一种毛囊移植液及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种毛囊移植液及其制备方法，属于生物技术、医学美容和毛发移植领域。本发明在人毛囊干细胞提取物中加入20～50ug/ml中药提取物制备得到；所述的人毛囊干细胞提取物中含有人干细胞活性成分为0.001％～90％；所述中药提取物中活性成分的质量百分比含量在50％以上；所述的中药提取物中的活性成分包括甙、酸、多酚、多糖、萜类、黄酮和生物碱中的一种以上。本发明采用过滤法结合低温运输、保存等相关技术手段，工艺简单、反应温和，保证了产品中活性物质的生物活性和产品效果的稳定性；本发明的毛囊移植液产品的制备方法完全脱离化工工艺，不含重金属残留、防腐剂等有毒有害物质，生物安全性高，市场推广和应用前景好。
【专利说明】
一种毛囊移植液及其制备方法
技术领域
[0001]本发明涉及一种毛囊移植液及其制备方法，属于生物技术、医学美发领域。
【背景技术】
[0002]皮肤是人体最大的器官，而毛囊又是皮肤的重要附属器，其呈周期性、有规律地自我再生，在人体内终生不断，是调控毛发周期生长的重要结构。健康成人头发总数平均有5-15万根，由于人们生活节奏加快，工作压力增大，生活作息不规律等诸多因素，雄源性秃发、瘫痕性秃发等脱发患者呈逐年增多趋势，我国男性脱发的发病率达到了 19.9%，脱发患者已超过I亿。而且，近年来脱发呈现年轻化趋势，中青年成了脱发人群中的主力军。因此，寻找有效治疗脱发的方法刻不容缓，现代医学也越来越重视对脱发的研究。
[0003]传统的脱发治疗方法包括秃发头皮缩减、皮瓣外科及头皮自体移植术等，但这些修复方法大多数存在毛发移植成活率低、疤痕明显、外观不自然等缺陷。自体头发移植术因具有简单易行、安全、快速、有效且隐蔽等特点，而得以广泛开展及受到患者的欢迎。但传统的毛发移植如:环钻钻孔移植、激光打孔移植、狭缝移植法等，每个移植物含有的毛发数目也是由4?12根不等，这些方法都可以修复毛发缺失，但是存在的问题是毛发移植物较大，因而产生术后毛发方向和密度分布不自然、受区损伤大、存活率低、影响美观等缺点。近年来发展起来的以自然毛囊单位为基础的毛发移植，使得毛发移植技术更趋于成熟。自体毛囊移植技术可以实现毛囊单位在秃发区域的再分布从而获得良好的外观，因由具有手术创伤小、疗效确切的优点而成为目前修复毛发缺失最有效的治疗手段之一。
[0004]目前，自体毛囊移植技术在临床上还存在以下不足:首先，技术要求高，需要专业人员操作。单位毛囊体积比较小，生命力比较脆弱，影响其存活的因素较多；其中直接损伤是对移植物的机械性损伤如夹伤;还有间接损伤，如热损伤及干燥损伤;在手术的过程中需要格外小心，减少直接夹持损伤，同时尽可能在最短的时间内植入，减少暴露的时间。其次，毛发移植中毛发的供区有限，不可再生，毛发移植的原理是通过手术使毛囊重新分布，不是毛发的再生，因而单位毛囊移植也不能够解决目前毛发供区不足的问题。而且单位毛囊在切割获取过程中的损失率比较高，技术要求高。另外，对于需大面积移植的患者仍然容易产生术后毛发密度较小、不自然的情况。由于手术时间长，容易使患者不耐受手术。
[0005]总之，自体毛囊移植术本质上不产生新的毛囊，因此如何有效利用有限的自体毛囊，保证毛发移植术过程中毛囊的活性，提高毛囊成活率，是提高自体毛囊移植术毛发移植效果的核心和关键。
[0006]目前，为了提高毛发移植术过程中毛囊的活性，人们已经发明了很多有效的方法。例如，(I)一种虎口毛囊移植物保湿储备器(CN202365929U)，发明了一种虎口毛囊移植物保湿储备器，能够保持毛囊单位在整个毛发移植的手术操作过程中的湿度，减少夹持毛囊单位的时间，从而增加手术的成功率；(2)毛囊移植器(CN202821458U)，该实用新型公开了一种毛囊移植器，包括U型槽以及与U型槽前端相连的针尖，所述U型槽的长度为l-3cm，所述U型槽后端连接把手。该实用新型克服了现有技术中植发手术过程繁琐的技术缺陷，提供一种能够简化植发手术的毛囊移植器。