一种灵芝孢子粉中三萜类化合物的提取方法
【专利摘要】本发明涉及菌类处理技术领域，具体涉及一种灵芝孢子粉中三萜类化合物的提取方法，该方法采用先破壁后提取的方式进行的，由灵芝孢子粉得到的提取物，主要为三萜类化合物，该方法技术难度较低；能够得到更容易被人体吸收的灵芝孢子粉有效成分，从而提高灵芝孢子粉的利用率。
【专利说明】
一种灵芝孢子粉中三萜类化合物的提取方法
技术领域
[0001]本发明涉及菌类处理技术领域，具体涉及一种灵芝孢子粉中三萜类化合物的提取方法。
【背景技术】
[0002]灵芝孢子是灵芝的有性生殖细胞，含有灵芝的全部遗传活性物质，具有抗肿瘤、降血糖和免疫调节等作用，在药理和临床上都有应用，也是一种良好的天然保健品原材料。灵芝孢子含有丰富的多糖、三萜类化合物、多肽、核酸、有机锗等抗肿瘤物质，而灵芝三萜类化合物是抗肿瘤的主要功能成分。灵芝三萜类化合物存在于灵芝孢子油中，具有广泛的生理和药理活性，它的开发与应用具有广阔的市场前景。
[0003]灵芝孢子粉是灵芝在生长成熟期，从灵芝菌褶中弹射出来的极其微小的卵形生殖细胞，即灵芝的种子，其凝聚了灵芝的精华，具有灵芝的全部遗传物质和保健作用。但是灵芝孢子壁有两层，内部含有1-2个油滴，外壁是由一层坚硬的几丁质壳、不溶性纤维和纤维素组成，有很强的耐酸碱性，阻止了溶剂对灵芝孢子油的提取加工，只有打开这双层壁壳，其有效成分才能被人体利用吸收。科学实验证实，服用未破壁的孢子，只有10%?20%的有效成分能被人体吸收，而破壁之后有效成分吸收率在90%以上。
[0004]灵芝三萜类化合物存在于灵芝孢子油，是灵芝孢子的主要功能成分，灵芝孢子破壁是灵芝孢子相关产品的必经工序。目前灵芝孢子油的提取方法多采用酸碱法，酶法，缺陷是灵芝孢子破壁率低，灵芝孢子油得率低，同时还会破坏灵芝孢子油的有效成分;此外，还有微波法、超声波法、液氮淬冷法，这些方法虽然能提高灵芝孢子油得率，但是加工效率低，成本高，仅适用于实验室操作，难以实现工业化生产。虽然目前已有多种技术能够完成对灵芝孢子粉的破壁处理，但是由于灵芝孢子粉所含的三萜类灵芝酸化学性质不稳定，如何在完成破壁的同时最大限度地保证灵芝有效成分在破壁过程中不被破坏，且完成破壁后又能稳定存在，目前仍旧是一个没有解决的技术难题。因此有必要对三萜类化合物进行提取以提尚其利用率。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是为了解决上述问题，提供一种灵芝孢子粉中三萜类化合物的提取方法。
[0006]这里的最终产品为灵芝孢子粉的提取物，且主要成分为三萜类化合物的混合物。
[0007]为了达到上述发明目的，本发明采用以下技术方案:
一种灵芝孢子粉中三萜类化合物的提取方法，包括以下步骤:
(1)首先将灵芝孢子粉放入质量浓度为0.05-0.15%的氢氧化钠溶液中，超声浸泡l_3h;然后过滤后加入水和几丁质分解酶，分解l_2h，过滤后在35-50°C下干燥；干燥时间在5-1Oh ；超声的功率为0.8-1.5w/cm2，频率为35_40KHz ；
(2)将干燥后的灵芝孢子粉采用超音速气流粉碎机在-10°C到-5°C下粉碎； (3)将加入灵芝孢子粉加入到微波逆流提取设备中，加入水和丁醇配比为3:1的混合液中提取2-4次，真空抽滤;然后再对滤渣采用石油醚微波逆流提取1-3次；
(4)在两种滤液中加入海藻糖，搅拌均匀后，均采用大孔吸附树脂进行吸附；加入海藻糖能够促进吸附树脂对有效成分的吸附;加入海藻糖提高吸附速率。
[0008](5)然后采用体积百分浓度为用60-70%乙醇洗脱8-10个柱体积，收集60-70%乙醇洗脱液，减压浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到三萜类化合物。
[0009]作为优选，步骤(I)中超声浸泡过滤后的灵芝孢子粉加入到水中，灵芝孢子粉中几丁质分解酶的添加量为3000-4000u/g，同时每Ikg灵芝孢子粉中加入抗坏血酸3-5g。
[0010]抗坏血酸控制酶的活性，避免酶将孢子粉外壁的几丁质过度分解，造成流失。
[0011 ]作为优选，步骤(5)中的乙醇水溶液种还加入质量百分比为0.05-0.1%的甜菜碱。
[0012]加入甜菜碱能够加快提取物即三萜类化合物的脱出。
[OO13 ]作为优选，步骤(I)中氢氧化钠溶液的用量为每克灵芝孢子粉I Oml。
[0014]作为优选，步骤(3)中每次微波逆流提取的提取时间为10-15min。
