一种治疗帕金森联合免疫用药物及其制备方法、用图

一种治疗帕金森联合免疫用药物及其制备方法、用图
【专利摘要】本发明公开了一种治疗帕金森联合免疫用药物，治疗帕金森联合免疫用药物由人参萃取物、山萸肉萃取物、生地萃取物、丁香萃取物为原料，且其重量配比为1∶(1～5)∶(1～5)∶(0.5～2)。该治疗帕金森联合免疫用药物，能提升免疫力、促进脂质代谢、较强的抗氧化性和自由基清除能力，有利于机体排毒并提高脑内DA的含量，保护神经，能纠正神经递质失衡，改善认知，治疗反应迟钝、记忆不敏，还能有效改善患者的运动功能、改善运动障碍；还能修复原被破坏的免疫系统，使其恢复正常的生理平衡，防止帕金森的复发。该治疗帕金森联合免疫用药物通过超临界流体制备，提取过程无破坏原植物生物活性成分，还将其生物活性成分制成比表面积大的萃取物，有利于体内溶出和人体吸收。
【专利说明】
-种治疗帕金森联合免疫用药物及其制备方法、用途
技术领域
[0001] 本发明属于药物领域，更具体地说，它设及一种治疗帕金森联合免疫用药物及其 制备方法、用途。
【背景技术】
[0002] 帕金森病(Parkinson^s disease，PD)，又称特发性帕金森病或震颤麻搏，是一种 中老年人常见的神经系统变性疾病。帕金森病W静止性震颤、动作迟缓、肌强直和姿势步态 障碍为典型临床特征，并且通常伴随有精神障碍、认知障碍和睡眠障碍Ξ大非运动症状导 致病人失去生活能力，大大降低了病人的生活质量。
[0003] 目前普遍认为，帕金森的突出的病理改变是中脑黑质致密部多己胺（dopamine， DA)能神经元的变性死亡、纹状体DA含量显著性减少W及黑质残存神经元胞质内出现嗜酸 性包涵体（即路易小体，Lewy body)。研究发现，出现临床症状时黑质多己胺能神经元死亡 至少在50% W上。除多己胺能系统外，帕金森病患者的非多己胺能系统也有明显的受损:如 167116的基底核的胆碱能神经元，蓝斑的去甲肾上腺素能神经元，脑干中缝核的5-径色胺能 神经元，W及大脑皮质、脑干、脊髓、W及外周自主神经系统的神经元。
[0004] 药物治疗是帕金森病最主要的治疗手段。左旋多己制剂仍是最有效的药物。Chua CE，T曰ng BL等人在Alph曰-SynuCIein and P曰rkinsor/s dise曰se:the first roadblock (2006，J Cell Mol Med. 10:837-846)中研究发现，左旋多己制剂会对多己胺神经有毒副作 用，并会导致具有细胞毒性的自由基的生成，运将破坏残存的多己胺神经元并加剧帕金森 疾病的恶化程度。
[0005] 如何有效、安全的治疗帕金森，并防止其恶化，已成为行业内重点研究的方向之 〇

【发明内容】

[0006] 针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种能缓解和改善帕金森症 状，提升免疫力确保帕金森的正常治疗，还能促进脂质代谢、较强的抗氧化性和自由基清除 能力，有利于机体排毒并提高脑内DA的含量，保护神经，能纠正神经递质失衡，改善认知，治 疗反应迟纯、记忆不敏，还能有效改善患者的运动功能、改善运动障碍;除了能提高免疫力， 还能修复原被破坏的免疫系统，调节机体内环境、恢复正常的生理平衡，防止帕金森的复发 的治疗帕金森联合免疫用药物。
[0007] 为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案： 一种治疗帕金森联合免疫用药物，所述治疗帕金森联合免疫用药物由人参萃取物、山 英肉萃取物、生地萃取物、下香萃取物为原料;所述人参萃取物、山英肉萃取物、生地萃取物 和下香萃取物的重量配比为1:(1~5):(1~5) :(0.5~2)。
[000引作为优选，所述人参为半野生人参，山英肉、生地、下香均为野生。在本发明中，只 需要植物的活性成分中有相应的成分即可达到本发明的目的，但野生或半野生植物中运些 活性成分含量偏高，效果更佳。
[0009] 人参，别名白参、红参、别直参、吉林参、圆参，为五加科植物人参化nax ginseng C.A.Mey.的根茎。其甘、微苦，平，能大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津，安神。本发明的人 参优选为半野生人参，其为将人参的种子放在类似野生的环境培育得到，人参的品种W吉 林人参（长白山人参）为佳。本发明的人参萃取物是用半野生人参的参体萃取制成，其主要 成分为人参皂巧、Ξ屯皂巧、假人参皂巧、皂巧元、挥发油、单糖、双糖、多糖、氨基酸、维生 素、酱醇和微量元素等，人参皂巧主要为R〇、Ra、肺i、Rb2、Rc、Rp、Re、Rai、Ra2、Ra3、Rgi、Rh3、 Rf4，S屯皂巧主要为R4,假人参皂巧主要为Fll、化1、化1，皂巧元主要有人参二醇、人参Ξ醇、 齐墳果酸等，挥发油含人参締、0-揽香締、人参烘醇、人参环氧烘醇、人参烘Ξ醇，多糖主要 有人参多糖、人参淀粉，研究发现其活性成分的比例不同均能达到本发明的目的，且通过本 发明的制备方法制备的人参萃取物的效果最佳。
