一种散沫花提取物及其提取方法、应用
【专利摘要】本发明提供了一种散沫花提取物及其提取方法、应用，涉及天然产物提取技术领域。散沫花提取方法包括以下步骤：用溶剂浸提散沫花，得到浸提液，然后浓缩除去溶剂。本发明提供的散沫花提取方法，是一种新的从散沫花中提取出抑菌物质的方法，制得的散沫花提取物具有较高的抑菌活性，对于细菌、真菌有明显的杀伤力，而且可以进一步分离制成多种临床药剂来防治细菌、真菌所引起的疾病，有效率高，抑菌效果好。
【专利说明】
_种散沬花提取物及其提取方法、应用
技术领域
[0001 ]本发明涉及天然产物提取技术领域，具体而言，涉及一种散沫花提取物及其提取 方法、应用。
【背景技术】
[0002] 人们的生活环境中，周围的病菌时刻在侵害人体，大多数的时候，人体体内的免疫 系统都可以应付这些病菌的入侵。但如果病菌突然大量繁殖，超过了防御系统所能应付的 范围，人就会生病。因此，抑制细菌和真菌等病菌的滋生是很重要的，特别是医疗行业。但在 医疗行业中，随着广谱抗生素的广泛应用，耐药致病真菌和致病细菌不断增多，医学界一直 致力于寻找安全有效的抗菌药物。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种散沫花提取方法，利用提取方法能够得到抑菌效果非 常好的散沫花提取物。
[0004] 本发明的另一目的在于提供一种散沫花提取物，其对于细菌和真菌有明显杀伤 力。
[0005] 本发明的另一目的在于提供散沫花提取物在医药和保健品中的应用。
[0006] 本发明的另一目的在于提供散沫花提取物在抑菌、抗菌药物中的应用。
[0007] 本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的：
[0008] -种散沫花提取方法，包括以下步骤：用溶剂浸提散沫花，得到浸提液，然后浓缩 除去溶剂。
[0009] 另外，一种散沫花提取物，通过上述的散沫花提取方法提取得到。
[0010] 另外，上述的散沫花提取物在医药和保健品中的应用。
[0011]另外，上述的散沫花提取物在抑菌、抗菌药物中的应用。
[0012] 另外，上述的散沫花提取物在局部化脓感染、阴道炎、肺炎、伪膜性肠炎、心包炎、 败血症、脓毒症中的应用。
[0013] 相对于现有技术，本发明包括以下有益效果:本发明是针对细菌、真菌等，提出一 种新的从散沫花中提取出抑菌物质的方法，现有技术中没有人利用散沫花进行过抑菌物方 面的提取，所以该方法本身就是一种创新。本发明制得的散沫花提取物具有较高的抑菌活 性，对于细菌、真菌有明显的杀伤力，而且可以进一步分离制成多种临床药剂来防治细菌、 真菌所引起的疾病，有效率高，抑菌效果好。
【具体实施方式】
[0014] 为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中 的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建 议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产 品。
[0015] 下面对本发明实施例的散沫花提取物及其提取方法、应用进行具体说明。
[0016] 散沫花提取方法包括以下步骤：
[0017]步骤A:用溶剂浸提散沫花，得到浸提液。
[0018] 散沫花为千屈菜科(Lyth raceae)植物，具有很大的开发价值，散沫花全草各部位 均可入药，可治发烧、头痛、痢疾、疥疮、贫血、失眠和智力缺陷等多种疾病;对伤口愈合和部 分炎症也有一定疗效。而本发明通过提取方法得到散沫花的提取物，进行体外抑菌活性的 研究，为进一步开发和研究新型临床抗菌药物奠定了基础。
[0019] 步骤A中，浸提的方法(第一种浸提方法)可以包括:利用索氏提取法对散沫花提取 10~14h，过滤;散沫花与溶剂的用量比为0.8~lg:0.8~lmL。
[0020] 步骤A中，浸提的方法(第二种浸提方法)也可以包括:在5~40°C下，利用溶剂浸泡 散沫花18~33h，过滤。
[0021 ]其中，浸泡时保证溶剂刚好浸没散沫花即可。
[0022] 在第二种浸提方法中，浸泡具体可以为:浸泡2~3次，每次浸泡9~11天，每次倒出 浸泡液。也就是说，在浸泡散沫花时，可以将散沫花浸泡2~3次，每次浸泡9~11天，每次浸 泡时都需用溶剂浸没散沫花，每一次浸泡完、要更换溶剂时，就将浸泡液倒出，留用，然后过 滤，再进行后续操作。因为每次浸泡后，溶剂中都溶解有大量的有效成分，接近饱和，所以更 换溶剂，浸泡2~3次的操作，能够给予散沫花新的溶剂以实现有效成分的继续溶解，使散沫 花的有效成分尽可能完全的溶解在溶剂中。
