黑蒜提取物及其在防治舌癌中的用图
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种黑蒜提取物及其在防治舌癌中的用途。
【背景技术】
[0002]按严格的解剖学定义，舌癌(carcinomaof tongue)应分为舌体癌(舌前2/3)与舌根癌(舌后1/3)两类。长期吸烟、饮酒、嚼槟榔或戴着不合适的义齿等都会使口腔黏膜反复损伤、充血、增生，口腔黏膜细胞的反复损伤、增生，使细胞核的代谢逐渐增加，整个细胞增殖周期中的Gl期细胞不断进入S期(DNA合成期)，促使S期细胞数增加。经过几年、几十年(口腔组织损伤达到数百万次，甚至更多)，最终出现DNA含量异常增高，产生染色体异常、细胞多核，反复口腔组织损伤还使细胞质的成分丢失或严重抑制细胞质的生长，细胞质无法生长成熟，引起细胞幼稚，产生癌症。在分子水平上，这些损伤使组织细胞内DNA上的基因反复断裂、重组(重新组合之意)，导致基因突变，形成口腔癌症。
[0003]黑蒜是新鲜的生大蒜通过控制温度和湿度，经发酵得到的大蒜深加工产品。与新鲜的生大蒜相比，黑蒜在感官、气味和营养价值等方面都有明显的优势，黑蒜中的蛋白质、氨基酸和多酚类物质等成分的含量显著提高。黑蒜具有抗氧化、美容养颜和调节血糖等作用，受到越来越多消费者的喜爱，具有广阔的市场前景。
[0004]中国专利申请201310390623.X公开了黑蒜提取物在调节动物肠道菌群中的用途，黑蒜提取物通过黑蒜去皮，把衣膜去尽，破碎，棒汁和过滤得到。
[0005]目前并没有相关将黑蒜提取物用于防治舌癌的报道。
【发明内容】
[0006]为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种黑蒜提取物，所述黑蒜提取物由以下步骤制备而成:
1)取黑蒜切片，加入所述黑蒜3?6倍重量的水，于85?115°C提取2?4h，过滤，收集第一滤液，保留滤渣；
2)向所述滤渣中加入所述黑蒜I?2倍重量的水，加入所述黑蒜0.003?0.05倍重量的复合植物水解酶，酶解，然后加入所述黑蒜卜3倍重量的60?85%的乙醇溶液，加热回流提取3?6h，过滤取滤液，减压浓缩，去除乙醇后得到第二滤液；
3)合并所述第一滤液和所述第二滤液，混匀后即得黑蒜提取物。
[0007]优选地，所述步骤2)中酶解的温度为36?45°C，时间为I?3h。
[0008]优选地，所述步骤2)中酶解的温度为36°C，时间为lh。
[0009]本发明还提供了所述黑蒜提取物的制备方法，其包括以下步骤:
1)取黑蒜切片，加入所述黑蒜3?6倍重量的水，于85?115°C提取2?4h，过滤，收集第一滤液，保留滤渣；
2)向所述滤渣中加入所述黑蒜I?2倍重量的水，加入所述黑蒜0.003?0.05倍重量的复合植物水解酶，酶解，然后加入所述黑蒜卜3倍重量的60?85%的乙醇溶液，加热回流提取3?6h，过滤取滤液，减压浓缩，去除乙醇后得到第二滤液；
3)合并所述第一滤液和所述第二滤液，混匀后即得黑蒜提取物。
[0010]优选地，所述步骤2)中酶解的温度为36?45°C，时间为I?3h。
[0011]优选地，所述步骤2)中酶解的温度为36°C，时间为lh。
[0012]本发明还公开了黑蒜提取物在制备防治舌癌的食品、保健品或药品中的用途。
[0013]优选地，所述黑蒜提取物可与药学上可接受的药物载体或辅料按常规方法制成临床常用制剂，所述制剂的剂型，包括口服剂、注射剂以及含漱剂。
[0014]与现有技术相比，本发明的有益效果是:本发明提供了一种黑蒜提取物，通过对黑蒜滤渣进行复合植物水解酶酶解和乙醇提取，大大增加了黑蒜提取液物中大蒜素、大蒜新素等活性成分的含量，可溶性固形物含量大大增加。其对舌癌Tca-8113细胞系具有抑制其生长、降低细胞活力、改变细胞形态的作用;本发明提供的黑蒜提取物制备方法简单，适于产业化应用。