[0010] 山英肉，又名山荣英、药要、要皮，为山荣英科植物山荣英Cornus officinalis Sieb.et Zucc.的干燥成熟果肉。其酸、涩，微溫。本发明的山英肉萃取物是用野生山英肉的 成熟果实萃取制成，其主要成分为山荣英巧(Cornin)、熊果酸(化solic acid)、齐墳果酸、 5,5/-二甲基糖醒酸、5-径甲基糖醒、没食子酸、3,5-二径基苯甲酸、马钱素、7-0-甲基莫诺 巧、7-脱氨马钱素、β-谷酱醇和脱水莫诺巧及多糖等，其多糖主要为葡萄糖、果糖、薦糖和配 糖体等，还含有机酸、酪类、较质、蛋白质、氨基酸、维生素、黄酬、蔥酿、酱体、Ξ祗、香豆素、 挥发油(包括栋桐酸、桂皮酸节醋、反式芳精醇氧化物、揽香素、慷醒、甲基下香油酪、异细辛 脑和β-苯乙醇等）、脂肪酸和微量元素，研究发现其活性成分的比例不同均能达到本发明的 目的，且通过本发明的制备方法制备的山英肉萃取物的效果最佳。
[0011 ] 生地，風I名生地黄、野地黄、山烟根，为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Ubosch的新鲜块根。值得注意的是，本发明的生地和经过生地处理得到的熟地的作用效果 是不同的，两者的归属性质不同：本发明的生地性寒凉，在中医中属于屯、、肝、肾经;而熟地 经过黄酒拌闷、晒蒸等过程，其性质发生了变化，由寒转为溫，归属于肝、肾经;且两者的化 学组成也不同，特别是熟地在经过炮制后其梓醇基本消失且5-径甲基慷醇增加。本发明的 生地萃取物是用生地的块根萃取制成，其含有环締酸祗巧类(梓醇、二氨梓醇、乙酷梓醇、益 母草巧、桃叶珊瑚巧、地黄巧等）、单糖、多糖、氨基酸、β-谷酱醇、地黄素等，研究发现其活性 成分的比例不同均能达到本发明的目的，且通过本发明的制备方法制备的生地萃取物的效 果最佳。
[0012]下香，别名熊下香或公下香，为桃金娘科植物下香Eugenia caryophyl lata 化umb.的干燥花蕾。其辛、溫，溫中降逆，补肾助阳。本发明的下香萃取物优选用主产地为澳 大利亚和美洲的热带和亚热带地区的公下香Eugenia cary地yllata的干燥的尚未开放的 花蕾萃取制成，其主要成分为挥发油，油中主含下香酪（Eugenol)、下香締 Kaiyophyllene)、乙酸下香酪(Acetyleugenol)，还含有庚酬-2(Methyl-n-am}d-Ketone)、 水杨酸甲醒、α-下香締、衣兰締(Ylangene)、胡椒酪(化avicol)、下香子酪、下香子酪乙酸 醋、齐墳果酸、山奈酪、鼠李素、苯并化酬类化合物番樓桃素化ugenin)、番樓桃素亭 化ugenitin)、异番樓桃素亭（Isoeugenitin)、异番樓桃酪（Isoeugenitol)、谷酱醇、较质、 香草醒、绿叶蜡质、有机酸类、黄酬类、蛋白质等，研究发现其活性成分的比例不同均能达到 本发明的目的，且通过本发明的制备方法制备的下香萃取物的效果最佳。
[0013] 研究发现，治疗帕金森联合免疫用药物中，所述人参萃取物、山英肉萃取物、生地 萃取物和下香萃取物的重量配比为1: (1~5): (1~5): (0.5~2)，其组合增效： (1) 人参具有补元气、复脉固脱、补脾益肺和生津安神的功效，山英肉具有补益肝肾和 涩精固脱的功效，生地具有清热凉血、养阴、补肾的功效，下香具有减轻疼痛、桂除胃寒、解 除疫李的功效;本发明的治疗帕金森联合免疫用药物，可补肝肾益气，能缓解和改善帕金森 症状的作用，如缓解静止性震颤、运动迟缓、肌强直和姿势步态障碍等临床表现、缓解疼痛、 增加食欲、镇痛补血，增强其生存质量； (2) 抑菌杀菌、抗病毒，同时能增加肝脏代谢各物质的酶活性而使肝脏的解毒能力，能 增强机体的自排毒的能力，还能刺激细胞免疫调节因子，增强细胞免疫活性，避免治疗过程 中的免疫的失衡，确保帕金森的治疗的正常和有效开展，减少治疗的并发症； (3) 对帕金森患者的脂质代谢有促进作用，有利于机体排毒，活血通络，有效用于治疗 帕金森阴虚血疲证； (4) 较强的抗氧化性和自由基清除能力，还能有效升高脑内DA的含量，降低胆碱醋酶的 活性，还能抗氧化神经保护，能纠正神经递质失衡，改善认知，治疗反应迟纯、记忆不敏，还 能有效改善患者的运动功能、改善运动障碍； (5) 除了能提高免疫力，还能修复原被破坏的免疫系统，调节机体内环境、恢复正常的 生理平衡，防止帕金森的复发。
[0014] 研究发现，优选所述人参萃取物、山英肉萃取物、生地萃取物和下香萃取物的重量 配比为 1:3:3:0.5。
[0015] 作为优选，所述药物的制剂为胶囊剂。
[0016] W胶囊剂给药，有利于保证本发明的治疗帕金森联合免疫用药物能准确、方便给 药，有利于控制。
[0017] 本发明的目的还在于提供一种所述的治疗帕金森联合免疫用药物的制备方法，所 述方法包括人参萃取物胶囊的制备、山英肉萃取物胶囊的制备、生地萃取物胶囊的制备和 下香萃取物胶囊的制备;所述人参萃取物胶囊、山英肉萃取物胶囊、生地萃取物胶囊和下香 萃取物胶囊的制备均包括： S1，取原料进行筛选和清洗，将干净的原料通过减压冷浸法软化； S2,取经S1步软化的原料，超临界流体萃取，分离得到萃取液与残渣； S3，取S2步得到的残渣，将其粉碎研磨； S4，取S2步得到的萃取液，将其喷雾干燥，喷雾干燥的过程中加入S3步得到的粉碎研磨 后的残渣，得到干燥的原料萃取物； S5，取配方量的S4步得到的原料萃取物，填充至胶囊壳内，得到胶囊。