[0023]以上两种浸提方法中，溶剂均选自水、甲酰胺、三氟乙酸、二甲基亚砜、乙腈、富马 酸二甲酯、六甲基磷酰胺、甲醇、900~980mlVL的乙醇、乙酸、异丙醇、吡啶、四甲基乙二胺、 丙酮、三乙胺、正丁醇、二氧六环、四氢呋喃、甲酸甲酯、三丁胺、甲乙酮、氯仿、乙酸乙酯中的 一种或多种。利用第一种浸提方法浸提时，溶剂优选水或900~980mL/L的乙醇;利用第二种 浸提方法浸提时，溶剂优选900~980mL/L的乙醇，因为水只能溶解水溶性有效成分，而乙醇 既可以溶解水溶性有效成分，又可以溶解油溶性有效成分，得到的浸泡液的有效成分种类 更多，含Μ更多。
[0024] 上述的溶剂中所提到的水选择蒸馏水、去离子水、超纯水中的一种或多种，优选蒸 馏水。水的选择能够避免引入新的细菌、杂质，从而就避免了对制得的提取物的不利影响。
[0025] 散沫花提取方法还包括步骤Β:浓缩除去溶剂。
[0026] 对于利用第二种浸提方法得到的浸泡液，若浸泡了 2~3次，则得到2~3份浸泡液， 那么浓缩时可以将这2~3份浸泡液分开浓缩，然后再合并浓缩物。当然，也可以先将浸泡液 混合，再将得到的混合物进行浓缩。
[0027]散沫花提取方法还可以包括步骤C:将步骤Β得到的物质与80~120mL/L的配制溶 剂配制成450~550mg/ml的样液即可。
[0028] 其中，配制溶剂选自水、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、乙酸、二甲基亚砜中的一种或多 种，优选丙酮。此种操作是将提取出的有效成分保存在有机溶剂中，避免有效成分的污染和 质变。
[0029]散沫花提取方法还可以包括步骤D:将样液置于0~10 °C下冷藏保存。如此，在需要 时取用即可，而无需重新配制，方便操作和实验。
[0030] 上述过程中使用的散沫花可以为干的散沫花，也可以为鲜散沫花，优选干散沫花， 因为干的散沫花含水量低。在0~10°c下保存样液后，在后期使用时，可能需要将其中的有 效成分分离出（多通过减压浓缩），而若使用的溶剂又为乙醇，则新鲜的散沫花中的水分会 与乙醇互溶，形成共沸物，导致减压浓缩时难以将乙醇蒸发干净。
[0031] 而因为优选干散沫花，采摘的散沫花又都为鲜散沫花，所以在步骤A之前，还可以 包括预处理:将采集的新鲜散沫花晒干。预处理还可以包括:将散沫花进行粉碎。粉碎操作 能够增加液体浸溶的面积，加强提取效果。而粉碎粒径并无严格要求，利用常规的中药材粉 碎机粉碎即可，优选市售的破壁粉碎机。当然，也可以不进行粉碎操作。
[0032] 本发明提供的散沫花提取物，是通过上述的散沫花提取方法提取得到。其可以应 用于医药和保健品中，应用于抑菌、抗菌药物中，主要应用于金黄色葡萄球菌等引起的局部 化脓感染和阴道炎、肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染疾病。散 沫花提取物可以按照药剂学方法，经进一步分离制成多种临床药剂来预防和治疗细菌、真 菌所引起的疾病，主要制成外用药，可以涂敷使用，可以制成洗液使用，当然，也可以制成内 服药。
[0033] 本发明还提供了散沫花提取物在医药和保健品中的应用。
[0034] 本发明提供的散沫花提取方法优选以下三种(简述）：
[0035] (1)利用蒸馏水作为溶剂，通过索氏提取法进行提取，然后浓缩、配制;得到的散沫 花提取物命名为水提取物；
[0036] (2)利用900~980mL/L的乙醇作为溶剂，通过索氏提取法进行提取，然后浓缩、配 制;得到的散沫花提取物命名为乙醇提取物；
[0037] (3)利用900~980mL/L的乙醇浸泡散沫花3次，然后浓缩、配制;得到的散沫花提取 物命名为乙醇浸泡物。
[0038]利用上述三种方法得到的散沫花提取物进行抑菌活性检测：
[0039] 检测方法：采用滤纸扩散法检测散沫花提取物的体外抑菌活性和最小抑菌浓度 (MIC值）；将保存在配制溶剂中的散沫花提取物浓缩取出，配制成一定浓度梯度的溶液，用 于体外抑菌实验。
[0040] 材料:水提取物、乙醇浸泡物和乙醇提取物；
[0041 ]仪器:JJJ1000型电子天平，CCA-1111型旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司），HV-85型全自动高压灭菌器，BD400电热培养箱；
[0042]对象:菌种(包括真菌和细菌）；
[0043] 真菌：白色念珠菌Candida albicans(ATCC10231)，克柔假丝酵母菌Candida krusei (ATCC14243)，串珠镜刀菌Fusarium moniliforme(ATCC2490)，黄曲霉Asperqillus flavus(ATCC2003)，尖抱镜刀菌Fusarium oxyporum(AT(X41029)，变紫青霉Penicillium purpurascens(ATCC40687)，表皮葡萄球菌Staphylococcus epidermidis(ATCC12228)，光 滑念珠菌Candida glabrata(ATCC15126)，尖抱镜刀菌Fusarium oxyporum(ATCC41029)，黑 曲霉Aspergillus niger(ATCC16404)〇