(3)—种无痕植发方法(CN104224249A)，本发明提供一种无痕植发方法，是通过以下的步骤实现的:I)毛囊检测:高清毛发专项检测系统，精确检测出毛发、毛囊质量和指标;2)角度定制:设计合理种植方案;3)植发体位:载体在提取毛囊时采用俯卧位，毛发植入采用平卧位;4)毛囊提取:采用毛囊提取仪选择不同的钻头进行毛囊提取;5)分离毛囊:显微镜分离毛囊;6)培育毛囊:将毛囊取下后放入冷冻的乳酸培植液中培植;7)大孔:对毛囊进行打孔;8)纳米种植:纳米级毛囊移植器械种植;9)洗涤与护理。本发明植入过程时间短，成活率高，植入精确，易于恢复。(4)高密式单体毛囊移植器(CN201279174Y)，该实用新型涉及一种高密式单体毛囊移植器，它属于一种用于毛囊移植的外科手术器械。该实用新型主要是解决现有方法存在的术后恢复时间长、移植效果差和损伤毛囊的技术难点。该实用新型为解决上述技术难点而采用的技术方案是:高密式单体毛囊移植器，它包括毛囊移植手术刀、夹持刀架、调节固定套和刀柄，毛囊移植手术刀设在夹持刀架的中央，夹持刀架的中上部装在调节固定套中且通过调节固定套与刀柄连接。该实用新型具有移植效果好、不损伤毛囊和恢复快的优点。(5)毛囊移植针(PTT-B3)CN301113834用于人体毛发移植。(6)手动无痕取发器CN201171699Y该实用新型公开了一种手动无痕取发器，该取发器由柄体I)、管状刀2)组成，在柄体I)的前端安装管状刀2)连成整体。使用时，手握取发器的柄体I)将管状刀2)插入枕部供区挑取毛囊，去除结缔组织和真皮层后的毛囊植入到易脱发区。该实用新型结构简单，使用方便，速度快捷，采用该取发器挑取优良毛囊移植，不开刀，不缝合，无疤痕，失血少，零感染，手术时间和术后恢复时间短，病人痛苦小。(7)毛囊移植器CN2889182Y该实用新型所述的毛囊移植器包括空心针头、手术针、推入针装置与针管体;空心针头、手术针与推入装置均设于针管体中，手术针设于推入装置一端并伸入空心针头I中，推入装置控制手术针在空心针头中移动。在使用过程中，在手术针前端空心针头的内孔的容纳管中放入毛囊，将空心针头插入需要植入的部位，按住按钮推动推入针装置，控制手术针向前移动，同时空心针头I后移动，将毛囊留在需要植入的部位;拔出空心针头，完成毛囊移植过程。能够使创口非常小，术后恢复时间短，降低对人体的伤害;方向精确密度好，可以提高植发的密度与植发方向的精确度；可实现单根毛囊移植;可用于眉毛，睫毛部位的毛发移植;器械不接触毛囊，降低了人为损伤毛囊的机率。
[0007]从上述专利申请情况不难看出，专利多为实用新型专利，多为毛囊移植器件的改进或改良。
【发明内容】
[0008]本发明的目的是提供一种毛囊移植液及其制备方法，所述的毛囊移植液可以用作毛囊移植时毛囊保存液，确保植发前、植发中、植发后的毛囊活性，合理调控毛囊生长过程，诱导和刺激移植毛胚迅速茁壮成长，激活萎缩毛囊焕发新生活力，将植发效果达到最大化。
[0009]本发明提供的毛囊移植液的制备方法，包括如下步骤，
[0010]第一步，获取单个或者多个毛囊组织，利用分离酶对离体的毛囊进行消化；
[0011]第二步，在显微镜下切取第一步中得到的毛囊的毛囊隆突部；
[0012]第三步，利用胰酶对第二步中所得的毛囊隆突部进行消化，消化温度为37°C，消化时间为1min左右，得到消化液；
[0013]第四步，对第三步获得的消化液以1000r/min的转速离心8-10分钟；
[0014]第五步，将第四步中离心后获得的细胞层重悬于完全培养基中培养，培养条件为:温度为37 °C，CO2浓度为5%;
[0015]第六步，待细胞融合度达到质量百分含量80%时，按贴壁面积1:3比例进行传代；
[0016]第七步，收集传代前的细胞培养上清液，得到细胞培养液；
[0017]第八步，收集的细胞培养液经过过滤系统，滤去细胞碎片及微生物，得到过滤液；
[0018]第九步，过滤液置于超滤管中低温高速离心，滤去上清液，得到浓缩液;所述低温高速离心的温度为4°C，离心速率为2750rpm;所述的浓缩液中含有人毛囊干细胞活性成分质量百分含量为0.001%?90%，其余为人毛囊干细胞活性成分正常代谢所需要的糖分、蛋白、维生素和水；
[0019]第十步，所得浓缩液与中药提取物混合，所述的浓缩液中加入20?50ug/ml的中药提取物;置于_20°C条件下储存，S卩得到所述的毛囊移植液。