[0018] 本发明采用减压冷浸软化法，借负压的作用将水迅速吸入，加速药材的软化，确保 在常溫下用水软化药材，缩短浸润时间，减少有效成分的流失、破坏和药材的霉变。
[0019] 本发明采用超临界流体萃取技术萃取药用植物，其超临界流体萃取的流体为二氧 化碳，其萃取溫度为30~4(TC，能避免挥发油等成分在萃取过程中的挥发，能最大程度的保 持药用植物的生物活性成分;同时因为过程中不适用有机溶剂，无溶剂残留，保证了原料的 纯天然活性，环保，安全无副作用。
[0020] 本发明采用喷雾干燥将本发明的原料萃取液快速干燥，得到的产品粒度细小、均 匀，流动性好，增加了其比表面积，有利于其在机体内的溶出，有利于人体吸收。原料萃取液 经喷雾干燥后得到细小的颗粒物质，由于其含有糖类、蛋白质、淀粉等黏性较大的物质，本 发明在原料萃取液喷雾干燥的过程中加入其原料的残渣，原料的残渣能吸附经喷雾干燥的 原料萃取液，且经喷雾干燥的原料萃取液与原料的残渣的结合力较强，能防止其出现粘壁 的情况;同时充分利用原料药，未添加其他外加辅料，有利于保存其纯天然活性。
[0021 ]通过上述制备得到的胶囊，安全无副作用，提取过程无破坏原植物活性成分，还能 充分将其活性成分制成比表面积大的萃取物，有利于体内溶出和人体吸收；同时使用该方 法，能避免生产过程中产生的粘壁现象等。
[0022] 研究发现，优选S1中，所述减压冷浸法的溫度为10~40°C，压强为-0.1~- 0.09MPa; S2中，所述超临界流体萃取的流体为二氧化碳，萃取溫度为30~40°C ; S4中，所述喷雾干燥的溫度为40~80°C，干燥时间为3~60S;所述原料萃取物的颗粒度 为10~60皿； S5中，所述胶囊壳为天然植物胶囊壳。
[0023] 本发明的目的还在于提供一种所述方法包括人参萃取物胶囊的制备、山英肉萃取 物胶囊的制备、生地萃取物胶囊的制备和下香萃取物胶囊的制备； 所述人参萃取物胶囊的制备包括： S1，取人参筛选、清洗，将干净的人参的参体通过减压冷浸法软化;所述减压冷浸法的 溫度为10~40°C，压强为-0.1~-0.09MPa; S2,取经S1步软化的人参，超临界流体萃取，分离得到人参萃取液与人参残渣;所述超 临界流体萃取的流体为二氧化碳，萃取溫度为30~40°C ; S3，取S2步得到的人参残渣，将其粉碎研磨； S4，取S2步得到的人参萃取液，将其喷雾干燥，喷雾干燥的过程中加入S3步得到的粉碎 研磨后的人参残渣，得到干燥的人参萃取物;所述喷雾干燥的溫度为40~80°C，干燥时间为 3~60S;所述人参萃取物的颗粒度为10~60WI1; S5,取1份S4步得到的人参萃取物，填充至天然植物胶囊壳内，得到人参萃取物胶囊； 所述山英肉萃取物胶囊的制备包括： S1，取山英肉筛选、清洗，将干净的山英肉的成熟果实通过减压冷浸法软化;所述减压 冷浸法的溫度为10~40°C，压强为-0.1~-0.09MPa; S2,取经S1步软化的山英肉，超临界流体萃取，分离得到山英肉萃取液与山英肉残渣； 所述超临界流体萃取的流体为二氧化碳，萃取溫度为30~40°C ; S3，取S2步得到的山英肉残渣，将其粉碎研磨； S4,取S2步得到的山英肉萃取液，将其喷雾干燥，喷雾干燥的过程中加入S3步得到的粉 碎研磨后的山英肉残渣，得到干燥的山英肉萃取物;所述喷雾干燥的溫度为40~80°C，干燥 时间为3~60S;所述山英肉萃取物的颗粒度为10~60μπι; S5，取1~5份S4步得到的山英肉萃取物，填充至天然植物胶囊壳内，得到山英肉萃取物 胶囊； 所述生地萃取物胶囊的制备方法均包括： S1，取生地筛选、清洗，将干净的生地通过减压冷浸法软化;所述减压冷浸法的溫度为 10~40°C，压强为-0.1 ~-0.09MPa; S2,取经SI步软化的生地，超临界流体萃取，分离得到生地萃取液与生地残渣;所述超 临界流体萃取的流体为二氧化碳，萃取溫度为30~40°C ; S3，取S2步得到的生地残渣，将其粉碎研磨； S4，取S2步得到的生地萃取液，将其喷雾干燥，喷雾干燥的过程中加入S3步得到的粉碎 研磨后的生地残渣，得到干燥的生地萃取物;所述喷雾干燥的溫度为40~80°C，干燥时间为 3~60S;所述生地萃取物的颗粒度为10~60WI1; S5,取1~5份S4步得到的生地萃取物，填充至天然植物胶囊壳内，得到生地萃取物胶 囊； 所述下香萃取物胶囊的制备方法均包括： S1，取下香筛选、清洗，将干净的下香的尚未开放的花蕾通过减压冷浸法软化;所述减 压冷浸法的溫度为10~40°C，压强为-0.1~-0.09MPa; S2,取经S1步软化的下香，超临界流体萃取，分离得到下香萃取液与下香残渣;所述超 临界流体萃取的流体为二氧化碳，萃取溫度为30~40°C ; S3，取S2步得到的下香残渣，将其粉碎研磨； S4，取S2步得到的下香萃取液，将其喷雾干燥，喷雾干燥的过程中加入S3步得到的粉碎 研磨后的下香残渣，得到干燥的下香萃取物;所述喷雾干燥的溫度为40~80°C，干燥时间为 3~60S;所述下香萃取物的颗粒度为10~60WI1; S5，取0.5~2份S4步得到的下香萃取物，填充至天然植物胶囊壳内，得到下香萃取物胶 囊； 所述人参为半野生人参，山英肉为野生山英肉，下香为公下香。