[0044] 细菌：金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus(ATCC25923)，枯草芽抱杆菌 bacillus subtilis(ATCC11774)，鲍曼不动杆菌Acinetobacter baumanii(ATCC19606)，大 肠埃希氏菌Escherichia coil(ATCC25922)，奠链球菌Streptococcus faecalis (ATCC29212)，铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa(ATCC27853)，奇异变形杆菌Proteus mirabilis(ATCC7002)，苏云金杆菌Bacillus thuringiensis(ATCC10792)，肠炎沙门氏菌 Salmonella enteritidis(ATCC50335)，阪崎肠杆菌Bntorobater sakazakii(ATCC29544)， 弗氏梓檬酸杆菌Citrobacter freundii (ATCC43864)，溶血性链球菌Streptococcus hemolyticus Rolly(ATCC21059)，焚光假单胞菌Pseudomonas fluorescens Migula (ATCC13525)，肺炎克雷伯菌Klebsiella Pneumoniae(ATCC200603)，副溶血性弧菌Vibrio parahaemolyticus(ATCC17802)〇
[0045] 抑菌率的计算公式:抑菌率％ =(抑菌圈直径/平板直径）X 100%
[0046] 其中，平板直径为90mm。
[0047] 结果:记录实验数据，进行分析，数据记载表明，水提取物、乙醇浸泡物和乙醇提取 物对各菌种均有一定的抑制作用。水提取物对金黄色葡萄球菌抑制率达16.07%以上；乙醇 浸泡物对粪链球菌抑制率达16.96%以上;乙醇提取物对粪链球菌抑制率达22.60%以上。 [0048]结论:水提取物、乙醇浸泡物和乙醇提取物均具有较好的抑菌活性，能够明显地杀 伤细菌细胞，能够抑制大肠杆菌ATCC25922、粪链球菌ATCC29212、白色念珠菌ATCC10231等 多种菌种的生长，乙醇的提取物的抑菌效果更为显著。散沫花的三种提取物对细菌、真菌具 有预防和治疗作用，因此，可用于预防治疗细菌、真菌所引起的疫病，可大力推广研制以药 用。
[0049]以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述：
[0050] 实施例一
[0051 ]本实施例提供的散沫花提取方法，包括以下步骤：
[0052] a.将采集的新鲜散沫花晒干后，粉碎备用；
[0053] b.称取200g经粉碎的散沫花，加入200ml蒸馏水，采用索氏提取法提取12h，过滤；
[0054] c.对步骤b得到的液体进行浓缩，直至其中不含水分；
[0055] d.以100mL/L的丙酮为配制溶剂，将步骤C得到的物质配制成500mg/m 1的样液，BP 得到散沫花提取物，于4°C下保存备用。
[0056]本实施例还提供了通过上述方法制得的散沫花提取物，其应用于抑菌、抗菌药物 中。
[0057] 实施例二
[0058]本实施例提供的散沫花提取方法，包括以下步骤：
[0059] a.将采集的新鲜散沫花晒干后，粉碎备用；
[0060] b.称取200g经粉碎的散沫花，加入200ml乙醇，乙醇浓度为950mL/L，然后采用索氏 提取法提取12h，过滤；
[0061 ] c.将步骤b得到的液体浓缩至无醇味；
[0062 ] d.以100mL/L的丙酮为配制溶剂，将步骤C得到的物质配制成500mg/m 1的样液，即 得到散沫花提取物，于5 °C下保存备用。
[0063]本实施例还利用上述的抑菌活性检测方法对散沫花提取物的体外抑菌活性和最 小抑菌浓度(MIC值)进行了检测，实验方法同上文，实验数据如表1~表7。
[0064]表1乙醇提取物对粪链球菌的抑菌活性
[0077]
[0078] 对实验数据进行处理，关于体外抑菌活性和最小抑菌浓度测定的处理结果为：乙 醇提取物的抑菌效果非常显著，其中对粪链球菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、铜绿假单 胞菌、奇异变形杆菌和串珠镰刀菌具有较好的抑制作用，抑制率分别为:22.60 %、20.82 %、 19.34%、19.20%、18.58%。对粪链球菌的最低抑制浓度为3.9mg/ml，对金黄色葡萄球菌、 白色念珠菌、铜绿假单胞菌、奇异变形杆菌和串珠镰刀菌的最低抑制浓度均为15.6mg/ml。 [0079]本实施例还提供了通过上述方法制得的散沫花提取物，其应用于抑菌、抗菌药物 中。