[0020]上述方法制备得到的毛囊移植液，通过人毛囊干细胞提取物中加入20?50ug/ml的中药提取物组成。所述的人毛囊干细胞提取物中含有人毛囊干细胞活性成分质量百分含量为0.001%?90%，其余为人毛囊干细胞活性成分正常代谢所需要的糖分、蛋白、维生素和水。所述的中药提取物为松针提取物、何首乌提取物、桑椹提取物和黑芝麻提取物中的两种以上组分，任意两种各组分重量相同。所述中药提取物中活性成分的质量百分比含量在50%以上;所述的中药提取物中的活性成分包括甙、酸、多酚、多糖、萜类、黄酮和生物碱中的一种以上。
[0021 ]毛囊移植液用作毛囊移植时的毛囊保存液，或者在毛囊移植时一同植入使用。
[0022]本发明采用过滤法结合低温运输、保存等相关技术手段，工艺简单、反应温和，保证了产品中活性物质的生物活性和产品效果的稳定性。本发明的毛囊移植液的制备方法完全脱离化工工艺，不含重金属残留、防腐剂等有毒有害物质，生物安全性高，市场推广和应用前景好。
【附图说明】
[0023]图1A和IB分别为实施例中受试者A在术前和术后90天的毛发生长情况。
[0024]图2A?2C分别为实施例中受试者B在术前和术后一个月、四个月的毛发生长情况。
【具体实施方式】
[0025]下面结合附图和实施例对本发明进行详细说明。
[0026]本发明提供一种基于毛囊干细胞的毛囊移植液及其制备方法，本发明中所述的毛囊移植液，含有人毛囊干细胞活性成分和中药提取物。人毛囊干细胞具有很高的增殖潜能，在体外培养时呈克隆性生长，可诱导分化为神经元细胞、神经胶质细胞、平滑肌细胞和黑色素细胞等细胞，而植入体内则可分化形成神经元、黑色素细胞和角化细胞等。人毛囊干细胞活性成分包含细胞生长因子(cell growth factor，CGF)等活性物质，这些活性物质可以促进表皮干细胞和毛囊干细胞增殖，调控毛囊生长过程，诱导和刺激移植毛胚迅速茁壮成长，激活萎缩毛囊焕发新生活力。添加的中药提取物一方面可以滋养毛囊干细胞和毛囊组织，另外也可稳定毛囊干细胞活性成分，使其更好的发挥作用。
[0027]本发明提供的毛囊移植液，将人毛囊干细胞活性成分与中药提取物配伍，所述的毛囊移植液为人毛囊干细胞提取物中加入20?50ug/ml的中药提取物;所述的人毛囊干细胞提取物中含有人毛囊干细胞活性成分质量百分含量为0.001 %?90 %，其余为人毛囊干细胞活性成分正常代谢所需要的糖分、蛋白、维生素和水。
[0028]所述的中药提取物为松针提取物、何首乌提取物、桑椹提取物和黑芝麻提取物中的两种以上组分，任意两种组分的重量比满足1:1。所述中药提取物中活性成分的质量百分比含量在50%以上。所述的中药提取物中的活性成分包括甙、酸、多酚、多糖、萜类、黄酮和生物碱中的一种以上。
[0029]上述的毛囊移植液用作毛囊移植时的毛囊保存液，也可以在毛囊移植时一同植入使用。
[0030]本发明还提供一种毛囊移植液的制备方法，包括以下步骤:
[0031](I)获取单个或者多个毛囊组织，利用分离酶对离体的毛囊进行消化。
[0032]所述分离酶为2.5g/L的DISPASE酶，消化温度为4°C，消化时间为25-30分钟。
[0033](2)在显微镜下切取步骤(I)中得到的毛囊的毛囊隆突部；
[0034](3)利用胰酶对步骤(2)中所得的毛囊隆突部进行消化，消化温度为37°C，消化时间为1min左右，得到消化液。
[0035](4)对步骤(3)获得的消化液以1000r/min的转速离心8-10分钟。
[0036](5)将步骤(4)中离心后获得的细胞层重悬于完全培养基中培养，培养条件为:温度为37 °C，5 % CO2 (体积浓度)ο所述的完全培养基，成分为DMEM+10 % hAB血清+1 Oug/LEGF+1ug/LbFGFο
[0037](6)待细胞融合度达到80% (质量百分含量)时，按贴壁面积1:3比例进行传代；
[0038](7)收集传代前的细胞培养上清液，得到细胞培养液；
[0039](8)收集的细胞培养液经过过滤系统，滤去细胞碎片及微生物，得到过滤液；
[0040](9)过滤液置于5K的超滤管中低温高速离心，滤去上清液，得到浓缩液;所述低温高速离心的温度为4°C，离心速率为2750rpm。所述的浓缩液中含有人毛囊干细胞活性成分质量百分含量为0.001%?90%，其余为人毛囊干细胞活性成分正常代谢所需要的糖分、蛋白、维生素和水。