[0024] 本发明的治疗帕金森联合免疫用药物中，人参萃取物胶囊、山英肉萃取物胶囊、生 地萃取物胶囊、下香萃取物胶囊分开制备，一方面可W避免四种植物在处理过程中的相互 干扰，有利于保证产品质量；另一方面在治疗时，可W根据需求而灵活给药，适于不同类型 的病人。
[0025] 本发明的目的还在于提供一种所述的治疗帕金森联合免疫用药物用W制备预防 或治疗帕金森的药物的用途。
[0026] -种所述的制备方法制备得到的治疗帕金森联合免疫用药物用W制备预防或治 疗帕金森的药物的用途。
[0027] 通过采用上述技术方案，具有W下有益效果： 1.本发明的治疗帕金森联合免疫用药物组合增效，可补肝肾益气，能缓解和改善帕金 森症状的作用，如缓解静止性震颤、运动迟缓、肌强直和姿势步态障碍等临床表现、缓解疼 痛、增加食欲、镇痛补血，增强其生存质量;抑菌杀菌、抗病毒，同时能增加肝脏代谢各物质 的酶活性而使肝脏的解毒能力，能增强机体的自排毒的能力，还能刺激细胞免疫调节因子， 增强细胞免疫活性，避免治疗过程中的免疫的失衡，确保帕金森的治疗的正常和有效开展， 减少治疗的并发症;对帕金森患者的脂质代谢有促进作用，有利于机体排毒，活血通络，有 效用于治疗帕金森阴虚血疲证;较强的抗氧化性和自由基清除能力，还能有效升高脑内DA 的含量，降低胆碱醋酶的活性，还能抗氧化神经保护，能纠正神经递质失衡，改善认知，治疗 反应迟纯、记忆不敏，还能有效改善患者的运动功能、改善运动障碍;除了能提高免疫力，还 能修复原被破坏的免疫系统，调节机体内环境、恢复正常的生理平衡，防止帕金森的复发。
[0028] 2.本发明的治疗帕金森联合免疫用药物的制备过程中，未使用有机溶剂和破坏性 条件，能最大程度的提取药用植物的有效生物活性成分，安全无副作用，同时还能将其有效 生物活性成分制成比表面积大的颗粒物质，有利于人体吸收。
[0029] 3.本发明的治疗帕金森联合免疫用药物的制备过程中，在原料萃取液喷雾干燥的 过程中加入其原料的残渣，有利于和常规防止粘壁的操作共同作用来解决原料萃取物在生 产的过程中出现的粘壁现象，还能充分利用原料药，保持纯天然性。
[0030] 4.本发明的治疗帕金森联合免疫用药物采用胶囊形式，给药精确且方便，有利于 保存，稳定性好。
【具体实施方式】
[0031] 取经筛选、清洗的长白山半野生人参的参体，将干净的人参的参体在10~40°(：和- 0.1~-0.09MPa下减压冷浸软化。人参的内皮软化后，在30~40°C下利用二氧化碳流体进行 超临界流体萃取，分离得到人参萃取液与人参残渣。取人参残渣粉碎研磨，过200-300目筛。 利用喷雾干燥将人参萃取液喷涂到经过筛的人参残渣上，喷雾干燥的溫度为40~80°C，干 燥时间为3~60S，得到颗粒度为10~60μπι的人参萃取物。取人参萃取物，按常规的胶囊填充 方法填充至天然植物胶囊壳内，得到人参萃取物胶囊。
[0032] 取经筛选、清洗的山英肉的成熟的果实，将干净的山英肉在10~40°C和-0.1~- 0.09MPa下减压冷浸软化。山英肉软化后，在30~40°C下利用二氧化碳流体进行超临界流体 萃取，分离得到山英肉萃取液与山英肉残渣。取山英肉残渣粉碎研磨，过200-300目筛。利用 喷雾干燥将山英肉萃取液喷涂到经过筛的山英肉残渣上，喷雾干燥的溫度为40~80°C，干 燥时间为3~60S，得到颗粒度为10~60μπι的山英肉萃取物。取山英肉萃取物，按常规的胶囊 填充方法填充至天然植物胶囊壳内，得到山英肉萃取物胶囊。
[0033] 取经筛选、清洗的野生地黄的块根，将干净的生地在10~40°C和-0.1~-0.09MPa 下减压冷浸软化。生地软化后，在30~4(TC下利用二氧化碳流体进行超临界流体萃取，分离 得到生地萃取液与生地残渣。取生地残渣粉碎研磨，过200-300目筛。利用喷雾干燥将生地 萃取液喷涂到经过筛的生地残渣上，喷雾干燥的溫度为40~80°C，干燥时间为3~60S，得到 颗粒度为10~60皿的生地萃取物。取生地萃取物，按常规的胶囊填充方法填充至天然植物 胶囊壳内，得到生地萃取物胶囊。
[0034] 取经筛选、清洗的主产地为澳大利亚和美洲的热带和亚热带地区的公下香 化ugenia cary地yllata)的干燥的尚未开放的花蕾，将干净的公下香尚未开放的花蕾在10 ~40°C和-0.1~-0.09M化下减压冷浸软化。公下香软化后，在30~40°C下利用二氧化碳流 体进行超临界流体萃取，分离得到公下香萃取液与公下香残渣。取公下香残渣粉碎研磨，过 200-300目筛。利用喷雾干燥将公下香萃取液喷涂到经过筛的公下香残渣上，喷雾干燥的溫 度为40~80°C，干燥时间为3~60S，得到颗粒度为10~60μπι的公下香萃取物。取公下香萃取 物，按常规的胶囊填充方法填充至天然植物胶囊壳内，得到公下香萃取物胶囊。
