时回收乙醇经处理再次使用。
[0050]⑶将流浸膏分散于其质量3倍的水中,用昆山市超声仪器有限公司生产的KQ2200B 超声清洗仪器在功率35KHz、温度40°C条件下进行超声溶解,然后用湘仪H-2050R台式高速 冷冻离心机以2500r/min速率离心除去不溶性杂质,得浓度为3.85 mg/mL的雪松松针总黄 酮粗提液。
[0051 ]⑷称取HPD722型大孔树脂湿法装柱,将雪松松针总黄酮粗提液用体积浓度为10% 的盐酸调pH至3,然后以lmL/min流速上样,最大上样量为0.5倍柱体积,上样完成后先用3BV 水洗除杂,然后用IBV的体积浓度为60%的乙醇洗脱,收集洗脱液。
[0052] (5)洗脱液采用河南巩义市予华仪器有限公司生产的RE-501型旋转蒸发仪在压力 0. 07MPa、水浴温度50°C条件下减压浓缩,再经江苏南通电器厂生产的766-3型远红外快速 干燥箱60°C干燥,即得雪松松针总黄酮19.06g,经日本岛津公司生产的SHIMADZU UV-240紫 外分光光度计检测,该雪松松针总黄酮纯度大于50%。
[0053]实施例2 -种雪松松针总黄酮的富集方法,包括以下步骤: ⑴将新鲜雪松松针置阴凉处晾干,得到干燥的雪松松针;取〇. 3kg干燥的雪松松针置于 上海雅程仪器设备有限公司生产的YC-10型多功能提取罐中,加入其重量28倍的体积浓度 为80%的乙醇,在温度为90°C的条件下回流提取,共提取2次,其中一次2 h,一次Ih;然后过 滤、合并,得雪松松针提取液及料渣,料渣废弃。
[0054]⑵将雪松松针提取液在压力O.OSMPa、水浴温度60°C条件下采用上海雅程仪器设 备有限公司生产的YC-10型多功能提取罐进行减压回收乙醇至无醇味,得60°C热测密度为 1. 10的流浸膏82.20g;同时回收乙醇经处理再次使用。
[0055]⑶将流浸膏分散于其质量4倍的水中,用昆山市超声仪器有限公司生产的KQ2200B 超声清洗仪器在功率45KHz、温度50°C条件下进行超声溶解,然后用湘仪H-2050R台式高速 冷冻离心机以3500r/min速率离心除去不溶性杂质,得浓度为3.85 mg/mL的雪松松针总黄 酮粗提液。
[0056]⑷称取HPD450型大孔树脂湿法装柱,将雪松松针总黄酮粗提液用体积浓度为10% 的盐酸调pH至6,然后以3mL/min流速上样,最大上样量为4.0倍柱体积,上样完成后先用5BV 水洗除杂,然后用3BV的体积浓度为90%的乙醇洗脱,收集洗脱液。
[0057] (5)洗脱液采用河南巩义市予华仪器有限公司生产的RE-501型旋转蒸发仪在压力 O.OSMPa、水浴温度60°C条件下减压浓缩,再经江苏南通电器厂生产的766-3型远红外快速 干燥箱50°C干燥,即得雪松松针总黄酮19.08g,经日本岛津公司生产的SHIMADZU UV-240紫 外分光光度计检测,该雪松松针总黄酮纯度大于50%。
[0058]实施例3 -种雪松松针总黄酮的富集方法,包括以下步骤: ⑴将新鲜雪松松针置阴凉处晾干,得到干燥的雪松松针;取〇. 3kg干燥的雪松松针置于 上海雅程仪器设备有限公司生产的YC-10型多功能提取罐中,加入其重量25倍的体积浓度 为60%的乙醇,在温度为87°C的条件下回流提取,共提取2次,其中一次2 h,一次Ih;然后过 滤、合并,得雪松松针提取液及料渣,料渣废弃。
[0059]⑵将雪松松针提取液在压力0.075MPa、水浴温度55°C条件下采用上海雅程仪器设 备有限公司生产的YC-10型多功能提取罐进行减压回收乙醇至无醇味,得60°C热测密度为 1.08的流浸膏81.00 g;同时回收乙醇经处理再次使用。
[0060] ⑶将流浸膏分散于其质量3.5倍的水中,用昆山市超声仪器有限公司生产的 KQ2200B超声清洗仪器在功率40KHz、温度45°C条件下进行超声溶解,然后用湘仪H-2050R台 式高速冷冻离心机以3000r/min速率离心除去不溶性杂质,得浓度为3.85 mg/mL的雪松松 针总黄酮粗提液。
[0061] ⑷称取AB-8型大孔树脂湿法装柱,将雪松松针总黄酮粗提液用体积浓度为10%的 盐酸调pH至4.5,然后以2mL/min流速上样,最大上样量为1.0倍柱体积,上样完成后先用4BV 水洗除杂,然后用2BV的体积浓度为70%的乙醇洗脱,收集洗脱液。
[0062] (5)洗脱液采用河南巩义市予华仪器有限公司生产的RE-501型旋转蒸发仪在压力 0.075MPa、水浴温度55°C条件下减压浓缩,再经江苏南通电器厂生产的766-3型远红外快速 干燥箱55°C干燥,即得雪松松针总黄酮19.04g,经日本岛津公司生产的SHIMADZU UV-240紫 外分光光度计检测,该雪松松针总黄酮纯度大于50%。
[0063]实施例4 一种雪松松针总黄酮的富集方法,包括以下步骤: ⑴将新鲜雪松松针置阴凉处晾干,得到干燥的雪松松针;取〇. 3kg干燥的雪松松针置于 上海雅程仪器设备有限公司生产的YC-10型多功能提取罐中,加入其重量23倍的体积浓度 为50%的乙醇,在温度为85°C的条件下回流提取,共提取2次,其中一次2 h,一次Ih;然后过 滤、合并,得雪松松针提取液及料渣,料渣废弃。
[0064]⑵将雪松松针提取液在压力0.07MPa、水浴温度50°C条件下采用上海雅程仪器设 备有限公司生产的YC-10型多功能提取罐进行减压回收乙醇至无醇味,得60°C热测密度为 1.06的流浸膏81.68 g;同时回收乙醇经处理再次使用。
[0065]⑶将流浸膏分散于其质量3倍的水中,用昆山市超声仪器有限公司生产的KQ2200B 超声清洗仪器在功率35KHz、温度40°C条件下进行超声溶解,然后用湘仪H-2050R台式高速 冷冻离心机以2500r/min速率离心除去不溶性杂质,得浓度为
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