[0015]本发明与现有技术相比，有益效果是:
I方法技术难度较低;2能够得到更容易被人体吸收的灵芝孢子粉有效成分，从而提高灵芝孢子粉的利用率。
【具体实施方式】
[0016]下面通过具体实施例对本发明的技术方案作进一步描述说明。
[0017]如果无特殊说明，本发明的实施例中所采用的原料均为本领域常用的原料，实施例中所采用的方法，均为本领域的常规方法。
[0018]一种灵芝孢子粉中三萜类化合物的提取方法，包括以下步骤:
(1)首先将灵芝孢子粉放入质量浓度为0.05-0.15%的氢氧化钠溶液中，超声浸泡l_3h;然后过滤后加入水和几丁质分解酶，分解l_2h，过滤后在35-50°C下干燥；干燥时间在5-1Oh;超声的功率为0.8-1.5w/cm2，频率为35_40KHz ;氢氧化钠溶液的用量为每克灵芝孢子粉1ml，灵芝孢子粉中几丁质分解酶的添加量为3000-4000u/g，同时每Ikg灵芝孢子粉中加入抗坏血酸3-5g，
(2)将干燥后的灵芝孢子粉采用超音速气流粉碎机在-10°C到-5°C下粉碎；
(3)将加入灵芝孢子粉加入到微波逆流提取设备中，加入水和丁醇配比为3:1的混合液中提取2-4次，真空抽滤;然后再对滤渣采用石油醚微波逆流提取1-3次;每次微波逆流提取的提取时间为10-15min;
(4)在两种滤液中加入海藻糖，搅拌均匀后，均采用大孔吸附树脂进行吸附；
(5)然后采用体积百分浓度为用60-70%乙醇洗脱8-10个柱体积，乙醇水溶液种还加入质量百分比为0.05-0.1%的甜菜碱，收集60-70%乙醇洗脱液，减压浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到三萜类化合物。
[0019]实施例1:
一种灵芝孢子粉中三萜类化合物的提取方法，包括以下步骤:
(I)首先将灵芝孢子粉放入质量浓度为0.05%的氢氧化钠溶液中，超声浸泡3h;然后过滤后加入水和几丁质分解酶，灵芝孢子粉中几丁质分解酶的添加量为3000u/g，同时每Ikg灵芝孢子粉中加入抗坏血酸5g，分解lh，过滤后在50°C下干燥;干燥时间在5h;超声的功率为1.5w/cm2，频率为35KHz ;氢氧化钠溶液的用量为每克灵芝孢子粉1ml;
(2)将干燥后的灵芝孢子粉采用超音速气流粉碎机在_5°C下粉碎；
(3)将加入灵芝孢子粉加入到微波逆流提取设备中，加入水和丁醇配比为3:1的混合液中提取2次，真空抽滤;然后再对滤渣采用石油醚微波逆流提取3次;每次微波逆流提取的提取时间为10_15min
(4)在两种滤液中加入海藻糖，搅拌均匀后，均采用大孔吸附树脂进行吸附；
(5)然后采用体积百分浓度为用60-70%乙醇洗脱8-10个柱体积，收集60-70%乙醇洗脱液，减压浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到三萜类化合物。
[0020]实施例2:
一种灵芝孢子粉中三萜类化合物的提取方法，包括以下步骤:
(1)首先将灵芝孢子粉放入质量浓度为0.15%的氢氧化钠溶液中，超声浸泡Ih;然后过滤后加入水和几丁质分解酶，灵芝孢子粉中几丁质分解酶的添加量为4000u/g，同时每Ikg灵芝孢子粉中加入抗坏血酸3g，分解2h，过滤后在35°C下干燥;干燥时间在1h;超声的功率为0.8w/cm2，频率为40KHz ;氢氧化钠溶液的用量为每克灵芝孢子粉1ml;
(2)将干燥后的灵芝孢子粉采用超音速气流粉碎机在-10°C下粉碎；
(3)将加入灵芝孢子粉加入到微波逆流提取设备中，加入水和丁醇配比为3:1的混合液中提取2-4次，真空抽滤;然后再对滤渣采用石油醚微波逆流提取1-3次;每次微波逆流提取的提取时间为10-15min
(4)在两种滤液中加入海藻糖，搅拌均匀后，均采用大孔吸附树脂进行吸附；
(5)然后采用体积百分浓度为用60-70%乙醇洗脱8-10个柱体积，收集60-70%乙醇洗脱液，减压浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到三萜类化合物。
[0021]实施例3:
一种灵芝孢子粉中三萜类化合物的提取方法，包括以下步骤:
(1)首先将灵芝孢子粉放入质量浓度为0.05%的氢氧化钠溶液中，超声浸泡3h;然后过滤后加入水和几丁质分解酶，分解lh，灵芝孢子粉中几丁质分解酶的添加量为4000u/g，同时每Ikg灵芝孢子粉中加入抗坏血酸3g;过滤后在50 0C下干燥;干燥时间在5h;超声的功率为1.5w/cm2，频率为35KHz ;氢氧化钠溶液的用量为每克灵芝孢子粉1ml;