[0080] 实施例三
[0081 ]本实施例提供的散沫花提取方法，包括以下步骤：
[0082] a.将采集的新鲜散沫花晒干后，粉碎备用；
[0083] b.称取200g经粉碎的散沫花，在15°C下，利用950mlVL的乙醇浸泡散沫花，总共浸 泡3次，每次浸泡10天，每次浸泡时都用乙醇浸没散沫花，每次浸泡完成都倒出浸泡液，将三 次浸泡得到的三份浸泡液混合，然后过滤；
[0084] c.对混合后的浸泡液进行浓缩，直至无醇味；
[0085] d.以10OmL/L的丙酮为配制溶剂，将步骤C得到的物质配制成500mg/m 1的样液，即 得到散沫花提取物，于6 °C下保存备用。
[0086]本实施例还提供了通过上述方法制得的散沫花提取物，其应用于抑菌、抗菌药物 中。
[0087]实施例四
[0088]本实施例提供的散沫花提取方法，包括以下步骤：
[0089] a.采集的新鲜散沫花，晒干备用；
[0090] b.选用二甲基亚砜作为溶剂，利用索氏提取法对散沫花提取10h，过滤;其中，散沫 花与二甲基亚砜的用量比为〇.8g:lmL;
[0091] c.将步骤b得到的溶液浓缩至不含二甲基亚砜，即得到散沫花提取物。
[0092] 本实施例还提供了通过上述方法制得的散沫花提取物，其应用于医药中。
[0093] 实施例五
[0094]本实施例提供的散沫花提取方法，包括以下步骤：
[0095] a.选用新鲜的散沫花；
[0096] b.在40°C下，利用去离子水浸泡散沫花33h;
[0097] c.将步骤b得到的溶液浓缩至不含水分；
[0098] d.以120mL/L的乙酸为配制溶剂，将步骤c得到的物质配制成550mg/ml的样液，即 得到散沫花提取物，于10°c下保存备用。
[0099] 本实施例还提供了通过上述方法制得的散沫花提取物，其应用于保健品中。
[0100] 以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技 术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修 改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种散沫花提取方法，其特征在于，包括以下步骤： 用溶剂浸提散沫花，得到浸提液，然后浓缩除去所述溶剂。2. 根据权利要求1所述的散沫花提取方法，其特征在于，上述浸提的方法包括:利用索 氏提取法对所述散沫花提取10~14h，过滤;所述散沫花与所述溶剂的用量比为0.8~lg: 0 · 8~lmL〇3. 根据权利要求1所述的散沫花提取方法，其特征在于，所述浸提的方法包括:在5~40 °C下，利用所述溶剂浸泡所述散沫花18~33h，过滤。4. 根据权利要求3所述的散沫花提取方法，其特征在于，所述浸泡具体为:浸泡2~3次， 每次浸泡9~11天，每次倒出浸泡液。5. 根据权利要求1所述的散沫花提取方法，其特征在于，所述溶剂选自水、甲酰胺、三氟 乙酸、二甲基亚砜、乙腈、富马酸二甲酯、六甲基磷酰胺、甲醇、900~980mlVL的乙醇、乙酸、 异丙醇、吡啶、四甲基乙二胺、丙酮、三乙胺、正丁醇、二氧六环、四氢呋喃、甲酸甲酯、三丁 胺、甲乙酮、氯仿、乙酸乙酯中的一种或多种，优选水或900~980mL/L的乙醇。6. 根据权利要求1所述的散沫花提取方法，其特征在于，所述浓缩之后，还包括:将浓缩 得到的物质与80~120mL/L的配制溶剂配制成450~550mg/ml的样液，所述配制溶剂选自 水、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、乙酸、二甲基亚砜中的一种或多种，优选丙酮。7. -种散沫花提取物，其特征在于，通过权利要求1~6任一项所述的散沫花提取方法 提取得到。8. 权利要求7所述的散沫花提取物在医药和保健品中的应用。9. 权利要求7所述的散沫花提取物在抑菌、抗菌药物中的应用。10. 权利要求7所述的散沫花提取物在局部化脓感染、阴道炎、肺炎、伪膜性肠炎、心包 炎、败血症、脓毒症中的应用。
【文档编号】A61P31/04GK105832784SQ201610436020
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年6月17日
【发明人】高非, 杨军辉, 王祝年
【申请人】中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所