[0035] 使用本发明的治疗帕金森联合免疫用药物时，将人参萃取物胶囊、山英肉萃取物 胶囊、生地萃取物胶囊和下香萃取物胶囊按按一定比例同时给药。 表1本发明的治疗帕金森联合免疫用药物
[0036] 对比例一毒理学试验 受试物:人参萃取物、山英肉萃取物、生地萃取物、下香萃取物均由实施例一制备。分别 取人参萃取物、山英肉萃取物、下香萃取物，分别经70°C水浴1小时、浸泡12小时、浓缩后，供 试验用D
[0037] 2、试验动物:选用中国药品生物制品检定所实验动物中屯、提供的慶明种健康小白 郎iy 0
[0038] 3、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验 采用间隔24hr两次经口灌胃法进行试验。用体重25-30克小白鼠50只，按体重随机分为 5组，按体重随机分为5组，每组10只，雌雄各半。W50mg/kg · bw剂量的环憐酷胺(CP)为阳性 对照，蒸馈水为阴性对照，本发明的治疗帕金森联合免疫用药物的剂量分别为1.50、3.00、 6. OOg/kg · bw，用蒸馈水配至所需浓度。末次给本发明的治疗帕金森联合免疫用药物后 6hr，颈椎脱白处死动物，取胸骨骨髓用小牛血清稀释涂片，甲醇固定，Giemsa染色。在光学 显微镜下，每只动物计数1000个嗜多染红细胞(PRC)，微核的发生率W含微核的PRC千分率 计，并进行统计处理。本发明的治疗帕金森联合免疫用药物对小鼠骨髓微核发生率的影响 的结果统计见表2。 表2小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验的结果统计
*与阴性对照组比较差异有极显著性(P<〇.01)
[0039] 由表2可见，小本发明的治疗帕金森联合免疫用药物各剂量组微核率，各剂量组与 阴性对照组比较差异无显著性，而环憐酷胺组与阴性对照组比较差异有极显著性（P< 0.01)。未见本发明的治疗帕金森联合免疫用药物对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率产生影 响。
[0040] 4、小鼠精子崎形试验 用体重30-35克的性成熟雄性小鼠50只，随机分为5组。W40mg/kg · bw剂量的环憐酷胺 为阳性对照，蒸馈水为阴性对照，本发明的治疗帕金森联合免疫用药物的剂量为1.50、 3.00、6.00g/kg · bw，用蒸馈水配至所需浓度。每日灌胃一次，连续5天，末次灌胃后30天处 死动物，取附睾制片，伊红染色，每组计数5只动物，每只动物计数1000个结构完整的精子， 计算崎变精子发生率百分率计），并进行统计处理。本发明的治疗帕金森联合免疫用药 物对小鼠精子崎形发生率的影响的结果统计见表3。 表3小鼠精子崎形试验的结果统计
*与阴性对照组比较差异有极显著性(P<〇.01)
[0041] 由表3可见，本发明的治疗帕金森联合免疫用药物对小鼠精子崎形发生率未产生 明显改变，各剂量组与阴性对照组比较差异无显著性，而环憐酷胺阳性对照组比较差异有 极显著性(P<〇.01)。因此，本发明的治疗帕金森联合免疫用药物对小鼠精子崎形产生影 响。
[0042] 对实施例二和实施例Ξ制备的本发明的治疗帕金森联合免疫用药物也进行相同 的毒理学试验，其结果和实施例一制备的本发明的治疗帕金森联合免疫用药物的结果相 同。
[0043] 对比例二免疫调节作用试验 1、受试物:人参萃取物胶囊、山英肉萃取物胶囊、生地萃取物胶囊、下香萃取物胶囊均 由实施例一制备。人体口服推荐量为1.5g/天，W每人60kg体重计算(每个品种各一粒），相 当于0.025g/kg · bw。小鼠的等效剂量相当于人体推荐量的10倍，即每日0.25定型产品/ kg · bw(中剂量）。上、下各设一个剂量组:0.75g定型产品/kg · bw(高剂量)和0.025g定型产 品/kg · bw(低剂量）。样品W已消毒的水配制，对照组W已消毒的水代替。连续灌胃30天后 测各项免疫指标。因为人参萃取物胶囊、山英肉萃取物胶囊、生地萃取物胶囊、下香萃取物 胶囊均不溶于水，用10倍于推荐量的热水(70-80°C)分3次，每次1小时浸泡，然后在旋转蒸 发仪(50-6(TC)蒸发浓缩成30倍推荐剂量浓度，再按比例稀释进行灌胃。
[0044] 2、试验动物： 选用中国药品生物制品检定所实验动物中屯、提供的昆明种健康雄性小鼠75只，体重 18-22g，分为4组，剂量组每组15只，对照组30只，进行迟发型变态反应和抗体生成细胞检 测。
[0045] 选用中国药品生物制品检定所实验动物中屯、提供的昆明种健康雌性小鼠75只，体 重18-22g，分为4组，剂量组每组15只，对照组30只，进行碳粒廓清试验。
[0046] 3、迟发型变态反应检测(DTH)(足巧增厚法） 小鼠经腹腔注射2% (v/v，用生理盐水配审ij)的SRBC(0.2mL/每鼠），致敏后4天，测量左 右足巧部厚度，同一部位测量Ξ次，取平均值。然后在测量部位皮下注射20% (v/v，用生理 盐水配制）的SRBC(20化/每鼠），于注射后24小时测量左右巧部厚度，同一部位测量Ξ次，取 平均值。W注射前后足巧厚度的差值(足巧肿胀度)来表示DTH的程度。本发明的治疗帕金森 联合免疫用药物对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响的结果统计见表4。 表4迟发型变态反应检测化TH)的的结果统计