【附图说明】
[0015]图1为不同浓度的黑蒜提取物处理舌癌Tca-8113细胞系12、24h后的细胞生长受限图；
图2为不同浓度的黑蒜提取物处理舌癌Tca-8113细胞系12、24h后的细胞形态改变图； 图3为不同浓度的黑蒜提取物处理舌癌Tca-8113细胞系12、24h后的细胞活力改变图。
【具体实施方式】
[0016]下面通过具体实施例对本发明做进一步的详细说明。
[0017]实施例1黑蒜提取物的制备
取黑蒜切片，加入所述黑蒜3倍重量的水，于85°C提取2h，过滤，收集第一滤液，保留滤渣；向所述滤渣中加入所述黑蒜I倍重量的水，加入所述黑蒜0.003倍重量的复合植物水解酶，在36°C下酶解lh，然后加入所述黑蒜I倍重量的65%的乙醇溶液，加热回流提取3h，过滤取滤液，减压浓缩，去除乙醇后得到第二滤液;合并所述第一滤液和所述第二滤液，混匀后即得黑蒜提取物。黑蒜提取液的可溶性固形物含量为19.8%。
[0018]实施例2黑蒜提取物的制备
取黑蒜切片，加入所述黑蒜5倍重量的水，于100°C提取3h，过滤，收集第一滤液，保留滤渣；向所述滤渣中加入所述黑蒜2倍重量的水，加入所述黑蒜0.004倍重量的复合植物水解酶，在40°C下酶解2h，然后加入所述黑蒜2倍重量的75%的乙醇溶液，加热回流提取4h，过滤取滤液，减压浓缩，去除乙醇后得到第二滤液;合并所述第一滤液和所述第二滤液，混匀后即得黑蒜提取物。黑蒜提取液的可溶性固形物含量为19.2%。
[0019]实施例3黑蒜提取物的制备
取黑蒜切片，加入所述黑蒜6倍重量的水，于115°C提取4h，过滤，收集第一滤液，保留滤渣；向所述滤渣中加入所述黑蒜2倍重量的水，加入所述黑蒜0.05倍重量的复合植物水解酶，在45°C下酶解3h，然后加入所述黑蒜3倍重量的85%的乙醇溶液，加热回流提取6h，过滤取滤液，减压浓缩，去除乙醇后得到第二滤液;合并所述第一滤液和所述第二滤液，混匀后即得黑蒜提取物。黑蒜提取液的可溶性固形物含量为18.7%。
[0020]对比例I黑蒜提取物的制备
取黑蒜切片，加入所述黑蒜3倍重量的水，于85°C提取2h，过滤，收集第一滤液，保留滤渣；向所述滤渣中加入所述黑蒜I倍重量的65%的乙醇溶液，加热回流提取3h，过滤取滤液，减压浓缩，去除乙醇后得到第二滤液;合并所述第一滤液和所述第二滤液，混匀后即得黑蒜提取物。黑蒜提取液的可溶性固形物含量为15.2%。
[0021]试验例本发明黑蒜提取物对舌癌Tca-8113细胞系抑制活性的研究
1、细胞系和试验药物:细胞系为舌癌Tca-8113细胞系，来自中山大学肿瘤防治中心华南肿瘤学国家重点实验室;试验药物实施例1-3所得黑蒜提取物;MTS试剂购自美国Promega公司。
[0022]2、黑蒜提取物处理
将实施例1-3黑蒜提取物，2000rmp X 1min离心15min，收集上清液于50ml离心管中，然后用Mi Ilex-HV0.45μπι过滤器过滤，收集过滤液，4°C保存备用。
[0023]3、细胞处理
待细胞生长至融合度达80%-90%时，用胰酶消化细胞，制备成细胞悬液;细胞计数板计数，以5000-600个/1 OOml /孔接种96孔板;用细胞培养液以I /80、I /60、I /40、I /20、I /10的体积比稀释黑蒜提取物，混合均匀，次日待孔板中细胞生长融合度大50%-60%时用上述稀释的黑蒜提取物更换细胞培养液，具体步骤为:先吸出孔板中的培养液，以10ml/孔加入各稀释的黑蒜提取物，每个浓度设置4个复孔，置于细胞培养箱中继续培养；以正常培养基作为对照组;分别于加药后12、24和36h给各浓度黑蒜提取物的细胞拍照；加药处理后36h，吸净各孔板中的培养液，加入新鲜培养液，以10μ1/孔加入MTS溶液，培养l_2h后测量孔板每孔的OD值，然后进行图片处理和数据分析统计。