(2)将干燥后的灵芝孢子粉采用超音速气流粉碎机在_5°C下粉碎；
(3)将加入灵芝孢子粉加入到微波逆流提取设备中，加入水和丁醇配比为3:1的混合液中提取2-4次，真空抽滤;然后再对滤渣采用石油醚微波逆流提取1-3次;每次微波逆流提取的提取时间为10-15min;
(4)在两种滤液中加入海藻糖，搅拌均匀后，均采用大孔吸附树脂进行吸附；
(5)然后采用体积百分浓度为用60-70%乙醇洗脱8-10个柱体积，乙醇水溶液种还加入质量百分比为0.05%的甜菜碱，收集60-70%乙醇洗脱液，减压浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到三萜类化合物。
[0022]实施例4:
一种灵芝孢子粉中三萜类化合物的提取方法，包括以下步骤:
(I)首先将灵芝孢子粉放入质量浓度为0.15%的氢氧化钠溶液中，超声浸泡Ih;然后过滤后加入水和几丁质分解酶，分解2h，灵芝孢子粉中几丁质分解酶的添加量为3000u/g，同时每Ikg灵芝孢子粉中加入抗坏血酸5g;过滤后在35 °C下干燥;干燥时间在1h;超声的功率为0.8w/cm2，频率为40KHz ;氢氧化钠溶液的用量为每克灵芝孢子粉1ml;
(2)将干燥后的灵芝孢子粉采用超音速气流粉碎机在-10°C下粉碎；
(3)将加入灵芝孢子粉加入到微波逆流提取设备中，加入水和丁醇配比为3:1的混合液中提取2-4次，真空抽滤;然后再对滤渣采用石油醚微波逆流提取1-3次;每次微波逆流提取的提取时间为10-15min;
(4)在两种滤液中加入海藻糖，搅拌均匀后，均采用大孔吸附树脂进行吸附；
(5)然后采用体积百分浓度为用60-70%乙醇洗脱8-10个柱体积，乙醇水溶液种还加入质量百分比为0.1%的甜菜碱，收集60-70%乙醇洗脱液，减压浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到三萜类化合物。
[0023]步骤(I)中加抗坏血酸比不加能够提高3-5%的收获率;步骤(5)中加入甜菜碱后能加快速度3-7%。
【主权项】
1.一种灵芝孢子粉中三萜类化合物的提取方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)首先将灵芝孢子粉放入质量浓度为0.05-0.15%的氢氧化钠溶液中，超声浸泡l_3h;然后过滤后加入水和几丁质分解酶，分解l_2h，过滤后在35-50°C下干燥；干燥时间在5-1Oh ；超声的功率为0.8-1.5w/cm2，频率为35_40KHz ； (2)将干燥后的灵芝孢子粉采用超音速气流粉碎机在-10°C到-5°C下粉碎； (3)将加入灵芝孢子粉加入到微波逆流提取设备中，加入水和丁醇配比为3:1的混合液中提取2-4次，真空抽滤;然后再对滤渣采用石油醚微波逆流提取1-3次； (4)在两种滤液中加入海藻糖，搅拌均匀后，均采用大孔吸附树脂进行吸附； (5)然后采用体积百分浓度为用60-70%乙醇洗脱8-10个柱体积，收集60-70%乙醇洗脱液，减压浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到三萜类化合物。2.根据权利要求1所述的一种灵芝孢子粉中三萜类化合物的提取方法，其特征在于，步骤(I)中超声浸泡过滤后的灵芝孢子粉加入到水中，灵芝孢子粉中几丁质分解酶的添加量为3000-4000u/g，同时每I kg灵芝孢子粉中加入抗坏血酸3-5g。3.根据权利要求1所述的一种灵芝孢子粉中三萜类化合物的提取方法，其特征在于，步骤(5)中的乙醇水溶液种还加入质量百分比为0.05-0.1%的甜菜碱。4.根据权利要求1所述的一种灵芝孢子粉中三萜类化合物的提取方法，其特征在于，步骤(I)中氢氧化钠溶液的用量为每克灵芝孢子粉1ml。5.根据权利要求1所述的一种灵芝孢子粉中三萜类化合物的提取方法，其特征在于，步骤(3)中每次微波逆流提取的提取时间为10-15min。
【文档编号】A61K36/074GK105902578SQ201610268953
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年4月27日
【发明人】叶丽芳, 朱妙飞, 吕晓霞, 易超宇, 留梦甜, 居雪峰, 李丹
【申请人】杭州海王生物工程有限公司