[0047] 由表4可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明的治疗帕金森联合免疫用药物30天， 经统计学处理，其足巧肿胀度在低、中、高剂量组与对照组间比较均有极显著性差异(P< 0.01)，即本发明的治疗帕金森联合免疫用药物能明显增强小鼠的迟发型变态反应。
[004引4、抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法） 小鼠经腹腔注射0.2mL 2% (v/v，用生理盐水配制）的SRBC(0.2血/每鼠）进行免疫。5天 后，将小鼠处死，取脾，轻轻撕碎，用化nk^ S液制成细胞悬液，洗涂、离屯、2次，将细胞悬浮在 5血化nk^ S液上。将表层培养基(琼脂糖)加热溶解后，与等量双倍化nk^ S液混合，分装小试 管、每管0.5ml，再向管内加10% (v/v，用SA液配制）的SRBC 5化L、脾细胞悬液20化，迅速混 匀后，倾倒于己刷琼脂糖薄层的玻片上，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放二氧 化碳培养箱中溫育1.化r，然后用SA缓冲液稀释的补体(1:10)加到玻片架凹槽内，继续溫育 1.5虹后，计数溶血空斑数。本发明的治疗帕金森联合免疫用药物对抗体生成细胞数的影响 的结果统计见表5。 表5抗体生成细胞检测的结果统计
[00例~由表5可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明的治疗帕金森联合免疫用药物30天，胃 经统计学处理，其足巧肿胀度在低、中、高剂量组与对照组间比较均无极显著性差异(P> 0.05)，即本发明的治疗帕金森联合免疫用药物对小鼠的抗体生成细胞数无影响。
[0050] 5、小鼠碳廓清实验测试 小鼠尾静脉注射W生理盐水稀释4倍的印度墨汁，每lOg体重注射O.lmL，墨汁注入后立 即计时。注入墨汁后2、1 Omin，分别从内赃静脉丛取血20化，加到2血0.1 %Na2C〇3溶液中，摇 匀。W0.1%化2〇)3溶液作空白对照，用721分光光度计在600nm波长处测光密度值(0D)。将小 鼠处死，取肝、脾，称重(体重为m，肝重为mi，脾重为m2)，按下式计算吞隧指数a:
本发明的治疗帕金森联合免疫用药物对对小鼠单核-巨隧细胞吞隧功能的影响的结果 统计见表6。 表6小鼠碳廓清实验测试的结果统计
[0051] ~由表6可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明的治疗帕金森联合免疫用药物30天/ 经统计学处理，其足巧肿胀度在低、中、高剂量组与对照组间比较均无极显著性差异(P> 0.05)，即本发明的治疗帕金森联合免疫用药物对小鼠单核-巨隧细胞碳廓清功能无影响。
[0052] 由表4至表6可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明的治疗帕金森联合免疫用药物 30天，能明显增强小鼠的迟发型变态反应，对小鼠的抗体生成细胞数和小鼠单核-巨隧细胞 碳廓清功能无影响。由此可见，本发明的治疗帕金森联合免疫用药物具有增强细胞免疫功 能的作用。
[0053] 对实施例二和实施例Ξ制备的本发明的治疗帕金森联合免疫用药物也进行相同 的免疫调节作用试验，其结果和实施例一制备的本发明的治疗帕金森联合免疫用药物的结 果相同。
[0化4]对比例Ξ、制剂的卫生学检验 参考GB4789-94和GB4789.15-94,对实施例一制备的本发明的治疗帕金森联合免疫用 药物进行大肠菌群、菌落总数、致病菌、霉菌、酵母计数的检测。分别对刚生产的一组样品和 在25°C/60%RH下放置3年后的一组样品进行检测，且两组样品均为同一个生产批次的样 品。每组样品均平行取10个样品。其卫生学检验结果详见表7。 表7卫生学检验结果统计
[0055] 由表7可见，治疗帕金森联合免疫用药物在生产后及在25°C/60%畑下放置3年，其 卫生学检验合格。
[0056] 对实施例二和实施例Ξ制备的本发明的治疗帕金森联合免疫用药物也进行相同 的卫生学检验，其结果和实施例一制备的本发明的治疗帕金森联合免疫用药物的结果相 同。
[0化7] 对比例四、临床试验 取帕金森患者病例进行临床试验，病例入选标准为： (1)西医诊断标准:符合中华医学会神经病学分会运动障碍及PD学组2006年发布的《帕 金森病的诊断》；中医诊断参照《中药新药临床研究指导原则(试行)》和"中医老年颤证诊断 和疗效评定标准(试行)制定。