[0024]如图1，不同浓度的黑蒜提取物处理舌癌Tca-8113细胞系12、24h后，细胞生长明显受限，其中，黑蒜提取物稀释1/10处理舌癌Tca-8113细胞系36h后，其对细胞生长抑制率达至Ij 26.36%。
[0025]如图2，不同浓度的黑蒜提取物处理舌癌Tca-8113细胞系12、24h后，细胞形态有改变。
[0026]如图3，与舌癌Tca-8113细胞系在正常培养基中培养相比，经黑蒜提取物培养36h后的舌癌Tca-8113细胞系活力有降低，其中以黑蒜提取物稀释I/10处理舌癌Tca_8113细胞系36h后细胞活力最低。
[0027]综上所述，本发明黑蒜提取物对舌癌Tca-8113细胞系具有抑制其生长、降低细胞活力、改变细胞形态的作用，可用于防治舌癌。
[0028]以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。
【主权项】
1.黑蒜提取物，其特征在于，所述黑蒜提取物由以下步骤制备而成: 1)取黑蒜切片，加入所述黑蒜3?6倍重量的水，于85?115°C提取2?4h，过滤，收集第一滤液，保留滤渣； 2)向所述滤渣中加入所述黑蒜I?2倍重量的水，加入所述黑蒜0.003-0.05倍重量的复合植物水解酶，酶解，然后加入所述黑蒜I?3倍重量的60?85%的乙醇溶液，加热回流提取3?6h，过滤取滤液，减压浓缩，去除乙醇后得到第二滤液； 3)合并所述第一滤液和所述第二滤液，混匀后即得黑蒜提取物。2.如权利要求1所述的黑蒜提取物，其特征在于:所述步骤2)中酶解的温度为36?45°C，时间为I?3h。3.如权利要求2所述的黑蒜提取物，其特征在于:所述步骤2)中酶解的温度为36V，时间为lh。4.如权利要求1-3任一所述的黑蒜提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: 1)取黑蒜切片，加入所述黑蒜3?6倍重量的水，于85?115°C提取2?4h，过滤，收集第一滤液，保留滤渣； 2)向所述滤渣中加入所述黑蒜I?2倍重量的水，加入所述黑蒜0.003-0.05倍重量的复合植物水解酶，酶解，然后加入所述黑蒜I?3倍重量的60?85%的乙醇溶液，加热回流提取3?6h，过滤取滤液，减压浓缩，去除乙醇后得到第二滤液； 3)合并所述第一滤液和所述第二滤液，混匀后即得黑蒜提取物。5.如权利要求4所述的黑蒜提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中酶解的温度为36?45°C，时间为I?3h。6.如权利要求5所述的黑蒜提取物的制备方法，其特征在于:所述步骤2)中酶解的温度为36°C，时间为lh。7.如权利要求1-6任一所述的黑蒜提取物在制备防治舌癌的食品、保健品或药品中的用途。
【专利摘要】本发明提供一种黑蒜提取物，其由以下步骤制备而成：取黑蒜切片，加入所述黑蒜3~6倍重量的水，于85~115℃提取2~4h，过滤，收集第一滤液，保留滤渣；向所述滤渣中加入所述黑蒜1~2倍重量的水，加入所述黑蒜0.003~0.05倍重量的复合植物水解酶，酶解，然后加入所述黑蒜1~3倍重量的60~85%的乙醇溶液，加热回流提取3~6h，过滤取滤液，减压浓缩，去除乙醇后得到第二滤液；合并所述第一滤液和所述第二滤液，混匀后即得黑蒜提取物。本发明黑蒜提取物对舌癌Tca-8113细胞系的生长具有抑制作用，可用于防治舌癌。
【IPC分类】A61P35/00, A23L33/105, A61K36/8962
【公开号】CN105596673
【申请号】CN201610056702
【发明人】樊曙明
【申请人】广东益生康生物科技有限公司
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2016年1月28日