[0041 ] (10)所得浓缩液与中药提取物混合，所述的浓缩液中加入20?50ug/ml的中药提取物;置于_20°C条件下储存，S卩得到所述的毛囊移植液。
[0042]本发明提供的毛囊移植液富含细胞因子等生物活性物质，这些生物活性物质常温下稳定性较差，易变性失活，严重影响其生物利用度，甚至失去作用；另一方面，这些活性物质作为营养物质很容易受到微生物的污染。因此，本发明所述的毛囊移植液产品对生产工艺的要求较高:既要保证产品的生物活性成分的生物功能，又要避免产品的污染变质。本发明摒弃传统的高温高压、化学灭菌方式，采用过滤法结合低温运输、保存等相关技术手段，工艺简单、反应温和，保证了产品中活性物质的生物活性和产品效果的稳定性。
[0043]本发明的毛囊移植液的制备方法完全脱离化工工艺，不含重金属残留、防腐剂等有毒有害物质，生物安全性高，市场推广和应用前景好。
[0044]实施例
[0045]应用本发明提供的毛囊移植液，对受试者A进行重塑发际线手术，对受试者B进行雄秃毛发移植手术。受试者行毛发移植时，将拔取的毛囊置于本发明的毛囊移植液中保存，之后移植区域每周涂抹本产品I次，周期为2个月，如图1A和1B，以及图2A?2C所示，结果非常理想。上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种毛囊移植液的制备方法，其特征在于:所述的制备方法包括如下步骤， 第一步，获取单个或者多个毛囊组织，利用分离酶对离体的毛囊进行消化； 第二步，在显微镜下切取第一步中得到的毛囊的毛囊隆突部； 第三步，利用胰酶对第二步中所得的毛囊隆突部进行消化，消化温度为37°c，消化时间为1min左右，得到消化液； 第四步，对第三步获得的消化液以1000r/min的转速离心8-10分钟； 第五步，将第四步中离心后获得的细胞层重悬于完全培养基中培养，培养条件为:温度为37 °C，CO2浓度为5%; 第六步，待细胞融合度达到质量百分含量80 %时，按贴壁面积1:3比例进行传代； 第七步，收集传代前的细胞培养上清液，得到细胞培养液； 第八步，收集的细胞培养液经过过滤系统，滤去细胞碎片及微生物，得到过滤液； 第九步，过滤液置于超滤管中低温高速离心，滤去上清液，得到浓缩液;所述低温高速离心的温度为4°C，离心速率为2750rpm;所述的浓缩液中含有人毛囊干细胞活性成分质量百分含量为0.001 %?90%，其余为人毛囊干细胞活性成分正常代谢所需要的糖分、蛋白、维生素和水； 第十步，所得浓缩液与中药提取物混合，所述的浓缩液中加入20?50ug/ml的中药提取物;置于_20°C条件下储存，即得到所述的毛囊移植液。2.根据权利要求1所述的一种毛囊移植液的制备方法，其特征在于:第一步中，所述分离酶为2.5g/L的DISPASE酶，消化温度为4°C，消化时间为25-30分钟。3.根据权利要求1所述的一种毛囊移植液的制备方法，其特征在于:所述的完全培养基，成分为DMEM+10 % hAB血清+1 Oug/LEGF+1 Oug/LbFGF。4.一种毛囊移植液，其特征在于:将人毛囊干细胞活性成分与中药提取物配伍，所述的毛囊移植液为人毛囊干细胞提取物中加入20?50ug/ml的中药提取物;所述的人毛囊干细胞提取物中含有人毛囊干细胞活性成分质量百分含量为0.001 %?90 %，其余为人毛囊干细胞活性成分正常代谢所需要的糖分、蛋白、维生素和水。5.根据权利要求4所述的一种毛囊移植液，其特征在于:所述的中药提取物为松针提取物、何首乌提取物、桑椹提取物和黑芝麻提取物中的两种以上组分，任意两种各组分重量相同。6.根据权利要求5所述的一种毛囊移植液，其特征在于:所述中药提取物中活性成分的质量百分比含量在50%以上;所述的中药提取物中的活性成分包括甙、酸、多酚、多糖、萜类、黄酮和生物碱中的一种以上。7.根据权利要求5所述的一种毛囊移植液，其特征在于:毛囊移植液用作毛囊移植时的毛囊保存液，或者在毛囊移植时一同植入使用。
【文档编号】A61K8/97GK105919923SQ201610293013
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年5月5日
【发明人】王朝刚, 周文然, 宋亚成, 马强
【申请人】北京博士园科技发展有限公司