[005引中医辨证属于阴虚证、血疲证。症见:肢体颤振、肢体拘疫、肢体少动、颈肩强直，表 情呆板、活动笨拙、腰膝酸软、言语蹇涩、智力减退、头晕、失眠多梦、肢体麻木、脉络渺血、刺 痛/痛有定处、夜尿频多、大便秘结，舌红少苔，脉象细数； 本次申请采用英国脑库的帕金森病诊断标准，其标准为:①帕金森症的纳入标准:运动 缓慢:随意运动的启动缓慢;疾病进展后，重复性动作的速度及幅度进行性降低;②下述症 状中至少一个:肌僵直、静止性震颤(4~6Hz)、姿势平衡障碍(并非由于原发性视觉、前庭、 小脑及本体感受功能障碍造成）。在诊断的过程中需要排除W下情况:反复的脑卒中发作 史，伴帕金森病特征的阶梯状进展;反复的脑损伤史；明确的脑炎史，有动眼危象;在应用抗 精神病药物过程中出现症状;1个W上的亲属患病;病情持续好转;起病3年后仍仅表现单侧 症状;进行性核上性凝视麻搏;小脑病变体征;疾病早期即出现严重的自主神经功能素乱； Babinski等病理征(+ ) ;CT显示脑肿瘤或交通性脑积水;大剂量左旋多己治疗无效;MPTP接 触史。同时确诊帕金森病需具备下列3项或3项W上的条件:单侧起病;静止性震颤;逐渐进 展;症状不对称性，起病侧较重；左旋多己治疗有明显疗效(70%-100%);左旋多己导致严 重的异动症;左旋多己的疗效持续5年或更长时间；临床病程10年或更长时间。帕金森病的 检查项目：血清肾素活力降低、酪氨酸含量减少;黑质和纹状体内ne、5-ht含量减少，谷氨酸 脱簇酶(gad)活性较对比组降低50% ;帕金森的检查项目表现有csf中gaba下降，csf中da和 5-ht的代谢产物ha含量明显减少;生化检测放免法检测csf生长抑素含量降低，尿中da及其 代谢产物3-甲氧酪胺、5-ht和肾上腺素、ne也减少;ct、mri影像表现由于帕金森病是一种中 枢神经系统退性变疾病，病理变化主要在黑质、纹状体、苍白球、尾状核W及大脑皮质等处， 所W，帕金森的检查项目ct影像表现，除具有普遍性脑萎缩外，有时可见基底节巧化。mri除 能显示脑室扩大等脑萎缩表现外，。加权像在基底节区和脑白质内常有多发高信号斑点存 在； (2)年龄45-75岁； (3化oehn-化虹量表分级《3级。
[0化9] 治疗方法:采用随机分组、对照研究的方法。试验组100例，对照组100例。试验组： 病例口服实施例一制备的本发明的治疗帕金森联合免疫用药物，每日分早晚两次服用，3个 月为一个疗程。对照组:病例口服上海罗氏的予美多芭(250mg)，每日分早晚两次服用，3个 月为一个疗程。。疗程中不施用其他治疗帕金森的药物。本次临床试验的疗效评价指标国际 通用统一帕金森病评定量表(UPDRS)。
[0060]分别服用2个疗程后，评价两组组患者的治疗效果，其结果统计见表8和表9。 表8临床疗效的比较
[0061 ] 表8显示，试验组100例患者中，明显改善31例，改善49例，无效20例，总有效率 80.0% ;对照组100例患者中，明显改善10例，改善31例，无效59例，总有效率41.0%。说明试 验组总临床疗效极显著优于对照组。
[0062] 表9显示，试验组与对照组治疗后UPDRS评分较治疗前显著降低(P<0.05);试验组 治疗后UPDRS评分较治疗后对照组有显著性差异(P<0.05)。
[0063] 在服用2个疗程后，对Ξ组的患者均停药，并在停药后6个月后观察其症状是否存 在加重或减缓的症状，同时对UPDS进行重新测试，具体结果见10和表11。 表10治疗前、治疗2个疗程后、停药6个月后临床疗效的比较
[0063] ~在服用2个疗程后，对Ξ组的患者均停药，并在停药后6个月后观察其症状是否存 在加重或减缓的症状，同时对UPDS进行重新测试，具体结果见10和表11。
[0064] 表10和11显示，在分别服用实施例一制备的本发明的治疗帕金森联合免疫用药 物、上海罗氏的予美多芭（250mg)2个疗程并停药后，对照组患者的病情发生反复的情况较 多，其无法保证疗效的巩固；而服用实施例一制备的本发明的治疗帕金森联合免疫用药物 并停药后，其疗效基本保持不变，运可能是和服用实施例一制备的本发明的帕金森联合免 疫用药物的患者的免疫系统已得到较为完善的平衡有关。
[0065] W上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施 例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域 的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，运些改进和润饰也 应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种治疗帕金森联合免疫用药物，其特征在于，所述治疗帕金森联合免疫用药物由 人参萃取物、山萸肉萃取物、生地萃取物、丁香萃取物为原料;所述人参萃取物、山萸肉萃取 物、生地萃取物和丁香萃取物的重量配比为I: (1~5): (1~5): (0.5~2)。2. 根据权利要求1所述的治疗帕金森联合免疫用药物，其特征在于，所述人参为半野生 人参，山萸肉、生地、丁香均为野生。3. 根据权利要求1所述的治疗帕金森联合免疫用药物，其特征在于，所述人参萃取物、 山萸肉萃取物、生地萃取物和丁香萃取物的重量配比为1:3:3:0.5。4. 根据权利要求1或2或3所述的治疗帕金森联合免疫用药物，其特征在于，所述药物的 制剂为胶囊剂。5. -种如权利要求4所述的治疗帕金森联合免疫用药物的制备方法，其特征在于，所述 方法包括人参萃取物胶囊的制备、山萸肉萃取物胶囊的制备、生地萃取物胶囊的制备和丁 香萃取物胶囊的制备;所述人参萃取物胶囊、山萸肉萃取物胶囊、生地萃取物胶囊和丁香萃 取物胶囊的制备均包括： Sl，取原料进行筛选和清洗，将干净的原料通过减压冷浸法软化； S2，取经Sl步软化的原料，超临界流体萃取，分离得到萃取液与残渣； S3，取S2步得到的残渣，将其粉碎研磨； S4，取S2步得到的萃取液，将其喷雾干燥，喷雾干燥的过程中加入S3步得到的粉碎研磨 后的残渣，得到干燥的原料萃取物； S5，取配方量的S4步得到的原料萃取物，填充至胶囊壳内，得到胶囊。6. 根据权利要求5所述的治疗帕金森联合免疫用药物的制备方法，其特征在于， Sl中，所述减压冷浸法的温度为10~40°C，压强为-0.1~-0.09MPa; S2中，所述超临界流体萃取的流体为二氧化碳，萃取温度为30~40°C ; S4中，所述喷雾干燥的温度为40~80°C，干燥时间为3~60S;所述原料萃取物的颗粒度 为10~60ym; S5中，所述胶囊壳为天然植物胶囊壳。7. -种如权利要求4所述的治疗帕金森联合免疫用药物的制备方法，其特征在于，所述 方法包括人参萃取物胶囊的制备、山萸肉萃取物胶囊的制备、生地萃取物胶囊的制备和丁 香萃取物胶囊的制备； 所述人参萃取物胶囊的制备包括： Sl，取人参筛选、清洗，将干净的人参的参体通过减压冷浸法软化;所述减压冷浸法的 温度为10~40°C，压强为-0 · 1~-0 · 09MPa; S2，取经SI步软化的人参，超临界流体萃取，分离得到人参萃取液与人参残渣;所述超 临界流体萃取的流体为二氧化碳，萃取温度为30~40°C ; S3，取S2步得到的人参残渣，将其粉碎研磨； S4，取S2步得到的人参萃取液，将其喷雾干燥，喷雾干燥的过程中加入S3步得到的粉碎 研磨后的人参残渣，得到干燥的人参萃取物;所述喷雾干燥的温度为40~80 °C，干燥时间为 3~60S;所述人参萃取物的颗粒度为10~60μπι; S5，取1份S4步得到的人参萃取物，填充至天然植物胶囊壳内，得到人参萃取物胶囊； 所述山萸肉萃取物胶囊的制备包括： SI，取山萸肉筛选、清洗，将干净的山萸肉的成熟果实通过减压冷浸法软化;所述减压 冷浸法的温度为10~40°C，压强为-0.1~-0.09MPa; S2,取经SI步软化的山萸肉，超临界流体萃取，分离得到山萸肉萃取液与山萸肉残渣； 所述超临界流体萃取的流体为二氧化碳，萃取温度为30~40°C ; S3，取S2步得到的山萸肉残渣，将其粉碎研磨； S4，取S2步得到的山萸肉萃取液，将其喷雾干燥，喷雾干燥的过程中加入S3步得到的粉 碎研磨后的山萸肉残渣，得到干燥的山萸肉萃取物;所述喷雾干燥的温度为40~80°C，干燥 时间为3~60S;所述山萸肉萃取物的颗粒度为10~60μπι; S5,取1~5份S4步得到的山萸肉萃取物，填充至天然植物胶囊壳内，得到山萸肉萃取物 胶囊； 所述生地萃取物胶囊的制备方法均包括： Sl，取生地筛选、清洗，将干净的生地通过减压冷浸法软化;所述减压冷浸法的温度为 10~40°C，压强为-ο · 1 ~-0 · 09MPa; S2，取经SI步软化的生地，超临界流体萃取，分离得到生地萃取液与生地残渣;所述超 临界流体萃取的流体为二氧化碳，萃取温度为30~40°C ; S3，取S2步得到的生地残渣，将其粉碎研磨； S4，取S2步得到的生地萃取液，将其喷雾干燥，喷雾干燥的过程中加入S3步得到的粉碎 研磨后的生地残渣，得到干燥的生地萃取物;所述喷雾干燥的温度为40~80 °C，干燥时间为 3~60S;所述生地萃取物的颗粒度为10~60μπι; S5,取1~5份S4步得到的生地萃取物，填充至天然植物胶囊壳内，得到生地萃取物胶 囊； 所述丁香萃取物胶囊的制备方法均包括： Sl，取丁香筛选、清洗，将干净的丁香的尚未开放的花蕾通过减压冷浸法软化;所述减 压冷浸法的温度为10~40°C，压强为-0.1~-0.09MPa; S2，取经SI步软化的丁香，超临界流体萃取，分离得到丁香萃取液与丁香残渣;所述超 临界流体萃取的流体为二氧化碳，萃取温度为30~40°C ; S3，取S2步得到的丁香残渣，将其粉碎研磨； S4，取S2步得到的丁香萃取液，将其喷雾干燥，喷雾干燥的过程中加入S3步得到的粉碎 研磨后的丁香残渣，得到干燥的丁香萃取物;所述喷雾干燥的温度为40~80°C，干燥时间为 3~60S;所述丁香萃取物的颗粒度为10~60μηι ; S5,取0.5~2份S4步得到的丁香萃取物，填充至天然植物胶囊壳内，得到丁香萃取物胶 囊； 所述人参为半野生人参，山萸肉为野生山萸肉，丁香为公丁香。8. -种如权利要求1所述的治疗帕金森联合免疫用药物用以制备预防或治疗帕金森的 药物的用途。9. 一种如权利要求5-7任一项所述的制备方法制备得到的治疗帕金森联合免疫用药物 用以制备预防或治疗帕金森的药物的用途。
【文档编号】A61P37/04GK105878548SQ201610213087
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2016年4月7日
【发明人】鲁伟
【申请人】北京路德凯奇商贸有限责任公司